中国食品卫生杂志 X EaBaL U?EQUUU(;F aea $ - 年第卷第期 = 法按照美国临床实验室标准研究所 X 的发生提供科学依据 Q ] B [ = H XQB $ 推荐的 QP 药敏 $材料与方法试验抗生素选择原则 ( ) 及欧洲抗菌药物

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锹泯伏
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1 - 年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究霍哲等 $ 论著 - 年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究霍哲王晨徐俊高波曹玮北京市西城区疾病预防控制中心北京$---$ 摘$要目的$探讨单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型 NQB@$ 与耐药性的关联性确定某些具有高致病性 ] T H S T$ 纸片扩散法和 a 药敏试条法对种抗生素进行药潜能的流行克隆株的存在方法$采用 S 物敏感性试验以 NQB@技术对 - 株菌株进行基因分型结果 $ 单核细胞增生李斯特菌耐药率为 --f 5 -$ 并出现多重耐药株 - 株单核细胞增生李斯特菌 NQB@分析共获得个型别以 B@ 和 B@ 为优势型别结论$特定 B@型别在食品生产过程中存在特定菌株之间的传递人源性和食源性单核细胞增生李斯特菌中均发现耐药株可能存在耐药基因的传递应加强对具有潜在致病性的 B@型别的监测力度关键词单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型药物敏感性进化树食源性致病菌耐药 2-$- - - 中图分类号$$文献标识码$$文章编号 $ ( ),)) )@)-- 5 ),? 5 ( )22 ))5), ) $ $ ) - KEFX = G?L H= FUT XUK G =X = ( X = ) = = T =--- X =$ = = ] M = PH H oh = = NQB@$ 5 ( 2 ( = ] H Y ] [ P = Y = P = =M Y = ) $BH Y ] M Y P [ H S ] T H S T$ P [ a P [ M Y =, = - 5 ( 2 ( =M = Y [ ]NQB@;, $@ = ] = H = = ] 5 ( 2 ( M --f 5 -$ PH = = YY [ [H =M [ [ [ = Y ] [ = NQB@ Y =M B@ B@ M ] = [ P = = Y 5 ( 2 ( ) )$BY B@ H [ = Y H H = [ Y [H = = =M 5 ( 2 ( A@ M Y ] = P = = ] H = ] [] = HP = H = = H P = = Y = Y = B@ YM oh PY = [H 5 ( 2 ( A =, ( ) 5 ( 2 ( PH H oh = = = ] H Y ] Y = [] = Y = = ] = $$单核细胞增生李斯特菌 5 ( 2 ( 担另一方面随着抗生素在临床和畜牧业中的广 QP$ 能引起人和动物脑膜炎败血症流产和单核细泛使用与滥用QP面临严重的抗生素选择压力已胞增多等死亡率为 -f c-f 被世界卫生组织有报道 KU$ 列为关系食品卫生安全的重要病原菌之临床用药的选择带来了很大的挑战多位点序列一 ( ) 年美国蓝钟 T HT $ 冰淇淋事件人因感染 QP 患病就医其中人死亡我国年文献 ( ) 检索出 QP病例例其中围产期病例为例给家庭和社会带来巨大的疾病负 () 指出我国出现对二线药物耐药的菌株给 H oh = Y =NQB@$ 是高通量测分型 PH 序技术与成熟的群体遗传学结合的产物 ( ) 适用于菌株的进化关系和微生物群体遗传学分析一般用于广义的流行病学调查 ( 2 ) 本研究对食源性和人源性 QP 进行了 NQB@分析以期了解不同来源 QP 的种群特征和遗传多样 - 收稿日期-2 基金项目北京市西城区优秀人才培养项目-- 作者简介霍哲$女$主管检验技师$研究方向为微生物致病菌检测 a P H] =b P P 性确定某些具有高致病性潜能的流行克隆株的存在探讨 NQB@型别与耐药性的关联性追踪耐药菌株间的亲缘关系为进一步预防控制李斯特菌病

2 中国食品卫生杂志 X EaBaL U?EQUUU(;F aea $ - 年第卷第期 = 法按照美国临床实验室标准研究所 X 的发生提供科学依据 Q ] B [ = H XQB $ 推荐的 QP 药敏 $材料与方法试验抗生素选择原则 ( ) 及欧洲抗菌药物敏感实验 ( ) $材料委员会 a?xb@$ 标准结合临床用药和研究需 $菌株要共选择 - 类共种抗生素进行药物敏感性试食源性菌株来自 - 年北京市西城区验分别为青霉素类青霉素 )ae$ 和氨苄西林采集的生禽畜肉熟肉制品水产品凉拌菜熟制 N)$ 糖肽类万古霉素 ge$ 大环内酯类红米面制品冷冻饮品和西式煎牛排猪排等共计类霉素 a;$ 氯霉素类氯霉素 XQ$ 氨基糖苷食品中检测出的株 QP 人源性菌株来自临床诊类庆大霉素 FaE$ 和阿米卡星 E$ 氟喹诺酮断为败血症慢性淋巴细胞白血病化脓性脑膜炎 )$ 和左氧氟沙星 Qag$ $ 类环丙沙星 X 内酰胺及流产等的患者的脑脊液和静脉血中培养出的株类氨苄西林 5 舒巴坦 BN$ 碳青霉烯类亚胺培 QP 标准菌株为 $ 药敏质控菌株 )N$ 和美罗培南 N)$ 四环素类四环素南均购自北京头孢类头孢噻肟 X@G$ 技术股份有限公司 $(E模板的提取 $主要仪器与试剂将 QP菌株接种于脑心浸液琼脂培养基 P X 梯度 )X 仪美国 T U 于 e恒温箱中过夜培养培养物按试剂盒说明 R [ = [ 全自动核酸分析仪德国 ($ O 书进行操作(E模板置于 j- e冰箱备用 O =$ $管家基因的扩增条均购自英国 UGU (细菌基药敏纸片a QP共有对管家基因管家基因引物序列均来 = 批号因组 (E 提取试剂盒德国 O = H) H在线数据库 ( - ) )X扩增条件自于 -2$ 产品均在有效期内除 2基因以外 $ e 预变性 P = e 变性 $方法 - e退火 - e 延伸 P = 个循环$ $抗生素敏感试验 e延伸 - P = 2基因退火温度为 e 其 ] T H S T$ 法和 a 药敏试条采用 S 他扩增步骤同上引物序列见表表 ] $NQB@Y P 5 ( 2 ( $ 引物序列基因 e 退火温度 5 ]Y 产物长度 5 E 2 2 = ; 2 F B F B - $B@型的获得及最小生成树的绘制 Y 软件进获得测序基因后基因序列用 XaR ( - ) = H) H 进行提交查询得行修正然后在 $结果 $QP耐药结果 oh = Y B@ $ 结合耐药到菌株的序列类型对 - 株 QP 进行种抗生素的药敏试验结 EHP 软件以法计算结果采用 T -$ 其耐药的抗生素果显示耐药率为 --f 5 相似性系数构建最小生成树有头孢噻肟环丙沙星红霉素氯霉素左氧氟沙星美罗培南和四环素耐受种抗生素的菌株有

3 - 年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究霍哲等株耐受种抗生素的菌株有株耐受种抗生素 $ --f 5 -$ 具体结果见表的菌株有株为多重耐药株多重耐药率为表 $QP的耐药谱 ( ] $@ Y = P ] = 5 ( 2 ( 耐抗生素数量耐药谱菌株数 f 占比头孢噻肟 2 鲜牛肉生鸡肉冰棍静脉血脑脊液粪便 -- 环丙沙星生鸡肉 -- 四环素猪肉馅 -- 红霉素氯霉素凉拌菜 -- 头孢噻肟环丙沙星冻牛肉 -- 头孢噻肟左氧氟沙星美罗培南肋排 -- 注表示该项不统计表 $菌株编号及对应的B@型别和分离年份 ] $B = =HP] PY H B@ Y 通过 NQB@分型把 - 株菌株分为个 B@型别每个 B@型别含 c 株菌株其中 B@ 和 B@ 为优势型别分别占 --f 5 - $ 和 --f 5 -$ 其次是 B@ 株$ B@ 2 株$ B@ 株 $ 和 B@ 株 $ 剩余的 B@型别只有 c 株菌株见表在个管家基因的等位基因型中拥有个以上 = 相同等位基因型的菌株组成一个克隆复合物 PY R XX$ ( ) 这些菌株中出现了个克隆复合物即 XX包括 B@ 和 B@- 在最小生成树中从进化距离可以看出分为两大进化谱系分别以 B@ 和 B@ 为中心 B@ 和 B@ 型间差异最多为 B@- 和 B@ 型间差异最少为见图 [ P 菌株编号 QP QP B@ 型别分离年份 - - QP2 QP QP - QP - QP QP2 QP QP QP QP- QP - QP - QP QP - - QP QP B@ 型别分离年份 QP QP - - QPQP - QP - QP - - QP QP QP2 QP 菌株编号 QP - QP- QP2 - QP 对食源性和人源性菌株进行 NQB@比较结果 QP QP - QP QP 显示其 B@型别分布也不同株食源性菌株分 QP QP 布在 - 个 B@型中其中 2 个 B@型别全部来自食源 QP- - QP 2 性菌株B@B@B@B@B@2 和 B@- 株 QP QP QP2 QP 人源性菌株分布在 2 个 B@型中其中 B@ 和 B@ QP QP QP QP QP QP- $不同菌株 NQB@型别比较全部来自人源性菌株 B@ B@ B@ 和 B@ 这种型别为人源性和食源性菌株混合存在见图 [] =$ 表示人源性来源 HP = 注表示食源性来源 H $ 注图中每个圈代表一个 B@型圈的大小表示菌株的数量圆圈间连线上的数字代表两个 B@型间的差异相同阴影下的圆圈属于同一个克隆复合物图 $- 株 QP最小生成树 H $N = PHP Y == = = - QP

4 中国食品卫生杂志 X EaBaL U?EQUUU(;F aea $ - 年第卷第期 $耐药特征与 B@型别的关系分析株耐药菌株共得到个 B@型别B@ 耐药 $ B@ B@ 耐药率均为率为 f 5 f 5 $ B@2 B@ B@ B@ 耐药率均为 -f 5 $ B@ B@ B@ B@ 和 B@- 这个型别没有检出耐药株其中 B@ 和 B@ 为我 ( - ) 唯一的一株多重耐药株国 QP耐药株常见型别是 B@ 型见图株人源性 QP 中有株 B@ B@ 和 B@ $ $ B@ 只均对头孢噻肟耐药耐药率 -f 5 在人源性 QP中发现耐药株B@ 和 B@ 在人源性和食源性 QP 中均发现耐药株 B@ B@ B@ 和图 $各个 B@型别菌株数 B@2 只在食源性 QP中发现耐药株 H $EHP] = B@ Y 图 $QP耐药株与 B@型别的最小生成树分析图 H $N = PHP Y == = = = P ] = B@ Y QP B@ 为主的 XX 是食品中广泛存在的 XX 有文 $讨论献 ( ) 报道- 年我国株食源性 QP的 NQB@结本研究对 - 年北京市西城区分离到果中以 B@ 最多其次为 B@ 本研究对 - 的 - 株食源性和人源性 QP进行种抗生素的药年北京市株食源性 QP 分析的 NQB@共得 - $ 结果提物敏感性试验耐药率为 --f 5 到 - 个型别其中 B@ 最多其次为 B@ 和 $ 明显高于食示人源性 QP的耐药率 -f 5 B@ 可以分析出B@ 依然是食源性 QP 的优势 $ 食源性 QP 耐源性 QP的耐药率 -f 5 型别广泛存在于食品中近几年 B@ 在食源性药率基本与 - 年北京市的食源性 QP 耐药率 QP中有增加的趋势值得引起关注通过对株人 f$ 接近 ( ) 人源性的相关数据较少一线源性 QP的 NQB@分析发现B@ 和 B@ 只在人源药物没有出现耐药情况但是二线药物对抗生素的 () 性 QP中发现虽然分离菌株数量少但有报道指 ( ) 出 B@ 可能具有引起李斯特菌病暴发的潜能B@ 红霉素和环丙沙星出现了耐药性本研究同样出现的 QP分离株来自一名产下死胎的患者的胎盘该型了红霉素和环丙沙星的耐药株本研究中对头孢别是否与妊娠期妇女的李斯特菌病有关还需要进一噻肟耐药的 QP 数量最多共有株耐药率为步探讨 B@B@B@ 和 B@ 型别中人源性和食 2--f 5 -$ 头孢类药物在临床上已不作为治源性分离株均有这些型别是否具有致病性也值得进疗 QP感染的主要药物一步研究通过对食源性和人源性菌株进行 NQB@ 耐受性呈不断上升的趋势---- 年报道 NQB@研究的靶基因是细菌生存和繁殖所必需的管家基因 ( ) 这些管家基因核苷酸改变较慢长时间内比较稳定适合研究种群结构和长期进化 ( ) 而且基因分型技术具备清晰的等位基因图谱定义可以通过互联网实现数据分析和信息共享 ( 2 ) 从世界和中国的研究 ( ) 情况可以看出以分析结果提示 QP 具有较高的种群多样性但以其中某几类 B@为主不同 QP的种群特征和遗传多样性不同即具有不同的优势 B@ NQB@分析揭示 - 株 QP中以 B@ 为主要耐药菌株有文献 ( ) 报道耐受四环素的 QP 明显集中在 B@B@- 和 B@ 这个型别本研究对

5 - 年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究霍哲等四环素耐受的 QP为一直是食源性 QP 中的优势型别在中发现株多重耐药株提示特定别在食品生产过程中特定菌株之间的传递可能存在耐药基因的传递整合 $ ( ) $N) B Q S U?N aq = -- P P P = = [ ( L) F $ 2 ( 2 ) $王中强邱少富王勇等多位点序列分型技术及其研究进 ) 军事医学-- $ 2 展( L B@ 和 B@ 在人源性和食源性 QP 中均发现耐药 ( ) $谢蟪旭王萍刘敏川多位点序列分型法在感染性疾病中的株可能存在耐药基因的传递这种现象提示在耐 ) 国际口腔医学杂志-- 2 $ 2- 应用( L 药基因检测和耐药机制探索中应加强对具有潜在致病性 B@型别的监测力度李斯特菌病感染主要发生在老年人孕妇新生儿以及免疫功能低下的人群本研究获得株来 ( ) $XQB N [ = P ] [ H = [ m H Y ] = = oh = [ [ H] YY [ H [ = [ =N ( B) - ( ) $a?xb@ 5 ( 2 ( ] = J = [ P ] my = N X H g = ( B) - 自孕妇和新生儿患者的 QP但是涉及的其他高危人 (- ) $ = H) HNQB@ M = PNQB@[ ] ( (T5 群病例有限需要加大对人源性 QP 的监测力度 UQ) - $ ( -2 - ) Y 55 ] []Y H 5 由于新生儿李斯特菌病绝大多数源于母亲而且 QP 会导致孕妇流产死胎早产因此妊娠期早期识 5 P ( ) $BQXa(UXaAQQXQuT ( YP = PH H oh = Y = P [ = 别早期正确治疗是降低新生儿李斯特菌病的重要 5 ( 2 ( = ( L) L X = N ] -- $ 环节 QP耐药菌株和多重耐药菌株的出现可能 2 与抗生素滥用有着紧密的联系应该进一步加强抗生素的管理合理使用抗生素降低耐药性菌株出现的风险 NQB@分析 QP的菌群结构在分子水平上了解其变化趋势及流行特征耐药性和 NQB@之间的联系能够更好的促进 QP 的流行病学研究为北京市李斯特菌病的预防和控制提供科学依据 ( ) $闫韶飞裴晓燕杨大进等- 年中国食源性单核细胞增 ) 中国食品生李斯特菌耐药特征及多位点序列分型研究 ( L 卫生杂志- 2 2 $ ( ) $赵悦付萍裴晓燕等中国食源性单核细胞增生李斯特菌 ) 中国食品卫生杂志- $ 耐药特征分析( L ( ) $XaE ;(E oh = ] [ H] Y = Y [ P = H ] m = 5 ( 2 ( ( () ) == = == = B?= -- ( ) $XaE ; AEF K SETaQ B L NH H = H 参考文献 oh = Y = [ = = =H [Y P Y PM ( ) $KUU m P = 5 ( 2 ( = [ [ = Y [ P = H ] m = [( at5 UQ) -- $ ( -2-2 ) Y 55 MMM M = 5 [ 5 YH] =5 P 5 P 5 =5 R P N ] $ 2 ( ) $gao?aa TUQE(L S?E N TaXa ) ( ) $XaEQ EX BO?a g QU)aA L XE@ EaQQ@ Y = P H H = [ P = = ( L) X = K [M [[ ]H = P = 5 ( 2 ( N ] M -- $ 2- (L ) ap = ( - 2 $ - ( ) $冯延芳冉陆张立实年中国李斯特菌病文献报 ) 疾病监测- 2 $ 2 2 告病例分析( L ( ) $杨洋付萍郭云昌等-- 年中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药性趋势分析 ( L) 卫生研究 -- $ 2 (L ) LX = N ] -- $ 2 5 ( 2 ( (2 ) $N (aen XNH H oh = Y = ] ( L ) ==H ( ) $KEF ; AU A? F = [ P H Y = 5 ( 2 ( = X =( L) TNX - $ N ] ( ) $王国梁不同单核细胞增生性李斯特菌分离株的分子分型研究( () 扬州扬州大学- YM P 欢迎投稿中国食品卫生杂志网址 MMMJ

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序

第期王兴涛等猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析病料毒株及细胞试剂引物设计提取及基因克隆及测序河南农业科学王兴涛罗俊滕蔓樊剑鸣鄂巍禹斌刘力张改平利用技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒基因和基因具有高度同源性的预期产物在日龄乳鼠脑内接种种猪

中国食品卫生杂志 X EaBaL U?EQUUU(;F aea $ - 年第 卷第 期 = 法按照 美 国 临 床 实 验 室 标 准 研 究 所 X 的发生提供科学依据 Q ] B [ = H XQB $ 推 荐 的 QP 药 敏 $材料与方法 试验抗生 素 选 择 原 则 ( ) 及欧洲抗菌药物

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