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1 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"! / 论著 珠海地区淋球菌耐药性监测及耐药质粒分型 沈守星刘小凤魏秋姣吴兴中覃晓琳. 广东省珠海市慢性病防治中心检验科 沈守星 刘小凤 魏秋姣. 广州 广东省皮肤性病防治中心检验科 吴兴中 覃晓琳 通信作者 沈守星 ".1 /9:: $! %' / $ ; && /. 摘要 目的监测珠海地区 年淋球菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性 了解质粒介导的 ( ) 和 基因分子流行情况 方法用琼脂稀释法测定淋球菌对 种抗菌药物 青霉素 四环素 环丙沙星 头孢克肟 大观霉素和阿奇霉素 的最低抑菌浓度 )* 采用纸片酸度法测定产青霉素酶淋球菌 ++,+*- 方法分别扩增 ( ) 和 耐药质粒基因片段 电泳分析其耐药质粒型别 结果./ 株淋球菌中检出 ++, 共 株. 0 耐四环素淋球菌 (-, 株 1 0./ 株淋球菌对青霉素 四环素 环丙沙星 阿奇霉素的耐药率分别 /0 青霉素低敏率为 0 未发现对大观霉素 头孢曲松 头孢克肟耐药菌株 但对头孢克肟的低敏率达到 / 0 耐药质粒分型结果 ++, 亚洲型 株.0 非洲型 株 / 0 未检出多伦多 里约型 (-, 荷兰型 / 株. 1/0 美国型 株 0 结论珠海地区淋球菌对四环素 环丙沙星 青霉素耐药率较高 但对头孢曲松和大观霉素敏感率高 可作为治疗淋病的首选药物 ++, 以亚洲型和非洲型为主 (-, 以荷兰型为主 偶见美国型 关键词 奈瑟球菌 淋病 耐药性 ( ) 基金项目 珠海市医学科研基金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

2 . 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"! )0 #! $ # 2! 2 & $! 4$ $2 7& 2& 0 # & " 2 &!! &!!& ( & 2& $ &2 4 "2& &#!""! 4 0 8# $2 4 "2& & )0 %7 $0 52 2!# 0 & 0!& $!! ! )+ ( & 2& 0" 0 8 $ & 0!$$2&!2" #! % 7 && 2$ ) * * $2" + & 2 $0 7!# 0702, 淋病是我国法定的乙类传染病 抗菌药物的选择是其治疗首先要考虑的问题 但是随着淋球菌耐药性的变化和耐药质粒流行株的扩散 抗生素的选择日益重要 淋球菌对青霉素和四环素耐药性主要由质粒介导 产青霉素酶淋球菌 ( 携带的质粒一般还有 ) * 基因 其产生的 ) * 型 内酰胺酶可水解 内酰胺环从而导致青霉素失去抗菌活性 耐四环素淋球菌 )+ ( 对四环素耐药是由携带 决定子的结合质粒所介导 为了解珠海地区, 年淋球菌临床分离株的耐药性和 ()+ ( 的流行情况及质粒型别的分布 现对临床分离的 -. 株淋球菌进行分析 报告如下 对象与方法一 菌株来源 -. 株临床淋球菌菌株来自, 年珠海市性病监测点门诊患者的泌尿生殖道分泌物 男性尿道样本取自尿道口内. $ 处 女性由宫颈口内 $ 处取材 接种于选择性培养基 )* 所有菌株经革兰染色 氧化酶试验和糖发酵试验证实后 在 )* 选择性培养上传代 次 经纯培养 / 0 后将纯菌株洗脱于小牛血清中 于 1 低温冰箱中冻存备用 淋球菌标准菌株 %( 和质粒分型标准质粒均由广东省皮肤性病防治中心实验室提供 其中 %( 株为 ( 阴性菌株 株为 ( 阳性菌株 二 材料 培养基和药物 ( 基础培养基 '! 公司 加入 脱纤维新鲜羊血 大观霉素 普强公司 头孢曲松 +!$0 公司 青霉素 0 " 公司 四环素 2 公司 环丙沙星 && 公司 头孢克肟 中国药品生物制品检定所 和阿奇霉素 中国药品 生物制品检定所 种药物均为标准品 由广东省皮肤性病防治中心提供 仪器和试剂 + 扩增试剂盒购自宝生物工程 大连 有限公司 % 8 相对分子质量标准标记物购自 )262 2 公司 + 引物由上海 5! 生物工程公司合成 + 仪为美国 * + 公司产品 电泳仪为美国 3!+2 公司产品 凝胶成像系统为法国 3! 公司产品 三 方法 菌株对抗生素敏感性测定采用 9:' 西太平洋地区淋球菌耐药检测规划协作组推荐的琼脂稀释法测定最低抑菌浓度 * 先将各抗生素用适当的缓冲液溶解配成原液 再倍比稀释 在培养基平皿上的最终药物浓度分别为 青霉素 四环素 环丙沙星均为. ; 头孢曲松 ; 大观霉素 / ; 阿奇霉素 // ; 头孢克肟 ; 试验菌株和标准菌株在无选择性培养基 ( 上传代培养, / 0 后 制成 / $#7; 的菌悬液 用多头点接种器蘸取菌液接种于各抗生素的琼脂平皿上 置. ' 环境下培养 0 观察结果 以能抑制淋球菌生长的最小药物浓度为该药的 * 每批试验均由标准菌株作质控 判断标准 青霉素和环丙沙星 *. ; 为敏感, ; 为低敏 ; 为耐药 大观霉素 *, ; 为敏感 / ; 为耐药 四环素 * ; 为敏感 ; 为耐药 头孢曲松 * ; 为敏感 ; 为低敏 头孢克肟敏感性试验和判断标准按美国临床和实验室标准化研究所 判断 ; 判为敏感 ; 为低敏 阿奇霉素 * ; 判为敏

3 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"! 感 () 为耐药 并统计出 *+ 和 *+, --. 和 /0. 测定 --. 测定采用纸片酸度法 以标准菌株 株作为阳性对照 标准菌株 % 株作为阴性对照 /0. 测定按照 1 ' 西太平洋地区淋球菌耐药检测项目推荐的标准判断 当四环素 *+ ) 判为 / 模板制备取.+ 培养基上纯培养 的淋球菌菌落 用灭菌水制备成 个麦氏单位的菌悬液 取 ) 该菌悬液离心去掉灭菌水 加入 ) 裂解液 沸水浴 冷却后以 的速度在低温离心机中离心 上清液即为 -+0 模板 % 2 分离上清液 保存在 备用 3 多重 -+0 采用 -4" 多重 -+0 方法测定 / * 耐药质 56 粒片段 引物包括 7)8/2+/+22/+../22/ /..+/ 87)8+2++/2/222/+/ ) 8++2/2././/.2./2// )8 /+2//+./.+.//+/ 亚洲型 非洲型和多伦多 ( 里约型质粒引物对分别为 7) 97) 7) 9 7) 7)97) 扩增产物分别为,, 和 56 耐药质粒片段引物包括通用正向引物 :;8/ 反向引物美国型 //2+2+2/+++/2+ 8 反向引物荷兰型 %08/ / 美国型和荷兰型扩增产物分别为 和 反应总体系 ) 包括 /4 酶 :3 ) /- 3!" ) -+0 缓冲液 3 ) 引物!" 各 3 ) 模板 % 2 ) -+0 反应条件 预变性, 变性, & 退火 & 延伸 共 个循环 最后 延伸 每批试验作阴性和阳性对照 -+0 扩增产物以 3 琼脂糖凝胶中进行电泳后 紫外分析仪观察结 5 6 果 最后用 7'-0 / 凝胶成像系统观察并照相 结果一 *+ 测定结果, 株淋球菌中检出青霉素 四环素和环丙沙星耐药株分别为 株 3 株 3 和, 株 3 青霉素 四环素和环丙沙星的 *+, 均已超过耐药标准 未检出对头孢曲松和大观霉素耐药株 敏感率均达到 3 头孢克肟敏感株 株,3, 中敏株 株 3 阿奇霉素敏感株 株,3 耐药株有 株 3 见表 二 --. 和 /0. 耐药质粒分型检测结果, 株淋球菌中检出 株 --. 阳性率为 3, 其中扩增产物, 的亚洲型质粒 株 3 扩增产物, 的非洲型质粒 株 3 未检出多伦多 里约型 见图, 株淋球菌中检出 株 /0. 阳性率为 3 其中扩增产物 的荷兰型质粒 株,3 只检出 株 的美国型质粒 3 见图 有 株菌株具有 --. 和 /0. 双重耐药质粒 其中 株为广东省首次分离出同时携带 /0. 美国型和 --. 非洲型双重耐药质粒 表 珠海地区淋球菌的药敏结果, 株 抗菌药物 敏感性 5 株 6 *+ ) 敏感中敏耐药 *+ *+, 青霉素 四环素 3 3 环丙沙星, 3 头孢曲松, 头孢克肟,3, 大观霉素, 3 阿奇霉素, 注 最低抑菌浓度

4 / 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"! 注 0 % 标准相对分子质量参考物 非洲型标准质粒. 亚洲型标准质粒.* / 临床分离株图 产青霉素酶淋球菌扩增产物琼脂糖凝胶电泳图注 0 % 标准相对分子质量参考物 美国型标准株 * 荷兰型标准株 / / 临床分离株图 耐四环素淋球菌扩增产物琼脂糖凝胶电泳图讨论淋球菌对抗菌药物的耐药性问题早已引起全球关注 根据 (' 规定 当某种抗菌药物的耐药率大于 ) 时 则该药不应作为首选药物 当耐药率高于 ) 时 应停止使用 本研究显示 珠海地区淋球菌对环丙沙星耐药率为 ) 与近几年本地区连续监测的耐药率一致 已不能用于临床治疗 本次研究发现 珠海地区淋球菌对青霉素的耐药率,- 为 *+) 略低于 年的监测结果 四环素的耐药率为 ) 明显低于广州 佛山 江,- 门 肇庆四市. ) 的耐药率 这可能与珠海地区近年来加强对淋球菌的耐药监测 及时指导临床医生合理规范使用抗生素有关 阿奇霉素曾是 (' 推荐临床治疗淋病的一线药物 由于其临床使用广泛 至今其药效逐渐降低并已出现耐药菌株 但不同地区耐药率各有不同 阳江 广州和南京的阿奇霉素耐药率分别为 / *.) ) 和. /),+*- 本研究显示珠海地区的耐药率为 /) 提示在珠海地区阿奇霉素已经不能作为治疗淋病的一线药物 本次监测大观霉素对淋球菌敏感率为 ) 01 和 01. 均为 + 本地区尚未发现大观霉素耐药株 提示仍可以作为治疗淋病的首选药物 头孢克肟是第三代口服头孢菌素类抗生素 本次监测尚未发现耐药菌株 但低敏率达到 / ) 高于广州的 ),- 应引起足够的重视 临床医师治疗淋病很少选用第三代口服的头孢克肟 首选头孢曲松 在 (' 提出的 控制淋球菌抗生素耐药性蔓延的全球性行动计划 中 头孢曲松敏感标准为 本次研究按照此标准显示头孢曲松对淋球菌的敏感率达到 ) 未发现对头孢曲松低敏菌株 01 和 01. 分别为 和 / 但近年来 法国和西班牙等地已发现了对头孢曲松高度耐药的淋球菌菌株 甚至出现了,.- 临床治疗失败的病例 根据我国淋球菌抗生素敏感性项目 23 的耐药检测报告 / 年我国平均头孢曲松低敏率为 ), - 因此有必要继续加强对头孢曲松耐药性的监测 治疗时要注意剂量和疗效 年珠海地区连续淋球菌耐药监测显示 总 33 和 45 检出率分别为 / ) 和.),- 本次监测结果显示 检出率为.+) * ) 两者流行率均有不同程度地降低 33 对青霉素耐药性是由 4 0 基因编码的 内酰胺酶耐药质粒介导 主要分为 / 种耐药质粒,- 亚洲型 非洲型和多伦多 里约型 吴兴中等对 年广州 佛山 江门和肇庆四市 + 株 33 耐药质粒分型结果显示..) 为亚洲型 仅 ) 为, - 非洲型 钟娜等报道海南省淋球菌 33 流行株, - 亚洲型占 * +) 非洲型占. ) 36" 等报道大多数来自亚洲地区的 33 携带有亚洲型质粒 而亚洲区以外分离株则携带非洲型质粒居多 如加拿大报道..)33 流行株携带非洲型质, /- 粒 本研究珠海地区 年分离的 + 株 33 中

5 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"!, 亚洲型 株 非洲型 株 非洲型耐药质粒比例明显高于国内其他地区 ( ) 对四环素高度耐药是由 基因介导 基因可分为美国型和荷兰型两种变型 近年来国内对 ( ) 耐药质粒分型研究显示 广东和上海地区 ( ) 菌株 耐药质粒 * + 均为荷兰型 我们本次监测的 株 ( ), 株为荷兰型 仅 株为美国型 此株为广东省首次分离出同时携带 ( ) 美国型和 -- ) 非洲型双重耐 * + 药质粒菌株 与海南地区报道相似 珠海地区 -- ) 非洲型耐药质粒较高水平地流行和 ( ) 美国型质粒的出现 说明珠海作为著名旅游城市 毗邻港澳 国际开放交流密切 导致 -- ) 和 ( ) 耐药质粒有跨洲际传播蔓延的迹象 因此有必要继续监测本地区淋球菌耐药质粒的流行情况 参考文献 * + -." /01 - " "!".& $..$!! ##..".$..& ".& &!# * + $! 2! 34 *+ )! 5( 1-0!" $ ".!"!!# & * + 6.& # $ *,+ 吴兴中 占城 覃晓琳 等 广州市和大连市淋病奈瑟球菌的耐药性及耐药质粒分型比较 * + 国际流行病学传染病学杂志 3,, %'8,39$. : && 3, 7 3, ;. 2 1." & &$ ". &&.$ ".& &!!# &!". & #! ).!. %.".* +!" # $ %& 38,, %'8,39$. : && 3, 7 3, *+ 刘小凤 沈守星 魏秋姣 广东省珠海地区 年淋球菌耐药监测变化趋势分析 * + 皮肤性病诊疗学杂志 3, 3,47,7 %',7379: && ;.." &&!# & "".$!# &&.$.! $. & ).! * + %. %.!!" 3,3,47,7 %',7379: && *+ 吴兴中 郑和平 李燕娃 等 淋球菌对头孢克肟等 3 种抗生素敏感性及耐药质粒分型研究 * + 皮肤性病诊疗学杂志 73,, ; /- 1 <;." & &$ "! 3. $!.". &. &&.$ ".& &!!# &!". & #! $ & ).! * + %. %.!!" 73,, *3+ 梁佩婵 黄海花 吴志周 等 江门市淋球菌对 种抗菌药物耐药性的结果分析 * + 国际检验医学杂志,443 %',7379: && 3,, /. // ;."." &&!# &&.$!#!. $!.". &. * ,4 43 %',7379: && 3,, 3 *+ 曹文苓 黎小东 毕超 等 广州地区, 年淋球菌耐药监测结果分析 * + 中国皮肤性病学杂志 4, %',, 9: $: 47 2.! ;11 %= 2."." &&!#.! $ &&.$!# &!". #! ).!,* + 2 %!" 4, %',, 9: $: 47 *4+ 袁柳凤 尹跃平 戴秀芹 等 南京地区淋球菌分离株对阿奇霉素的敏感性研究 * + 中国麻风皮肤病杂志 3 <. 1 < <- %.." 6 &!# &!". &!.! $.: * > %& 3 *7+?! 0)!".. % $!".& (." / " " $ #. $ #.! &&..$! "!&.$."" ". & $$ &&# ".!." $"! $. & &. #." * + $! & 2! 3,, 4 %' * &." 0!" $ ". " " $ #.! &&. &!". & $ 2.."!. 6. * + $! 2! %' 7,9:.$9>&3 *+ 2 62< <-%.." &.!@ &. $ #.! &&.$.!" $ ".!"!!# 2.* + $! 2! %' 7,9:.$9>, *+ 钟娜 刘巧 乔凤 等 年海南省淋球菌耐药性监测及基因分型 * + 中华皮肤科杂志,,,! 1.!."! $ &&.$ & "".$.!!# &!". & #! /..! $ * + 2 %.!",,, %',39 $. : &&, *, );!." &. $!." &&.$ &!" * + 6.& %&, %' 79'1,,4$33# *+ 杨阳 吴磊 章楚光 等 上海地区淋球菌药物敏感性试验和耐药分子机制研究 * + 中华检验医学杂志 7,, %',39$. : && <. < ; 1. 2)." % & & &!# &!" $ ". $. &!# &&.$ * ,, %',39$. : && 收稿日期

6 ) 国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $ %&'$!!"! 论著 人乳头瘤病毒 及其变异体感染者宫颈 () 和视网膜母细胞瘤蛋白表达研究 陶萍萍杨宾烈张爱陆宇萍孙丽艳王宇华.. 上海市浦东新区人民医院妇产科通信作者 杨宾烈 2"#$ 4 " &2 $! %' ) $ 2 && ). 摘要 目的探讨 () 视网膜母细胞瘤蛋白 * 表达变化在 +( 单一型持续感染者宫颈病变早期进展中的作用 方法选择 ) 年 月至 年 月在上海市浦东新区人民医院宫颈疾病患者档案中登记的 +( 单一型持续阳性 但病理学正常的患者 例 行 %, 序列分析检测 +( 变异体 按照是否存在变异体分为 +( 变异体组 变异体组 和 +( 非变异体组 非变异体组 随访 年对 +( 阳性者复测变异体 对同一变异体持续阳性或非变异体持续阳性者同时行宫颈活检 并用免疫组织化学法检测宫颈组织 () 和 * 蛋白表达 进行分析比较 结果得到同一变异体持续感染 ) 例 非变异体持续感染 例 最终得到完整的免疫组化染色结果各 例 变异体组 例进展为 - 非变异体组. 例进展为 - 差异无统计学意义 / 0 例变异体持续感染患者中 ) 例 1 的 +( 变异体属亚洲原型,&() 例 属欧洲原型 ( 例 1 属亚洲变异体 例 属欧洲变异体 例 属非洲 变异体,# 在变异体组与非变异体组 - 患者的阳性率分别为 1 和 1 均高于慢性宫颈炎 差异有统计学意义 和.. 而 * 在两组的慢性宫颈炎患者中阳性率为 1 和 1 高于 - 患者 差异有统计学意义. 和 结论在宫颈病变早期 可能更早参与了其发生和进展 表达上升且 * 表达下降对 +( 持续感染患者早期宫颈病变进展可能起一定预测作用 但 () 和 * 表达在宫颈病变进展早期变异体与非变异体感染患者间并无差异 关键词 人乳头瘤病毒 变异体 () 视网膜母细胞瘤蛋白基金项目 上海市浦东新区卫生系统重点专科建设项目 ( ) 上海市浦东新区卫生系统学科带头人培养项目 ( *% ).!"#$"% &"!'! " &"' " ('") ) % &&' % ' "*&! + '" ' " ' "'!" " #"!$% "" & ' '( ) *$ ( $# ") +, ' -. # /01 '' ) " ' ( $ 2 3(,#" " -#. "'! & 2 3!" &!# () 2! "2&! 2! *! 3 2 "4! &&!# $ $2" " &!& 2 & 5 3 && +( # $! /!"0,! 2"!# 2 & 5 3 +( & " # $! 2! 2" 2 3!"! 453! 5 & 3 $ $2" & 2& 2 $3 & (7! 5, 2 (! " 8& +!& 2" #! '$! )! 7 5 & " $ 3& & 74 %, & 97 $ & 5 22"4: #! $ +( 2 2 & 3 2 & 5! +( 2 2 &!7 2! 2 2!7,# 2 #!""!5 7!# (!& 2 & 5 & #! 2 2 & 2 22 $ $2"! & & 5 #! 2 & &2 2 2 # $!!! 2 2 && # $! 3 ; &&!&!# () 2 * $ $2" &&7 & 5 $ 4 7!3&!$3 $2" 3! 1! " 3 5 ) $2& & &2 2 2 && # $! 2 $2& & 5 3! 2 2 +( && # $! 2""4 $2& & $! " 7!3&!$3 $2" & 2 2$3!7 5! $2& &! &&! $ $2" 2 3 "2"

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