中国农学通报 2015,31(10):153-157 Chinese Agricultural Science Bulletin 蚬壳花椒资源繁育与有效成分研究进展 杨 辉 李 猛 王 平 孙吉康 代明龙 中南林业科技大学生命科学与技术学院 长沙 410004 摘 要 总结了蚬壳花椒的一般特性及生长发育特征 地理分布差异 组织培养 扦插嫁接 有性繁育 遗 传多样性分析 药用成分的种类 有效成分的分离纯化方法 有效成分的鉴定方法等方面的研究 提出了 蚬壳花椒渐危的主要原因及其具体解决措施 认为蚬壳花椒种子资源库的建立 有性人工繁育 GAP 规范化栽培研究 主要药用成分的药理 药剂 药代动力学考察 新的药用成分的分离 纯化 鉴定 药用 成分的合成途径及其基因组学研究等将成为未来研究的方向与重点 关键词 药用植物 蚬壳花椒 组织培养 有效成分 研究进展 中图分类号 Q599 文献标志码 A 论文编号 casb15010205 Research Progress on Medicinal Plant of Zanthoxylum dissitum Hemsl Yang Hui, Li Meng, Wang Ping, Sun Jikang, Dai Minglong (College of Life Science and Technology, Central South University of Forestry and Technology, Changsha 410004) Abstract: The author summarized the past study on Zanthoxylum dissitum Hemsl in this paper, including the general biological characteristics and development characteristics, the distribution differences, tissue culture, cuttings grafting, sexual breeding, genetic diversity, the types of medicinal ingredients, methods of isolation and purification and identification of effective components, etc. Furthermore, the author pointed out the main reason for vulnerable status of Zanthoxylum dissitum Hemsl and specific countermeasures. Moreover, the author believed that the establishment of Zanthoxylum dissitum Hemsl seed resource library, artificial breeding, GAP standardization planting, study on the main medicinal ingredients of pharmacology, pharmaceutical and pharmacokinetic, new medicinal ingredient separation, purification and identification, the synthesis approach of medicinal ingredients and the genomics research will become the future research directions and focuses. Key words: medicinal plant; Zanthoxylum dissitum Hemsl; tissue culture; effective components; research progress 0 引言 由于人们对蚬壳花椒资源及其加工产品的需求越来越 蚬壳花椒(Zanthoxylum dissitum Hemsl)又名蚌壳 [1] 多 导致相关药厂对其需求量不断增加 而蚬壳花椒野 花椒 大叶花椒 单面针等 是芸香科花椒属木质藤 生资源有限 过度开挖 已逐步使其成为渐危植物 野 本植物 蚬壳花椒的根 茎 叶中均含有白藓碱等有效 生蚬壳花椒资源已处于严重匮乏状态[3] 笔者对近些 成分 具有解毒消肿 散瘀止痛 祛风活络等功效 主要 年有关蚬壳花椒的一般生物学特性与资源分布 有性 [2] 用于治疗产后月经不调 骨骼疼痛等病症 近年来 与无性繁育 药用价值及其主要有效成分的提取 分 基金项目 湖南省科技计划重点项目 国际合作与交流 林药单面针种质基因库的构建与栽培技术示范 (2012wk2014) 国家林业公益性行业专项 林药单面针资源培育利用技术研究与示范 (201204606) 国家自然科学基金项目 蚬壳花椒种子萌发过程中基因与蛋白质的表达差异研究 (31370612) 第一作者简介 杨辉 男 1989 年出生 湖南常德人 在读硕士 研究方向为应用生物化学 通信地址 410004 湖南省长沙市韶山南路 498 号 中南林业 科技大学生科院 E-mail csuftyh@163.com 通讯作者 王平 男 1964 年出生 湖南常德人 教授 博士生导师 主要从事应用生物技术等方面的教学与研究工作 E-mail csfuwp@163.com 收稿日期 2015-01-27 修回日期 2015-02-05
154 中国农学通报 http://www.casb.org.cn 离 鉴定等方面的研究进行综合归纳与总结 为人们了 仍完全处于野生状态 尚无任何规模化人工栽培的报 解当前蚬壳花椒的研究现状和存在的问题以及后期深 道 为了对各地区蚬壳花椒进行比较分析及优良性状 入研究提供理论参考 1 蚬壳花椒的生物学特性及分布研究 进行鉴定 李猛等[10-11]通过 ISSR 分子标记的方法 对湖 南 湖北 贵州 重庆 4 个省份 12 个采样点 120 个样品 1.1 蚬壳花椒一般特性及生长发育特征 进行比较分析 试验结果显示 4 个省份遗传分化很高 蚬壳花椒主要生长在 500~1000 m 高度的地带 呈 推测可能是由于地理隔离造成了这一结果 同时发 零星分布在广东 广西 湖南 甘肃 湖北 贵州 重庆 现 湖 南 省 张 家 界 市 种 群 遗 传 多 样 性 最 高 (PPB= 陕西等地区的常绿灌木林中 大多不能形成群落的优 62.0% HPOP=0.3267) 可以将此种群作为今后蚬壳花 势种 蚬壳花椒成株一般高约 2~3 m 表皮毛和腺体 椒育种 栽培及分子生物学等方面研究的主要种群来 分布于幼茎表面 成熟茎表面被有褐色皮刺 含有少量 源[12] 结晶和分泌囊 根皮黄色 粗糙 有许多黄色小疣点 2 蚬壳花椒资源繁育研究 [4] 断面呈 人 字形纹 初生木质部有三原型和四原型 由于蚬壳花椒种子的休眠期较长且种壳比较坚 羽状复叶互生 革质 近对生 卵状长圆形或长圆状披 硬 导致蚬壳花椒种子自然萌芽率很低 进而导致蚬壳 针形 且叶上 下表皮细胞结构差异显著 上表皮有一 花椒野生资源严重稀少 为了解决这一问题 科研工作 分泌囊紧接下表皮 且细胞较大 有短的小枝 叶轴 总 者做了大量的工作 主要集中在无性繁育和有性繁育 叶柄 有时叶片下面中肋上生下曲而小的锐刺 聚伞 2 个方面 状圆锥花序腋生 较叶短的花序长度 苞片小 卵圆形 2.1 蚬壳花椒无性繁育技术研究 花单性 雄花萼片 4 片 雄花序细长 卵圆形 花瓣 4 片 2.1.1 组织培养人工快繁技术 利用组织培养技术繁育 黄色 雄蕊花丝较花瓣长 雌花无退化雄蕊 心皮 4 枚 试管苗是解决蚬壳花椒种苗的有效途径 目前 蚬壳 与雄花相似 蓇突果 淡褐色 密集成簇 扁椭圆形 有 花椒用于外植体的主要有种子胚及无菌幼苗的嫩叶及 [5-6] 皱纹 似蚌壳状 黑色种子 球形 有光泽 茎段等 据研究 由种子诱导的愈伤组织分化能力较 土壤 ph 和碳氮比值可能是影响蚬壳花椒自然生 强 因此 外植体嫩叶及茎段主要由离体胚培养的蚬壳 长的主要因素 其要求相对较高的土壤 ph 条件 一 花椒幼苗提供 首先 王平等 [13] 以蚬壳花椒种子胚为 般最适 ph 6.7 平均有机质含量可达 9.02% 喜阳 但 外植体进行胚培养 研究出一套离体胚培养的完善体 忌强光直射 喜湿 常生长在沟溪边 冬季土壤的平均 系 进而马英姿等[5,14] 王海霞等[15]在王平等离体胚培 绝对含水量可达 26.89% 蚬壳花椒的花期较长 于 养的基础上分别以带顶芽或腋芽的茎段为材料 蚬壳 12 月及次年 2 月开花 果实于次年 12 月成熟 在同一 花椒幼苗的叶片为外植体 研究不同激素 不同培养基 植株上可出现花果同枝的现象 且结实明显有大小年 及培养条件对其愈伤组织诱导及生长的影响 马英姿 证实 MS+ 6-BA 2.0 mg/l+ NAA 0.05 mg/l 为最佳腋芽 [7] 的现象 在高等植物中 种子休眠是一种普遍存在的现象 其休眠机制可因植物种类和其生境的不同而有所差 愈伤诱导培养基 诱导率达 64% 王海霞研究结果表 明 MS 培养基为最适基本培养基 蚬壳花椒愈伤组织 异 中南林业科技大学王平的课题组近年的研究表 诱 导 的 较 优 激 素 组 合 是 6- BA 0.5 mg/l + NAA 明 根据 Baskin 和 Baskin 提出的种子休眠分类系统 1.5 mg/l+ 2,4-D 0.1 mg/l 诱导率为 65.72% [8] [9] 推测蚬壳花椒的种子休眠属生理休眠类型(PD) 由于 诱导蚬壳花椒愈伤组织不定芽及生根 在利用 蚬壳花椒种子坚硬的种壳和较长的生理休眠期 单独 MS 培养基的基础上 IBA 6-BA NAA ZT 等激素适 使用 GA 处理尚不能打破其休眠以实现人工萌发 更 当的配比也起到至关重要的作用 王平等[16]以蚬壳花 由于生理休眠机制的存在 导致蚬壳花椒种子自然萌 椒幼苗叶片为外植体 诱导愈伤组织不定芽的分化 诱 芽率极低 这可能是导致蚬壳花椒野生资源稀少的重 要原因 因此 如能从物种内在机制上阐明并解除蚬 导结果为 其叶片不定芽最适诱导培养基为 MS+ 6BA 0.5 mg/l+ NAA 0.1 mg/l 最高诱导率可达 61% 壳花椒种子的生理休眠 探索出种子培育的新方法 为 马英姿 [5] 以带顶芽或腋芽的茎段为外植体 得出 MS+ 蚬壳花椒的规模化繁育提供必要的理论依据和技术支 ZT 2.0 mg/l+ NAA 0.2 mg/l 为最佳诱导丛芽愈伤培 撑将是国内林业科技工作者今后努力的主要方向 养 基 诱 导 率 为 90% 增 殖 系 数 是 2.7 1/3MS + IBA 1.2 蚬壳花椒地理分布差异 0.5 mg/l+ NAA 0.05 mg/l 为最佳生根培养基 生根率 [3] 依上所述 蚬壳花椒虽然分布比较广泛 但是目前 高达 78%
杨 辉等 蚬壳花椒资源繁育与有效成分研究进展 由上述试验结果可知 关于蚬壳花椒的组织培养 已经建立并形成了一套完善的 成熟的离体胚培养-愈 155 3 蚬壳花椒有效成分研究 目前 主要采用氧化铝 大孔树脂 硅胶柱层析法 伤组织诱导无性快繁体系 并且获得了一批优良的试 [17] 管苗及较高成活率的成苗 但是 由于植物组织培养 溶剂法 水提醇沉法 回流提取法等对蚬壳花椒根茎叶 中有效成分进行分离 纯化 通常利用核磁共振法 波 周期较长 且投资成本较高 因此利用此方法规模化生 谱法 高效液相色谱(HPLC)分析法并结合理化性质对 产蚬壳花椒幼苗还存在一定问题 蚬壳花椒中有效成分单体化合物进行结构鉴定 鉴定 2.1.2 其他无性繁育技术 高等植物的无性繁育技术不 的化合物主要为生物碱类及其他有效成分 仅包括组织培养 还有扦插 嫁接和压条技术 而在实 3.1 蚬壳花椒主要药用价值 际的工作中 主要利用扦插技术实现种苗的规模化生 [18] [19] [20] 蚬壳花椒含有较多的生物碱类 如白藓碱 对皮肤 产 目前 对红叶石楠 厚荚相思 桑树 等高等植 瘙痒 皮肤湿疹有治疗作用 且具有抗菌功效[23-25] 还可 物都已经建立了一套比较成熟的扦插体系 虽然在实 以有效抑制烟草赤星病菌孢子和玉米弯孢病菌的萌 践中扦插技术应用比较广泛 但是扦插是一个非常复 发[26] 国外研究主要将其用做杀虫剂[27]等 4-甲氧基-1- 杂的技术过程 涉及到诸多因素 且生根机制研究尚不 甲基-2-喹诺酮具有与抗老年痴呆活性相关的内酰胺 成熟 这都需要今后在利用扦插技术大量繁育蚬壳花 结构 [28] 杨林等 [29] 研究认为 蚬壳花椒果皮多糖可能 椒种苗的过程中进一步开展研究 是其有效成分之一 该研究发现 蚬壳花椒果皮多糖 2.2 蚬壳花椒有性繁育技术研究 在小鼠体内外均具有显著的抗肿瘤活性 呈现出一定 经过多年研究认为 影响野生蚬壳花椒资源存量 的浓度依赖关系 并且能增强机体免疫功能 具有毒副 的主要原因除了生态环境和人为因素外 还与其自 作用小等优点 因此 在研发抗肿瘤药物方面具有广 身的生物学特性密切相关 其种子具有深度生理性 阔前景 对其药理学机制方面有待深入探讨和研究 胚休眠(deep physiological embryo dormancy) 在自然 施瑶等 [30] 研究发现 蚬壳花椒的根对口腔致病菌表现 状态下 蚬壳花椒种子通常需经 2 冬 1 夏方能完成生 出很强的抗菌活性 马英姿等[31]研究认为蚬壳花椒中 理成熟 这一特性决定了蚬壳花椒资源的分散性 有 性亲脂性成分具有很好的抑菌作用 对金黄色葡萄球 限性及发展的难度性 种子休眠期长 难以萌发可能 菌和沙门氏菌有明显的抑制作用 对大肠杆菌也有一 是导致蚬壳花椒自然繁殖率低下的重要障碍 [5,16] 因此科研工作者对蚬壳花椒种子进行大量的人工繁 [5] 育 马英姿 采用不同的方法处理蚬壳花椒当年成熟 的种子 最终获得高萌发率的方法 首先用浓硫酸处 定的抑制作用 有研究表明 香豆素类具有多种生物 活性 如抗癌 抗 HIV 抗凝血 抗真菌等作用 其中的 熊果酸也具有镇静 抗炎 抗菌和抗癌等作用 目前 蚬壳花椒已经被开发为妇科千金片 凤宝康 理 6 min 除种皮 然后将种子浸泡于 50 mg/l 的 GA3 宁 千金洗液等妇科用药 关于其他方面的医学用药 5 min 清 洗 后 于 25 培 养 箱 中 培 养 萌 芽 率 达 有待于进一步研究和开发 相信其能够为人类疾病的 60% 程 鹏 等 治疗发挥更大的作用 [21] 得出蚬壳花椒种子最佳萌发方案 为 80%浓硫酸浸泡 3 min 机械破壳 [22] 转入 30 g/l 3.2 蚬壳花椒主要有效成分 碳酸氢钠溶液 浸泡 10 min 手工破壳后 用 GA3 浓度 3.2.1 生物碱类物质 马英姿[5]利用组织定位的方法检 为 540 mg/l 浸 泡 5.5 h 最 后 转 入 6- BA 浓 度 为 测白藓碱在蚬壳花椒不同部位的含量水平 试验结果 2.7 mg/l CaCl2 浓度为 5 g/l 的培养液中培养 使用 显示 茎的韧皮部 皮层 周皮的细胞中含有大量的白 此方案能使蚬壳花椒种子萌发率达到 65% 虽然马 藓碱 被染成深色 次生木质部中的细胞被染成深色 英姿 程鹏等使种子萌发率达到了比较高的水平 但 说明生物碱的分布与茎中的分布情况基本相同 但是 是对于蚬壳花椒种子休眠 解休眠及萌发过程的分 根的韧皮部及皮层的细胞着色较茎部细胞深 表明根 子机理均不清楚 且蚬壳花椒移栽到大田中 由于病 虫害 肥料的施加控制等诸多问题尚未解决 因此 中的白藓碱含量较茎中的含量高 叶肉细胞没有着色 说明叶中不含有白藓碱或者极少 随后 马英姿 [6] 又 试图从分子生物学水平研究蚬壳花椒种子从解休眠 用 HPLC 法测定湖南地区蚬壳花椒根 茎 叶中白藓碱 到萌发过程中起重要作用的基因和蛋白质 解析与 的含量 试验结果显示 根中白藓碱的含量是茎中含量 种子萌发相关的重要调控基因以及主要调控通路 的 4 倍左右 而叶中未检测到白藓碱 此试验结果进一 必将成为从根本上解决蚬壳花椒种子萌发率低下的 步验证了化学组织定位的结果 李海洲 [4] 在马英姿 [6] 科学关键 研究的基础上 采用高效液相色谱法(HPLC) 对不同
156 中 国 农 学 通 报 http://www.casb.org.cn 种 源 ( 湖 南 湖 北 甘 肃 四 川 ) 蚬 壳 花 椒 的 相 同 部 位 及 同 一 种 源 不 同 部 位 有 效 成 分 进 行 检 测 和 分 析, 证 明 湖 南 省 张 家 界 市 蚬 壳 花 椒 根 部 提 取 物 中 白 藓 碱 的 含 量 最 [6] [32-33] 高, 这 与 马 英 姿 等 的 试 验 结 果 相 一 致 王 丽 美 进 [6] [4] 一 步 根 据 马 英 姿 和 李 海 洲 的 试 验 结 果, 对 4 个 省 份 ( 湖 南 湖 北 贵 州 广 西 )13 批 蚬 壳 花 椒 供 试 样 品 进 行 色 谱 条 件 测 定, 确 定 蚬 壳 花 椒 的 16 个 峰 为 特 征 峰 构 建 其 指 纹 图 谱, 并 比 较 了 不 同 产 地 蚬 壳 花 椒 HPLC 指 纹 图 谱 的 相 似 度, 同 时 也 证 明 湖 南 张 家 界 蚬 壳 花 椒 样 品 根 部 白 藓 碱 的 含 量 最 高 ; 与 此 同 时, 比 较 了 不 同 直 径 根 部 有 效 成 分 的 种 类 和 含 量, 结 果 显 示 平 均 直 径 为 2.5 cm 时, 根 部 有 效 成 分 的 种 类 和 含 量 较 高, 随 着 直 径 的 增 大, 其 有 效 成 分 的 种 类 及 含 量 均 无 明 显 变 化 肖 灿 等 采 用 氧 化 铝 - 硅 胶 柱 层 析 法 对 蚬 壳 花 椒 茎 中 有 效 成 分 进 行 分 离, 并 根 据 理 化 性 质 及 光 谱 数 据 对 单 体 化 合 物 进 行 结 构 鉴 定, 都 分 离 并 鉴 定 到 了 白 藓 碱 ; 韦 瑀 [35] 龙 等 采 用 硅 胶 柱 层 析 等 方 法 进 行 分 离 纯 化, 并 采 用 质 谱 核 磁 共 振 等 方 法 对 分 离 得 到 的 单 体 成 分 进 行 分 析, [36] 鉴 定 出 了 白 藓 碱 ; 袁 园 对 蚬 壳 花 椒 提 取 液 反 复 常 压 氧 化 铝 柱 层 析, 结 合 溶 剂 法 进 行 重 结 晶 处 理, 分 离 纯 化 得 到 5 个 化 合 物, 经 理 化 常 数 TLC 检 测 波 谱 方 法 与 标 准 图 谱 及 文 献 报 道 的 有 图 谱 数 据 比 较, 鉴 定 的 化 合 物 其 中 之 一 为 白 藓 碱, 这 与 肖 灿 等 的 试 验 结 果 一 致 [37] 马 英 姿 等 利 用 回 流 提 取 法, 通 过 单 因 素 试 验 和 正 交 试 验, 对 蚬 壳 花 椒 茎 中 总 生 物 碱 的 提 取 工 艺 进 行 研 究, 用 干 酸 性 染 料 比 色 法 及 重 法 测 定 总 生 物 碱 含 量, 得 出 最 佳 提 取 溶 剂 为 乙 醇, 总 生 物 碱 最 佳 提 取 条 件 是 : 75% 体 积 分 数 的 乙 醇 为 溶 剂, 超 声 波 提 取 1 h, 浸 泡 48 h 后, 料 液 比 为 1:25,pH 2.0,70 回 流 提 取 2 h, 蚬 壳 [38] 花 椒 茎 的 总 生 物 碱 提 取 率 为 5.57% 韦 熹 苑 等 采 用 高 效 液 相 色 谱 法 (HPLC), 在 检 测 波 长 为 328 nm 时, 得 出 氯 化 两 面 针 碱 在 0.072~0.36 μg 范 围 内 线 性 关 系 良 好, 平 均 回 收 率 为 100.56% 肖 灿 等 采 用 氧 化 铝, 硅 胶 柱 层 析 法 对 蚬 壳 花 椒 茎 中 有 效 成 分 进 行 分 离, 并 结 合 光 谱 数 据 及 理 化 性 质 鉴 定 了 单 体 化 合 物 的 结 构, 分 [39] 离 得 到 两 面 针 碱 血 根 碱 花 椒 棚 碱 吴 润 菁 采 用 高 效 液 相 色 谱 法, 色 谱 柱 为 Kromasil C 18, 流 动 相 为 乙 腈 0.1 mol/l, 磷 酸 二 氢 钠 ( 体 积 比 为 11:89); 检 测 波 长 268 nm; 柱 温 25 试 验 结 果 显 示, 木 兰 花 碱 在 20~ 300 μg/ml 范 围 内 线 性 关 系 良 好,r 值 为 0.9999 韦 瑀 [35] 龙 等 采 用 硅 胶 柱 层 析 等 方 法 对 蚬 壳 花 椒 进 行 分 离 纯 化, 并 利 用 质 谱 核 磁 共 振 等 方 法 鉴 定 了 分 离 所 得 单 体 成 分 的 结 构, 鉴 定 出 5 个 生 物 碱, 分 别 是 大 叶 桉 亭 花 椒 [40] 碱 茵 芋 碱 橙 黄 胡 椒 酰 胺 香 豆 酰 酪 胺 汤 俊 等 应 用 硅 胶 柱 色 谱 分 离 和 纯 化, 用 IR MS 和 NMR 等 谱 学 方 法 解 析 化 合 物 结 构, 也 获 得 化 合 物 橙 黄 胡 椒 酰 胺, 并 用 MIA 法 测 试 该 化 合 物 具 有 微 弱 的 抗 HIV-1 整 合 酶 活 性 3.2.2 其 他 有 效 成 分 利 用 传 统 生 物 技 术 与 现 代 生 物 技 术, 从 蚬 壳 花 椒 外 植 体 中 分 离 和 鉴 定 了 其 他 一 些 有 效 成 分, 如 果 皮 多 糖 橙 皮 甘 辛 夷 脂 素 表 芝 麻 脂 素 柄 果 脂 素 Ⅱ β- 谷 甾 醇 香 兰 醛 等 化 合 物 [29] 杨 林 等 采 用 水 提 醇 沉 法 制 备 蚬 壳 花 椒 果 皮 多 糖, 并 验 证 了 果 皮 多 糖 质 量 浓 度 为 62.5~1000 μg/ml 时, 其 对 体 外 培 养 的 2 株 人 肿 瘤 细 胞 Hela 和 SMMC- 7721 的 增 殖 表 现 出 显 著 的 抑 制 作 用 [38] 韦 熹 苑 等 采 用 高 效 液 谱 法 (HPLC), 在 检 测 波 长 为 283 nm 时, 测 得 橙 皮 甘 在 0.147~0.736 μg 范 围 内 线 性 关 系 良 好, 平 均 回 收 率 分 别 为 100.86% [41-42] 何 桂 霞 等 不 仅 利 用 HPLC 法 测 定 蚬 壳 花 椒 中 辛 夷 脂 素 表 芝 麻 脂 素 柄 果 脂 素 Ⅱ 分 别 在 52~832 58~928 100~1600 ng 范 围 内 与 峰 面 积 呈 良 好 的 线 性 关 系, 平 均 回 收 率 分 别 为 99.63% 99.41% 和 99.31%,RSD 依 次 为 1.09% 1.00% 和 1.54%; 而 且 以 蚬 壳 花 椒 的 茎 为 材 料, 采 用 硅 胶 柱 色 谱 及 重 结 晶 等 方 法 进 行 成 分 分 离, 并 利 用 1H-NMR 13C-NMR 2D-NMR 等 理 化 性 质 和 波 谱 学 技 术 鉴 定 其 化 学 结 构, 结 果 鉴 定 出 6 种 化 合 物, 分 别 是 β- 谷 甾 醇 香 兰 醛 表 芝 麻 脂 素 柄 果 脂 素 Ⅱ 辛 夷 脂 素 (-)eudesmin 6 随 着 研 究 的 深 入, 在 蚬 壳 花 椒 的 繁 育 技 术 和 有 效 成 分 的 分 离 与 鉴 定 方 面 的 研 究 取 得 了 较 大 的 进 展, 为 蚬 壳 花 椒 的 规 模 化 繁 育 及 其 开 发 和 利 用 提 供 了 理 论 依 据 但 是, 对 蚬 壳 花 椒 有 效 成 分 的 药 理 功 能 及 临 床 应 用 方 面 的 研 究 较 少, 这 将 是 今 后 研 究 的 方 向 与 重 点 4 问 题 与 展 望 目 前, 蚬 壳 花 椒 的 研 究 主 要 集 中 在 再 生 体 系 的 建 立 及 有 效 成 分 的 分 离 与 鉴 定, 而 其 分 子 生 物 学 药 理 功 能 和 临 床 应 用 方 面 的 研 究 则 较 少 因 而, 对 蚬 壳 花 椒 种 子 休 眠 的 分 子 生 物 学 方 面 研 究 ( 基 因 与 蛋 白 质 差 显 ), 有 性 人 工 繁 育 主 要 药 用 成 分 的 药 理 药 剂 药 代 动 力 学 考 察, 新 的 药 用 成 分 的 分 离 纯 化 鉴 定,GAP 规 范 化 栽 培 研 究, 代 谢 机 制 及 其 基 因 组 学 研 究 等 将 成 为 未 来 研 究 的 方 向 与 重 点 由 于 蚬 壳 花 椒 是 一 种 渐 危 的 药 用 价 值 极 高 的 中 药 材 究 其 渐 危 的 原 因 主 要 有 几 点 :(1) 种 子 萌 发 率 极 低, 自 然 发 芽 率 只 有 5% 左 右 ;(2) 药 厂 需 求 量 大, 随 着 蚬 壳 花 椒 药 用 价 值 的 开 发, 一 些 工 厂 药 厂 对 其 需 求 量 日 益 增 加, 而 目 前 这 些 工 厂 药 厂 等 主 要 靠 野 外 采 集 的 野 生 植 株 来 供 给 生 产 ;(3) 蚬 壳 花 椒 的 药 用 成 分 主 要 集
杨 辉 等 : 蚬 壳 花 椒 资 源 繁 育 与 有 效 成 分 研 究 进 展 157 中 在 根 部, 药 材 采 集 的 时 候 是 连 根 拔 起, 是 毁 灭 性 的 采 集, 导 致 其 濒 危 找 寻 适 宜 的 繁 殖 途 径, 迅 速 扩 大 蚬 壳 花 椒 资 源 供 给 已 势 在 必 行, 对 蚬 壳 花 椒 的 资 源 保 护 及 资 源 量 提 升 提 出 几 点 建 议 :(1) 选 用 扦 插 嫁 接 工 厂 化 育 苗 优 良 种 子 资 源 的 收 集 等 方 法, 提 高 蚬 壳 花 椒 的 产 量 及 质 量 ; [21] (2) 提 高 种 子 的 发 芽 率, 目 前 主 要 利 用 的 是 激 素 法 ; (3) 由 于 蚬 壳 花 椒 的 有 效 成 分 主 要 集 中 在 根 部, 因 此, 可 以 采 用 基 因 工 程 的 手 段 转 入 一 些 促 进 植 株 根 部 发 育 加 快 的 基 因, 缩 短 成 林 年 限 为 了 保 护 蚬 壳 花 椒 的 野 生 资 源, 在 今 后 的 中 成 药 开 发 中, 应 该 合 理 利 用 其 野 生 资 源, 并 通 过 有 性 无 性 繁 育 进 行 蚬 壳 花 椒 大 规 模 推 广, 解 决 其 资 源 匮 乏 问 题 参 考 文 献 [1] 中 国 科 学 院 植 物 研 究 所. 中 国 高 等 植 物 科 属 检 索 表 [M]. 北 京 : 科 学 出 版 社,1979:346. [2] 全 国 中 草 药 汇 编 组. 全 国 中 草 药 汇 编 ( 下 册 )[G]. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社,1978:1245-1248. [3] 马 英 姿, 王 平. 蚬 壳 花 椒 受 威 胁 程 度 评 价 及 其 可 持 续 利 用 对 策 [J]. 经 济 林 研 究,2008,26(1):91-94. [4] 李 海 洲. 不 同 种 质 资 源 地 单 面 针 主 要 有 效 成 分 含 量 的 比 较 研 究 [D]. 长 沙 : 中 南 林 业 科 技 大 学,2012. [5] 马 英 姿. 药 用 植 物 蚬 壳 花 椒 化 学 成 分 分 析 及 繁 殖 技 术 研 究 [D]. 长 沙 : 中 南 林 业 科 技 大 学,2010. [6] 马 英 姿, 王 平. 蚬 壳 花 椒 营 养 器 官 解 剖 及 其 生 物 碱 分 布 [J]. 湖 南 农 业 大 学 学 报,2009,35(3):242-245. [7] 马 英 姿, 王 平, 梁 文 斌. 药 用 植 物 蚬 壳 花 椒 的 生 境 及 生 物 学 特 性 调 查 [J]. 湖 南 农 业 大 学 学 报,2009,35(3):242-245. [8] 程 鹏, 王 平, 孙 吉 康, 等. 植 物 种 子 休 眠 与 萌 发 调 控 机 制 研 究 进 展 [J]. 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报,2013,33(5):52-58. [9] Baskin C C, Baskin J M. Underdeveloped embryos in dwarfseeds and implications for assignment to dormancy class[j]. Seed Science Research,2005,15:357-360. [10] 李 猛, 王 平, 孙 吉 康, 等. 蚬 壳 花 椒 ISSR-PCR 反 应 体 系 的 建 立 与 优 化 [J]. 广 西 植 物,2013,33(2):185-190. [11] 李 猛. 蚬 壳 花 椒 遗 传 多 样 性 ISSR 研 究 [D]. 长 沙 : 中 南 林 业 科 技 大 学,2013. [12] 李 猛, 王 平, 孙 吉 康, 等. 天 然 蚬 壳 花 椒 种 群 遗 传 多 样 性 的 ISSR 标 记 分 析 [J]. 中 药 材,2014. [13] 王 平, 马 英 姿, 王 晓 明, 等. 药 用 植 物 单 面 针 离 体 胚 培 养 的 研 究 [J]. 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报,2008,28(1):130-133. [14] 马 英 姿, 王 平, 王 晓 明, 等. 药 用 植 物 蚬 壳 花 椒 的 立 体 培 养 及 再 生 体 系 的 建 立 [J]. 湖 南 师 范 大 学 自 然 科 学 学 报,2009,32(1):106-111. [15] 王 海 霞, 王 平, 王 晓 明, 等. 蚬 壳 花 椒 愈 伤 组 织 诱 导 的 影 响 因 素 [J]. 湖 南 农 业 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版,2008,34(2):147-148. [16] 王 平, 王 海 霞, 马 英 姿, 等. 蚬 壳 花 椒 叶 片 不 定 芽 诱 导 与 内 源 激 素 的 变 化 规 律 [J]. 中 草 药,2008,39(9):1400-1403. [17] 王 海 霞, 王 平. 蚬 壳 花 椒 组 培 苗 移 栽 技 术 研 究 [J]. 牡 丹 江 师 范 学 院 : 自 然 科 学 版,2010,71(2):37-38. [18] 冯 志. 红 叶 石 楠 嫩 叶 扦 插 技 术 [J]. 现 代 农 业 科 技,2007,20(2):59. [19] 谢 乐, 梁 机, 赖 玖 鑫, 等. 厚 荚 相 思 扦 插 技 术 研 究 [J]. 绿 色 技 术,2007, 4:112-113. [20] 赵 剑 平, 朱 洪 才, 沈 增 学. 桑 树 硬 枝 温 床 扦 插 技 术 的 改 进 与 技 术 要 点 [J]. 中 国 蚕 业,2009,1:100-103. [21] 程 鹏. 蚬 壳 花 椒 种 子 的 人 工 萌 发 及 生 理 生 化 机 制 研 究 [D]. 长 沙 : 中 南 林 业 科 技 大 学,2014. [22] 王 平, 陈 飞, 孙 吉 康, 等. 小 颗 粒 硬 壳 种 子 破 壳 机 [P].CN: ZL201320383228.4,2013-06-28. [23] 许 新 梅, 刘 秀 香. 中 药 白 藓 碱 的 临 床 应 用 [J]. 现 代 中 西 医 结 合 杂 志, 2003,12(16):1772-1773. [24] 王 兆 全, 许 凤 呜, 安 诗 友. 白 藓 皮 的 化 学 成 分 研 究 [J]. 中 国 中 药 杂 志, 1992,17(9):551-552. [25] 马 晓 红, 马 宽 玉. 马 宽 玉 任 医 师 治 疗 过 敏 性 皮 炎 简 介 [J]. 现 代 中 药, 2006,26(1):11-12. [26] 王 麦 玲, 张 继 文, 钱 勇, 等. 白 藓 皮 杀 菌 活 性 的 研 究 [J]. 农 药,2006,45 (11):739-741. [27] Francois Tillequin. Rutaceous alkaloids as models for the design of novel antitumor drugs[j]. Phytochem Rev,2007,6 :65-79. [28] 汤 俊, 朱 卫, 屠 治 本. 蚬 壳 花 椒 化 学 成 分 研 究 [J]. 中 草 药,1995,26(11): 563-565. [29] 杨 林, 邵 文 斌, 于 爱 红, 等. 蚬 壳 花 椒 果 皮 多 糖 抗 肿 瘤 活 性 研 究 [J]. 中 医 药 学 报,2012,40(5):34-37. [30] Shi Yao, Li Ding- Xiang, Min Zhi- Da. Activity of Zanthoxylum Species and their Compounds Against Oral Pathogens[J]. Chin J Nat Med,2005,3(4):248-251. [31] 马 英 姿, 王 平, 袁 园, 等. 蚬 壳 花 椒 中 性 亲 脂 性 成 分 抑 菌 活 性 及 其 化 学 成 分 研 究 [J]. 林 业 科 学,2010,46(2):162-165. [32] 王 丽 美. 单 面 针 药 用 成 分 HPLC 指 纹 图 谱 及 其 质 量 评 价 研 究 [D]. 长 沙 : 中 南 林 业 科 技 大 学,2013. [33] 王 丽 美, 王 平, 孙 吉 康, 等.HPLC 法 测 定 单 面 针 单 面 针 药 材 中 白 鲜 碱 含 量 [J]. 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报,2013,33(6):75-78. 肖 灿, 裴 刚, 袁 园, 等. 单 面 针 茎 中 生 物 碱 类 成 分 研 究 [J]. 中 药 材, 2011,34(4):551-553. [35] 韦 瑀 龙, 张 翠 仙, 熊 天 琴, 等. 蚬 壳 花 椒 中 生 物 碱 成 分 的 研 究 [J]. 中 药 新 药 与 临 床 药 理,2009,20(5):471-473. [36] 袁 园. 单 面 针 中 生 物 碱 类 成 分 研 究 [D]. 长 沙 : 湖 南 中 医 药 大 学, 2010. [37] 马 英 姿, 王 平, 杨 波 华. 蚬 壳 花 椒 总 生 物 碱 的 提 取 工 艺 [J]. 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报,2009,29(2):68-72. [38] 韦 熹 苑, 裴 刚, 袁 园. 单 面 针 茎 中 氯 化 两 面 针 碱 和 橙 皮 苷 含 量 测 定 [J]. 中 国 现 代 药 物 应 用,2014,8(3):24-26. [39] 吴 润 菁, 王 欢, 林 朝 晨, 等. 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 单 面 针 中 木 兰 花 碱 的 含 量 [J]. 广 西 中 医 药 大 学 学 报,2014,31(3):443-446. [40] Tang Jun, Supinya Tewtrakul, Wang Zheng-tao, et al. Aurantiamide Acetate from Stems of Zanthoxylum dissitum Hemsley[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2003,12(4):231-233. [41] 何 桂 霞, 李 嘉 滢, 姚 颖, 等.HPLC 法 同 时 测 定 单 面 针 中 辛 夷 脂 素 表 芝 麻 脂 素 柄 果 脂 素 Ⅱ 的 含 量 [J]. 中 药 材,2013,36(9):1466-1468. [42] 何 桂 霞, 姚 颖, 袁 园, 等. 单 面 针 茎 中 苯 丙 素 类 化 学 成 分 研 究 [J]. 湖 南 中 医 药 大 学 学 报,2012,32(3):38-41.