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Transcription:

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MILLIPLEX Milliplex, ELISA FACS (Flow cytometry), well,, 25 µl/well, kit intra-assay (%CV) inter-assay (%CV), Std, kit QC (Quality control) CRO center, serum matrix, serum/plasma, Std curve, (Pre-mixed) kit kit all-in-one 1

Milliplex ELISA, ELISA coating ; Milliplex coating, (red) (infared) 2, 100 color-code colorcode,, Biotin detection antibody, SAPE (Streptavidin Phycoerythrin) Luminex,Milliplex well 1 10 IL-6 36 IL-1b 92 100 2

Multiplex & Single-plex :, Std (Standard) reference curve,curve shift rate <2~5% 現, 3

MILLIPLEX & ELISA 3 Kit Milliplexing 1. 2. sample type 3. analytes 4

Human MILLIPLEX map Kit Analytes Catalogue No. RANTES, TGF-α, TNF-α, TNF-β, VEGF, scd40l, EGF, Eotaxin, FGF-2, Flt-3 ligand, Fractalkine, G-CSF, Human Cytokine / Chemokine Panel I Immunology / Immune Response Human High Sensitivity T Cell Human Th17 GM-CSF, GRO, IFN-α2, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12 HCYTOMAG-60K (p40), IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17A, IP-10, MCP-1, MCP-3, MDC (CCL22), MIP-1α, MIP-1β, PDGF-AA, PDGF-AB/BB TNF-α, Fractalkine, GM-CSF, IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-17A, HSTCMAG-28SK IL-21, IL-23, ITAC, MIP-1α, MIP-1β, MIP-3α TNFβ, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17A, IL-17F, IL- HTH17MAG-14K 17E/IL-25, IL-21, IL-22, IL-23, IL-27, IL-28A, IL-31, IL- 33, MIP-3α/CCL20, TNF-α TNF-α, ACTH, DKK-1, FGF-23, IL-1β, IL-6, Bone Metabolism Human Bone Insulin, Leptin, Osteocalcin, OPN - Osteopontin, HBNMAG-51K Osteoprotegerin, PTH, SOST Troponin I (TnI), BNP, NT-proBNP, CK-MB, CXCL6/ Human CVD Panel Cardiovascular 1 Human Disease Apolipoproteins Human Angiogenesis / Angiogenesis Growth Factor Human Circulating Cancer Biomarker Panel 1 Cancer Biomarkers Human Circulating Cancer Biomarker Panel 2 GCP-2, CXCL16, Endocan-1 (ESM-1), FABP3, FABP4, HCVD1MAG-67K LIGHT, Oncostatin (OSM), Placental Growth Factor (PlGF) Apo E, Apo AI, Apo AII, Apo B, Apo CII, Apo CIII APOMAG-62K VEGF-D, Angiopoietin-2, BMP-9, EGF, Endoglin, Endothelin-1, FGF-1, FGF-2, Follistatin, G-CSF, HB- HAGP1MAG-12K EGF, HGF, IL-8, Leptin, PLGF, VEGF-A, VEGF-C β-hcg, AFP, CEA, CYFRA21-1, FGF-2, HE4, PSA Total, PSA free, HGF, IL-6, IL-8, Leptin, MIF, OPN - HCCBP1MAG-58K Osteopontin, Prolactin, SCF, sfas, sfasl, TGF-α, TNF-α, TRAIL, VEGF, CA125, CA15-3, CA19-9 Vitronectin, Antithrombin III, Complement Factor H, Extracellular Matrix Protein 1, Vitamin D Binding HCCBP2MAG-58K Protein Distinct Patterns of Cytokine and Angiogenic Factor Modulation and Markers of Benefit for Vandetanib and/or Chemotherapy in Patients With Non Small-Cell Lung Cancer. American Society of Clinical Oncology.J Clin Oncol. 2010 January 10; 28(2): 193 201. With the Universal Definition, Measurement of Creatine Kinase-Myocardial Band Rather Than Troponin Allows More Accurate Diagnosis of Periprocedural Necrosis and Infarction After Coronary Intervention. Journal of the American College of Cardiology,Volume 57, Issue 6, 8 February 2011, Pages 653 661. Multiplexed quantification of 63 proteins in human urine by multiple reaction monitoring-based mass spectrometry for discovery of potential bladder cancer biomarkers. Journal of Proteomics Volume 75, Issue 12, 27 June 2012, Pages 3529 3545. 5

Mouse Kit Analytes Catalogue No. IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17, IP-10, KC, LIF, LIX, MCP-1, M-CSF, Mouse Cytokine / Immunology / MIG, MIP-1α, MIP-1β, MIP-2, RANTES, Chemokine Immune Response TNF-α, VEGF, Eotaxin, G-CSF, GM-CSF, Panel I IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, MCYTOMAG-70K IL-6, IL-7, IL-9 Mouse Th17 IL-22, IL-23, IL-27, IL-28B, IL-31, IL-33, MIP- 3α/CCL20, TNF-α, TNFβ, CD40 Ligand, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL- MTH17MAG-47K 6, IL-10, IL-12 (p70), IL-13, IL-15, IL-17A, IL- 17E/IL-25, IL-17F, IL-21 Cancer Biomarkers Mouse Angiogenesis / Growth Factor Panel 1 VEGF-D, salk-1, Amphiregulin, Angiopoietin-2, Betacellulin, scd31/ PECAM-1, EGF, Endoglin, Endothelin-1, sfasl, FGF-2, Follistatin, G-CSF, HGF, IL- 1β, IL-6, IL-17A, KC/CXCL1, Leptin, MCP-1, MIP-1α, PLGF-2, Prolactin, SDF-1, TNF-α, VEGF-A, VEGF-C MAGPMAG-24K TNF-α, Amylin (Active), C-Peptide 2, Metabolism / Mouse Metabolic Ghrelin (Active), GIP (Total), GLP-1 (Active), Endocrinology Hormone Glucagon, IL-6, Insulin, Leptin, MCP-1, PP, MMHMAG-44K PYY, Resistin Enhanced progenitor cell recruitment and endothelial repair after selective endothelial injury of the mouse kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 2010 Jun;298(6):F1504-14. Epub 2010 Mar 17. 6

Rat Kit Analytes Catalogue No. Rat Cytokine / Rat Cytokine / Chemokine VEGF, EGF, Eotaxin, Fractalkine, G-CSF, GM-CSF, GRO/KC, IFN-γ, IL-1α, IL- 1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL- 10, IL-12 (p70), IL-13, IL-17A, RECYTMAG-65K IL-18, IP-10, Leptin, LIX, MCP- 1, MIP-1α, MIP-2, RANTES, TNF-α Chemokine Metabolism / Rat Metabolic Hormone TNF-α, Amylin (Active), C-Peptide 2, Ghrelin (Active), GIP (Total), GLP-1 (Active), RMHMAG-84K Glucagon, IL-6, Insulin, Leptin, MCP-1, PP, PYY Endocrinology Rat Thyroid T4, TSH, T3 RTHYMAG-30K Mitochondrionopathy Phenotype in Doxorubicin-Treated Wistar Rats Depends on Treatment Protocol and Is Cardiac- Specific. PLoS ONE.June 2012 Volume 7 Issue 6 e38867. Porcine Kit Analytes Catalogue No. TNF-α, GM-CSF, IFNγ, IL-1α, Porcine Cytokine / Immunology IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-6, IL- PCYTMAG-23K Chemokine 8, IL-10, IL-12, IL-18 Mitochondrionopathy Phenotype in Doxorubicin-Treated Wistar Rats Depends on Treatment Protocol and Is Cardiac- Specific. PLoS ONE.June 2012 Volume 7 Issue 6 e38867. Multi-species Kit Analytes Catalogue No. Multi-species TGFβ - TGFβ1 TGFBMAG-64K-01 Single Plex Immunology Multi-species TGFβ - 3 TGF-β3, TGF-β1, TGF-β2 TGFBMAG-64K-03 Plex 7

MILLIPLEX

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Intracellular Milliplex Assays MILLIPLEX map intracellular multiplex panels MAPmate TM single plex, (biomarkers) Phosphoprotein +Total protein Kit Analytes Catalogue No. Akt Phospho/Total 2 Plex Akt/PKB(Ser473), Akt/PKB 48-618MAG (AB2) Erk/MAPK 1/2 Phospho/Total Erk/MAPK 1/2 (Thr185/ Cell Signaling 2 Plex Tyr187), Erk/MAPK 1/2 48-619MAG (AB2) Phosphoprotein + JNK/SAPK1 (Thr183/ JNK Phospho/Total 2 Plex Total 2 Plex Assays Tyr185), JNK/SAPK1 48-622MAG (AB2) p38 Phospho/Total 2 Plex p38/sapk2a/b (Thr180/ Tyr182), p38/sapk2a/b 48-624MAG (AB1 or AB2) Cell Signaling TGFβ - 6 Plex TGFβRII (Total), Akt (Ser473), ERK (Thr185/ Tyr187), Smad2 (Ser465/ Ser467), Smad3 (Ser423/ Ser425), Smad4 (Total) 48-614MAG (AB2) All-trans retinoic acid modifies the expression of clock and disease marker genes. J Nutr Biochem. 2011 Apr 14. All-trans retinoic acid modifies the expression of clock and disease marker genes. J Nutr Biochem. 2011 Apr 14. 8

MAPmate TM Phosphoprotein & Total Single Plex Kits Cell Signaling Buffer & Detection Kit (48-602MAG) Magnetic Bead MAPmate TM kits Cat. No. Species Homology AB1 AB2 β-tubulin (Total) 46-713MAG H,M,R GAPDH (Total) 46-667MAG H Akt/PKB (assay buffer 2) (Ser473) 46-677MAG H,M,R Akt/PKB (assay buffer 2) (Total) 46-675MAG H,M,R BAD (Ser112) 46-694MAG H,M Caspase 3 (Active) 46-604MAG H,M c-jun (Ser73) 46-622MAG H,M,R CREB (Ser133) 46-631MAG H,M,R CREB (Total) 46-632MAG H,M,R EGF Receptor (Total) 46-606MAG H ERK/MAPK 1/2 (Thr185/Tyr187) 46-602MAG H,M,R ERK/MAPK 1/2 (Total) 46-609MAG H,M,R GSK3β (Ser9) 46-690MAG H,M,R GSK3β (Total) 46-689MAG H,M,R H2A.X (Ser139) 46-692MAG H,M HSP27 (Ser78) 46-607MAG H HSP27 (Total) 46-608MAG H IκBα (Ser32) 46-643MAG H IκBα (Total) 46-644MAG H JNK/SAPK1 (Thr183/Tyr185) 46-613MAG H,M JNK/SAPK1 (Total) 46-618MAG H,M MEK1 (Ser222) 46-670MAG H,M,R MEK1 (Total) 46-669MAG H,M mtor (Ser2448) 46-686MAG H,M,R mtor (Total) 46-685MAG H,M,R NFκB (Ser536) 46-702MAG H NFκB (Total) 46-701MAG H p21 (Total) 46-621MAG H p38/sapk2a/b (Thr180/Tyr182) 46-610MAG H,M,R p38/sapk2a/b (Total) 46-612MAG H,M,R p53 (Ser15) 46-663MAG H p53 (Total) 46-662MAG H p70s6k (Thr389/412) 46-629MAG H,M,R p70s6k (Total) 46-630MAG H,M,R Cleaved PARP (Total) 46-656MAG H PTEN (Total) 46-678MAG H,M,R RPS6 (Ser235/Ser236) 46-714MAG H,M,R RPS6 (Total) 46-715MAG H,M,R Src (Tyr419) 46-710MAG H,M,R STAT1 (Tyr701) 46-655MAG H,M STAT1 (Total) 46-654MAG H,M STAT3 (Ser727) 46-623MAG H,M,R STAT3 (Tyr705) 46-624MAG H,M,R STAT3 (Total) 46-625MAG H,M,R STAT5A/B (Tyr694/Tyr699) 46-641MAG H,M,R Recommended H Human AB1: Assay Buffer 1 Acceptable M Mouse AB2: Assay Buffer 2 Not Recommend R Rat 9

10 Q and A

Q and A 1.? (Agarose Beads)? Ans : 6.45 µm vacuum,, vacuum, filter plate, Agarose Beads lost,,, 2. Milliplex? Ans : 3.? Ans : 11

4. panel, kit? Ans :, : (cross-reactivity) buffer : EGF EGFR,,,, kit 5.? Ans : XPONENT software, MILLIPLEX Analyst 5.1 software 5- parameter log (5PL), (MFI) CV Recovery rate MILLIPLEX Analyst 5.1 software, 6. Kit? Ans : Assay Sensitivities, MinDC ( Minimum detectable concentration ) 7.? Ans : -20 1, -80 2,, 8.? Ans :, (>10mg/ml),,, 12

Q and A 9.? Ans : Plate (Sealer),, QC Serum Matrix Std, -20, 10.? Ans :,, plate, 4, 24 Shaker, 11.,? Ans :, Lysis Buffer Milliplex Lysis Buffer Cat No. 43-040 MILLIPLEX MAP Lysis buffer for Multiplexing 12.? Ans : Heparin, Heparin, Heparin 10IU/ml 13. Milliplex Beads? Ans : Milliplex Beads color-code, color-code 13

14. Intracellular Milliplex? Ans : MAPmate TM assays : assay buffer color-code,e.g. total GSK3β (color-code:37) and phospho-gsk3β (Ser9) (color-code:37) phospho-egf Receptor (pan Tyr) phospho-stat1(tyr701) pakt pstat3 GAPDH β-tubulin pan Tyr assays GAPDH β-tubulin 15. Milliplex?? Ans : MAGPIX Luminex 100 / 200 FlexMAP 3D MAGPIX MAGPIX system : CCD-based, xponent 4.2, (MFI) Luminex 100/200 TM FlexMAP 3D systems : flow cytometry-based, (MFI) Luminex 100 / 200 xponent 3.1 14

Q and A Specifications Instrument MAGPIX Luminex 100 /200 FLEXMAP 3D Software xponent 4.2 xponent 3.1 xponent 4.2 Optic LED/CCD Camera Lasers/APDs/PMTs Lasers/APDs/PMTs Hardware Fluorescent Imager Flow Cytometry based Flow Cytometry based Bead Compatibility Magnetic Magnetic and non- Magnetic Magnetic and non- Magnetic Multiplex Capacity 50 100 (80 for MagPlex) 500 Read Time ~60 mins/96 well plate ~40 mins/96 well plate ~20 mins/96 well plate Applications Protein/Nucleic Acid Protein/Nucleic Acid Protein/Nucleic Acid Dynamic Range 3.5 logs 3.5 logs 4.5 logs Microtiter Plate 96 well 96 well 96 well & 384 well Footprint including PC (linear bench space) 64.8 cm (24") 80.0 cm (32") 64.8 cm (24") Weight (Analyzer) 17.5 kg (38.5 lbs.) 49 kg (113 lbs.) 77.1 kg (170 lbs.) 15

MILLIPLEX Makes scientific and economic sense 16

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