第 16 卷 第 4 期 生 命 科 学 研 究 灾 燥 造 援 员 6 晕 燥 援 4 圆 园 年 8 月 蕴 蚤 枣 藻 杂 糟 蚤 藻 灶 糟 藻 砸 藻 泽 藻 葬 则 糟 澡 Aug. 圆 园 血 管 活 性 肠 肽 对 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肝 损 伤 的 保 护 作 用 苏 岑 1, 张 兴 利 1, 黄 韵 如 1, 郑 和 鑫 1, 肖 献 忠 1, 曾 庆 仁 2, 谭 斯 品 1,2* (1. 中 南 大 学 基 础 医 学 院, 中 国 湖 南 长 沙 410078; 2. 中 南 大 学 细 胞 与 分 子 生 物 学 实 验 教 学 中 心, 中 国 湖 南 长 沙 410083) 摘 要 : 采 用 盲 肠 结 扎 穿 孔 (cecal ligation and puncture, ) 法 制 备 脓 毒 性 休 克 大 鼠 模 型, 探 讨 血 管 活 性 肠 肽 (vasoactive intestinal peptide, ) 对 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肝 损 伤 的 保 护 作 用 及 其 可 能 机 制. 将 48 只 雄 性 SD 大 鼠 随 机 分 成 4 组 : 假 手 术 组 (, n=) 尧 组 (n=) 尧 组 (n=) 和 生 理 盐 水 组 (S, n=). 组 大 鼠 在 行 术 后 即 刻 给 予 6nmol, 应 用 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 (ELISA) 检 测 各 组 大 鼠 血 清 谷 丙 转 氨 酶 ALT 和 谷 草 转 氨 酶 AST 水 平, 同 时 检 测 血 清 炎 症 因 子 : 促 炎 因 子 肿 瘤 坏 死 因 子 鄄 琢 (TF 鄄 琢 ), 抑 炎 因 子 白 介 素 鄄 10 (IL 鄄 10) 的 变 化 ; 取 大 鼠 肝 脏 组 织 行 病 理 检 查. 在 以 后 的 各 时 间 点, 与 S 组 比 较, 组 TF 鄄 琢 水 平 明 显 降 低,IL 鄄 10 水 平 持 续 升 高, 组 AST 和 ALT 水 平 自 h 始 明 显 降 低, 肝 脏 病 理 损 伤 明 显 改 善. 实 验 表 明, 通 过 抑 制 促 炎 因 子 的 生 成 并 促 进 抗 炎 因 子 的 产 生 在 大 鼠 脓 毒 性 休 克 肝 损 伤 中 发 挥 保 护 作 用. 关 键 词 : 血 管 活 性 肠 肽 ; 脓 毒 性 休 克 ; 肝 损 伤 中 图 分 类 号 : R631 +.4 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : 1007 鄄 7847(20)04 鄄 0319 鄄 05 Protective Effects of Vasoactive Intestinal Peptide on Liver Injury of Septic Shock Rats SU Cen 1,ZHAG Xin 鄄 li 1,HUAG Yun 鄄 ru 1,ZHEG He 鄄 xin 1, XIAO Xian 鄄 zhong 1, ZEG Qing 鄄 ren 2,TA Si 鄄 pin 1,2* (1. School of Basic Medicine, Central South University, Changsha 410078, Hunan, China; 2. Center of Cellular and Molecular Abstract: Cecla ligation and puncture intestinal peptide Experiment, Central South University, Changsha 410083, Hunan, China) () was performed to produce septic shock rat model. Vasoactive () was injected to investigate its protective effects on liver injury of septic shock rats and its possible mechanism. Forty 鄄 eight adult Sprague 鄄 dawley rats were randomly divided into 4groups, with animals in each group: sham operation group ( group), group, group and normal Salin group (S group). The rats in group were given intravenous injection of (6 nmol per art) instantly after the operation. Enzyme 鄄 linked immunosorbent assays (ELASA) was performed to measure the serum con 鄄 centrations of alanine amiotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST), also the concentration of pro 鄄 inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor (TF 鄄 琢 ), anti 鄄 inflammatory cytokines such as inter 鄄 leukin 鄄 10 (IL 鄄 10) were measured. Rat liver was harvested for pathological examinations. At each time point after, in group, the rat serum TF 鄄 琢 concentration was decreased meanwhile IL 鄄 10 level was in 鄄 creased. After h, ALT and AST concentration was decreased with markedly alleviated organ pathological injuries. Thus, it is proved that exerts protective effects on liver injury of septic shock rats through in 鄄 hibiting production of proinflammatory factors and stimulating the production of anti 鄄 inflammatory cytokines. 收 稿 日 期 : 20 鄄 04 鄄 11; 修 回 日 期 : 20 鄄 07 鄄 03 基 金 项 目 : 中 南 大 学 学 生 潜 质 发 掘 专 项 项 目 (2010100090); 湖 南 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (10JJ4016); 教 育 部 留 学 人 员 回 国 科 研 启 动 基 金 资 助 项 目 作 者 简 介 : 苏 岑 (1988 鄄 ), 女, 天 津 人, 硕 士 研 究 生, 主 要 从 事 炎 症 与 神 经 免 疫 研 究 ; * 通 讯 作 者 : 谭 斯 品 (1974 鄄 ), 女, 湖 南 长 沙 人, 中 南 大 学 基 础 医 学 院 副 教 授, 博 士, 主 要 从 事 脓 毒 症 炎 症 和 心 肌 内 源 性 保 护 机 制 领 域 的 研 究,E 鄄 mail: springtan@6.com.
320 生 命 科 学 研 究 圆 园 年 Key words: vasoactive intestinal peptide; septic shock; liver injury (Life Science Research,20,16(4):319 耀 323) 脓 毒 性 休 克 是 临 床 常 见 的 危 重 病 之 一, 常 因 合 并 多 脏 器 功 能 障 碍 综 合 征 (multipul organ dys 鄄 function syndrome, MODS) 导 致 患 者 死 亡, 死 亡 率 高 达 30% 耀 70% [1]. 研 究 表 明, 炎 症 反 应 失 控 是 脓 毒 性 休 克 的 主 要 发 病 环 节. 脓 毒 症 MODS 脏 器 功 能 损 伤 的 发 生 有 其 相 对 规 律 性, 其 中 肝 是 损 伤 发 生 较 早 频 率 较 高 的 脏 器. 在 感 染 引 起 的 MODS 中, 若 患 者 发 生 严 重 的 肝 损 伤 则 死 亡 率 几 乎 达 100%. 因 此, 在 脓 毒 性 休 克 治 疗 中 早 期 防 治 肝 损 伤 是 降 低 死 亡 率 的 关 键. 部 分 研 究 表 明 血 管 活 性 肠 肽 (vasoactive intestinal peptide, ) 可 以 减 少 多 种 促 炎 因 子 的 产 生, 促 进 抗 炎 症 因 子 如 白 介 素 鄄 10 (IL 鄄 10) 的 抗 炎 作 用 而 抑 制 全 身 炎 症 反 应 综 合 征 (systemic inflammatory response syndrome, [2, 3] SIRS) 的 发 展. 本 研 究 采 用 盲 肠 结 扎 穿 孔 法 (ce 鄄 cal ligation and puncture, ) 制 备 脓 毒 性 休 克 大 鼠 模 型, 在 不 同 时 期 予 以 治 疗 大 鼠, 观 察 治 疗 组 与 对 照 组 促 炎 症 因 子 和 抗 炎 症 因 子 浓 度 的 变 化 和 各 组 大 鼠 肝 脏 的 病 理 变 化 来 判 断 对 脓 毒 性 休 克 时 肝 损 伤 的 影 响, 并 探 讨 其 机 制. 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 材 料 健 康 雄 性 SD 大 鼠 48 只, 体 重 约 200 耀 300 g, 由 中 南 大 学 湘 雅 医 学 院 实 验 动 物 中 心 提 供 ; 购 自 美 国 Sigma 公 司. 1.2 大 鼠 模 型 的 制 备 实 验 前 大 鼠 禁 水 禁 食 h. 实 验 中 先 予 水 合 氯 醛 1mL 鼠 腹 腔 注 射 麻 醉. 然 后 于 前 腹 正 中 作 一 2 耀 3cm 切 口, 游 离 盲 肠 和 肠 系 膜, 以 4 号 丝 线 环 形 结 扎 盲 肠 末 端, 用 9 号 针 头 于 肓 肠 部 位 穿 孔 两 次, 两 针 孔 相 距 约 1.5 cm, 还 纳 肠 管, 逐 层 缝 合 关 腹. 关 腹 前 每 鼠 均 补 充 2mL 生 理 盐 水, 以 保 证 血 容 量 供 应. 最 后 分 出 阴 茎 静 脉 作 为 给 药 途 径. 1.3 实 验 分 组 48 只 雄 性 SD 大 鼠 随 机 分 成 4 组 : 假 手 术 组 ( 组 ) 组 组 和 生 理 盐 水 组 (S 组 ), 每 组 只. 组 按 模 型 制 备 过 程 进 行 操 作, 组 除 不 行 肓 肠 结 扎 和 穿 扎 外, 其 余 步 骤 与 组 相 同. S 组 行 后 即 刻 经 阴 茎 静 脉 每 鼠 分 别 注 射 6nmol 1 ml 生 理 盐 水. 1.4 观 察 指 际 观 察 实 验 大 鼠 有 无 萎 靡 寒 战 腹 胀 腹 泻 及 竖 毛 等 表 现. 术 后 分 别 于 0 6 从 心 脏 取 血 5mL, 血 标 本 静 置 20 min 后 置 于 高 速 低 温 离 心 机 2000 r/min, 离 心 15 min, 吸 取 血 清 上 清 液 保 存 于 -20 益 冰 箱 中. 应 用 ELASA 方 法 检 测 血 清 肿 瘤 坏 死 因 子 鄄 琢 (TF 鄄 琢 ) 白 介 素 鄄 10 (IL 鄄 10) 谷 丙 转 氨 酶 ALT 和 谷 草 转 氨 酶 AST 水 平, 操 作 步 骤 按 试 剂 盒 要 求 进 行. 观 察 24h 内 未 死 亡 大 鼠, 行 放 血 处 死, 留 肝 组 织 标 本. 标 本 用 4% 甲 醛 固 定, 石 蜡 包 埋 后 切 成 薄 片, 苏 木 素 伊 红 (HE) 染 色 后, 光 镜 下 伊 40 倍 观 察. 1.5 统 计 学 方 法 计 量 资 料 均 以 x±s 表 示. 用 SPSS13.0 软 件 进 行 数 据 分 析, 用 单 因 素 方 差 分 析 (AOVA) 比 较 各 组 血 清 谷 丙 转 氨 酶 ALT 和 谷 草 转 氨 酶 AST 水 2 平 和 血 清 炎 症 因 子 差 异. 存 活 率 采 用 字 检 验, 以 P<0.05 为 差 异 具 有 统 计 学 意 义. 2 实 验 结 果 2.1 一 般 情 况 S 组 和 组 大 鼠 活 动 自 如. 呼 吸 平 稳, 进 食 及 排 泄 正 常 ; 组 大 鼠 有 萎 靡 竖 毛 寒 战 大 小 便 失 禁 等 表 现, 呼 吸 频 率 加 快, 幅 度 变 浅 ; 组 大 鼠 活 动 较 少, 有 轻 度 竖 毛. 无 明 显 寒 战 腹 胀 腹 泻 及 大 小 便 失 禁 等 表 现. 2.2 动 物 存 活 率 各 实 验 组 内 均 无 大 鼠 死 亡, S 组 大 鼠 内 存 活 率 分 别 为 / (100%) 11/(91.7%) 8/(66.7%) 8/(66.7%). 2 采 用 字 检 验, 与 组 存 活 率 相 比, P<0.05; 与 S 组 存 活 率 相 比, P<0.05. 2.3 血 清 炎 症 因 子 TF 鄄 琢,IL 鄄 10 浓 度 2.3.1 血 清 TF 鄄 琢 水 平 变 化 与 组 比 较, 组 TF 鄄 琢 水 平 明 显 增 高 且 在 时 达 高 峰, 后 逐 步 回 落 ; 与 S 组 比 较, 组 TF 鄄 琢 水 平 在 后 各 时 间 点 明 显 降 低 且 逐 步 回 落 ( 见 表 1). 2.3.2 血 清 IL 鄄 10 水 平 变 化 与 组 比 较, 组 IL 鄄 10 水 平 在 后 各 时 间 点 明 显 增 高 ; 与 S 组 比 较, 组 IL 鄄 10 水 平 明 显 增 高 且 持 续 递 增 ( 见 表 2).
第 4 期 苏 岑 等 : 血 管 活 性 肠 肽 对 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肝 损 伤 的 保 护 作 用 321 表 1 各 组 血 清 TF 鄄 琢 水 平 变 化 Table 1 Change of serum TF 鄄 琢 in each group S 2.4 肝 脏 的 功 能 与 病 理 改 变 2.4.1 血 清 ALT 水 平 变 化 与 组 比 较, 组 ALT 水 平 在 后 各 时 间 点 明 显 增 高, 并 在 h 达 到 高 峰 后 逐 步 回 落 ; 与 S 组 比 较, 组 ALT 水 平 在 h 后 明 显 降 低 ( 表 3). 2.4.2 血 清 AST 水 平 变 化 与 组 比 较, 组 AST 水 平 在 后 各 时 间 点 明 显 增 高, 并 在 h 达 到 高 峰 后 逐 步 回 落 ; 与 S 组 比 较, 组 AST 水 平 在 h 后 明 显 降 低 ( 表 4). 9.9 依 2.1 11.7 依 1.5 10.6 依 1.2 11.2 依 1.3 10.6 依 1.8 72.0 依 6.2 a 38.5 依 3.3 bc 71.7 依 5.9 b 2.4.3 各 实 验 组 肝 脏 病 理 变 化 h.5 依 1.8 58.1 依 3.9 a 29.0 依 3.6 bc 57.8 依 4.0 b 9.8 依 1.3 36.5 依 5.4 a 15.4 依 1.2 bc 35.7 依 4.8 b S 表 2 各 组 血 清 IL 鄄 10 水 平 变 化 Table 2 Change of serum IL 鄄 10 in each group 50.1 依 10.4 55.0 依 9.8 56.0 依 11.7 54.8 依 9.2 50.4 依 9.7 55.3 依 9.6 a 61.5 依 8.4 bc 54.8 依 9.0 b h 65.6 依 11.0 221.0 依 28.8 a 484.8 依 42.1 bc 230.3 依 25.4 b 64.2 依.5 434.3 依 53.4 a 580.3 依 49.2 bc 437.2 依 52.1 b S 表 3 各 组 血 清 ALT 水 平 变 化 Table 3 Change of serum ALT in each group 30.0 依 2.5 32.6 依 1.2 30.3 依 2.1 30.8 依 1.7 33.4 依 2.3 62.2 依 5.0 a 57.7 依 6.4 60.4 依 5.2 h 34.8 依 1.4 1.4 依 9.0 a 63.9 依.0 bc 115.3 依 8.8 b 26.7 依 2.1 36.0 依 3.1 a 32.7 依 1.2 bc 43.3 依 4.0 b 制 备 各 组 大 鼠 肝 脏 石 蜡 切 片,HE 染 色, 光 镜 下 观 察, 可 看 到 组 肝 细 胞 正 常. 组 和 S S 表 4 各 组 血 清 AST 水 平 变 化 Table 4 Change of serum AST in each group 组 两 组 切 片 均 可 见 肝 细 胞 混 浊 肿 胀, 伴 有 水 肿 样 变 和 气 球 样 变, 小 叶 内 大 量 炎 症 细 胞 浸 润, 以 淋 巴 细 胞 为 主, 并 见 散 在 点 状 坏 死, 枯 否 细 胞 增 生, 以 h( 图 3B) 组 和 hs( 图 3D) 组 改 变 最 为 明 显. 组 各 时 间 点 肝 组 织 均 可 见 肝 细 胞 有 轻 度 肿 胀, 无 大 量 炎 症 细 胞 浸 润. 组 与 S 组 相 比, 可 见 肝 脏 病 理 损 伤 均 显 著 减 轻, 两 实 验 组 在 h 时 肝 脏 病 理 改 变 差 异 最 为 明 显 ( 见 图 3C D). 3 讨 论 36.0 依 2.2 35.6 依 1.4 31.3 依 2.3 34.8 依 3.0 目 前 随 着 对 脓 毒 性 休 克 发 病 机 制 研 究 的 不 断 深 入, 已 提 出 了 许 多 干 扰 炎 症 反 应 过 程 的 治 疗 方 法, 但 这 些 方 法 大 多 数 是 针 对 单 一 的 促 炎 因 子, 如 抗 TF 鄄 琢 抗 体 IL 鄄 和 IL 鄄 6 中 和 抗 体 等, 而 炎 症 反 应 中 各 种 促 炎 因 子 能 够 相 互 作 用 形 成 复 杂 的 网 络, 因 此 阻 断 单 一 的 促 炎 因 子 疗 效 差 [4]. 血 管 活 性 肠 肽 () 是 一 种 起 神 经 递 质 和 神 经 调 节 因 子 作 用 的 神 经 肽. 部 分 研 究 表 明 不 仅 可 以 减 少 多 种 促 炎 因 子 的 产 生, 而 且 还 能 促 进 IL 鄄 10 等 抑 炎 因 子 的 抗 炎 作 用, 而 抑 制 SIRS 的 发 展 [2,3]. 且 尚 未 发 现 有 毒 副 作 用, 这 为 应 用 于 临 床 防 治 脓 毒 性 休 克 奠 定 了 良 好 的 基 础. 在 以 往 的 研 究 中, 我 们 曾 发 现 可 减 轻 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肠 道 病 变, 并 对 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肺 肾 和 肠 道 的 保 护 作 用 明 显 [5], 但 对 脓 毒 性 休 克 肝 损 伤 的 保 护 作 用 未 见 任 何 报 道. 由 于 在 感 染 引 起 的 MODS 中, 若 患 者 发 生 严 重 的 肝 损 伤 则 死 亡 率 几 乎 达 100%. 因 此 本 文 对 在 脓 毒 症 休 克 大 鼠 肝 保 护 的 机 制 进 行 了 部 分 探 讨. 35.1 依 2.4 193.5 依 15.8 a 189.3 依 14.5 191.5 依 4.0 h 38.6 依 2.0 351.9 依 10.5 a 199.6 依.3 bc 346.6 依 11.6 b 32.6 依 2.3 84.6 依 2.2 a 51.8 依 4.1 bc 86.5 依 4.0 b 在 本 研 究 中, 我 们 参 考 Wichterman 等 [6] 的 方 法 制 备 脓 毒 性 休 克 大 鼠 模 型, 实 验 过 程 中 组 大 鼠 术 后 出 现 炎 症 因 子 TF 鄄 琢 和 IL 鄄 10 升 高 及 肝 脏 病 理 损 害, 处 死 动 物 剖 腹 后 可 见 盲 肠 肿 胀 发 黑, 腹 腔 内 大 量 脓 血 性 渗 出 液, 说 明 脓 毒 性 休 克 模 型
322 生 命 科 学 研 究 圆 园 年 A1 B1 C1 D1 S A2 B2 C2 D2 S A3 h B3 h C3 h D3 hs A4 B4 C4 D4 S 图 1 不 同 时 间 点 各 组 大 鼠 肝 脏 石 蜡 切 片 (HE 染 色, 40 倍 ) A: 组 肝 组 织 ;B: 组 肝 组 织 ;C: 组 肝 组 织 ;D: S 组 肝 组 织. Fig.1 The wax section of rat liver at different time points in four groups (HE staining, 伊 40) A: The rat liver wax section in group; B: The rat liver wax section in group; C: The rat liver wax section in group; D: The rat liver wax section in S group. 的 制 备 是 成 功 的.ALT AST 是 反 映 肝 脏 功 能 的 基 本 指 标, 组 ALT AST 水 平 较 正 常 明 显 升 高 并 在 术 后 h 达 高 峰, 应 用 后, 在 h 后 的 时 间 点 ALT AST 水 平 较 S 组 均 有 明 显 降 低, 这 可 能 与 使 得 肝 脏 功 能 得 到 保 护 和 改 善 有 关. 同 时 我 们 还 发 现, 组 的 肝 脏 病 理 损 害 也 明 显 减 轻. 这 证 明 对 于 脓 毒 症 休 克 大 鼠 的 肝 脏 是 具 有 保 护 作 用 的. TF 鄄 琢 是 一 种 主 要 由 单 核 鄄 巨 噬 细 胞 分 泌 的 小 分 子 蛋 白 质, 是 重 要 的 促 炎 因 子. 它 能 促 进 中 性 粒 细 胞 吞 噬, 抗 感 染, 促 进 髓 样 白 血 病 细 胞 向 [7] 巨 噬 细 胞 分 化, 同 时 还 能 促 进 细 胞 增 殖 和 分 化. IL 鄄 10 是 一 种 来 源 于 Th2 和 部 分 调 节 性 T 细 胞 的 细 胞 因 子, 它 是 一 种 重 要 的 抑 炎 因 子.IL 鄄 10 能 抑 制 Th1 细 胞 应 答 及 合 成 细 胞 因 子, 抑 制 巨 噬 细 胞 的 抗 原 提 呈 功 能 及 合 成 细 胞 因 子, 同 时 还 能 抑 制 [8] 中 性 粒 细 胞 抗 炎 反 应. 通 过 测 定 各 组 大 鼠 不 同 时 间 点 的 血 清 促 炎 因 子 TF 鄄 琢 抗 炎 因 子 IL 鄄 10 浓 度, 我 们 从 促 炎 和 抗 炎 两 方 面 探 讨 对 脓 毒 性 休 克 肝 损 伤 的 保 护 作 用 的 可 能 机 制. 结 果 显 示, 组 的 TF 鄄 琢 和 IL 鄄 10 浓 度 较 假 手 术 组 明 显 升 高,TF 鄄 琢 在 术 后 达 高 峰,IL 鄄 10 实 验 结 束 前 仍 呈 上 升 趋 势, 这 可 能 与 IL 鄄 10 是 一 种 重 要 的 抑 炎 因 子, 可 抑 制 促 炎 因 子 的 产 生, 阻 止 炎 症 反 应 的 进 一 步 扩 大 化 有 关. 应 用 后, 该 组 大 鼠 在 6 时 间 点 的 TF 鄄 琢 水 平 均 较 S 组 有 明 显 降 低, 而 抗 炎 因 子 IL 鄄 10 水 平 较 S 组 明 显 升 高, 这 可 能 与 可 以 减 少 多 种 促 炎 因 子 的 产 生, 促 进 IL 鄄 10 等 抑 炎 因 子 的 抗 炎 作 用 有 关. 通 过 对 上 述 炎 症 因 子 的 影 响, 从 而 起 到 保 护 脏 器 和 治
第 4 期 苏 岑 等 : 血 管 活 性 肠 肽 对 脓 毒 性 休 克 大 鼠 肝 损 伤 的 保 护 作 用 323 疗 功 能. 结 合 临 床 及 本 实 验 的 结 果, 我 们 认 为, 在 脓 毒 症 发 生 后 即 刻 应 用 可 起 到 保 护 肝 脏 作 用 ( 脓 毒 性 休 克 的 一 系 列 连 锁 反 应 尚 未 启 动 ), 其 可 能 机 制 是 通 过 抑 制 促 炎 因 子 的 生 成 及 促 进 抑 炎 因 子 的 表 达 而 起 到 抗 脓 毒 性 休 克 及 脏 器 保 护 功 能, 治 疗 可 能 是 一 种 潜 在 的 治 疗 脓 毒 性 休 克 及 保 护 肝 功 能 的 有 效 方 法. 参 考 文 献 (References): [1] MATOT I, SPRUG CL. Definition of sepsis[j]. Intensive Care Medicine, 2001, 27(3): 3 鄄 9. [2] DELGADO M, ABAD C, MARTIE C, et al. Vasoactive in 鄄 testinal polypeptide in immune system: potential therapeutic role in inflammatory and autoimmune diseases[j]. Journal of Molecular Medicine, 2002, 80(1): 16 鄄 24. [3] POZO D. and PACAP mediated immunomedulation as prospective therapeutic tools[j]. Trends in Molecular Medicine, 2003, 9(5): 211 鄄 217. [4] FRY DE. Sepsis, systemic inflammatory response, and multi 鄄 ple organ dysfunctions:the mystery continues[j]. American Surg 鄄 ery, 20, 78(1): 1 鄄 8. [5] 张 育 才. 血 管 活 性 肠 肽 对 大 鼠 内 毒 素 性 休 克 肠 道 损 伤 保 护 作 用 的 研 究 [J]. 中 华 儿 科 杂 志 (ZHAG Yu 鄄 cai. Protective ef 鄄 fects of vasoactive intestinal peptide on intestinal lesions in 鄄 duced by endotoxic shock in rat[j]. Chinese Journal of Pedi 鄄 atrics), 2006, 44(5): 369 鄄 373. [6] WICHTXEMA K, BAUE AE, CHAUDRY IH. Sepsis and septi cshock: Areview of laboratory models and aproposal[j]. Journal of Surgical Research, 1980, 29(8): 189 鄄 201. [7] QIU P, CUI X, BAROCHIA A, et al. The evolving experience with therapeutic TF inhibition in sepsis: considering the po 鄄 tential influence of risk of death[j]. Expert Opinion on Inves 鄄 tigative Drugs, 2011, 20(11): 1555 鄄 1564. [8] BAZZOI F, TAMASSIA, ROSSATO M, et al. Understand 鄄 ing the molecular mechanisms of the multifaceted IL 鄄 10 鄄 medi 鄄 ated anti 鄄 inflammatory response: lessons from neutrophils[j]. European Journal of Immunology, 2010, 40(9): 2360 鄄 2368. ( 上 接 第 313 页 ) [4] CHAMBERS I, COLBY D, ROBERT M, et al. Functional expression cloning of nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells[j]. Cell, 2003, 113(5): 643 鄄 655. [5] HAA LA, FOREMA RK, TARASEKO IA, et al. Re 鄄 quirement for Foxd3 in maintaining pluripotent cells of the early mouse embryo[j]. Genes Development, 2002, 16(20): 2650 鄄 2661. [6] SMITH AG, HEATH JK, DOALD DD. Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentiation by purified polypeptides[j]. ature, 1988, 336(6200): 688 鄄 690. [7] MATSUURA K, JIGAMI T, TAIUE K, et al. Identification of a link between Wnt/ 茁 鄄 catenin signalling and the cell fusion pathway[j]. ature Communication, 2011, 22(2): 548. [8] GREBER B, COULO P, ZHAG M, et al. FGF signalling in 鄄 hibits neural induction in human embryonic stem cells[j]. EM 鄄 BO, 2011, 30(24): 4874 鄄 4884. [9] WILLIAMS L, HILTO J, PEASE S, et al. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of em 鄄 bryonic stem cells[j]. ature, 1988, 336(6200): 684 鄄 687. [10] BYRE JA, PEDERSE DA, CLEPPER LL, et al. Produc 鄄 ing primate embryonic stem cells by somatic cell nuclear transfer[j]. ature, 2007, 450(7169): 497 鄄 502. [11] GRIFFITHS DS, LI J, DAW MA, et al. LIF 鄄 independent JAK signalling to chromatin in embryonic stem cells uncov 鄄 ered from an adult stem cell disease[j]. ature Cell Biology, 2011, 13(1): 13 鄄 21. [] 李 峰, 刘 艳 红, 谢 平 丽, 等.GOLPH2 的 原 核 表 达 纯 化 抗 体 制 备 和 初 步 应 用 [J]. 生 命 科 学 研 究 (LI Feng, LIU Yan 鄄 hong, XIE, Ping 鄄 li, et al. Expression purification antibody prepara 鄄 tion and preliminary application of tumor protein GOLPH2[J]. Life Science Research), 2011, 15 (5): 438 鄄 442. 叶 生 态 学 报 曳 征 订 启 事 生 态 学 报 是 中 国 生 态 学 学 会 主 办 的 综 合 性 学 术 刊 物, 创 刊 于 1981 年 主 要 报 道 动 物 生 态 植 物 生 态 微 生 物 生 态 农 业 生 态 森 林 生 态 草 地 生 态 土 壤 生 态 海 洋 生 态 淡 水 生 态 景 观 生 态 区 域 生 态 化 学 生 态 污 染 生 态 经 济 生 态 系 统 生 态 城 市 生 态 人 类 生 态 等 生 态 学 各 领 域 的 学 术 论 文 ; 能 反 映 现 代 生 态 学 发 展 方 向 的 优 秀 综 述 性 文 章 ; 原 创 性 研 究 报 告 和 研 究 简 报 ; 生 态 学 新 理 论 新 方 法 新 技 术 介 绍 ; 新 书 评 介 和 学 术 科 研 动 态 及 开 放 实 验 室 介 绍 等 生 态 学 报 为 半 月 刊, 大 16 开 本, 信 息 容 量 55 万 字 以 上, 单 期 定 价 70 元, 年 定 价 1680 元 全 国 各 地 邮 局 均 可 订 阅, 望 广 大 读 者 互 相 转 告, 以 便 及 时 订 阅 您 需 要 订 阅 或 者 合 订 本, 也 可 直 接 与 编 辑 部 联 系! 编 辑 部 电 话 :(8610)62941099 地 址 :100085 北 京 海 淀 区 双 清 路 18 号 生 态 学 报 编 辑 部 E 鄄 mail: shengtaixuebao@rcees.ac.cn 网 址 :www.ecologica.cn 本 刊 国 内 邮 发 代 号 :82 鄄 7, 国 外 邮 发 代 号 :M670 标 准 刊 号 :ISS 1000 鄄 0933 辕 C11 鄄 2031/Q