3 中 南 大 学 学 报 医 学 版 平 肝 潜 阳 方 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 钟 广 伟 胡 建 军 陈 泽 奇 罗 艳 红 张 莺 尹 耀 慧 李 炜 易 振 佳 陈 国 林 中 南 大 学 湘 雅 医 院 中 西 医 结 合 研 究 所 急 诊 科 长 沙 4 摘 要 目 的 探 讨 平 肝 潜 阳 方 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 作 用 的 分 子 机 制 方 法 用 电 刺 激 大 鼠 三 叉 神 经 节 的 方 法 并 灌 服 附 子 汤 复 制 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 模 型 采 用 平 肝 潜 阳 方 中 药 进 行 干 预 运 用 双 向 凝 胶 电 泳 技 术 分 离 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 的 总 蛋 白 图 像 分 析 识 别 差 异 表 达 的 蛋 白 质 点 基 质 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞 行 时 间 质 谱 得 到 相 应 的 肽 质 量 指 纹 图 搜 索 数 据 库 鉴 定 蛋 白 质 结 果 平 肝 潜 阳 方 能 够 明 显 改 善 偏 头 痛 大 鼠 的 头 痛 等 症 状 得 到 分 辨 率 及 重 复 性 较 好 的 正 常 大 鼠 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 中 药 治 疗 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 的 双 向 凝 胶 电 泳 图 谱 共 得 到 肽 质 量 指 纹 图 谱 个 无 质 谱 结 果 搜 索 到 具 有 统 计 学 意 义 的 蛋 白 质 个 包 括 乙 醇 脱 氢 酶 糖 原 磷 酸 化 酶 85 合 酶 链 膜 联 蛋 白 泛 素 中 性 粒 细 胞 防 御 素 前 体 黑 素 瘤 相 关 性 1 抗 原 热 休 克 蛋 白 3 膜 联 蛋 白 8 硫 氧 还 蛋 白 过 氧 化 物 酶 谷 胱 甘 肽 合 成 转 移 酶 片 断 结 论 平 肝 潜 阳 方 治 疗 后 的 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 的 表 达 与 治 疗 前 比 较 有 差 异 所 鉴 定 的 个 蛋 白 质 可 能 与 平 肝 潜 阳 方 的 作 用 机 制 有 关 关 键 词 平 肝 潜 阳 方 蛋 白 质 组 学 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 血 淋 巴 细 胞 %,!2! 23 33 '!++ +)!?": +- ) +)?": -%:77'/ $&' 1:-. #$%* -8:7,:*' #,,- 1:7'* "#"'&,'&&#& :#' $%&''! (&!& )#%& '& '#! &#& 4 & "() 5* *+ *)'+ ) *6 6*+' 6*+) ;+( '+ 8:7 + +*( / (+* *6 +);*6 ;+8:7 * 8+*( *6+ / +);*6;+8:7/ ( +*' )+ )+* '* ( (+* *6*+(+* *6<'( )*)*5 * +**6 *) +/+ +( *( +(( ( * )+**+ 1 ( 1 /( E' 3 *6/++ 收 稿 日 期! " " 作 者 简 介 钟 广 伟 硕 士 主 治 医 师 主 要 从 事 中 医 药 治 疗 脑 血 管 疾 病 的 基 础 与 临 床 研 究 通 信 作 者! 钟 广 伟 1/3)* 基 金 项 目 7! 国 家 自 然 科 学 基 金 2 3 湖 南 省 中 医 药 科 研 计 划 项 目!3 5/*+0 / '*+( :*:'+)) <*'(* *62 3 ( +*)<'( *65+( * () ( +')6)9+) *6' +*;) 9!3
平 肝 潜 阳 方 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 钟 广 伟 等 3 ( +( *+* ** *66 )+* + 8#,5%< (, %95( ( /+ '( *( 6(6++*#!+ 5 6*+' 6*+) ;+( '+ 8:7)*'( *+*; () +*'* ( ++*(') 1+*6+*) 6+* *+ *( ( +' /+ * (1; *6 * (6++* */+ ')) 6' ( 6( 8#,5%<5 +* /+ )**( (+* 8 )* **+ 85 ) '.' '+*( 6 +)'+*+ **)( 1 *)0 +*3 8 +*+(* $)'* +6+ <+ 7 +! 6+)*))'+ + * *6*) +* + +/ (+* *6 + );*6;+8:76++ / 6*+' 6*+) ;+( '+ 8:7 ( ( 6( +* * *)( / ), -6*+' 6*+) ;+( '+ 8:7+**)+ (+* +);*6;+8:7*) 偏 头 痛 + 在 以 头 痛 为 症 状 的 疾 病 中 占 有 很 重 要 的 地 位 为 发 病 率 较 高 的 疾 病 之 一 在 美 国 约 3? 的 女 性 和 2? 的 男 性 曾 有 偏 头 痛 发 作 但 仅 有 4? 的 患 者 就 诊 至 今 其 发 病 机 制 仍 未 完 全 明 确 蛋 白 质 组 学 的 迅 速 发 展 为 研 究 偏 头 痛 的 发 病 机 制 提 供 了 新 的 思 路 肝 阳 上 亢 证 是 偏 头 痛 中 的 常 见 证 型 也 是 中 医 肝 脏 象 的 临 床 常 见 证 型 之 一 许 多 学 者 在 应 用 平 肝 潜 阳 药 物 治 疗 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 方 面 做 了 积 极 的 努 力 取 得 了 较 好 的 疗 效 但 平 肝 潜 阳 药 物 治 疗 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 的 作 用 机 制 目 前 尚 未 阐 明 应 用 蛋 白 质 组 学 技 术 研 究 平 肝 潜 阳 药 物 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 表 达 的 影 响 以 揭 示 平 肝 潜 阳 方 治 疗 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 的 分 子 机 制. / 材 料 与 方 法 材 料 实 验 时 间 实 验 于 2 年! 月 至 3 年 月 在 中 南 大 学 湘 雅 医 院 中 西 医 结 合 所 实 验 室 生 殖 与 遗 传 实 验 室 卫 生 部 肿 瘤 蛋 白 质 组 实 验 室 完 成 实 验 动 物 雄 性 +' / 大 鼠 只 清 洁 级 体 质 量 H 由 中 南 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 许 可 证 号 D> 湘 试 剂 大 鼠 淋 巴 细 胞 分 离 液 产 自 天 津 灏 洋 生 物 有 限 公 司 丙 烯 酰 胺 甲 叉 双 丙 烯 酰 胺 固 化 梯 度 干 胶 条,7 + :# ) 均 由 美 国 8 + *)) 公 司 提 供 二 硫 苏 糖 醇 (*+* 55 甲 苯 磺 酰 苯 丙 氨 酰 氯 甲 酮 胰 蛋 白 酶 : *' '6* # )*+( 5>+ 乙 腈 )* 8: 三 氟 乙 酸 +6'*+*)))( 5<8 基 质 氰 基 羟 基 肉 桂 酸 )* (+*)) )( 8 均 由 美 国 公 司 提 供 附 子 汤 由 单 味 制 附 子 由 中 南 大 学 湘 雅 医 院 中 药 房 提 供 组 成 将 药 物 先 泡 煎 煮 次 后 再 将 药 液 合 并 浓 缩 为 含 生 药 # 的 药 液 平 肝 潜 阳 方 自 拟 方 天 麻 钩 藤 石 决 明 牡 蛎 川 芎 石 决 明 和 牡 蛎 先 煎 钩 藤 后 下 浓 缩 为 含 生 药 4 # 的 药 液 仪 器 5%1#5,:7 5# 鼠 脑 定 位 仪 系 美 国 5%1#5,:7 产 品 生 理 电 子 刺 激 仪 E 型 为 蚌 埠 实 用 技 术 研 究 所 产 品 1 8#5 垂 直 电 泳 槽 和,) + 扫 描 仪 购 自 美 国 8 + 公 司 E' 3 分 析 软 件 购 自 美 国 *9( 公 司 1D#4 自 动 酶 标 仪 购 自 美 国 50,+' =*+1 59 3 8#,5%< 质 谱 仪 购 自 美 国 8( * 公 司
3 中 南 大 学 学 报 医 学 版 方 法 动 物 造 模 偏 头 痛 模 型 复 制 参 照 +(*' 等 的 方 法 实 验 动 物 在? 水 合 氯 醛 麻 醉 # 在 头 顶 作 正 中 切 口 在 前 囟 旁 根 据 动 物 大 小 可 变 动 后 处 用 手 术 刀 凿 一 直 径 为 的 小 孔 操 作 鼠 脑 立 体 定 位 仪 将 不 锈 钢 电 极 由 钻 孔 处 垂 直 插 入 深 度 在 硬 脑 膜 下! 处 达 三 叉 神 经 节 应 用 生 理 电 子 刺 激 仪 进 行 电 刺 激 刺 激 电 流 8 波 宽 持 续 完 毕 后 拔 除 电 极 缝 合 头 皮 外 敷 青 霉 素 粉 剂 预 防 感 染 手 术 过 程 及 苏 醒 期 间 以 2 灯 泡 维 持 体 温 在 3 A 肝 阳 上 亢 证 复 制 参 照 鄢 东 红 等 的 方 法 连 续 灌 服 附 子 汤 # 次 日 次 共 ( 复 制 成 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 大 鼠 模 型 动 物 分 组 只 大 鼠 随 机 分 为 组 正 常 对 照 组 简 称 正 常 组 4 蒸 馏 水 # 灌 胃 日 次 共! ( 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 组 简 称 模 型 组 4 麻 醉 手 术 电 刺 激 附 子 汤 灌 胃 # 次 日 次 共 ( 第 天 开 始 蒸 馏 水 # 灌 胃 至 第 3 周 末 平 肝 潜 阳 方 治 疗 组 简 称 中 药 组 4 造 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 模 型 后 的 第 3 周 开 始 用 平 肝 潜 阳 方 灌 胃 日 次 至 第 3 周 末 实 验 中 动 物 无 脱 落 血 淋 巴 细 胞 分 离 所 有 动 物 在 处 死 前 均 从 腹 腔 注 射 麻 醉 剂 水 合 氯 醛? # 待 动 物 麻 醉 后 断 头 收 集 血 浆 用 等 量 0 液 稀 释 后 加 在 淋 巴 细 胞 分 离 液 上 4 + 离 心 A 洗 涤 次 4 + 离 心 A 沉 淀 物 用 9,2 稀 释 成 适 用 浓 度 的 淋 巴 细 胞 悬 液 @ 2 # 随 后 放 入 "4 A 冰 箱 中 保 存 备 用 淋 巴 细 胞 总 蛋 白 质 的 抽 提 样 品 加 入 # 细 胞 裂 解 液 3 *# 尿 素 *# 硫 脲? :? 5+* D *#55? 胆 胺 丙 基 甲 氨 基 丙 磺 酸 8 *# 乙 二 胺 四 乙 酸 *#5+? 两 性 载 体 室 温 下 静 置 于 A 下 + 离 心 2 吸 取 上 清 液 作 为 细 胞 的 总 蛋 白 取 # 上 清 用 于 E' 蛋 白 质 定 量 试 剂 盒 的 微 量 测 试 法 测 定 总 蛋 白 质 浓 度 其 余 上 清 液 冻 存 于 "4 A 备 用 双 向 电 泳 及 考 马 斯 亮 蓝 染 色 用 ) 干 胶 条 上 样 量 为 4 具 体 操 作 按,7*+ 等 电 聚 焦 系 统 指 南 和 7*+ 2 等 的 方 法 进 行 A 水 化 行 等 点 聚 焦 总 电 压 时 间 积 达 2 = 聚 焦 后 将 胶 条 先 后 在 含 55 和 碘 乙 酰 胺 的 平 衡 液 中 平 衡 然 后 行? 聚 丙 烯 酰 氨 凝 胶 电 泳 871 电 泳 考 马 斯 亮 蓝 染 色 凝 胶 通 过,) + 扫 描 仪 及 #) 扫 描 软 件 进 行 扫 描 获 取 图 像 利 用 E' 3 分 析 软 件 对 图 像 进 行 强 度 校 正 点 检 测 背 景 消 减 匹 配 等 分 析 2 差 异 蛋 白 质 点 质 谱 分 析 选 取 分 辨 较 好 的 蛋 白 质 点 利 用 8#,5%< 质 谱 仪 进 行 质 谱 分 析 获 得 肽 质 量 指 纹 图 谱 将 获 得 的 肽 质 量 指 纹 图 谱 用 )*+ 软 件 识 别 单 同 位 素 峰 获 得 的 肽 段 的 质 荷 比 数 值 输 入 )* 软 件 进 行 检 索 :,+ 及,9%5 数 据 库 3 统 计 学 处 理 搜 索 数 据 库 为 采 用 统 计 软 件 计 量 资 料 均 以 H# 表 示 采 用 方 差 分 析 等 级 计 数 资 料 采 用 秩 和 检 验 计 数 资 料 采 用 检 验 以 为 差 异 有 统 计 学 意 义 / 结 // 果 大 鼠 行 为 学 变 化 模 型 组 大 鼠 较 对 照 组 食 量 减 少 体 质 量 减 轻 毛 发 干 枯 前 肢 频 繁 搔 头 刺 激 侧 咀 嚼 肌 收 缩 有 时 可 见 口 鼻 分 泌 物 增 加 经 中 药 治 疗 周 后 大 鼠 进 食 增 加 体 质 量 增 加 毛 发 变 得 光 泽 搔 头 次 数 减 少 性 情 变 化 及 旋 转 时 间 模 型 组 在 附 子 汤 灌 胃 周 后 其 激 惹 程 度 发 生 了 很 大 的 变 化 多 表 现 为 级 且 半 数 出 现 了 眼 结 膜 充 血 与 正 常 组 比 较 差 异 具 有 统 计 学 意 义 正 常 组 旋 转 时 间 均 大 于 都 以 计 算 模 型 组 大 鼠 在 造 模 后 旋 转 时 间 较 对 照 组 缩 短 差 异 具 有 统 计 学 意 义 中 药 组 在 治 疗 后 激 惹 程 度 及 旋 转 时 间 均 有 所 改 善 与 正 常 组 比 较 差 异 无 统 计
平 肝 潜 阳 方 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 钟 广 伟 等 3 学 意 义 表 组 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 1 图 谱 及 差 异 蛋 白 质 点 在 相 同 条 件 下 分 别 将 正 常 组 模 型 组 和 中 药 组 血 淋 巴 细 胞 总 蛋 白 质 样 品 进 行 次 双 向 电 泳 其 总 蛋 白 分 布 模 式 非 常 相 似 以, 4 和 分 子 质 量 3 0 ' 范 围 的 蛋 白 质 点 最 多 图 经 E' 3 软 件 分 析 相 同 条 件 下 识 别 的 蛋 白 质 斑 点 数 分 别 为 正 常 组 H 个 模 型 组 3 H22 个 中 药 组 3 H2! 个 图 像 分 析 时 将 正 常 组 的 一 块 凝 胶 选 为 参 考 胶 其 他 凝 胶 中 蛋 白 质 点 与 其 相 匹 配 结 果 模 型 组 的 平 均 匹 配 点 数 为 4 H 个 平 均 匹 配 率 为 43? 中 药 组 的 平 均 匹 配 点 数 为 2 H23 个 平 均 匹 配 率 为!? 图 像 分 析 统 计 后 发 现 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 组 与 正 常 组 相 比 有 个 蛋 白 质 下 调 和 4 个 蛋 白 质 上 调 其 中 经 中 药 治 疗 后 这 些 蛋 白 点 有 2 个 恢 复 至 正 常 水 平 或 接 近 正 常 表./ 组 动 物 性 情 变 化 外 观 及 旋 转 时 间 的 比 较 $1./! 组 别 性 情 变 化 结 膜 充 血 旋 转 时 间 正 常 组 4 H 模 型 组 4 43 H3 中 药 组 4! H2 与 正 常 组 比 较 与 模 型 组 比 较 图./ 各 组 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 的 考 马 斯 亮 蓝 染 色 双 向 凝 胶 电 泳 图 谱 8 正 常 组 模 型 组 中 药 组 71./$-+++ - ++!+18:*++*' *( +*' 5+ +*' 差 异 表 达 蛋 白 质 点 的 8#,5%< 质 谱 鉴 定 及 数 据 库 查 询 结 果 随 机 选 取 图 像 分 析 统 计 后 的 差 异 大 于 倍 的 蛋 白 质 点 个 胶 内 酶 切 提 取 蛋 白 进 行 质 谱 鉴 定 共 得 到 个 肽 质 量 指 纹 图 谱 其 中 个 无 质 谱 结 果 搜 索 到 具 有 统 计 学 意 义 的 蛋 白 质 个 图 是 号 蛋 白 质 点 的 肽 质 量 指 纹 图 图 为 经 )* 软 件 搜 到 的 号 蛋 白 质 点 的 评 分 其 中 鉴 定 的 蛋 白 分 别 为 乙 醇 脱 氢 酶 )**( (+* 8 糖 原 磷 酸 化 酶 )* **+ 85 合 酶 链 85 ) 膜 联 蛋 白 泛 素 '.' 中 性 粒 细 胞 防 御 素 前 体 '+*( 6 +)'+*+ 黑 素 瘤 相 关 性 1 抗 原 * *)( 1 热 休 克 蛋 白 3 *)0 +* 3 膜 联 蛋 白 8 8 硫 氧 还 蛋 白 过 氧 化 物 酶 +*+(* 谷 胱 甘 肽 合 成 转 移 酶 片 断 $ )'* +6+ <+ 7 表
3 中 南 大 学 学 报 医 学 版!#()*+,-./0.! 1%.... "#$%&'..,#!+#2"34( 图 / 采 用 *"&%$7* 检 测 到 的 2 号 差 异 表 达 蛋 白 质 点 肽 指 纹 图 谱 71/ + 2! *"&%$7*1 图 /2 号 差 异 点 差 异 点 肽 质 量 指 纹 图 谱 在 9%#$ 数 据 库 中 检 索 结 果 71/*!+ 2 9%#$1 表 / 组 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 差 异 表 达 蛋 白 信 息 $1/++! 编 号 登 录 号 蛋 白 名 称 分 数 相 对 分 子 质 量 等 电 点 匹 配 的 肽 段 匹 配 率 表 达 情 况 E3=!J985 )**( (+*! 3!? 2 )* **+ 3!3! 2! 3? 1!43J985 *)0 +*3 2! 3 34 34? 1<J985 '+*( 6 +)'+*+ 2 4! 4? 22! 4 2 2!!2? 2 871 **)( 1 2 22? 3 85J985 85 ) 2 4 4! 23? 4 E2 '.' 3 4 2 22 4?! 4 8 34 4 4 22!? 3 +*+(* 4!!2 4!? E!$!2 $)'* +6+ 6+!? 模 型 组 与 正 常 组 比 较 和 分 别 表 示 该 蛋 白 点 在 模 型 组 中 表 达 上 调 和 下 调 中 药 治 疗 后 恢 复 至 正 常 水 平 / 讨 // 论 偏 头 痛 是 一 种 常 见 病 多 发 病 其 临 床 表 现 为 反 复 发 作 单 侧 搏 动 性 头 痛 可 伴 有 恶 心 呕 吐 视 物 异 常 耳 鸣 等 症 状 由 于 发 病 机 制 的 研 究 尚 不 明 确 西 药 缓 解 偏 头 痛 的 急 性 发 作 研 究 成 效 显 著 但 许 多 药 物 副 反 应 大 或 价 格 昂 贵 因 此 防 治 偏 头 痛 的 药 物 研 究 成 为 当 今 一 大 医 学 研 究 热 点 开 发 有 效 而 且 低 毒 副 作 用 的 中 药 在 防 治 偏 头 痛 的 发 作 方 面 将 有 所 作 为 大 多 数 学 者 认 为 偏 头 痛 常 见 为 肝 阳 上 亢 痰 浊 上 泛 淤 血 阻 络 和 气 血 亏 虚 型 3 清 代 叶 天 士 首 创 肝 阳 上 亢 学 术 论 点 在 临 证 指 南 医 案 中 明 确 指 出 肝 为 风 脏 因 精 血 衰 耗 水 不 涵 木 木 少 滋 荣 故 肝 阳 偏 亢 其 基 本 病 机 为 肝 脏 阴 阳 平 衡 失 调 肝 阴 不 能 制 阳 以 致 肝 阳 不 潜 浮 动 于 上 临 床 上 采 用 平 肝 潜 阳 制 剂 治 疗 偏 头 痛 疗 效 明 显 但 对 平 肝 潜 阳 药 物 治 疗 偏 头 痛 的 机 制 研 究 尚 未 见 报 道 在 本 实 验 中 也 发 现 该 疗 法 能 够 改 善 偏 头 痛 大 鼠 的 头 痛 等 症 状 平 肝 潜 阳 方 中 药 复 方 由 天 麻 钩 藤 石 决 明 川 芎 和 牡 蛎 等 种 中 药 组 成 是 由 天 麻 钩 藤 饮 化 裁 而 来 全 方 共 奏 平 肝 潜 阳 之 效 现 代 药 理 学 研 究 发 现 天 麻 钩 藤 牡 蛎 的 有 效 成 分 均 能 够 降 低 中 枢 神 经 系 统 的 兴 奋 性 调 节 免 疫 力 石 决 明 镇 静 川 芎 的 有 效 成 分 则 能 降 低 血 小 板 活 性 抗 血 小 板 聚 集 并 对 中 枢 有 抑 制 作 用 淋 巴 细 胞 为 外 周 血 中 较 易 分 离 的 细 胞 且 有 细 胞 核 并 能 进 行 有 氧 呼 吸 和 合 成 蛋 白 质 在 代 谢 方 面 与 组 织 脏 器 细 胞 相 近 已 被 证 实 是 最
平 肝 潜 阳 方 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 钟 广 伟 等 3 近 似 反 映 组 织 细 胞 功 能 特 性 的 外 周 血 细 胞 4 研 究 显 示 偏 头 痛 患 者 均 伴 随 有 淋 巴 细 胞 内 游 离 钙 水 平 的 增 加 且 淋 巴 细 胞 内 游 离 钙 的 变 化 与 偏 头 痛 发 作 呈 正 相 关 关 系 故 本 研 究 选 择 血 淋 巴 细 胞 为 靶 点! 本 实 验 中 模 型 组 与 正 常 组 比 较 经 图 像 分 析 统 计 后 有 个 蛋 白 质 表 达 下 调 4 个 蛋 白 质 表 达 上 调 表 明 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 异 常 可 以 作 为 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 的 临 床 诊 断 标 志 物 之 一 而 中 药 组 与 模 型 组 比 较 表 达 下 调 4 个 蛋 白 质 中 有 个 表 达 增 强 而 表 达 上 调 个 蛋 白 质 中 有 个 表 达 降 低 表 明 平 肝 潜 阳 药 物 治 疗 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 可 能 是 通 过 调 节 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 的 表 达 而 实 现 本 研 究 鉴 定 的 个 差 异 蛋 白 质 点 包 括 乙 醇 脱 氢 酶 糖 原 磷 酸 化 酶 85 合 酶 链 膜 联 蛋 白 泛 素 中 性 粒 细 胞 防 御 素 前 体 黑 素 瘤 相 关 性 1 抗 原 热 休 克 蛋 白 3 膜 联 蛋 白 8 硫 氧 还 蛋 白 过 氧 化 物 酶 谷 胱 甘 肽 合 成 转 移 酶 片 断 它 们 均 与 偏 头 痛 发 生 发 展 密 切 相 关 有 可 能 是 偏 头 痛 的 相 关 诊 断 指 标 乙 醇 脱 氢 酶 是 含 锌 原 子 :8 依 赖 的 胞 质 二 聚 体 酶 可 逆 氧 化 各 种 醇 为 相 应 的 醛 酮 是 乙 醇 代 谢 的 关 键 酶 有 研 究 表 明 饮 酒 可 以 诱 发 偏 头 痛 的 发 生 与 发 展 但 目 前 饮 酒 与 偏 头 痛 之 间 相 互 关 系 的 潜 在 机 制 尚 不 完 全 清 楚 中 性 粒 细 胞 防 御 素 为 生 物 体 内 参 与 机 体 最 初 防 御 活 动 的 小 分 子 肽 中 性 粒 细 胞 也 可 释 放 防 御 素 越 来 越 多 的 证 据 表 明 中 性 粒 细 胞 防 御 素 能 激 活 细 胞 的 高 敏 感 钙 通 道 还 能 通 过 形 成 上 皮 顶 膜 的 通 道 而 激 活 氯 化 物 的 分 泌 可 与 嗜 酸 性 粒 细 胞 相 互 作 用 参 与 偏 头 痛 的 发 病 同 时 防 御 素 的 表 达 受 炎 症 因 子 的 调 控 谷 胱 甘 肽 是 细 胞 内 最 主 要 的 巯 基 和 含 量 最 丰 富 的 低 分 子 多 肽 参 与 细 胞 许 多 功 能 活 动 它 作 为 一 种 还 原 物 质 和 抗 氧 化 剂 能 清 除 体 内 过 氧 化 氢 和 许 多 有 害 的 过 氧 化 代 谢 产 物 阻 断 脂 质 过 氧 化 连 锁 反 应 从 而 起 到 保 护 细 胞 结 构 和 功 能 完 整 的 作 用 同 时 它 具 有 降 低 血 液 黏 稠 性 抑 制 血 小 板 聚 集 具 有 血 栓 作 用 表 明 谷 胱 甘 肽 与 偏 头 痛 的 发 病 有 关 研 究 发 现 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 大 鼠 乙 醇 脱 氢 酶 和 谷 胱 甘 肽 表 达 下 调 而 中 性 粒 细 胞 防 御 素 表 达 上 调 经 平 肝 潜 阳 方 中 药 干 预 后 可 以 调 节 其 表 达 失 调 膜 联 蛋 白 8 是 表 皮 生 长 因 子 受 体 激 酶 蛋 白 激 酶 等 的 磷 酸 化 底 物 参 与 了 炎 症 细 胞 分 化 和 增 殖 有 关 的 信 号 转 导 过 程 热 休 克 蛋 白 3 属 于 小 分 子 热 休 克 蛋 白 家 族 为 4 8> 信 号 转 导 通 路 中 的 信 号 蛋 白 并 参 与 多 种 效 应 反 应 可 能 是 在 机 体 抗 损 伤 中 起 一 定 作 用 1;+6*; 等 的 研 究 发 现 该 蛋 白 的 突 变 与 进 行 性 神 经 性 肌 萎 缩 和 遗 传 性 运 动 神 经 病 有 关 硫 氧 还 蛋 白 过 氧 化 物 酶 属 于 硫 氧 还 蛋 白 系 统 广 泛 存 在 于 各 种 组 织 中 可 以 清 除 自 由 基 从 而 对 组 织 起 保 护 作 用 本 研 究 发 现 热 休 克 蛋 白 3 膜 联 蛋 白 8 和 硫 氧 还 蛋 白 过 氧 化 物 酶 个 蛋 白 在 模 型 大 鼠 中 表 达 上 调 平 肝 潜 阳 方 可 以 调 节 个 蛋 白 的 表 达 失 衡 本 课 题 组 在 研 究 平 肝 潜 阳 方 对 高 血 压 病 肝 阳 上 亢 证 和 甲 亢 肝 阳 上 亢 证 的 蛋 白 质 表 达 中 发 现 2 这 个 蛋 白 质 表 达 失 衡 推 测 这 个 蛋 白 质 与 中 医 肝 阳 上 亢 证 的 发 生 和 形 成 密 切 相 关 可 能 是 平 肝 潜 阳 方 治 疗 肝 阳 上 亢 证 的 作 用 分 子 机 制 之 一 综 上 所 述 本 研 究 采 用 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 组 学 方 法 对 偏 头 痛 大 鼠 进 行 了 研 究 这 为 筛 选 用 于 偏 头 痛 诊 断 和 治 疗 的 分 子 标 志 物 奠 定 了 基 础 这 些 相 关 蛋 白 质 的 功 能 及 其 在 偏 头 痛 发 病 中 的 作 用 还 有 待 进 一 步 的 证 实 和 研 究 致 谢 本 课 题 承 中 南 大 学 生 殖 与 遗 传 重 点 实 验 室 及 湘 雅 医 院 卫 生 部 肿 瘤 蛋 白 质 组 重 点 实 验 室 的 技 术 支 持 指 导 和 帮 助 在 此 表 示 衷 心 的 感 谢 参 考 文 献 #* 9 /+ < *( +;) ( '+( *6+ $( (6+* 8 +) + '(, & () 3 2 2 2 3 赵 瑞 成 周 慎 偏 头 痛 辨 治 规 律 分 析 & 湖 南 中 医 杂 志 4-8% 9') -%$ 8* +'++' *6(+* (6+)6)* 6*++ & ' &*'+*65+(* () 4 周 慎 杨 维 华 孙 兆 泉 等 平 肝 通 络 颗 粒 治 疗 偏 头 痛 肝 风 血 瘀 证 的 临 床 及 实 验 研 究 & 中 成 药 2 4 -%$ 8:7 ' $: -*.' ) 6)*6*'*7+'* + / ;+ /( ( **( * & 5+(*
32 中 南 大 学 学 报 医 学 版 () 2 4 +(*' = ' 7 *0*/ 8 5+ *+6 +'* (')*+**))+ 6))+* +('++) & :'+* ))!!! 3 鄢 东 红 金 益 强 肖 纯 等 自 发 性 高 血 压 大 鼠 肝 阳 上 亢 证 模 型 的 复 制 & 湖 南 中 医 学 院 学 报!!!! 4 8: ** &,:. D,8%' ') *( *6 ) ; +*6;+8:7 (+* * *' +; + & &*'+*6' 5+(* () $;+*6'!!!! 4 2 7*+8 % ++ *' 7 5 )' + *6/*( * )+**+/ *( +( & 1)+**+ 2 3 3 张 树 彪 王 景 阁 偏 头 痛 的 中 西 医 治 疗 进 展 & 天 津 中 医 学 院 学 报 2 2-8:7 '* 8:7&+*+ *6+( +( * ( + () + + & &*'+*65 * *65+(* ( ) 2 2 4 %5 ''+ >(*>,+) '+*( ' )*)+* *)( ++*)*6 / +* & & +&! 4 4! 3 3 4! +) 8 +8 (8 +*6*+) *0 ( * *)' ( *) + + * +''+**( *6+ /*' '+ ( ) & () 2 2 3 *** * ***: #** )'* *6)**( (+* / )*6)*+6*+ * *6 +')'+ ( ); & * )*+* 4 3 2 4 #)+, '7 +* +7 9,(')* *6 )*+( )+* ) 6*+ )+( ( & +*):8)( )$8!! 3! 2 2 4 4 4 4! &'0 + '*6' = +**)( 6)* *6 '+'( *6*+ *6 8 ++ 6* */+;+ )++) & 7 3 2 2 2 3 张 立 勇 赵 晓 航 吴 膜 联 蛋 白, 的 结 构 和 功 能 & 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展! 3-8:7 #* -8% D* $ 5 +')'+ ( 6')*)+)+)*6 & +*+ *) +( *)! 3 1;+6*;%= +*;,,+*& ' *)0 +* 3 )' *+)*+5** ( ( ( +(+ **+ '+* & : 7 2 2 2 2 2 钟 广 伟 李 炜 罗 艳 红 等 平 肝 潜 阳 药 物 对 偏 头 痛 肝 阳 上 亢 证 患 者 的 临 床 疗 效 及 其 对 血 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 & 中 西 医 结 合 学 报! 3 -%:7 7'/ #, #$% * + 6*+**;+( '(' + *6+ / +); ;+(+* ( 6)* * ) +* + * +(*( )*+*( + & &*'+*6,+; ()! 3 钟 广 伟 李 炜 罗 艳 红 等 平 肝 潜 阳 药 物 对 高 血 压 病 肝 阳 上 亢 证 患 者 淋 巴 细 胞 蛋 白 质 表 达 的 影 响 & 中 南 大 学 学 报 医 学 版 4 -%:7 7'/ #, #$% * 16)*6 ) ;+( '+ +); 8:7 (+' * *) +* +* / +); *6;+8:7 & &*'+*6+*' $;+ ())) 4 本 文 编 辑 傅 希 文