Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段凯时注射液是一种用脂微球包裹前列腺素 E 1 (prostaglandin E 1,P

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倍汪
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1 714 解放军医学杂志 2013 年 9 月 1 日第 38 卷第 9 期论著 3 种小鼠肝纤维化模型的比较及凯时注射液的抗肝纤维化作用评价金明姬, 黄伟, 陈卫, 高钟镐 [ 摘要 ] 目的对 3 种不同药物诱导产生的小鼠肝纤维化模型进行筛选, 并选用最佳模型评价凯时注射液的抗肝纤维化作用方法将 BALB/c 小鼠分别经腹腔注射二甲基亚硝胺 (DMN) 硫代乙酰胺(TAA) 及四氯化碳 (CCl 4 ) 三种药物诱导产生不同的小鼠肝纤维化模型, 以肝组织病理学变化和血清丙氨酸转氨酶 (ALT) 天门冬氨酸转氨酶(AST) 及透明质酸 (HA) 浓度为指标筛选出最优模型, 对最优模型小鼠尾静脉注射凯时注射液, 评价其抗肝纤维化作用结果与正常对照组比较,TAA 组小鼠的体重无明显变化, 而 DMN 组 CCl 4 组小鼠体重明显下降 (P<0.05) 与正常对照组相比,3 个实验组小鼠均出现显著肝纤维化 (P<0.001), 同时血清中 ALT AST 和 HA 含量明显升高 (P<0.001), 且 DMN 组小鼠肝纤维化程度及血清 ALT AST HA 含量均高于其他两组 (P<0.05) DMN 诱导的小鼠肝纤维化模型经凯时注射液治疗后, 肝组织纤维化指标及血清中 AST ALT 和 HA 含量改变均显著逆转 (P<0.05) 结论 DMN 诱导的小鼠肝纤维化模型成功率高建模稳定凯时注射液在小鼠体内有较好的抗肝纤维化作用 [ 关键词 ] 肝硬化, 实验性 ; 模型, 动物 ; 凯时 ; 二甲基亚硝胺 ; 硫代乙酰胺 ; 四氯化碳 [ 中图分类号 ] R575.2 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2013) Comparative study of different animal models of hepatic fibrosis reproduced by different drugs and evaluation of effect of Kaishi injection in prevention of fibrosis JIN Ming-ji, HUANG Wei, CHEN Wei, GAO Zhong-gao Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Science, State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines, Key Laboratory of Drug Delivery Technology and Novel Formulations, Beijing , China * Corresponding author, zggao@imm.ac.cn [Abstract] Objective To screen the best animal model of hepatic fibrosis reproduced by different drugs and to evaluate the anti-fibrosis activity of Kaishi injection in the chosen animal model. Methods Normal saline (NS), dimethyl nitrosamine (DMN), thiacetamide (TAA) or carbon tetrachloride (CCl 4 ) was administered respectively to the randomly grouped BALB/c mice intraperitoneally in an identical dosage. Five weeks later, the best animal model was screened based on the changes in concentration of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and hyaluronic acid (HA) in the plasma of the above 3 animal models, then the model of most obvious hepatic fibrosis was employed to investigate the anti-fibrosis activity of Kaishi injection. Results The body weight in TAA group was not significantly different from that of control group. However, the respective body weight of CCl 4 and DMN groups decreased significantly compared with that of control group (P<0.05). The degree of liver fibrosis and plasma concentrations of ALT, AST and HA in the 3 model groups were all higher than that of control group (P<0.001). Plasma concentrations of ALT, AST and HA in DMN group were higher than that of other groups (P<0.05), DMN group was therefore chosen as the model for experimental group. After the treatment with Kaishi injection, alleviation of liver fibrosis and reduction in levels of ALT, AST and HA in plasma were found (P<0.05). Conclusions DMN treatment was proved to be the most promising method to successfully induce hepatic fibrosis in BALB/c mice. Kaishi injection has been shown as to have a good therapeutic effect on DMN induced hepatic fibrosis in mice. [Key words] hepatic cirrhosis, experimental; animal model; Kaishi; dimethyl nitrosamine; thiacetamide; carbon tetrachloride [ 作者简介 ] 金明姬, 药学硕士, 助理研究员主要从事抗肿瘤纳米制剂生物大分子类药物制剂方面的研究 [ 作者单位 ] 北京中国医学科学院药物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 药物传输技术及新型制剂北京市重点实验室 ( 金明姬黄伟陈卫高钟镐 ) [ 通讯作者 ] 高钟镐, zggao@imm.ac.cn 肝纤维化是威胁人类健康的常见病变, 是各种慢性肝病最重要的病理特征, 能够引发肝硬化, 也是诱发原发性肝癌的危险因素之一 [1] 肝纤维化可导致正常肝组织的结构及功能改变 [2-3], 其中 25%~40% 的患者可能发展为肝硬化乃至肝癌选

2 Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段凯时注射液是一种用脂微球包裹前列腺素 E 1 (prostaglandin E 1,PGE 1 ) 的新型载体制剂, 在临床上主要用于治疗慢性动脉闭塞症引起的四肢溃疡及四肢静息疼痛, 并能改善心脑血管微循环障碍, 因此也用于脏器移植术后抗栓治疗和小儿先天性心脏病动脉导管未闭等笔者推测, 凯时注射液很可能对肝纤维化具有一定治疗作用, 而新型微球制剂可能使其发挥更好的效果因此, 本研究首先选用 3 种不同药物二甲基亚硝胺 (DMN) 硫代乙酰胺 (TAA) 和四氯化碳 (carbon tetrachloride,ccl 4 ) [4] 建立肝纤维化模型, 比较筛选出一种最佳模型, 再使用该模型评价凯时注射液的抗肝纤维化作用, 为凯时注射液对肝纤维化疾病的治疗提供理论依据 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 DMN TAA 和 CCl 4 购自 Sigma 公司, 市售橄榄油, 丙氨酸转氨酶 (ALT) 天门冬氨酸转氨酶 (AST) 及透明质酸 (HA) 检测试剂盒购自南京建成科技有限公司, 凯时注射液购自北京泰德制药有限公司, 其他试剂均为分析纯 AL204 型电子天平购自 METTLER TOLEDO 公司 ; 高速离心机购自 Thermo 公司 ; 倒置显微镜购自日本 Olympus 公司 ; 酶标仪购自澳大利亚 TECAN 公司 ;TU1900 紫外分光光度计购自上海棱谱仪器有限公司 1.2 动物模型建立与分组 BALB/c 小鼠 40 只, 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 雌雄各半, 体重 15g 左右, 随机分为 4 组, 分别为空白对照组 DMN 组 TAA 组 CCl 4 组 DMN 和 TAA 用生理盐水配制, 给药剂量分别为 10µl/kg 和 200mg/ kg;ccl 4 用橄榄油稀释 4 倍, 给药剂量为 0.1ml/kg; 空白对照组注射生理盐水, 剂量为 15ml/kg 各组小鼠均采用腹腔注射给药, 次数为 3 次 / 周, 连续给药 5 周后观察腹腔腹水情况及小鼠生存情况 1.3 肝组织病理学检查各组小鼠连续给药 5 周后眼眶取血, 脱臼处死, 采集肝脏组织, 迅速用 10% 中性甲醛固定, 脱水, 石蜡包埋, 切片对肝脏组织切片进行 HE 及 Masson 常规染色, 光镜下观察组织病理形态及结构变化根据肝损伤程度肝组织纤维化程度和肝胆管上皮细胞增生程度对各组进行计分比较其中纤维化程度评判标准如下 [5] : - 无成纤维细胞增生, 计 0 分 ; + 汇管区扩大, 有少量成纤维细胞增生, 计 1 分 ; 汇管区成纤维细胞增生并向小叶内延伸, 呈较窄较短的纤维素条, 计 2 分 ; 汇管区成纤维细胞大量增生并向小叶内明显延伸, 形成纤维隔伴有小叶结构紊乱, 计 3 分最后以肉眼观察到肝纤维化形成及镜下纤维组织增生形成作为肝纤维化模型诱导成功的标志 [6] 1.4 血清 ALT AST 及 HA 含量的测定各组小鼠给药 5 周后眼眶取血, 血液加入含 0.38% 枸橼酸钠的试管中, 离心取上清, 按照各项检测指标试剂盒中的规定测定血清中 ALT AST 及 HA 的含量 1. 5 用凯时注射液治疗 D M N 诱导的肝纤维化模型小鼠 30 只 BALB/c 小鼠, 雌雄各半, 体重 15g 左右, 随机分均为 3 组, 分别为空白对照组模型组治疗组首先建立病理模型, 空白对照组腹腔注射生理盐水 15ml/kg, 模型组和治疗组分别腹腔注射 DMN 10µl/kg,3 次 / 周, 连续给药 5 周后, 空白对照组和模型组分别静脉注射生理盐水, 治疗组静脉注射凯时注射液,6ml/(kg.d) 连续给药 20d 后, 按照 1.3 和 1.4 的方法进行疗效评价 1.6 统计学处理采用 SPSS 13.0 软件进行统计分析, 计量资料以 x±s 表示, 组间比较采用单因素方差分析 (one-way ANOVA), 进一步两两比较采用 LSD-t 法 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 一般生长情况实验期间各实验组小鼠均出现活动减少精神萎靡对外界刺激反应迟钝的现象, 其中 DMN 组小鼠死亡 2 只,TA A 组小鼠死亡 1 只, 其他两组均未发生死亡各组小鼠体重变化及死亡情况见表肝组织病理学检查空白对照组 HE 染色后见肝小叶肝细胞索呈放射状排列, 肝细胞无变性坏死, 肝窦未见明显异常,Masson 染色示肝脏门脉区和肝窦网状纤维呈浅绿色, 肝组织间未见明显纤维增生 DMN 组 HE 染色见肝组织形成假小叶, 周围出血, 纤维组织增生并出现炎性浸润,Masson 染色同样见肝组织内假小叶形成, 纤维组织明显增生形成包膜, 肝细胞索纤维分割, 周围广泛出血 TAA 组 HE 染色见肝小叶肝细胞索呈放射状排列, 肝细胞无变性坏死, 未见明显纤维增生和纤维化,Masson 染色见肝小叶中央静脉网状纤维着色浅绿, 肝组织间未见明显纤维增生 CCl 4 组 HE 染色见个别肝细胞表 1 各组小鼠体重变化及死亡情况 (x±s, n=10) Tab.1 The body weight and death of experimental mice(x±s, n=10) Group Dose Gain weight (g) Mortality (case) Control group 15ml/kg 22.45± DMN group 10µl/kg 16.29±2.17 (1) 2 TAA group 200mg/kg 20.34± CCl 4 group 100µl/kg 15.53±2.55 (1) 0 (1)P<0.05 compared with control group

716 解放军医学杂志 2013 年 9 月 1 日第 38 卷第 9 期有变性和坏死, 其他未见异常,Masson 染色见轻度肝窦网状纤维肿胀, 轻度纤维组织增生以上结果表明 DMN 诱导的小鼠最具备典型的肝纤维化表现, 模型建立成功, 其他两组的肝纤维化特征并不是很明显, 与 DMN 组相比, 具有一定的差异 ( 图 1) 2.

3 716 解放军医学杂志 2013 年 9 月 1 日第 38 卷第 9 期有变性和坏死, 其他未见异常,Masson 染色见轻度肝窦网状纤维肿胀, 轻度纤维组织增生以上结果表明 DMN 诱导的小鼠最具备典型的肝纤维化表现, 模型建立成功, 其他两组的肝纤维化特征并不是很明显, 与 DMN 组相比, 具有一定的差异 ( 图 1) 2.3 各组小鼠肝纤维化程度比较按照肝纤维化 A B C D E F G H 图 1 各组小鼠肝组织病理学变化 ( 100) Fig.1 Histopathological changes of the mouse liver tissue of the different groups ( 100) A. HE staining of control group; B. Masson staining of control group; C. HE staining of DMN group; D. Masson staining of DMN group; E. HE staining of TAA group; F. Masson staining of TAA group; G. HE staining of CCl 4 group; H. Masson staining of CCl 4 group 分级方法对 4 个组进行了评分比较,DMN 诱导的小鼠形成典型的肝纤维化模型, 其他两组的增生变性坏死及细胞组织的特征性变化不明显与空白对照组相比,3 个实验组均出现显著肝纤维化 (P<0.05); 与 TAA 组和 CCl 4 组相比,DMN 组的纤维化程度更为明显 (P<0.05, 表 2 3) 2.4 各组小鼠血清 ALT AST 及 HA 含量测定结果与空白对照组相比,3 个实验组的血清 ALT AST 及 HA 含量均有明显上升 (P<0.05); 而与 TA A 组和 CCl 4 组相比,DMN 组的 ALT AST 及 HA 含量上升更为明显 (P<0.05);TAA 组和 CCl 4 组之间比较差异无统计学意义 ( 表 4) 2.5 凯时注射液治疗 DMN 诱导小鼠肝纤维化模型的结果在实验过程中, 模型组和治疗组各有 1 只动物死亡, 肝组织病理学检查结果显示治疗组肝细胞变性坏死出血和纤维化程度明显轻于 DMN 模型组 ( 图 2 ) 与模型组比较, 治疗组肝损伤肝组织纤维化和肝胆管上皮细胞增生均有明显减轻 (P<0.05, 表 5) 各组小鼠血清 ALT AST 及 HA 含量, 与空白对照组相比, 模型组和治疗组血清 ALT AST 及 HA 含量均明显上升 (P<0.001); 与模型组相比, 治疗组 ALT AST 及 HA 含量有所下降, 差异有统计学意义 (P<0.05, 表 6) 3 讨论肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病表 2 各组肝脏组织病理学病变发生情况 (n=10) Tab.2 The liver histopathologic lesions of each group (n=10) Group Degeneration and necrosis Hemorrhage Inflammatory cell infiltration Fibroplasia Bile duct proliferation Portal expansion Control group DMN group 10 (1) 9 (1) 9 (1) 8 (1) 10 (1) 9 (1) TAA group 10 (1) 7 (1) 4 (1) 3 (1) 4 (1) 6 (1) CCl 4 group 10 (1) 8 (1) 2 (1) 3 (1) 2 (1) 8 (1) (1)P<0.05 compared with control group 表 3 各组肝损伤肝组织纤维化和肝胆管上皮细胞增生计分情况 (x±s, n=10) Tab. 3 Scores of liver injury, fibrosis and hepatic duct epithelial hyperplasia (x±s, n=10) Group Liver injury score Liver tissue fibrosis score Bile duct hyperplasia score Control group 0.00± ± ±0.00 DMN group 2.57±0.54 (1) 1.71±0.38 (1) 1.71±0.95 (1) TAA group 1.67±0.41 (1)(2) 0.33±0.81 (1)(2) 0.83±0.75 (1)(2) CCl 4 group 0.86±0.38 (1)(2) 0.14±0.38 (1)(2) 0.00±0.00 (1)(2) (1)P<0.05 compared with control group; (2)P<0.05 compared with DMN group

Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 2013 717 表 4 各组小鼠血清 ALT AST 及 HA 含量的变化 (x±s, n=10) Tab. 4 Serous levels of ALT, AST and HA (x±s, n=10) Group ALT(U/L) AST(U/L) HA(μg/L) Control group 29.

4 Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 表 4 各组小鼠血清 ALT AST 及 HA 含量的变化 (x±s, n=10) Tab. 4 Serous levels of ALT, AST and HA (x±s, n=10) Group ALT(U/L) AST(U/L) HA(μg/L) Control group 29.8± ± ±20.8 DMN group 417.3±37.0 (1) 402.3±53.0 (1) 310.6±33.7 (1) TAA group 265.8±30.6 (1)(2) 289.1±40.4 (1)(2) 208.5±32.4 (1)(2) CCl 4 group 272.1±26.4 (1)(2) 252.8±48.2 (1)(2) 225.8±40.5 (1)(2) (1)P<0.05 compared with control group; (2)P<0.05 compared with DMN group A B C D E F 图 2 凯时注射液治疗后的小鼠肝组织病理学变化 ( 100) Fig.2 Pathological changes of the mouse liver tissue after Kaishi treatment ( 100) A. HE staining of control group; B. Masson staining of control group; C. HE staining of DMN group; D. Masson staining of DMN group; E. HE staining of treatment group; F. Masson staining of treatment group 表 5 凯时注射液对 DMN 诱导肝纤维化模型小鼠肝损伤肝组织纤维化和肝胆管上皮细胞增生的影响 (x±s, n=10) Tab. 5 Effects of Kaishi on liver injury, fibrosis and hepatic duct epithelial hyperplasia of mice (x±s, n=10) Group Liver injury score Liver tissue fibrosis score Bile duct hyperplasia score Control group 0.00± ± ±0.00 DMN group 2.11±0.38 (1) 0.89±0.41 (1) 1.25±0.33 (1) Kaishi injection group 1.79±0.41 (1)(2) 0.68±0.27 (1)(2) 1.01±0.25 (1)(2) (1)P<0.001 compared with control group; (2)P<0.05 compared with DMN group 表 6 凯时注射液对 DMN 诱导肝纤维化模型小鼠血清 ALT AST 及 HA 含量的影响 (x±s, n=10) Tab. 6 Effects of Kaishi on ALT, AST and HA in DMN induced mice liver fibrosis (x±s, n=10) Group ALT(U/L) AST(U/L) HA(μg/L) Control group 19.15± ± ±15.24 DMN group ±41.08 (1) ±33.25 (1) ±25.24 (1) Kaishi injection group ±25.44 (1)(2) ±22.59 (1)(2) ±25.20 (1)(2) (1)P<0.001 compared with control group; (2)P<0.05 compared with DMN group 机制的重要基础, 同样, 进行药物抗肝纤维化的研究也必须建立合适的动物模型理想的肝纤维化动物模型应符合如下条件 [7] :1 与人类肝纤维化疾病的基本病变特征相似 ;2 病变有一定发展过程, 病程发展存在一个可逆与不可逆的阶段性演进过程 ;3 形成率高, 病死率低, 重复性好 ;4 方法简便易行 ;5 动物易获得, 经济实用目前常用的各种造模方法各有优缺点, 可以根据不同实验目的选择合适的造模方式本研究分别采用 3 种药物建立不同的小鼠肝纤维化模型, 并通过一系列评价指标进行最优模型的筛选 DMN 具有肝毒性基因毒性和免疫毒性, 其活性代谢产物使核酸蛋白质等重要的生命物质发生甲基化, 进而导致肝细胞坏死, 并可使细胞外基质进行性增多 [8-9] CCl 4 是一种经典的诱发肝纤维化的选择性肝毒性药物 [10], 可引起肝细胞脂质过氧化增强, 从而损伤肝细胞 [11-12] 本实验中, 与 CCl 4 模型相比,DMN 模型中肝细胞无脂肪变性, 肝纤维化形成相对稳定, 模型成功率高, 纤维化程度比较接近临床患者的实际情况 CCl 4 的肝纤维化模型在中断药物后有一定的自愈倾向, 而

5 718 解放军医学杂志 2013 年 9 月 1 日第 38 卷第 9 期 DMN 模型在中断药物后数月内还能保持较稳定的进展 [13-14] TAA 与 DMN 的作用机制相似, 都是通过影响蛋白质合成及肝细胞中酶的代谢诱导肝损伤 [15], 中断给药后肝纤维化仍能保持一定的时间从本实验的结果中可以看出,TAA 及 CCl 4 诱导小鼠肝纤维化的成功率并不是很高, 虽然跟正常对照组相比过半小鼠出现了肝纤维化, 但是与 DMN 相比肝纤维化模型形成程度没有达到规定的要求, 其成功率也较低 TAA 组和 CCl 4 组的小鼠肝损伤模型制备诱发病变程度较轻, 多数动物未出现肝损伤病变和肝纤维化, 未达到制备肝损伤和肝纤维化模型的预期结果 DMN 诱导的小鼠肝纤维化模型中形成的肝纤维化, 与临床病理特征相似, 并且病理切片结果也很好地证明了其肝纤维化特征但 DMN 组也存在一定的缺点, 该组死亡率比其他组略高, 可能与 DMN 毒性较大有关 [14], 因此在实验中用 DMN 制备动物模型时一定要控制好给药剂量, 时刻观察动物的状态, 以降低死亡率 PGE 1 作用于血管 PGE 1 受体, 能够扩张血管, 增加门静脉血流量, 并且能够调节前列环素与血栓素 A 的平衡, 改善肝脏微循环, 从而增加肝组织供氧量, 消除肝细胞代谢产物 [16] 凯时注射液是 PGE 1 包裹在脂微球中的一种新型载体制剂 [17], 不易在肺内失活, 体内作用持续时间长, 且脂微球极易集聚在炎症病灶和病变血管处, 有靶向作用, 因此仅用原 PGE 1 制剂的 1/5~1/10 的量即可取得相同疗效且副作用小, 多用于肝炎及肝纤维化的治疗 [18-19] 目前认为, 凯时注射液用于肝疾病的治疗, 可能通过改善肝脏微循环减少血小板衍生生长因子等细胞因子及内毒素水平等, 减轻肝脏炎症, 促进肝细胞再生及肝功能的恢复, 并减少肝脏星状细胞的活化, 减少细胞外基质的沉积, 从而起到抗肝纤维化作用 [20] 肝损伤肝纤维化后, 血清中多种酶如 ALT AST 和相应物质含量发生改变且与肝损伤肝纤维化的程度呈正相关, 可作为辅助诊断指标 HA 主要被肝内皮细胞分解摄取, 当肝内皮细胞严重损害时,HA 因摄取不足而显著升高 HA 的增高也表明肝星状细胞较活跃, 细胞外基质合成增多, 这些都是肝纤维化形成的标志本研究结果显示, 凯时注射液治疗后肝组织纤维化程度肝损伤以及血清中 ALT AST HA 含量均有所下降 (P<0.05) 肝组织病理结果显示, 凯时注射液可减轻肝脏的炎症反应, 抑制肝胆管上皮细胞的增生, 进一步证实凯时注射液具有抗炎抗肝纤维化的作用但是, 凯时注射液改善炎症反应和纤维化程度, 以及降低血清中 ALT AST HA 含量的机制尚未完全阐明, 可能与改善肝脏微循环, 减轻炎症反应, 抑制血小板产生和聚集, 减少炎症因子对肝星状细胞的刺激, 减少肝内弥漫性细胞外基质的产生等有关 [17] 本研究结果表明, 不同类型药物诱导的肝纤维化程度及标准不同, 应该根据实验目的选择合适的动物模型凯时注射液具有改善肝炎及肝纤维化的功效, 并能降低血清中 ALT AST 及 HA 的含量, 这将为凯时注射液和 PGE 1 用于肝炎和肝纤维化的治疗提供重要的参考依据参考文献 [1] Chen YQ, Mao DW. Research progress of liver fibrosis animal model preparation[ J]. J Clin Hepatol, 2007, 10(3): [ 陈月桥, 毛德文. 肝纤维化动物模型制备的研究进展 [ J]. 实用肝脏病杂志, 2007, 10(3): ] [2] Schenker S, Maddrey WC. Subliminal drug-drug interactions: users and their physicians take notice[ J]. Hepatology, 1991, 13(5): [3] Frezza EE, Ger unda GE, Far inat i F, et al. CCl 4 -induced l i v e r c i r r h o s i s a n d h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a i n r a t s : relationship to plasma zinc, copper and estradiol levels[ J]. Hepatogastroenterology, 1994, 41(4): [4] He H, Hua HY, Ge SW, et al. Effects of Curcumin on carbon tetrachloride induced liver fibrosis in rates[ J]. J Zhengzhou Univ (Med Sci), 2009, 43(5): [ 何航, 华海婴, 戈士文, 等. 姜黄素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响 [ J]. 郑州大学学报 ( 医学版 ), 2009, 43(5): ] [5] Scheuer PJ. Classification of chronic viral hepatitis: a need for reassessment[ J]. J Hepathol, 1991, 13(3): [6] Ma YZ, Han JT, Chen W, et al. The new design of liver fibrosis model by subcutaneous injection of carbon tetrachloride[ J]. Sichuan J Zool, 2007, 26(3): [ 马玉珍, 韩景田, 陈炜, 等. 四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型的新设计 [ J]. 四川动物, 2007, 26(3): ] [7] Zhang S, Gu WL, Huang D, et al. Comparison of rat models of hepatic fibrosisinduced by carbon tetrachloride, thioacetamide and porcine serum[ J]. Chin J Gen Surg, 2012, 21(1): [ 张帅, 古维立, 黄迪, 等. 四氯化碳硫代乙酰胺和猪血清诱导大鼠肝纤维化模型的比较 [ J]. 中国普通外科杂志, 2012, 21(1): ] [8] Li SC, Li T. Principle and application of making different animal models of liver fibrosis[ J]. Study J Tradit Chin Med, 2006, 24(12): [ 李生财, 李彤. 肝纤维化动物模型的造模原理及应用 [ J]. 中医药学刊, 2006, 24(12): ] [9] Sugiyama M, Ichida T, Sato T, et al. Expression of activin A is increased in cirrhotic and fibrotic rat livers[ J]. Gastroenterology, 1998, 114(3): [10] Li J, Cao ZH. Oxidation stress effects of carbon monoxide on rats'hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride[ J]. Med J Chin PLA, 2006, 31(3): [ 李隽, 曹治宸. NO 在 CCl 4 致大鼠肝纤维化中的氧化应激作用 [ J]. 解放军医学杂志, 2011, 36(7): ] [11] Jaeger HJ, Kruegener GH, Donovan AG. Patellar metastasis from a malignant melanoma[ J]. Int Orthop, 1992, 16(3): [12] Zhao ZJ, Zhang XX. Review of research on hepatic fibrosis animal model experiment[ J]. Chin J Integr Tradit West Med

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Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 213 715 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段凯

Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 213 715 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段凯 714 解放军医学杂志 213 年 9 月 1 日第 38 卷第 9 期论著 3 种小鼠肝纤维化模型的比较及凯时注射液的抗肝纤维化作用评价金明姬, 黄伟, 陈卫, 高钟镐 [ 摘要 ] 目的对 3 种不同药物诱导产生的小鼠肝纤维化模型进行筛选, 并选用最佳

Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发 病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的 有效手段 凯时注射液是一种用脂微球包裹前列腺 素 E 1 (prostaglandin E 1,P

Med J Chin PLA, Vol. 38, No. 9, September 1, 择适当的肝纤维化动物模型是深入研究肝纤维化发病机制的重要基础, 也是筛选防治肝纤维化药物的有效手段凯时注射液是一种用脂微球包裹前列腺素 E 1 (prostaglandin E 1,P