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1 碧云天蛋白质组学服务 Proteomics Services by Beyotime 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 : 或 技术咨询 技术服务 网址 :

2 常用蛋白质组定量技术 凝胶技 术 2D-Silver 2D-CBB DIGE 一级质 谱 Label Free SILAC 二级质 谱 itraq TMT SWATH 2 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

3 itraq 标记定量原理 itraq(isobaric tags for relative and absolute quantitation, 同位素标记 相对与绝对定量 ) 技术是由 ABI 公司开发, 其标签试剂可与氨基 ( 包括氨基酸 N 端及赖氨酸侧链氨基 ) 反应实现连接, 标记通量分为 4 标和 8 标 在一级质谱中, 不同来源的相同肽段被连接上总质量相同的完整 itraq 标签 试剂, 具有相同质荷比, 表现为一个峰 在二级质谱中,iTRAQ 标签试剂在不同基团连接处发生断裂, 试剂中报告基 团表现信号 ( 平衡基团发生中性丢失 ), 根据不同报告基团信号峰强弱进行肽段 定量并根据肽段二级质谱信息实现肽段定性, 并最终回溯到蛋白水平 3 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

4 itraq 试剂结构 4 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

5 itraq 标记定量原理 itraq 标记肽段质量数的改变 只要有氨基端, 肽段至少都会加上一个 itraq 标签 另外赖氨酸等侧链氨基也会被 itraq 标签标记 5 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

6 itraq 标记定量原理 6 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

7 itraq 工作流程 7 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

8 itraq 实验流程 样本处理 蛋白提取 蛋白还原 烷基化和酶解 肽段标记 样本混合分类处理 LC/MS 质谱分析 生物信息学分析 8 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

9 样品处理与蛋白提取 组织 细胞 常规蛋白提取方法 : RIPA 裂解, 丙酮沉淀, 超声破碎, 酚抽提法等 血清 9 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

10 蛋白还原 烷基化和酶切 组织 细胞 血清 还原 烷基化 酶切 DKR EJDRK JKL BDRKE KENDIE JSDBF IDEK 10 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

11 标记肽段 样品 1 Label 114 样品 2 Label 115 样品 3 样品 4 Label 116 Label Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

12 样品混合与分离 样品 1 样品 2 样品 3 色谱分离 样品 4 12 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

13 LC/MS 质谱分析 13 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

14 LC/MS 质谱分析 14 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

15 itraq 技术优势 通量高 : 可一次实现最多 8-10 次样品的分离分析 适用范围广 : 体外标记, 可标记各种动物 植物 微生物 细胞 体液等样品 重复性好且定量准确 : 所有样品的分离鉴定条件完全一致, 保证了实验重复性, 同时增强定量的准确性 分辨率高 : 可与最高分辨率的 LC-MS/MS 技术结合, 实现对低丰度蛋白的定量 定性 自动化程度高 : 以高分辨率液质联用为基础, 自动化操作, 分析速度快 15 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

16 itraq 应用领域 信号转导 研究 蛋白质互作研究 分子标志 物发掘 itraq 药物作用靶标研究 蛋白翻译 后修饰 疾病表型的分子机制研究 16 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

17 itraq 服务流程 客户提供 : 蛋白提取液 ( 组织, 细胞, 血液, 尿液等, 需符合 碧云天蛋白质组学生物送样要求 ) 碧云天蛋白质组学服务询价单 碧云天蛋白质组学生物样本信息表 碧云天提供 : 完整的蛋白质组学实验报告 生物信息学分析结果 蛋白质谱检测原始数据 17 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

18 非标记蛋白组 (Label Free) 定量原理 随着非凝胶技术的发展, 鸟枪法 蛋白质组学 ( Shotgun proteomics) 技术, 已成为研究复杂生物样本中大规模蛋白质表达和定性 定量分析的强有力工具 在非标记策略的定量模型中, 主要涉及两种不同的算法 : 以肽段的色谱峰积分面积为基础, 通过比较一对生物样品中相对应到蛋白质酶解多肽的色谱积分面积而得到两者的相对丰度 以肽段被质谱检测的计数为基础, 通过归一化来表征被检测蛋白质的相对丰度 非标记技术认为肽段在质谱中被捕获检测的频率 (Counts) 与其在混合物中的丰度成正相关, 因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度, 通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来, 从而对蛋白质进行定量 18 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

19 Label Free 蛋白组学定量流程 19 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

20 Label Free 蛋白组学实验流程 样本处理 蛋白提取 蛋白酶解 高效液相 HPLC 预分离 MS 质谱检测 原始数据搜库分析 生物信息学分析 20 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

21 Label Free 技术优势 快速在大量样本中找到差异表达的蛋白集合 在较短时间以较低成本得到具有提示意义的蛋白表达数据 对待测样品蛋白含量要求不高 可以检测含量很少的相互作用蛋白 21 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

22 Label Free 服务流程 客户提供 : 蛋白提取液 ( 组织, 细胞, 血液, 尿液等, 需符合 碧云天蛋白质组学生物送样要求 ) 碧云天蛋白质组学服务询价单 碧云天蛋白质组学生物样本信息表 碧云天提供 : 完整的蛋白质组学实验报告 生物信息学分析结果 蛋白质谱检测原始数据 22 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

23 DIA/SWATH 定量原理 DIA/SWATH 采用数据非依赖性的扫描采集模式, 将扫描区间内所有的肽段母 离子经过超高速扫描并进行二级碎裂, 使用二级碎片离子进行蛋白相对 绝 对定量, 从而获得完整的肽段信息 DIA/SWATH 技术示意图 23 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

24 DIA/SWATH 工作流程 24 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

25 DIA/SWATH 实验流程 25 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

26 DIA/SWATH 技术优势 更高的覆盖率和精确度, 兼具 shot-gun 法的高通量以及 SRM 法的可重复性 无需同位素标记 适用于研究亚细胞结构 细菌 真菌 细胞分泌物样本 高水平杂志非常认可的技术 26 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

27 DIA/SWATH 服务流程 客户提供 : 蛋白提取液 ( 组织, 细胞, 血液, 尿液等, 需符合 碧云天蛋白质组学生物送样要求 ) 碧云天蛋白质组学服务询价单 碧云天蛋白质组学生物样本信息表 碧云天提供 : 完整的蛋白质组学实验报告 生物信息学分析结果 蛋白质谱检测原始数据 27 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

28 磷酸化蛋白质组学技术原理 碧云天同位素标记磷酸化蛋白质组学 (Phosphoproteomics) 技术通过巧妙的 将 itraq 技术与 TiO 2 磷酸化肽段富集技术相互结合实现对磷酸化肽段 ( 蛋白质 ) 的定性和定量研究 技术原理 通过蛋白质提取 (Protein Extraction) 获得组织细胞中的全蛋白, 将全蛋白酶解 (Trypsin Digestion) 成肽段,iTRAQ 试剂对所获得的全部肽段进行标记, 标记混合之后的肽段经过 TiO 2 富集得到磷酸化肽段 28 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

29 磷酸化蛋白质组学实验流程 样本处理 蛋白提取 蛋白酶解 肽段标记 TiO 2 富集磷酸化肽段 LC/MS 质谱分析 生物信息学分析 29 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

30 磷酸化蛋白质组学技术特点 在磷酸化富集前进行 itraq 标记, 避免 TiO 2 富集的不平行对定量结果的干扰, 提高定量磷酸化蛋白质组分析的精确度 TiO 2 富集方法富集效率高, 操作快速, 不需要特殊设备, 能与多种缓冲盐体 系兼容 采用高分辨率 高扫描速度的质谱, 对富集的磷酸化肽段进行大规模鉴定 结合 itraq 标记定量技术可对不同样品间的磷酸化水平的差异进行定量比较 30 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

31 磷酸化蛋白质组学服务流程 客户提供 : 蛋白提取液 ( 组织, 细胞, 血液, 尿液等, 需符合 碧云天蛋白质组学生物送样要求 ) 碧云天蛋白质组学服务询价单 碧云天蛋白质组学生物样本信息表 碧云天提供 : 完整的蛋白质组学实验报告 生物信息学分析结果 蛋白质谱检测原始数据 31 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

32 碧云天常规生物信息学分析 32 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

33 蛋白质应用现状 全蛋白组 : proteome, proteomic, protemics 标记定量蛋白组 :itraq TMT 中国 全部 中国 全部 > 影响因子区间 > 影响因子区间 33 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

34 应用案例 1 文章题目 : 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对新型红霉素衍生物和苯挫西林复方抗菌药物的蛋白质组学应答 实验材料 : 金黄色葡萄球菌 主要技术 :Label Free 发表期刊 :Sci. Rep. 影响因子 :5.578 周期 :18 个月 34 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

35 应用案例 2 文章题目 : 全蛋白质组的氧化分析发现衰老过程中有效的线粒体蛋白的动态平衡 实验材料 : 柄孢霉菌线粒体 主要技术 :itraq 发表期刊 :Mol. Cell. Proteomics 影响因子 :6.564 周期 :20 个月 35 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

36 Thank You 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 : 或 技术咨询 技术服务 网址 : 36 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

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