wcj@wjgnet.com 世界华人消化杂志 214 年 4 月 28 日 ; 22(12): 1688-1693 ISSN 19-379 (print) ISSN 2219-2859 (online) 研究快报 RAPID COMMUNICATION 参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织 AQP4 蛋白及 mrna 表达的影响 李姿慧, 王键, 蔡荣林, 孙娟, 叶铭钢 背景资料溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, U C ) 是一种病因和发病机制尚未明确的慢性肠道非特异性炎症性疾病, 中医学认为, 其多属 肠澼 肠风 泄泻 或 便血 等范畴, 脾虚湿困证是 UC 临床常见证候. 多项研究表明, 健脾化湿法有效方剂参苓白术散治疗 U C 疗效明确, 但是有关其作用机制的研究却鲜见报道. 同行评议者黄颖秋, 教授, 本溪钢铁 ( 集团 ) 总医院消化内科 李姿慧, 王键, 孙娟, 叶铭钢, 安徽中医药大学中医临床学院安徽省合肥市 2338 蔡荣林, 安徽中医药大学针灸经络研究所安徽省合肥市 2338 李姿慧, 讲师, 医学博士, 主要从事中医治则治法的理论与实验研究. 国家自然科学基金资助项目, Nos. 81173172, 813291 安徽省自然科学基金资助项目, No. 13885QH155 安徽省高等学校自然科学研究重点基金资助项目, No. KJ211A184 作者贡献分布 : 李姿慧与王键对此文所作贡献均等 ; 此课题由王键与李姿慧设计 ; 研究过程由李姿慧 蔡荣林 孙娟及叶铭钢操作完成 ; 研究所用试剂与分析工具由王键与李姿慧提供 ; 数据分析由李姿慧 王键及蔡荣林完成 ; 本论文写作由李姿慧与王键完成. 通讯作者 : 王键, 教授, 博士生导师, 2338, 安徽省合肥市梅山路 13 号, 安徽中医药大学. wangjian631@163.com 电话 : 551-65169179 收稿日期 : 213-1-31 修回日期 : 214-1-1 接受日期 : 214-1-8 在线出版日期 : 214-4-28 Effect of Shenlin Baizhu power on expression of AQP4 in ulcerative colitis rats with synrome of ampness stagnancy ue to spleen eficiency Zi-Hui Li, Jian Wang, Rong-Lin Cai, Juan Sun, Ming-Gang Ye Zi-Hui Li, Jian Wang, Juan Sun, Ming-Gang Ye, School of Traitional Chinese Meicine, Anhui University of Traitional Chinese Meicine, Hefei 2338, Anhui Province, China Rong-Lin Cai, Research Institute of Acupuncture an Moxibustion, Anhui University of Traitional Chinese Meicine, Hefei 2338, Anhui Province, China Supporte by: National Natural Science Founation of China, Nos. 81173172 an 813291; the Natural Science Research Project of Anhui Province, No. 13885QH155; the National Basic Research Program of China University Science Research Project of Anhui Province, No. KJ211A184 Corresponence to: Jian Wang, Professor, School of Traitional Chinese Meicine, Anhui University of Traitional Chinese Meicine, 13 Meishan Roa, Hefei 2338, Anhui Province, China. wangjian631@163.com Receive: 213-1-31 Revise: 214-1-1 Accepte: 214-1-8 Publishe online: 214-4-28 Abstract AIM: To investigate the effect of Shenlin Baizhu power on expression of aquaporin 4 (AQP4) in ulcerative colitis (UC) rats with synrome of ampness stagnancy ue to spleen eficiency. METHODS: Forty rats were ivie into a normal control group, a moel control group, a Shenlin Baizhu group an a sulfasalazine group, with 1 rats in each group. UC was inuce in rats by environmental an iet interventions combine with trinitrobenzene sulfonic aci (TNBS) an ethanol. The expression of AQP4 protein an mrna in colonic tissues was etecte by immunohistochemistry an fluorescence quantitative PCR, respectively. RESULTS: The expression of AQP4 protein an mrna in the moel control group was significantly lower than that in the normal group (.764 ±.51 vs.8 ±.33, 28.288 ± 1.578 vs 28.296 ± 1.142, P <.5). The expression of AQP4 protein an mrna in the sulfasalazine group an Shenlin Baizhu group significantly increase an was significantly higher compare with that in the moel group (.752 ±.59 vs.8 ±.33, 28.13 ± 1.395 vs 28.288 ± 1.578,.487 ±.46 vs.8 ±.33, 27.711 ± 1.638 vs 28.288 ± 1.578, P <.5). There was a significant ifference in the expression of AQP4 protein an mrna between the sulfasalazine group an Shenlin Baizhu group (.752 ±.59 vs.487 ±.46, 28.13 ± 1.395 vs 27.711 ± 1.638, P <.5). CONCLUSION: Shenlin Baizhu power coul significantly improve the expression of AQP4 protein an mrna in UC an promote the repair of the intestinal mucosa. 214 Baishieng Publishing Group Co., Limite. All rights reserve. Key Wors: Shenlin Baizhu power; Ulcerative colitis; Synrome of ampness stagnancy ue to spleen eficiency; Aquaporin 4 Li ZH, Wang J, Cai RL, Sun J, Ye MG. Effect of Shenlin Baizhu power on expression of AQP4 in ulcerative
李姿慧, 等. 参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织 AQP4 蛋白及 mrna 表达的影响 1689 colitis rats with synrome of ampness stagnancy ue to spleen eficiency. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 214; 22(12): 1688-1693 URL: http://www.wjgnet. com/19-379/22/1688.asp DOI: http://x.oi. org/1.11569/wcj.v22.i12.1688 摘要目的 : 探讨参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, UC) 大鼠结肠组织中水通道蛋白 4(aquaporin 4, AQP4) 蛋白及 mrna 表达的影响. 方法 : Wistar 大鼠 4 只, 随机分为正常对照组 模型对照组 柳氮磺吡啶组 参苓白术散组, 每组 1 只, 脾虚湿困型 UC 大鼠模型的复制采用环境与饮食干预结合三硝基苯磺酸 (trinitrobenzene sulfonic aci, TNBS)/ 乙醇灌肠法, 运用免疫组织化学法 荧光定量 PCR 法检测并比较各组大鼠结肠组织 AQP4 蛋白及 mrna 表达的变化. 结果 : 模型对照组 AQP4 蛋白及 mrna 表达量低于正常对照组 (.764±.51 vs.8 ±.33, 28.288±1.578 vs 28.296±1.142, P <.5), 参苓白术散组和柳氮磺吡啶组大鼠结肠组织 A Q P4 表达平均光密度及 A Q P4 mrna 表达较模型对照组显著升高, 其间差异有统计学意义 (.752±.59 vs.8±.33, 28.13±1.395 vs 28.288±1.578,.487±.46 vs.8±.33, 27.711±1.638 vs 28.288± 1.578, P <.5), 参苓白术散组大鼠结肠组织 AQP4 表达平均光密度与柳氮磺吡啶组比较差异亦有统计学意义 (.752±.59 vs.487 ±.46, 28.13±1.395 vs 27.711±1.638, P <.5). 结论 : 参苓白术散治疗可以明显改善 UC 大鼠结肠组织中 AQP4 的表达, 促进肠黏膜的修复. 214 年版权归百世登出版集团有限公司所有. 关键词 : 参苓白术散 ; 脾虚湿困证 ; 溃疡性结肠炎 ; 水通道蛋白 4 核心提示 : 参苓白术散能增强脾虚湿困型溃疡性 结肠炎大鼠的结肠组织中水通道蛋白 4(aquaporin 4, AQP4) 的表达, 改善脾运化水液的功能, 促进机 体水液代谢功能的恢复. 因此, 参苓白术散改善 结肠组织中 AQP4 的表达可能是其改善脾主运化 功能的重要生物学机制之一. 李姿慧, 王键, 蔡荣林, 孙娟, 叶铭钢. 参苓白术散对脾虚湿 困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织 A Q P4 蛋白及 m R N A 表达的影响. 世界华人消化杂志 214; 22(12): 1688-1693 URL: http://www.wjgnet.com/19-379/22/1688.asp DOI: http://x.oi.org/1.11569/wcj.v22.i12.1688 引言溃疡性结肠炎 (ulcerative colitis, UC) 是一种病因和发病机制尚未明确的慢性肠道非特异性炎症性疾病, 中医学认为, UC 多属 肠澼 肠风 泄泻 或 便血 等范畴, 脾虚湿困证是 UC 临床常见证候 [1,2]. 多项研究表明, 健脾化湿法有效方剂参苓白术散治疗 UC 疗效明确 [1,3], 但是有关其作用机制的研究却鲜见报道. 近年来有研究发现湿病与水通道蛋白 (aquaporin, AQP) 密切相关 [4]. 本研究选取健脾化湿法有效方剂参苓白术散, 运用现代分子生物学研究技术观察参苓白术散对脾虚湿困型 UC 大鼠 AQP4 蛋白及 mrna 表达的影响, 初步探讨参苓白术散治疗脾虚湿困型 UC 的部分作用机制, 以进一步揭示湿病及其化湿法的生物学机制, 促进中医水液代谢障碍理论的深入研究. 1 材料和方法 1.1 材料 4 只健康清洁级 Wistar 大鼠, 雌雄各半, 体质量 2 g±2 g[ 南京医科大学实验动物中心提供, 合格证号 : SCXK( 苏 )284]. 大鼠适应性常规普食喂养 3 后随机分为正常对照组 模型对照组 柳氮磺吡啶组 参苓白术散组, 每组 1 只. 参苓白术散水煎液组方为 : 人参 15 g 茯苓 15 g 薏苡仁 9 g 白术 15 g 桔梗 6 g 莲子肉 9 g 缩砂仁 6 g 陈皮 9 g 甘草( 炒 )9 g 白扁豆 ( 姜汁浸, 去皮 )12 g 山药 15 g 均购自安徽中医药大学门诊部, 由安徽中医药大学中药制剂室提供制剂 ; 2,4,6- 三硝基苯磺酸 [(trinitrobenzene sulfonic aci, TNBS), 由 Sigma 公司生产 ] rabbit anti-aqp4(h-8): ZS-2812 柳氮磺吡啶肠溶片 ( 上海中西三维药业有限公司, 批号 : 211212) 通用型二抗试剂盒 (PV-6) 引物及探针合成 (Invitrogen 公司 ) TRIzol Reagent (Invitrogen 公司, 货号 : 15596-26) Taq DNA 聚合酶 (Fermentas 公司, 美国 ) DAB( 北京中杉金桥生物技术有限公司, ZLI-932) 逆转录试剂盒(RevertAi first Stran cdna Synthesis Kit, Fermentas 公司, 货号 : 64525) 荧光定量试剂(TaKaRa 公司 ). 11-A 恒温干燥箱 ( 宁波自动化仪表厂 ) FA24 型电子天平 ( 上海天平仪器厂生产 ) OLYMPUS 研发前沿中医药治疗 UC 具有独特的优势, 采用中药复方治疗 UC 的作用机制研究还有待于进一步深入研究. 近年来有研究发现湿病与水通道蛋白密切相关. 水通道蛋白 (aquaporin, AQP) 的表达失常可能是 UC 发生的重要病理机制, 肠道 AQP 的正常表达可能是治疗 UC 的分子生物学基础之一. 相关报道诸多研究证明, 脾虚湿困是 UC 的基本病机, 采用具有健脾化湿作用的有效方剂参苓白术散治疗脾虚湿困型 UC, 疗效显著. AQP 与中医理论的肺 脾 肾等脏功能密切相关. 已有相关研究发现, AQP 蛋白的表达水平与湿阻中焦证 脾胃湿热证 便秘 腹泻等病证的发生有一定的关系.
169 ISSN 19-379 (print) ISSN 2219-2859 (online) 世界华人消化杂志 214 年 4 月 28 日第 22 卷第 12 期 创新盘点本研究选取健脾化湿法有效方剂参苓白术散, 运用现代分子生物学研究技术观察参苓白术散对脾虚湿困型 U C 大鼠 A Q P 4 蛋白及 mrna 表达的影响, 初步探讨参苓白术散治疗脾虚湿困型 UC 的部分作用机制, 以进一步揭示湿病及其化湿法的生物学机制, 促进中医水液代谢障碍理论的深入研究. 表 1 引物及探针引物 序列 actin Forwar Primer 5'-GACTACCTCATGAAGATCCTCACC-3' Reverse Primer 5'-TCTCCTTAATGTCACGCACGATT-3' Probe 5'-CGGCTAC AGCTTC ACCACCACGGC-3' 水通道蛋 Forwar Primer 5'-TGAATCCAGCTCGA TCCTTTG-3' 白 4 Reverse Primer 5'-TATCCAGTGGTTT TCCCAGTTTC-3' Probe 5'-CCCTGCAGTTATCATG-3' BX51 荧光显微镜 ( 日本 OLYMPUS 光学工业株式会社 ) LEICA ASP2 自动切片机 (LEICA 公司 ) PCR 仪 ( 美国 ABI 公司, ABI272) 荧光定量 PCR 仪 ( 美国 ABI 公司, ABI75) DP81 形态学显微图像分析系统 ( 捷达科技发展有限公司 ) TB-718 自动包埋机 ( 泰维电子设备有限公司 ) GSM 凝胶图像分析管理系统 ( 美国 Sim 公司, Biopro CN-UV 型 ). 1.2 方法 1.2.1 模型复制 : 脾虚湿困型 UC 大鼠模型的复制采用环境与饮食干预结合 TNBS/ 乙醇灌肠法 [5], 每日 8: 至 16: 将大鼠置于 2 cm 深的水中, 控制睡眠 8 h, 单日禁食, 并给予 2 ml 4 生理盐水灌胃 1 次, 双日给予充足饲料和 4 ml 猪油灌胃 1 次, 连续 2. 第 21 天, 脾虚湿困型 UC 组大鼠 24 h 禁食不禁水, 用 1% 水合氯醛 (3 ml/kg) 麻醉, 经肛门按照 12 5 将 5% 的 TNBS 与 5 ml/l 乙醇混合物 ( 其中 TNBS 12 mg/kg).8 ml 注入距肛门上段约 8 cm 处, 然后将大鼠头部向下持续倒置 1 min 使溶液充分渗入大鼠肠腔内, 再将大鼠头部倾斜放置至自然清醒, 自由饮食. 1.2.2 实验处理 : 正常对照组大鼠给予常规喂养, 生理盐水 2 ml/ 只灌胃每日 1 次, 并参照造模方法予肛门灌肠生理盐水.8 ml/ 只. 模型复制成功后, 参苓白术散组大鼠予参苓白术散煎剂灌胃, 按照 药理实验方法学 不同动物等效剂量折算系数表 折算出参苓白术散煎剂的大鼠用药剂量为 12 g/(kg ), 柳氮磺吡啶组大鼠给予.5 g/(kg ) 柳氮磺吡啶灌胃, 正常对照组和模型对照组大鼠给予 1 ml/(kg ).9% 生理盐水灌胃, 连续 14. 组大鼠结肠组织 AQP4 表达. 将固定后的结肠组织进行石蜡包埋, 切片成 5 μm, 常规脱蜡, 蒸馏水冲洗 5 min, 再用 PBS 浸泡 5 min, 枸橼酸液加热修复, H 2 O 2 冲洗 5 min, 3%H 2 O 2 室温孵育 6 min, 滴加一抗, rabbit anti-aqp3/aqp4 (H-8): ZS-2812, 工作浓度 1 1, 置于 4 冰箱过夜 ; 滴加通用型二抗通用型二抗 (PV-6), 室温 2 min, DBA 显色后常规脱水, 中性树胶封片. 镜检 图像采集 记录其平均每 1 个细胞中的平均光密度 ( 每张切片选取 3-5 个不重叠视野, 测定每个视野下的平均光密度 ). 荧光定量 P C R 法检测各组大鼠结肠组织 AQP4 mrna 表达的变化. 取大鼠结肠组织约 5 mg, 剪碎后加入 1 ml TRIzol, 匀浆后提取总 RNA;.2 ml EP 管中加入 1 μmol/l Oligo(T)1 μl 总 RNA 8 μl DEPC 水 3 μl, 轻轻混匀后离心 ; PCR 仪上 5 min 65 加热, 3 min 冰浴 ; 在上述 EP 管中加入 1 mmol/l NTP Mix 2 μl 5 Reaction Buffer 4. μl RevertAi M-MuLV Reverse Transcniptase 1 μl Ribolock Rnase inhibitor 1 μl; 42 6 min, 7 5 min; 取出上述反应液, 即为 cdna, -8 保存备用 ; 取出 cdna 2 μl 作为荧光定量的模板进行 PCR 反应. 引物及探针如表 1. 结果判定及测量方法为 : relative quantification stuy, 分析所采用的指标为 : 2 - Ct. 统计学处理所有实验数据以 mean±sd 表示, 采用 SPSS17. 软件进行处理, 各组间均数比较采用单因素方差分析 (One-way ANOVA), 组间均数的两两比较采用最小显著差数法, 以 P <.5 为差异有统计学意义. 实验结束后, 将大鼠用 1% 水合氯醛 (3 ml/kg) 麻 醉, 开腹, 暴露结肠, 从肛门向上纵向剪开大鼠结肠组织, 取病变最明显处 ( 约肛门上 8 cm) 的肠组织约 1 cm 1 cm, 用生理盐水冲洗干净, 分别置于 1% 多聚甲醛溶液和液氮中保存备用. 1.2.3 观察指标与测定 : 免疫组织化学法观察各 2 结果 2.1 免疫组织化学法检测 AQP4 表达的变化情况模型对照组 A Q P4 表达量低于正常对照组 (P <.5), 柳氮磺吡啶组和参苓白术散组大鼠结肠组织 AQP4 表达的平均光密度较模型对照组
李姿慧, 等. 参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织 AQP4 蛋白及 mrna 表达的影响 1691 A C B D 图 1 各组大鼠结肠 AQP4 免疫组织化学染色 (SP 4). A: 正常对照组 ; B: 模型对照组 ; C: 参苓白术散组 ; D: 柳氮磺吡啶组. AQP4: 水通道蛋白 4. 应用要点本研究发现参苓白术散治疗可以明显改善 UC 大鼠结肠组织中 AQP 的表达, 促进肠黏膜的修复. 通过对脾虚湿困型 UC 大鼠结肠组织 AQP 表达及参苓白术散干预作用的研究, 可进一步深入揭示 AQP 在脾虚湿困型 UC 发病过程中的作用机制, 对不断阐明湿病发生的生物学基础和健脾化湿法的作用机制与途径具有重要的意义. 各组大鼠结肠组织 AQP4 平均光密度 1.8.6.4.2 显著升高, 其间差异有统计学意义 (P <.5), 参 苓白术散组大鼠结肠组织 AQP4 表达的平均光 密度值与柳氮磺吡啶组比较差异亦有统计学意 义 (P <.5). 提示参苓白术散治疗可以明显改善 UC 大鼠结肠组织中 AQP4 的表达, 且其作用优于 柳氮磺嘧啶 ( 图 1, 2). 2.2 荧光定量 PCR 法检测 AQP 4 mrna 表达的变 化情况 bf 正常对照组模型对照组参苓白术散组柳氮磺吡啶组 图 2 各组大鼠结肠组织 AQP4 平均光密度比较. b P <.1 vs 正常对照组 ; P <.1 vs 模型对照组 ; f P <.1 vs 参苓白术散组. AQP4: 水通道蛋白 4. 2.2.1 结肠组织 AQP4 mrna 表达定量分析 : 从图 3 可知, 标准品的起始拷贝数不同, 达到荧光域 值 (threhsol) 的 PCR 循环次数不同, 起始拷贝数 越高, 达到荧光域值的循环次数越少. 扩增曲线 显示荧光强度和初始拷贝数呈良好的线性关系. 2.2.2 各组大鼠结肠组织 AQP4 mrna 表达比较 : 由图 4 可知, 模型对照组大鼠结肠组织中 AQP4 mrna 表达均较正常对照组明显降低, 其间差异 有统计学意义 (P <.5). 参苓白术散组大鼠结肠 组织中 AQP4 mrna 表达与模型对照组比较显 著升高, 其间差异有统计学意义 (P <.5). 提示 参苓白术散治疗可显著改善大鼠结肠组织 AQP4 mrna 表达. 3 讨论 湿邪致病因其具有潜隐性 兼挟性及迁延性等 特点, 几乎存在于各系统的疾病中, 病种繁多. 对 于湿病的治疗, 历代医家都极为重视对脾脏生理 功能的恢复, 素问 至真要大论 已有 诸湿 肿满, 皆属于脾 的认识, 认为诸多水湿病证, 其 病变根本原因是脾的运化水液功能失调. 在诸多 医籍医案中或明确提出健脾化湿, 或虽未提及健 脾化湿法, 但也已蕴含健脾化湿之意. 诸多研究证明, 脾虚湿困是 U C 的基本病 机, 采用具有健脾化湿作用的有效方剂参苓 白术散治疗脾虚湿困型 UC, 疗效显著. 一项对 1989-23 年国内医学杂志中治疗 UC 的 1369 篇 实验研究论文进行综合分析发现, 单纯中药治 疗和中西药结合治疗 UC 的总有效率均在 9% 以 上, 其中参苓白术散等是中医治疗 UC 的主要方 剂 [6]. 有研究报道参苓白术散能明显修复胃肠黏 膜屏障 改善胃肠动力的作用 [7,8] [9]. 阮家安用 参苓白术散辨证加减治疗慢性泄泻总有效率达 [1] 91.11%, 谭巨涛以加味参苓白术散配合灌肠
Rn vs cycle A 19.23 B 16.88 15.23 14.88 13.23 12.88 11.23 1.88 9.23 6.88 5.23 4.88 3.23 2.88 5 1 15 2 25 3.88 4 5 1 15 C Delta Rn D 1.e+.1 1.e+. 1.e+. 1.e-.1 1.e-.2 1.e-.3 1.e-.3 5 1 15 2 3 4 3 4 1.e-.1 1.e-.2 25 25 3 4 Delta Rn vs cycle 1.e+.2 1.e+.1 1.e-.4 2 Delta Rn vs cycle 1.e+.2 第12期 8.88 7.23 1.23 第22卷 Rn vs cycle 18.88 17.23 Rn AQP作为膜内在 蛋白质, 是细胞膜 上转运水的特异 性孔道, 与水通透 性密切相关, 目 前已在哺乳动物 体内发现了13种 AQP亚类, 对不同 种类细胞膜的跨 膜水转运发挥着 重要的介导作用, 能显著增加细胞 膜的透水性, 对保 持生命体内稳态 水平衡具有关键 的作用. 世界华人消化杂志 214年4月28日 Delta Rn 名词解释 ISSN 19-379 (print) ISSN 2219-2859 (online) Rn 1692 1.e-.4 5 1 15 2 25 图 3 扩增曲线与扩增图谱. A: β-actin的扩增曲线; B: AQP4样本的扩增曲线; C: β-actin的扩增图谱; D: AQP4样本的扩增图谱. Rn: 荧光信号强度; Rn vs cycle: 荧光信号强度与PCR循环之间的关系; AQP4: 水通道蛋白4. 各组大鼠结肠组织AQP4 mrna表达 1.5 脾 肾三脏发挥着对人体内水液代谢过程的重 要调节作用, 提示我们, AQP与中医理论的肺 1 脾 肾等脏功能密切相关. 已有相关研究发现, AQP蛋白的表达水平与湿阻中焦证 脾胃湿热 证 便秘 腹泻等病证的发生有一定的关系..5 bf 周正等 [13-15] 通过研究发现, 脾胃湿热证患 者AQP4的蛋白及mRNA表达明显升高, 而脾气 虚证患者AQP4蛋白及mRNA表达均低下, 认为 正常对照组 模型对照组 参苓白术散组 柳氮磺吡啶组 图 4 各组大鼠结肠组织AQP4 mrna表达比较. bp <.1 vs 正常对照组; P <.1 vs 模型对照组; fp <.1 vs 参苓白术散 组. AQP4: 水通道蛋白4. 脾气虚证和脾胃湿热证在水液代谢方面有不同 的变化, 其发生机制可能与A Q P4的异常表达 有关. 另有研究认为在腹泻状态下, 大鼠结肠组 织A Q P4的表达显著降低, 致使结肠黏膜对肠 腔内的水分吸收减少, 从而引起大便溏薄等症 来治疗慢性UC, 总有效率96.9%. 我们还在前期 状[16], 五苓散能够显著提高小鼠结肠组织AQP4 研究中发现, 参苓白术散可以有效改善脾虚湿 mrna的表达[17]. 诸多研究提示AQP4在体内调 困型UC大鼠血清表皮生长因子 血清和结肠组 节水代谢方面起着重要作用, 因此, 我们推测肠 织超氧化物歧化酶 丙二醛水平, 从而促进肠 道AQP的表达失常可能是UC发生的重要病理机 [11,12] 黏膜的修复. 近年来研究表明, AQP广泛存在于人体肺 胃 肠 肾 脑等器官. 祖国医学认为, 肺 制, 肠道AQP的正常表达可能是治疗UC的分子 生物学基础之一. 本实验结果发现模型对照组大鼠结肠组织
李姿慧, 等. 参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织 AQP4 蛋白及 mrna 表达的影响 1693 中 AQP4 蛋白及 mrna 表达均明显降低, 与正常 对照组比较差异有统计学意义 (P <.5). 参苓白 术散组大鼠结肠组织中 AQP4 蛋白及 mrna 的表 达与模型对照组比较显著升高, 差异有统计学 意义 (P <.5). 脾虚湿困型 UC 大鼠的结肠组织 中 AQP4 出现低表达, 表明脾运化水液功能降低, 而参苓白术散能增强脾虚湿困型 UC 大鼠的结 肠组织中 AQP4 的表达, 改善脾运化水液的功能, 促进机体水液代谢功能的恢复. 因此, 参苓白术 散改善结肠组织中 AQP4 的表达可能是其改善 脾主运化功能的重要生物学机制之一. 总之, 通过对脾虚湿困型 UC 大鼠结肠组织 AQP 表达及参苓白术散干预作用的研究, 可进 一步深入揭示 AQP 在脾虚湿困型 UC 发病过程中 的作用机制, 对不断阐明湿病发生的生物学基 础和健脾化湿法的作用机制与途径具有重要的 意义. 4 参考文献 1 李惠霞. 参苓白术散加减配合中药灌肠治疗脾虚湿困型溃疡性结肠炎 47 例. 辽宁中医杂志 28; : 866 2 岳宏, 王天芳, 陈剑明, 杨璐, 赵丹, 赵燕, 吴秀艳, 屈凯, 于丽丽, 赵绂诚. 溃疡性结肠炎常见中医证候及证候要素的现代文献研究. 北京中医药大学学报 21; 33: 36-38 3 李楠. 参苓白术散合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎 62 例. 中医研究 211; 24: 46-47 4 李姿慧, 王键, 蔡荣林. 湿病与水通道蛋白的相关性研 究进展. 中西医结合学报 211; 9: 5-1 5 李姿慧, 王键, 蔡荣林, 王又闻, 胡建鹏. 脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型的建立与评价. 中西医结合学报 212; 1: 918-924 6 陈曦, 欧阳钦, 胡仁伟, 李国栋, 李希诗. 我国溃疡性结肠炎治疗性研究文献分析. 四川医学 25; 26: 376-378 7 杨旭东, 张杰, 王崴. 参苓白术散对脾虚小鼠肠保护作用及其机制的研究. 牡丹江医学院学报 29; 3: 9-11 8 张仲林, 钟玲, 臧志和, 辛志伟. 参苓白术散对动物胃肠动力影响的实验研究. 时珍国医国药 29; 2: 3151-3152 9 阮家安, 缪峰. 参苓白术散加减治疗慢性泄泻 45 例. 陕西中医学院学报 29; 32: -36 1 谭巨涛. 加味参苓白术散配合灌肠治疗慢性溃疡性结肠炎临床观察. 山西中医 211; 27: 14-15 11 李姿慧, 王键, 王又闻, 蔡荣林, 孙娟, 叶铭钢. 参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠血清 EGF SOD MDA 的影响. 世界华人消化杂志 212; 2: 41-413 12 李姿慧, 王键, 蔡荣林, 王又闻, 胡建鹏, 江爱娟. 参苓白术散对溃疡性结肠炎大鼠超氧化物歧化酶及丙二醛的影响. 中医杂志 212; 53: 1764-1767 13 周正, 劳绍贤, 黄志新, 黄烈平, 张向菊, 胡斌. 脾胃湿热证与水通道蛋白 4 基因表达的关系. 中国中西医结合消化杂志 24; 12: 71-73 14 周正, 劳绍贤, 黄志新, 黄烈平, 张向菊, 匡忠生, 胡斌. 从水通道蛋白 4 的表达探讨脾胃湿热证的机理. 广州中医药大学学报 24; 21: 369-372 15 周正, 劳绍贤, 黄志新, 黄烈平, 张向菊, 匡忠生. 慢性浅表性胃炎 ( 脾胃湿热证 ) 与水通道蛋白 4 表达关系的研究. 中医杂志 24; 45: 371-372 16 王晓玲, 王俊平. 腹泻大鼠结肠水通道蛋白 4 表达与分布的研究. 山西医药杂志 27; 36: 179-181 17 刘洋, 苏凤哲, 徐华洲, 于文涛. 五苓散对腹泻模型小鼠结肠 AQP-4 mrna 表达的影响. 中国中医基础医学杂志 25; 11: 197-198 编辑郭鹏电编都珍珍 同行评价本文选题较新颖, 研究方法科学, 实验数据充分, 结论客观. 采用分子生物学技术, 初步探讨了参苓白术散治疗溃疡性结肠炎的作用机制, 为中医水液代谢障碍理论的进一步研究提供了实验依据, 有一定的学术价值.