乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响李富军, 等 505 ABSTRACT Objective: To explore the effects of novaferon on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis

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1 504 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2015, 40(5) DOI: /j.issn 乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响 李富军, 王维, 赵桢, 邹益友 ( 中南大学湘雅医院消化内科, 长沙 ) [ 摘要 ] 目的 : 观察乐复能对葡聚糖硫酸钠 (dextran sulfate sodium,dss) 诱导的实验性溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, UC) 小鼠模型的治疗作用及其对小鼠结肠黏膜中肿瘤坏死因子 -α(tumour necrosis factor alpha,tnf-α) 表达的影响, 了解乐复能对 UC 的治疗作用及可能的机制 方法 :70 只 Balb/C 雌性小鼠,8 周龄左右, 体质量 18~22 g/ 只, 清洁级 随机分为 7 组, 分别为正常组 模型组 美沙拉嗪治疗组 泼尼松治疗组以及乐复能低 中 高剂量组, 每组 10 只 采用 4%DSS 水溶液自由饮用的造模方法制作 UC 小鼠模型 造模第 8 天, 各组同时分别给予对照剂与实验药物, 实验第 14 天处死小鼠, 游离并取出全段结肠, 测量回盲部至肛门的长度, 记录小鼠疾病活动指数 (disease activity index,dai) 结肠长度 组织学损伤评分 结肠黏膜组织中 TNF-α 的表达 结果 :1) 使用 DSS 的各干预组小鼠均不同程度地出现腹泻 黏液便 大便隐血阳性或血便等症状, 随天数增加, 小鼠 DAI 积分逐渐增高 美沙拉嗪 泼尼松 乐复能均能改善小鼠的一般状况, 降低小鼠的 DAI 评分, 减轻结肠长度缩短情况, 降低组织学损伤评分 2) 乐复能低 中 高剂量组, 美沙拉嗪组及泼尼松组 DAI 积分与模型组相比, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.01); 美沙拉嗪组 泼尼松组与乐复能低剂量组之间比较, 差异均无统计学意义 ( 均 P>0.05), 乐复能中 高剂量组治疗效果明显好于美沙拉嗪组 泼尼松组与乐复能低剂量组 ( 均 P<0.01), 且乐复能治疗效果呈剂量依赖性, 乐复能高剂量组好于乐复能中剂量组 (P<0.01) 3) 乐复能低 中 高剂量组 泼尼松组 美沙拉嗪组黏膜缺损相对较轻, 小部分腺体不完整, 炎症细胞较少, 与模型组比较, 差异有统计学意义 ( 均 P<0.01); 乐复能高剂量组与乐复能低 中剂量组, 美沙拉嗪组与泼尼松组比较, 组织损伤明显减轻, 组织学评分显著降低, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.05); 但在乐复能低 中剂量组, 美沙拉嗪组和泼尼松组之间差异均无统计学意义 ( 均 P>0.05) 4) 乐复能低 中 高剂量组, 美沙拉嗪及泼尼松处理组 TNF-α 的表达明显下调, 与模型组相比较, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.01); 美沙拉嗪组与泼尼松组比较,TNF-α 表达差异无统计学意义 (P>0.05), 乐复能低 中 高剂量组之间 TNF-α 的表达随着剂量增加而减少, 所有乐复能治疗组 TNF-α 的表达均明显低于其它治疗组 ( 均 P<0.01) 结论 : 乐复能能明显改善 DSS 诱导的 UC 小鼠 DAI 评分 小鼠结肠黏膜损伤情况及炎症评分, 下调小鼠结肠黏膜组组织内 TNF-α 的表达, 其结果优于美沙拉嗪与泼尼松, 且乐复能的作用呈剂量依赖性 [ 关键词 ] 乐复能 ; 溃疡性结肠炎 ; 肿瘤坏死因子 -α; 葡聚糖硫酸钠 Novaferon ameliorates dextran sulfate sodium-induced colitis and down-regulates expression of TNF-α in mice LI Fujun, WANG Wei, ZHAO Zhen, ZOU Yiyou (Department of Gastroenterology, Xiangya Hospital, Central South University, Changsha , China) 收稿日期 (Date of reception): 第一作者 (First author): 李富军, fj7165@163.com 通信作者 (Corresponding author): 邹益友, zouyiyou1957@163.com

2 乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响李富军, 等 505 ABSTRACT Objective: To explore the effects of novaferon on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis and expression of TNF-α in mice and to evaluate the efficacy of novaferon on ulcerative colitis and the possible mechanisms. Methods: A total of 70 BALB/C mice [weight (20.0±2.0) g, 8-week years old, female, pathogen free] were randomly divided into 7 groups: a normal group, a model group, a mesalazine treatment group, a prednisone treatment group, a low-dose novaferon group, a middle-dose novaferon group and a high-dose novaferon group (10 mice per group). The normal group-mice were given distilled water. The ulcerative colitis model was established by treated the mice with 4% DSS for 7 continuous days. At the 8th day, the mice in the all of drug treatment groups were injected corresponding drugs (i.p.). During the experiment, the general situation, daily weight, stool trait and occult blood were recorded, and the mice were killed on the 14th day. The disease activity index (DAI), colon length, histological scores were assessed. Immunohistochemistry was used to measure the expression of TNF-α in colonic mucosa. Results: 1) The mice treated with DSS solution showed diarrhea, mucous stool and bloody stool, and the DAI score increased gradually. The mesalazine, predinison and nofaferon could ameliorate the general situation of the mice, reduce the DAI and histological scores, and reverse the decrease in the colon length. 2) Compared with the model group, the DAI scores were significantly decreased in the novaferon groups (at low, middle or high dose), the mesalazine group or the prednisone group (all P<0.01), but there was no difference among the mesalazine group, the prednisone group and the low-dose novaferon group (all P>0.05). The efficacy of novaferon in the middle-dose group and the high-dose group are better than that in the mesalazine group, the prednisone group and the low-dose novaferon group (all P<0.01). The efficacy of novaferon showed a dose-dependent manner. 3) The injury of colonic mucosa was relatively mild in the novaferon groups (at low-dose, middle-dose or high-dose), the mesalazine group and the prednisone group, and there were partial glands and less inflammatory cells. Compared with the model group, there was statistics difference (all P<0.05). The tissue injury was significantly alleviated, and the DAI score was decreased in the high-dose novaferon group compared the middle-dose novaferon group (P<0.05), but there was no significant difference between the low-dose novaferon group and the middle-dose novaferon group or between the mesalazine group and the prednisone group (both P>0.05). 4) The TNF-α expression was significantly down-regulated in the novaferon groups (at low-dose, middle-dose or high-dose), the mesalazine group and the prednisone group compared with model group (all P<0.01); but there was no significant difference between the mesalazine group and the prednisone group (P>0.05); the decrease of TNF-α expression by novaferon displayed a dose-dependent manner. Compared with the mesalazine group or the prednisone group, the TNF-α expression in novaferon groups at all dosages was dramatically reduced (all P<0.01). Conclusion: Novaferon can improve the DAI scores and colonic tissue injury in ulcerative colitis induced by DSS in mice, and down-regulate the TNF-α expression in dose-dependent manner. KEY WORDS novaferon; ulcerative colitis; tumor necrosis factor alpha; dextran sulphate sodium 溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, UC) 与克罗恩病 (Crohn s disease, CD) 同属炎症性肠病 (inflammatory bowel disease,ibd), 但二者在发 病机制 临床表现 治疗及预后方面存在着一定的区别 UC 是一种慢性非特异性炎症性肠道疾病, 病变呈弥漫性分布, 主要局限于黏膜与

3 506 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(5) 黏膜下层, 临床上主要表现为腹泻 腹痛 黏液脓血便 [1] 其病因与病理生理学机制尚不十分清楚, 抗炎因子与致炎因子的失衡在 UC 的发病中起了重要作用 [1] 柳氮磺胺吡啶 美沙拉嗪和激素成为治疗 UC 的常用药物, 但治疗时间长 病情反复 副作用大是其主要临床特点, 迄今为止, 对于这些治疗 UC 的一线药物的作用机制并未详尽阐述 近年来, 生物治疗成为 UC 治疗的热点, 并取得了不错的临床效果 乐复能是一种高活性新型蛋白, 已经取得了美国专利 [2] (US B2) 前期研究表明 : 乐复能能够影响机体免疫功能, 调节抗炎与致炎因子的产生 本研究拟观察并比较乐复能 美沙拉嗪 糖皮质激素治疗 UC 小鼠疗效及其对小鼠肠黏膜内肿瘤坏死因子 -α(tumour necrosis factor alpha,tnf-α) 的影响, 以期探讨乐复能治疗 UC 的可行性及其可能的作用机制, 为乐复能治疗 UC 提供理论依据 1 材料与方法 1.1 实验动物 Balb/C 小鼠由中南大学湘雅医学院实验动物中心提供 小鼠为 SPF 级, 鼠龄 8 周左右, 体质量 18~22 g/ 只, 饲养于 SPF 级动物实验室 实验前先在实验条件下适应环境 4 d, 保持室温 (18±2), 相对湿度 (50±10)%, 人工光照时间 12 h/ 日, 自动抽风, 每日上午更换食 水 1 次,3 d 更换消毒垫料 1 次, 每笼 4~6 只, 给予标准配方的鼠饲料, 自由饮食 1.2 4% 葡聚糖硫酸钠溶液配制葡聚糖硫酸钠 (dextran sulfate sodium,dss) ( 购于 Sigma 公司 )40 g, 溶于 800 ml 三蒸水中, 充分搅拌均匀使之完全溶解后, 用三蒸水定容至 ml, 重新搅拌均匀后经直径 0.22 μm 滤器过滤除菌, 每次取 0.2 ml; 乐复能由北京杰华生物技术有限公司提供 ( 批号为 ,10 μg/ 支 ), 分别稀释成低浓度溶液 (0.1 μg/ml); 中浓度溶液 (0.2 μg/ml); 高浓度溶液 (0.3 μg/ml), 每次取 0.2 ml 40 mg/ml 的美沙拉嗪溶液的剂量制备 : 将 1 g 美沙拉嗪 ( 法国爱的发制药集团生产 ) 溶解于 25 ml 无菌生理盐水中, 每毫升含美沙拉嗪 40 mg, 每次取 0.2 ml 5 mg/ml 的泼尼松溶液的剂量制备 : 将 5 mg 泼尼松 ( 浙江仙琚制药股份有限公司生 产 ) 溶解于 10 ml 无菌生理盐水, 每毫升含泼尼松 0.5 mg, 每次取 0.2 ml 1.3 方法 造模及分组实验动物共 70 只, 随机分为正常对照组, 模型组, 美沙拉嗪治疗组, 泼尼松治疗组, 乐复能低 中 高剂量治疗组, 每组 10 只 正常对照组给予蒸馏水自由饮用 7 d, 其余各组参照 Cooper [3] 等的方法建立小鼠 UC 模型 :Balb/C 小鼠自由饮用 4%DSS 溶液, 以代替其日常饮用水, 连续 7 d, 建立小鼠急性 UC 模型 药物处理造模第 8 天各组分别开始给药, 具体给药剂量 方法如下 ( 此方法参考既往动物实验进行, 乐复能剂量参照人体 I II 期临床试验进行 ): 正常对照组 0.2 ml 生理盐水灌胃, 每日 1 次 ; 共 7 d; 模型组 0.2 ml 生理盐水灌胃, 每日 1 次, 共 7 d; 美沙拉嗪治疗组 40 mg/ml 美沙拉嗪溶液灌胃 (0.4 g/kg 体质量 ), 每日 1 次, 共 7 d; 泼尼松治疗组 0.5 mg/ml 泼尼松溶液灌胃 (5 mg/kg 体质量 ), 每日 1 次, 共 7 d 乐复能低剂量组 0.1 μg/ml 的乐复能溶液腹腔注射 (10 μg/kg 体质量 ), 每日 1 次, 共 7 d; 乐复能中剂量组 0.2 μg/ml 的乐复能溶液腹腔注射 (20 μg/kg 体质量 ), 每日 1 次, 共 7 d; 乐复能高剂量组 0.3 μg/ml 的乐复能溶液腹腔注射 (10 μg/kg 体质量 ), 每日 1 次, 共 7 d; 造模第 14 天使用水合氯醛溶液 0.1 ml 腹腔注射麻醉后处死所有实验小鼠, 游离结肠 远端回肠, 取出肛门至盲肠末端的整个结肠和直肠段, 观察各组小鼠结肠的大体改变, 测量整个结肠长度 用预冷无菌生理盐水将结肠冲洗干净, 分别于结肠末端 ( 距肛门 1 cm) 处剪取 0.5 cm 长结肠,10% 甲醛浸泡固定, 石蜡包埋 切片,HE 染色做病理检查 症状及体征观察及评分造模过程中, 观察各组小鼠的体质量变化 [3] 大便性状和便血情况, 参照 Cooper 等的经典评分方法, 每日将体质量下降 大便性状和隐血或便血情况的评分相加, 作为疾病活动指数 (disease activity index,dai) 组织病理学炎症损伤评分 [4] 根据 Dieleman 等评分标准, 结合炎症 病变深度 隐窝破坏及病变范围的评分之和来表示组织

4 乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响李富军, 等 507 学损伤程度 每个切片随机取 10 个高倍视野 ( 400) 进行计分, 以其平均值作为组织学损伤评分 免疫组织化学检测所有标本均由 10% 中性甲醛固定, 石蜡包埋后,4 μm 连续切片 免疫组织化学采用 SP 法, 参考试剂说明书进行操作 结果判断 : 染色以细胞质 细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性, 采用江苏捷达公司 JD-801 显微图象分析系统进行图象半定量分析 根据染色面积和强度进行半定量分析, 用吸光度值表示 图像分析系统的吸光度值 =log( 景平均灰度值 / 待测目标的平均灰度值 ) 物体颜色越深, 吸光度值越大, 阳性物质相对含量越大 每个标本随机选择 10 个高倍镜视野 ( 400) 测定其吸光度值, 取其平均值进行统计分析 1.4 统计学处理各组小鼠 DAI, 结肠长度和组织学损伤评分结果数据, 以及免疫组织化学法测得的 TNF-α 数据均以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 对计量资料进行方差齐性检验, 组间比较采用单因素方差分析 (one-way ANOVA), 经 SPSS 16.0 统计软件处理, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 小鼠 DAI 评分情况造模第 3 天, 模型组及各药物治疗组小鼠不同程度地出现饮食减少 懒动 体质量下降 毛发无光泽等 随实验天数的增加, 小鼠逐渐出现大便次数增多 软便或稀便 大便末端有黏液或脓点等, 有的出现肉眼血便 而正常对照组小鼠大便正常 体质量增加 毛发有光泽 活动均正常 不同药物及不同剂量的乐复能治疗组与模型组同期相比, 腹泻 稀血便症状及疾病活动指数有不同程度的缓解 造模第 14 天, 对各组小鼠进行 DAI 评分, 所有治疗组小鼠 DAI 积分较正常组均有不同程度的增高 ( 均 P<0.01) 乐复能低 中 高剂量组, 美沙拉嗪组及泼尼松组 DAI 积分 ( 分别为 4.20±0.98, 3.37±0.93, 2.50±0.84,4.17±0.95,4.00±0.97) 维持在相对较低的水平, 与模型组 (7.67±1.23) 相比, 差异有 统计学意义 ( 均 P<0.01) 美沙拉嗪组 泼尼松组 DAI 评分 ( 分别为 4.17±0.95,4.00±0.97) 与乐复能低剂量组 (4.20±0.98) 之间比较, 差异无统计学意义 ( 均 P>0.05), 但乐复能中 高剂量组 DAI 评分 (3.37±0.93, 2.50±0.84) 治疗效果明显好于美沙拉嗪组 泼尼松组 (4.17±0.95, 4.00±0.97) 与乐复能低剂量组 (4.20±0.98)( 均 P<0.01), 且乐复能治疗效果呈剂量依赖性, 乐复能高剂量组 DAI 评分 (2.50±0.84) 好于乐复能中剂量组 (3.37±0.93) (P<0.01) 2.2 小鼠结肠黏膜损伤情况及炎症评分镜下正常组小鼠结肠黏膜完整, 腺体排列整齐, 无炎细胞浸润和杯状细胞减少 ; 模型组小鼠结肠黏膜缺损明显, 大多腺体不完整, 排列紊乱, 病变重者腺体消失, 隐窝破坏变形, 大量炎细胞浸润, 杯状细胞减少明显 ; 乐复能低 中 高剂量组, 泼尼松组 美沙拉嗪组黏膜缺损相对较轻, 小部分腺体不完整, 炎症细胞较少, 与模型组比较, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.01) 乐复能高剂量组的组织学评分 (4.17±1.17) 较乐复能低剂量组 (6.83±1.47) 中剂量组(6.33±1.45) 美沙拉嗪组 (6.33±1.37) 和泼尼松组 (7.33±1.33) 明显降低, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.05), 但在乐复能低剂量组 中剂量组 美沙拉嗪组和泼尼松组之间差异无统计学意义 ( 均 P>0.05, 图 1) 2.3 小鼠结肠黏膜组织内 TNF-α 表达正常组小鼠结肠黏膜中 TNF-α( 吸光度值为 0.108±0.020) 呈低水平表达 模型组 TNF-α (0.316±0.059) 呈高水平表达 ; 乐复能低剂量组 (0.172±0.023) 中剂量组(0.163±0.026) 高剂量组 (0.150±0.026) 美沙拉嗪组(0.258±0.047) 及泼尼松处理组 (0.262±0.043) 的 TNF-α 表达明显下调, 与模型组相比, 差异均有统计学意义 ( 均 P<0.05) 美沙拉嗪组 (0.258±0.047) 与泼尼松组 (0.262±0.043) 比较,TNF-α 表达差异无统计学意义 (P>0.05); 乐复能低 中 高剂量组之间 TNF-α 的表达呈剂量依赖性, 乐复能低 中 高剂量组 TNF-α 的表达均明显低于美沙拉嗪组与泼尼松组 ( 均 P<0.01, 图 2)

5 508 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(5) A1 A2 B1 B2 C1 C2 D1 D2 E1 E2 F1 F2 G1 G2 图 1 各组小鼠结肠组织黏膜损伤情况 ( 免疫组织化学染色,A1,B1,C1,D1,E1,F1,G1, 100;A2,B2,C2,D2, E2,F2,G2, 400) Figure 1 Mucosal injury in colonic tissue of mice in different groups (immunohistochemistry staining, A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, 100; A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, 400) A1, A2: Normal group; B1, B2: Model group; C1, C2: Lower-dose novaferon group; D1, D2: Middle-dose novaferon group; E1, E2: High-dose novaferon group; F1, F2: Mesalazine group; G1, G2: Prednisone group

6 乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响李富军, 等 509 A B C D E F G 图 2 各组小鼠结肠黏膜 TNF-α 表达 ( 免疫组织化学染色, 400) Figure 2 Expression of TNF-α in colonic mucosa in different groups (immunohistochemistry staining, 400) A: Normal group; B: Model group; C: Mesalazine group; D: Prednisone group; E: Low-dose novaferon group; F: Middle-dose novaferon group; G: High-dose novaferon group 3 讨论 UC 是炎症性肠病的一种, 到目前为止, 关于其发病原因尚不甚清楚, 遗传 免疫 环境被认为在其发病过程中起了重要的作用 [5] 5- 氨基水杨酸 美沙拉嗪 激素 免疫抑制剂作为治疗 UC 的经典用药被沿用至今, 但治疗时间长 副作用大 停药容易复发的特点一直没得到很好的改变 生物制剂 TNF 单抗英夫利昔在治疗 CD 方面取得不错的结果, 进而引发生物制剂治疗 IBD 的研究热点 但目前大多数治疗 IBD 的生物制剂主要是针对 CD 患者, 仅有少量生物制剂用于治疗 UC 且效果并不理想 乐复能是采用基因穿梭法 从 12 种人 α 干扰素基因构建杂交文库, 采用高通量筛选技术, 筛选 10 多万个克隆而得到的新型生物制剂, 由 498 个核苷酸编码 166 个氨基酸组成, 分子质量为 19.3 kd, 具有多种生物学活性的 [6] 细胞因子 一系列前期研究表明 : 它在抗病毒 抗肿瘤具有较好的疗效, 抗肿瘤活性是天然人干扰素的 200 多倍, 抗病毒活性则达 10 倍以上, 但关于乐复能治疗免疫性疾病方面的研究尚属空白 作者前期体外实验表明, 乐复能具有较强的免疫调节功能 [2] 本研究发现 : 乐复能在治疗 UC 模型小鼠方面具有好的疗效, 表现在乐复能能够明显改善 UC 模型小鼠结肠黏膜损伤情况 炎症评分 DAI 评分, 并且具有剂量依赖性, 与其它治疗组比较, 乐复能低剂量组与美沙拉嗪治疗组疗效相当, 乐复能中剂量组与激素治疗组疗效相当, 但好于美沙拉嗪治疗组, 而乐复能高剂量组疗效明显好于其它治疗组 TNF-α 是一种较为重要的致炎因子, 除了其本身致炎作用外, 还能因其 炎症瀑布效应 而引起其它一些致炎因子和炎症介质的释放, 因此 TNF-α 与许多炎症性疾病 ( 如 CD,UC 和类风湿性关节炎

7 510 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(5) 等 ) 关系密切 [7] 临床研究也表明, 抑制 TNF-α 的分 泌或阻断 / 中和其作用可成为治疗此类疾病不错的 选择 [8] 美莎拉嗪是治疗轻 中度 UC 的经典用药, 其具体作用机制尚未阐明, 可能与抑制结肠过氧化物酶 抑制炎性介质 ( 包括前列腺素 白三烯等 ) 的合成和释放 抑制血小板活化因子的活性 清除自 [9] 由基 降低肠道黏膜的损伤及刺激有关 有研究表明 : 美莎拉嗪能够下调 UC 模型小鼠结肠黏膜内 TNF-α 的表达, 因此其治疗 UC 的作用可能与其抑制 TNF-α 的分泌有关 糖皮质激素作为治疗中 重度 UC 的药物, 主要是通过下调免疫细胞内 NF-κB 与 AP-1 而抑制炎性因子 ( 如 TNF-α) 分泌, 从而发挥其抗炎 抑制免疫的作用 [10-11] 本研究亦显示: 美沙拉嗪与激素能明显下调 UC 小鼠结肠黏膜内 TNF-α 的水平, 由此可知抑制或下调 UC 患者体内的 TNF-α 产生, 是治疗 UC 的有效途径之一 乐复能是一种新型抗病毒 抗肿瘤 免疫调节生物制剂, 本研究亦表明它能抑制 UC 小鼠结肠黏膜内 TNF-α 的表达, 且呈剂量依赖性, 因此, 乐复能通过下调 UC 小鼠内 TNF-α 的分泌, 从而抑制由 TNF-α 所导致的一系列炎症性瀑布反应, 起到下调炎症反应的作用, 这也是与目前治疗免疫性疾病 ( 如类风湿性关节炎 ) 的策略相一致 [12] 本研究发现: 乐复能低 中 高剂量组在改善 UC 小鼠 DAI 评分与下调小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达较美沙拉嗪与泼尼松组明显, 且乐复能低 中 高剂量组之间呈明显剂量依赖性, 但在关于改善 UC 小鼠结肠黏膜损伤情况及炎症评分方面, 除乐复能高剂量组外, 其它各治疗组之间并无明显差异, 这一研究结果亦与治疗 UC 患者相似, 因为黏膜的愈合要晚于 UC 患者症状改善与体内炎性因子的下调 [13] 总之, 乐复能低 中 高剂量组能明显改善 UC 小鼠 DAI 评分, 下调小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达, 其结果明显优于美沙拉嗪组与泼尼松组, 基于此, 乐复能有望成为治疗 UC 的一种新型生物制剂 Science, 2013, 38(1): [3] Cooper HS, Murthy SN, Shah RS, et al. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis[ J]. Lab Invest, 1993, 69(2): [4] Dieleman LA, Ridwan BU, Tennyson GS, et al. Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice[ J]. Gastroenterology, 1994, 107(6): [5] Baumgart DC, Carding SR. Inflammatory bowel disease: cause and immunobiology[ J]. Lancet, 2007, 369(9573): [6] Li M, Rao C, Pei D, et al. Novaferon, a novel recombinant protein produced by DNA-shuffling of IFN-α, shows antitumor effect in vitro and in vivo[ J]. Cancer Cell Int, 2014, 27, 14(1): 8. [7] Dotan I, Rachmilewitz D. Probiotics in inflammatory bowel disease: possible mechanisms of action[ J]. Curr Opin Gastroenterol, 2005, 21(4): [8] Armstrong AM, Gardiner KR, Kirk SJ, et al. Tumour necrosis factor and inflammatory bowel disease[ J]. Br J Surg, 1997, 84(8): [9] Mao JW, Tang HY, Tan XY, et al. Effect of Etiasa on the expression of matrix metalloproteinase-2 and tumor necrosis factor-α in a rat model of ulcerative colitis[ J]. Mol Med Rep, 2012, 6(5): [10] Refojo D, Liberman AC, Holsboer F, et al. Transcription factormediated molecular mechanisms involved in the functional cross-talk between cytokines and glucocorticoids[ J]. Immunol Cell Biol, 2001, 79(4): [11] Yamamoto Y, Gaynor RB. Therapeutic potential of inhibition of the NF-kappaB pathway in the treatment of inflammation and cancer[ J]. J Clin Invest, 2001, 107(2): [12] Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Role of cytokines in rheumatoid arthritis[ J]. Annu Rev Immunol, 1996, 14: [13] Seidelin JB, Coskun M, Nielsen OH. Mucosal healing in ulcerative colitis: pathophysiology and pharmacology[ J]. Adv Clin Chem, 2013, 59: 参考文献 ( 本文编辑傅希文 ) [1] Strober W, Fuss IJ. Proinflammatory cytokines in the pathogenesis of inflammatory bowel diseases[ J]. Gastroenterology, 2011, 140(6): [2] 李富军, 薛梅, 卢放根, 等. 乐复能对 LPS 介导的健康人外周血单核细胞分泌 TNF-α 的影响及其机制 [ J]. 中南大学学报 : 医学版, 2013, 38(1): LI Fujun, XUE Mei, LU Fanggen, et al. Mechanism of Novaferon on production of TNF-α by monocytes isolated from normal human peripheral blood[ J]. Jounal of Central South University. Medical 本文引用 : 李富军, 王维, 赵桢, 邹益友. 乐复能对溃疡性结肠炎小鼠疗效及其对小鼠结肠黏膜内 TNF-α 表达的影响 [ J]. 中南大学学报 : 医学版, 2015, 40(5): DOI: / j.issn Cite this article as: LI Fujun, WANG Wei, ZHAO Zhen, ZOU Yiyou. Novaferon ameliorates dextran sulfate sodium-induced colitis and down-regulates expression of TNF-α in mice[ J]. Journal of Central South University. Medical Science, 2015, 40(5): DOI: / j.issn

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600 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 599 喘 可 治 注 射 液 联 合 细 辛 脑 注 射 液 治 疗 小 儿 毛 细 支 气 管 炎 的 临 床 研 究 唐 辉 英, 佘 定 平, 马 颐 娇 深 圳 市 儿 童 医 院 呼 吸 科, 广 东 深 圳 518026 摘 要 : 目 的 探 讨 喘 可 治 注 射 液 联 合

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