講題一 : 新式糞便標準化裝置於糞便檢查應用之一 : 1. 蟲卵濃縮及糞便常規檢查 (Parasite MIF-Conc. / STOOL ROUTINE) 2. 幽門螺旋桿菌糞便抗原 (HPSA) 暨全方位解決方案 (TOTAL SOLUTIONS) 講員 : 劉呈文醫檢師身分字號 :B120850446 學歷 : 台北醫學大學醫技系經歷 : 台灣羅氏診斷設備股份有限公司業務主任現任 : 西羅亞生技有限公司行銷業務經理
新式糞便檢查標準化裝置 2015/5/7 2
一管到底 One Tube for Every Tests 乾淨環保 Clean & EcoAssist 2015/5/7 3
台灣專利證號 :M417919 / M434565 中國大陸專利證號 :01120282754.2 2015/5/7 4
專利採便棒設計完全採樣 5 糞便採集定量標準化 2015/5/7 5
腸道糞便成型的過程 挖耙法? 多點針刺法? 表面擦過法?
完全採檢 7 1. 滾動式反覆採檢 2. 擴大檢體接觸面積 3. 溝槽式定量採檢 可有效避免偽陰性可能發生在檢體不是非常均勻分佈在糞便的情況 2015/5/7 7
1. 2. 3. 4. 刮除孔 反覆滾動 填滿前端插回管體栓緊送檢..\..\2in1_PPT\VGH-PULI\SAMPLING_NORMAL.mp4
9 Reversed Cone Shape 立體孔徑倒錐體設計 3 sizes in diameter 三種不同尺寸孔徑設計 Tubulence enhanced filtration 循環性渦流增強過濾效能 2015/5/7 9
MICROSCOPIC COMPARISION WITH QSFCD and CFEA SFCD 400X 400X2 1000X CFEA 400X 400X2 1000X
11 2015/5/7 11
12 25 孔 _50 孔 2015/5/7 12
SHAKING MACHINE ( 試管混合器 ) 試管架放入位置 主體 扣環 控制面板試管放入夾具後, 將扣環合上, 選擇英文按鍵, 開始搖散混合 產品型號 :SK-300
14 2015/5/7 14
2015/5/7 15
1. 2. 3. 4. 反覆滾動 填滿前端插回管體栓緊送檢
加入 5ml MIF 試劑 混合 更換濾網 放入過濾架按下通氣針進行過濾 2015/5/7 17
2000 rpm 離心 2 分鐘內容物屣分為 4 層 : ( 由上而下為 ) 乙醚層 糞渣層 汞碘層和沉澱層 倒掉上清液, 再以等量 MIF 試劑製作 Suspension 加 Ethyl acetate 蓋回蓋子後, 覆蓋工作平台 振盪混合均勻 滴 1 滴沉澱層做鏡檢 先以低倍 (10 倍物鏡 ) 鏡檢, 觀察有無寄生蟲卵, 必要時以高倍 (40 倍物鏡 ) 確認之 檢測完畢, 一次倒入醫療廢棄袋 2015/5/7 18
糞便常規檢查 (STOOL ROUTINE) 2015/5/7 19
A.Wet Mount( 濕抹片 ) 旋開頭蓋取出採便棒 將糞便直接抹在載玻片上並混合 Saline 直接鏡檢 先以低倍 (10 倍物鏡 ) 鏡檢, 觀察有無寄生蟲卵, 必要時以高倍 (40 倍物鏡 ) 確認之
判讀 ( 萬花筒 ) OB 試劑直接與糞便進行反應並觀察視窗內顏色變化 2015/5/7 21
糞便常規 (STOOL ROUTINE) 糞便物理檢查外觀顏色. 等 多視窗式判讀法 糞便潛血化學法檢查 : 多視窗判讀法 2015/5/7 22
糞便常規 (STOOL ROUTINE) / 蟲卵濃縮法 (MIF)_2 in 1 MIF OB 2015/5/7 23
H.pylori Stool Antigen Test ( 幽門螺旋桿菌糞便菌體抗原 )
胃腸潰瘍的殺手 ~ 幽門螺旋桿菌的發現 ~ 在西元1983年以前 大部分的人都同意西元1910年 Schwarz所提出的 No acid,no ulcer的理論 直到西元1982年在澳洲的馬歇爾醫師親身人體試驗 吞下 十億個幽門螺旋桿菌後 即發生急性胃炎 幽門螺旋桿 菌從此受到醫界相當的矚目! 並且證實此菌會造成胃炎 慢性胃腸炎 胃潰瘍 十二指 腸潰瘍 非潰瘍性消化不良與部分胃癌
胃腸潰瘍的殺手 ~ 幽門螺旋桿菌的特性 ~ 幽門螺旋桿菌是棒狀或螺旋狀, 他帶有 4~6 根宛如尾巴般的鞭毛 人體的胃酸正常強度是 ph2, 具有強的殺菌效果, 普通的細菌無法在胃中生存! 幽門螺旋桿菌卻可將胃壁微血管流出的尿素交換成氨的尿素酶, 在鹼性的氨環境中不直接與胃酸接觸, 而形成堅固的壁壘於菌體四周, 以防胃酸侵蝕 並且會分泌不同的消化酵素與胃黏膜進行化學反應, 藉以破壞胃黏膜的表皮細胞, 造成發炎的現象!
胃腸潰瘍的殺手 ~ 幽門螺旋桿菌的臨床統計 ~ 在西方國家中 超過90%的十二指腸潰瘍患者同時 被發現在胃中有幽門螺旋桿菌 而胃潰瘍患者亦 高達70%以上 根據台灣醫學會議最新的報告統計 台灣地區每5 個人之中有3個帶有幽門螺旋桿菌 90%~100%有十二指腸潰瘍的人帶有幽門螺旋 桿菌! 50%~90%有胃潰瘍的人帶有幽門螺旋桿菌! 70%~90%有慢性胃炎的人帶有幽門螺旋桿菌! 日本直接將此菌與胃癌劃上等號
Barry J. Marshall J. Robin Warren 1975 (25) Bachelor of Medicine, Bachelor of Surgery 1981 (31) met Robin Warren 1985 (35) experiment was published 2005 (55) awarded the Nobel Prize in Physiology or Medicine 1962 (25) Adelaide University 1979 (42) noticed bacteria growing on the surface of a gastric biopsy 1981 (44) met Barry Marshall 2005(68) awarded the Nobel Prize in Physiology or Medicine
Over 50% of the world s population infected Global health problem Driven by sanitary situation High prevalence in emerging markets Source: Helicobacter Foundation
H. pylori Gram negative Spiral bacillus 2~4 um Secret urease Oral-to-oral infection
TFSS
The localization of H. pylori
Sites and type of infection Pyloric antrum: duodenal ulcer Corpus: gastric ulcer and cancer
Summary
UBT test principle 1.Patient swallows a labeled C13/14 urea tablet. Dissolves to release 14 C-urea. 2.If present, H. pylori metabolizes 14 C-urea to labeled carbon dioxide ( 14 CO 2 ) and ammonia via the enzyme urease. H 2 N( 13/14 CO)NH 2 + H 2 0 urease 2NH 3 + 13/14 CO 2 3. 14 CO 2 is transported in the blood to the lungs. 4.Patient exhales. 14 CO 2 is captured for analysis. (If H. pylori is absent, the 14 C-urea is simply absorbed and subsequently voided)
Diagnosis 侵入性 非侵入性 診斷方法 病理組織學檢查 (Histological examination) 細菌培養 (Culture) 聚合酶鏈鎖反應 (Polymerase Chair Reaction) 快速尿素試驗 (Rapid urease test) 血清學檢查 (Serology test) 糞便檢測 (Scatological examination) 碳 -13 尿素呼吸試驗 (C- 13-urea breath test) 診斷方式 切取胃黏膜檢體做切片, 於顯微鏡下觀察是否有 H. pylori 將胃黏膜檢體置入培養基中培養細菌萃取胃黏膜檢體之 DNA, 借由 H. pylori 基因特異之引子, 以 P.C.R. 放大 偵測微量 H. pylori 將胃黏膜檢體置入含尿素與指示劑之培養基中, 藉 H. pylori 以尿素酶分解尿素特性偵測之 / CLO Test 借由測定血清中是否含 H. pylori 抗體而檢驗 ELISA / Rapid Test / Latex /IMCC 偵測糞便中是否存有 H. pylori 以判定其是否存在於人體內 ELISA / Rapid Test / IMCC 藉由 C-13 標定尿素, 攝取後數小時收集呼出氣體檢驗 C-13 與 C-12 比例並分析判斷
診斷方法內視鏡切片敏感性 (%) 特異性 (%) 使用時機 組織學檢查需要 90 95 可同時瞭解胃黏膜病變 細菌培養需要 80-90 95 可做抗生素的藥物敏感試驗 尿素脢試驗 (CLO test) 尿素呼氣試驗 (UBT) 需要 90 100 迅速診斷 不需要 95 100 評估根除療法的成效 血清抗體診斷不需要 95.9 89.6 大規模篩檢, 合併抗原追蹤治療 糞便抗原診斷不需要 98.3 100 診斷 追蹤 篩檢合併抗體
特性 Urea Breath Test (UBT) H.pylori Stool Antigen(HpSA) 臨床意義 感染期 感染期 內視鏡不需要不需要 檢測原理吹氣 + 質譜儀乳膠凝集免疫比濁法 發報告時間需等待數天快速, 自動化, 標準化, 定量報告 檢查成本 1200~1500/ 人力 900( 健保點數 :376) 健保給付 需吞胃鏡及切片檢查 無需吞胃鏡及切片, 採自費療程 ( 適應症 ) 檢測時間 停藥後 4~6 週 ( 受抗生素影響 ) 停藥後 ( 不受抗生素影響 ) 敏感度 96~97% 98.30% 適用性 小兒科 孕婦 重症患者 適用性廣 不適用 臨床應用 評估根除療法的成效 診斷, 追蹤, 篩檢皆宜
ID 76618 Subject/Title Alternative Title Assessment of Novel Enzyme Immunoassay for Helicobacter Pylori Stool Antigen 利用酵素免疫分析法偵測糞便中之幽門螺旋桿菌抗原之臨床評估 Author Journal Title 王昶皓 (Chang-Hao Wang); 廬錫祺 (Hsi-Chi Lu); 溫保英 (Pao-Ying Wen); 孫茂勝 (Maw-Soan Soon) 黃凱玲 (Kai-Lin Hwang); 林國川 (Kwo-Chuan Lin) 中華民國消化系醫學雜誌 Vol./Publishing Date Vol.16 No.2 (1999/06) Page(s) 149-154 Language English Abstract 目前診斷幽門螺旋稈菌的方法不外乎是以內視鏡為主的侵襲性檢查及所謂的非侵襲性檢查, 例如碳十三尿素呼氣測驗 血清幽門螺旋桿菌抗體等等 本文介紹一種新的非侵襲性檢測方法, 其原理乃利用多株抗體攫取糞便中之幽門螺旋桿菌抗原 本研究之目的在瞭解此法之敏感度 特異性及凖確度 研究中共有九十一名患者因上腹不適而接受此一檢查並對照其內視鏡切片所得之快速尿素酶測驗及組織學結果得知其敏感度及特異性分別爲 95.8% 及 91.9%, 陽性及陰性預到值各為 93.9% 94.4%, 並有 94.1% 之凖確度, 且臨床上具非侵襲性 簡單 快速 方便等優點, 為一頗具潛力之診斷工具 Enzyme immunoassay (EIA) for Helicobacter pylori (H.pylori) antigen in feces is a newly invented, noninvasive, simple rapid method to detect the presence of H.pylori in the stool. The presence of the antigen captured by the polyclonal antibody indicated an active infection state rather than an exposure only (antibody). In this study, we aimed to assess its diagnostic sensitivity, specificity and accuracy. Nine-one patients (52 males and 39 females, aged 16 to 74 with a mean of 45) with dyspetic symptoms were enrolled. All patients received panendoscpic examinations with biopsies for both CLO test and histological examinations.stool samples from patients were tested for HpSA simultaneously. The sensitivity of the EIA test was 95.8%(46/48), and the specificity was 91.9% (34/37). The positive predictive and negative predictive values were 93.9%(46/49) and 94.4%(34/36), respectively,with a diagnostic accuracy of 94.1%. We concluded that ELA for HpSA is a rapid, simple, reliable and promising test.
糞便採集與前處理 Sample Type Native stool samples collected in an tube (SFCD) with extraction buffer 3 ml added. Sample Stability Stool samples must be stored at 2~8 C Fresh stool samples are stable @ RT for 3 days. Freezing of samples is possible, Stability of extracts Extracts must be stored at -20 C stable at -20 C for at least 18 months
1. 2. 3. 4. 反覆滾動 填滿前端插回管體栓緊送檢
1. 快速檢驗 加 0.8ml 檢體混合 取下 ( 手或小工具 ) 栓蓋換上過濾裝置 滴定 (3 滴 ) 判讀結果 (15 分鐘 ) 強陽性弱陽性陰性
2. 生化免疫法 震盪混合 過濾 離心上機 2015/5/7 46
幽門桿菌抗原抗體檢測 - 全面解決方案 (TOTAL SOLUTIOINS FOR H.Pyolri) 測試項目 + (>35AU/ml) 抗原 - (<34AU/ml) 抗體 + (>35AU/ml) - (<34AU/ml) 感染恢復期 (Infected in Recovery) 感染期 (Active Infection) 恢復期 (Recovery) 陰性反應 (Negative Reaction)
抗體檢測 非侵 入性 原理 ELISA / CLIA Latex / Rapid Test IM_CC 備註 ELISA : OD reading CLIA : IU / ml 各廠牌抓的蛋白質不同手工操作, 判讀不易, 只提供定性. Total proteins detected in Latex, But varies in rapid tests. 自動化, 標準化, 適用各種廠牌生化機, 生化管一次完成, 節省人力
幽門螺旋桿菌血清抗體檢測試劑 ( 免疫比濁法供生化儀器使用 ) 衛署醫器輸壹字第 012328 號
檢測 anti-hp Urease IgG 抗體 幽門螺杆菌菌體表面的鞭毛以及分泌的多種抗原成分均可激發宿主的免疫反應而誘導抗體產生 ; 根據研究, 胃幽門螺旋桿菌木身可以分泌多種酶, 其中最重要的酶就是 尿素酶, 它可以將存在於黏膜上的 尿素 轉化成 氨, 由於氨本身為鹼性物質, 因而會導致胃幽門螺旋桿菌周圍生存環境的酸鹼度降低 ; 因此, 氨本身就像一個 防護罩 一樣, 可以避免胃幽門螺旋桿菌受到傷害, 而使得胃幽門螺旋桿菌得以生存下來 ; 氨氣本身不僅會降低黏液中黏蛋白的含量, 更進一步破壞黏液離子的完整性, 而削弱黏膜屏障功能, 造成 H+ 逆向擴散 ; 此外, 氨還消耗需氧細胞的 α- 酮戊二酸 ( 一種轉氨酶的代謝產物 ), 並破壞三羧酸循環 (tricarboxylic acid cycle, 亦稱枸櫞酸循環 ) 過程, 干擾細胞能量代謝的過程, 而導致細胞變性 ; 基本上, 高濃度的氨本身就可導致細胞空泡變性 ( 類似 VacA 所導致的空泡變性 ) 因此, 尿素酶本身不僅可直接造成胃黏膜組織細胞的損害, 也可改變感染個體的免疫反應 檢測血清中 anti-hp Urease 抗體可以反映病源體的感染情況 幽門螺旋桿菌全身性抗體 ( 即血清抗體 ) 主要為 IgG 和 IgA, IgM 極為少見 血清抗體可反映病源體對幽門螺旋桿菌的感染及免疫反應能力, 檢測抗體十分必要
Ulcerations, Cancer
免疫比濁法 (Immunoturbidimetry) 以乳膠微粒子與幽門螺旋桿菌萃取蛋白, 做為免疫比濁反應放大試劑, 達到自動定量目的 將幽門螺旋桿菌抗原吸附於乳膠粒顆粒上, 通過孵育使稀釋的人血清中的特異性抗體與抗原結合, 經孵育後, 產生的吸光變化量與檢測樣本中的特異性抗體濃度成正比
實驗室結果解釋 >35 AU/mL 陽性 <34 AU/mL 陰性 當檢測結果為 34-35 AU/mL 可疑時, 建議重新檢測, 若仍為可疑, 需在 1~2 周後重新採集樣本檢測 2015/5/7 54
Immulite i-2000 HpAb 摘錄自 Siemens immulite i-2000 Package Insert 2015/5/7 55
品牌機型 適用儀器 日立 7170/7180/7600/7080 奧林巴斯 AU400/640/800/1000/2700/5400 羅氏 COBAS8000/6000/P Module c501 西門子 ADVIA1650/1800/2400 貝克曼 DXC800/DXC600/LX20/CX4/5/7/9 東芝 40FR/120FR 所有生化分析儀 2015/5/7 56
幽門桿菌抗原抗體檢測 - 全面解決方案 (TOTAL SOLUTIOINS FOR H.Pyolri) 測試項目 + (>35AU/ml) 抗原 - (<34AU/ml) 抗體 + (>35AU/ml) - (<34AU/ml) 感染恢復期 (Infected in Recovery) 感染期 (Active Infection) 恢復期 (Recovery) 陰性反應 (Negative Reaction)
Thank you. ( Q & A )