Milliplex

Transcription

1 Milliplex 高通量多因子检测平台 转化医学及精准医学研究的系统化平台

2 Content 目录 Milliplex 高通量多因子检测平台简介 检测平台软件平台应用平台服务平台 Milliplex 高通量多因子检测平台在不同研究领域中的应用 肿瘤研究代谢研究免疫研究神经性疾病研究信号通路研究细胞治疗疫苗研究药物研发妇产科研究五官科和皮肤科系统医学 Milliplex 高通量多因子检测平台高分引用文献 57 其他蛋白检测平台 59 1

3 Luminex 多功能液相芯片分析平台 快速悬浮液相芯片, 转化医学全进程研究的系统化平台! 新生物标志物研发都会经历生物标志物的发现 功能确定 标志物在疾病中验证 到临床检测的过程 在研发前期主要通过蛋白组学 / 基因组学等技术进行高通量指标数的筛选 在 Biomarker 功能确定 验证 临床验证的转化过程中, 需要多重指标和中高通量样本筛选, 这就需要多重指标的高通量样本筛选平台 新药发现与生物标志物相同, 对先导化合物药效确定到临床测试都需要多重检测的中高通量样本检测平台 Luminex 多功能液相芯片可以提供 1-5 重指标的 96/384 孔板检测, 是新 Biomarker 发现之后最佳的筛选平台 为新的治疗方法的转化医学研究提供强有力的技术保障 靶标选择 先导化合物确定 临床前验证 临床 I 期 /II 期 /III 期测试 产品上市 发现功能确定验证 临床验证 通过 (NA/EU) 合规, 临床采纳 蛋白质组学 基因组学 代谢组学 影像技术 多重检测 综合技术 自动化高通量验证实验 临床检测 设计临床试验 多重检测指标数 高通量样本数 Luminex 多重检测技术的核心即 xmap 专利的编码微球系统 xmap 创新技术真正实现了 : 多重检测 : 实现 1-5 重因子同时检测, 为微量样本的精确检测提供技术保障 ; 高灵敏度 : 精密的光学设计提升检测灵敏度, 低至.4pg/ml; 快速 / 高通量 : 96/384 孔板自动化高通量检测, 每小时数据量可达 9,6 个结果微量样本 : 1-5ul 的样本量使得跟踪动物模型的阶段性变化成为可能, 避免个体差异带来的实验误差 2

4 xmap 专利的微球编码技术, 创新实现多重精确检测 xmap 技术原理 : xmap 技术是液相芯片实现多重检测的基础 通过独有的微球表面化学技术, 实现了在 96/384 孔板的每一个单孔中同时检测多个指标的研究 并通过精密的仪器和精确的分析软件获得值得信赖的数据 该平台已被广泛用于抗原 - 抗体 ( 蛋白生物标志物 ) 免疫分析 核酸研究 酶 - 底物的酶学研究以及受体 - 配体识别分析等研究领域 Luminex 应用其专利技术对每一个微球进行 2-3 种荧光染料的着色, 通过精确的染料比例产生 1-5 种不同颜色的微珠, 每一种颜色的微珠上偶联一种特异性的蛋白抗体 当偶联了特异性抗体的微珠与样本中的蛋白 (Analyte) 反应, 加入生物素标记的检测抗体 通过 PE 标记的 Streptavidin 与生物素的连接放大信号 整个反应结束后形成的复合物包括了微珠的 荧光和 PE 的荧光信号 仪器在检测时, 在液流系统中, 微珠快速通 过第一束红色激光, 对微珠进行 ID 识别 第 最后, 获取到的光信号将被快速处理成数字信号, 经软件分析后计算得到每一种蛋白的含量 二束激光是绿色激光, 对 PE 荧光信号的强弱 进行检测 3

5 Merck Life Science 联合 Luminex 共同建立多重生物标志物检测金标准 作为 Luminex 最早全球的合作伙伴,Merck Life Science 始终致力于生物标志物多重检测技术与研发 拥有三十多年深厚的研发经验,Merck Life Science 秉持着严谨 专业的态度在基于 Luminex 液相芯片平台上创建了生物标志物快速检测的金标准 Merck Life Science 与 Luminex 液相悬浮芯片相结合的多重检测平台 拥有这样专业全面的平台, 您将更快速的掌握最新的技术 获取更多经验 实现更高效的科学研究 Merck Life Science 是最早提供 FLEXMAP 3D, Luminex 2, MAGPIX 以及 Milliplex MAP 检测的完整平台, 满足从实验室到临床全进程转化医学的需要 自 23 年, 美国国立卫生研究院 (NIH) 正式提出转化医学研究以提高公民健康状况, 转化医学研究就为弥补基础实验研发与临床之间的鸿沟, 为新药开发 研究新的治疗方法开辟了一条新途径, 是从实验台到临床的双向开发研究过程 Merck Life Science 与 Luminex, 为基础研究 新药研发 新治疗探索的转化医学研究提供了统一的研究平台 Merck Life Science 液相芯片检测平台, 开创生物标志物检测完整平台及一站式服务 FLEXMAP 3D 液相芯片分析仪 Milliplex 平台软件 平台整体服务 检测平台 : Merck-life Science 提供所有基于 xmap 技术的检测仪器, FLEXMAP 3D, Luminex2, MAGPIX 独特的仪器维护校验 校正系统为客户得到多重精确的数据检测提供了坚实的保障 软件平台 : Merck Life Science 为更准确的数据对比和分析提供 Luminex 原厂软件 xponent 专业定量分析软件 Milliplex-Analyst, 为您更高效地获得更高效的数据分析提供强有力的保证 为更高效的数据分析和结果对比提供有力的工具 应用平台 : Merck-life Science 是蛋白生物标志物检测的领导者, 为多种疾病检测提供广泛的试剂应方案 : 包括癌症 免疫疾病 心血管疾病 代谢疾病 神经退行性疾病等, 以及肾毒性 信号转导研究等 Merck Life Science 提供超过 8 个种属 12 种生物标志物的选择 服务平台 : 近 4 年的研发经验积累, 打造了 Merck Life Science Biomarker Service 金牌服务 十几家 Milliplex 认证实验室, 遍布主要区域, 让你享受在身边的高品质服务 4

6 检测平台 Luminex 液相芯片分析仪介绍 1. 灵活地高通量高速检测, 药物筛选和验证的高效平台 FLEXMAP-3D 超群的识别能力, 提供 5 重检测的灵活搭配, 配合高速的 96/384 孔板的自动化进样系统, 实现了每小时 85, 个数据点检测 为新药的筛选 药效验证及药物毒性的测试提供快速 高效的检测平台 2. 符合 FDA51(K) 标准的疾病检测平台 Luminex 2 被誉为真正的临床型生物芯片 Luminex2 的操作平台支持 1 重反应 ;96 孔板自动化检测实现了大量样本的检测, 可实现每小时 9,6 个结果检测 独有的 xponent 操作软件系统通过 FDA 21CFR 认证, 提供真实可靠性的数据 3. 生物标志物验证平台, 终结 ELISA 技术时代 选择最适合你的一款 Luminex 液相芯片分析仪 MAGPIX 以最先进的光学激光技术作为仪器检测的光源, 在确保仪器检测能力的同时, 大大延长了光学系统使用寿命 紧凑式的设计和更友好的操作模式使得 MAGPIX 成为个人型的液相芯片, 被广泛用于基础科研中 Instrument FLEXMAP 3D System Luminex 1/2 System MAGPIX System Software xponent 4.2 xponent 3.1 xponent 4.2 Optic Lasers/ APDs/ PMTs Lasers/ APDs/ PMTs LED/ CCD Camera Hardware Flow Cytometry-based Flow Cytometry-based Fluorescent Imager Bead Compatibility Magnetic and nonmagnetic Magnetic and nonmagnetic Magnetic Multiplex Capacity 5 (8 for MagPlex ) 1 (8 for MagPlex ) 5 Read Time ~2 min/96-well plate ~4 min/96-well plate ~6 min/96-well plate Applications Protein/ Nucleic Acid Protein/ Nucleic Acid Protein/ Nucleic Acid Dynamic Range 4.5 logs 3.5 logs 3.5 logs Microtiter Plate 96-well & 384-well 96-well 96-well Footprint including PC (linear bench space) 64.8 cm (24 ) 8. cm (32 ) 64.8 cm (24 ) Weight (Analyzer) 77.1 kg (17 lbs) 49 kg (113 lbs) 17.5 kg (38.5 lbs) 5

7 Luminex 液相芯片分析仪配套的 校准校验试剂盒和鞘液 Description Pack Size Cat. No. MAGPIX Drive Fluid 4 pack, 75 ml ea MPXDF-4PK Sheath Fluid for Luminex 1/2 & FLEXMAP 3D Systems 2 L SHEATHFLUID MAGPIX Calibration Kit 25 uses 4-49 MAGPIX Performance Verification Kit 25 uses 4-5 Luminex 2 Calibration Kit (xponent ) 25 uses Luminex 2 Performance Verification Kit (xponent ) 25 uses FLEXMAP 3D Calibration Kit 25 uses 4-28 FLEXMAP 3D Performance Verification Kit 25 uses 4-29 (Cat. No ) (Cat. No. MPXDF-4PK) (Cat. No. 4-49) 手持式磁力架 磁力架顶部是白色聚碳酸酯, 下面是耐腐蚀的钢板, 外面包被聚丙烯材料 可调节的夹片适用于多种微孔板 底座上的 O-Ring 方便不同大小的手操作时都可以握紧 每个孔周围环绕 9 个磁铁, 提供更强大的磁力, 最大程度减少磁珠损失 磁力强度 : 52 Mega Gauss Oersteds (MGO) Description Handheld Magnetic Separator Block for 96- well Flat Bottom or Conical Well Plates Cat. No

8 软件平台 Luminex xponent 操作软件和 Milliplex Analyst 数据分析软件 Luminex xponent 操作软件 xponent 采用模块化及可视化图形设计, 除了可以控制 Luminex 2 /FLEXMAP 3D / MAGPIX 仪器运行外, 同时还可兼容实验室信息管理系统,21CFR Part 11 Compliant 及自动化操作系统 为您带来更易于使用的仪器操控体验 配合 Merck Life Science 强大的数据处理专业软件 Milliplex Analyst, 让您获得的海量数据实现快速分析, 并生成多种格式的报告 xponent 和 Milliplex Analyst 的完美结合为您的科研成果带来质和量的飞跃 xponent 3.1 / xponent 4. / xponent 4.2 软件, 充分发挥 Luminex 仪器平台的高通量检测功能 模块化设置, 一键化完成开机 / 校准 / 校验 / 关机 一键导入检测模板, 操作简便 预设磁珠校准 / 校验程序, 与磁珠应用兼容 实时在线分析 友好直观的操作界面, 易于学习和掌握 xponent 软件的功能拓展 21 CFR Part 11 认证提供电子签名选择 兼容自动化工作站, 进一步提升效率 兼容 LIS/LIMS 安全模块升级, 提供用户信息安全管理功能 1. 仪器运行与维护 : 仪器维护 CAL 试剂盒 : Protocol High PMT/Low PMT VER 试剂盒 : 试剂盒信息 CD: 自动维护板 (Automated maintenance plate, AMP) 2. xponent 数据获取 : CV% Median 7

9 Milliplex Analyst 数据分析软件 与 xponent 软件组成完美的多重检测分析方案 我们提供最优的软件组合 : 最强的 MULTIPLEX 数据分析软件 MILLIPLEX Analyst 5.1 搭配 Luminex xponent 数据采集软件 MILLIPLEX Analyst 5.1 软件能够更快速高效地管理 追踪和分析多重检测的海量数据, 使您的研究工作事半功倍 Luminex 所有的硬件系统, 包括 MAGPIX, Luminex 2 和 FLEXMAP 3D, 在数据采集和分析过程中能够做到无缝衔接 MILLIPLEX Analyst 5.1 提供多种 License 选择方案, 方便大中小型实验室的使用 利用该软件你能够轻松的获得满足多种格式要求的数据报表 Analyte IL-1 Analyte VEGF MFI pg/ml Analyte IFNγ 2539 CV=%, R 2 = CV=.1%, R 2 =.999 MFI CV=%, R 2 = pg/ml MFI pg/ml 标准品 Location Expected pg/ml(i) MFI(i) pg/ml(i) MFI pg/ml CV Recovery 1C % 1.37% 1D E % 99.8% 1F G % 99.12% 1H A % 14.6% 1B C % 1.64% 1D E % 91.79% 1F G % 11.53% 1H 样品 Location Sample MFI(i) pg/ml(i) MFI pg/ml CV 1A3 QC % 1B C3 QC % 1D

10 应用平台 Immunology Human Cytokine / Chemokine Panel I (Cat. No. HCYTOMAG-6K) (Cat. No. HCYTMAG-6K-PX29) (Bulk Cat. No. HCYTMAG6PMX29BK) (Cat. No. HCYTMAG-6K-PX3) (Bulk Cat. No. HCYTMAG6PMX3BK) (Cat. No. HCYTMAG-6K-PX38) (Bulk Cat. No. HCYTMAG6PMX38BK) (Cat. No. HCYTMAG-6K-PX41) (Bulk Cat. No. HCYTMAG6PMX41BK) scd4l EGF Eotaxin/CCL11 FGF-2/FGF-basic Flt3 Ligand Fractalkine /CX3CL1 G-CSF GM-CSF GRO IFNα 2 IFNγ IL-1α IL-1β IL-1Ra IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-8/CXCL8 IL-9 IL-1 IL-12 (p4) IL-12 (p7) IL-13 IL-15 IL-17A/CTLA8 IP-1/CXCL1 MCP-1/CCL2 MCP-3/CCL7 MDC/CCL22 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 PDGF-AA PDGF-AB/BB RANTES/CCL5 TGFα TNFα TNFβ/ Lymphotoxinα (LTA) VEGF-A Human Cytokine / Chemokine Panel II (Cat. No. HCYP2MAG-62K) (Cat. No. HCP2MAG-62K-PX23) (Bulk Cat. No. HCP2MAG62KPX23BK) 6Ckine/CCL21/ Exodus-2 BCA-1/CXCL13 CTACK/CCL27 ENA-78/CXCL5 Eotaxin-2/CCL24/ MPIF-2 Eotaxin-3/CCL26 IL-16 IL-2 IL-21 IL-23 IL-28A/IFNλ 2 IL-33/NF-HEV (mature) 提供超过 8 个种属 12 种生物标志物的选择, 涵盖肿瘤 免疫疾病 心血管疾病 代谢疾病 神经退行性疾病等 肾毒性 干细胞 信号转导研究等十几个热门研究领域 I-39/CCL1 LIF MCP-2/CCL8 MCP-4/CCL13 MIP-1δ /MIP-5/CCL15 SCF SDF-1/CXCL12 TARC/CCL17 TPO TRAIL/TNFSF1 TSLP Human Cytokine / Chemokine Panel III (Cat. No. HCYP3MAG-63K) HCC-1/CCL14 IL-11 IL-29/IFNλ 1 I-TAC/CXCL11 LIX/CXCL6/GCP-2 Lymphotactin/XCL1 M-CSF MIG/CXCL9 MIP-3α /CCL2 MIP-3β/CCL19 NAP-2/CXCL7 Human Cytokine/Chemokine Panel IV (Cat. No. HCYP4MAG-64K) (Cat. No. HCY4MG-64K-PX21) (Cat. No. HCP4MG64KPX21BK) APRIL/TNFSF13 BAFF/Blys BRAK/CXCL14 CCL28 HCC-4/CCL16 HMGB1 IFNβ IL-14/α -Taxilin IL-19 IL-24 Human High Sensitivity T Cell (Cat. No. HSTCMAG-28SK) (Cat. No. HSTCMAG28SPMX13) (Bulk Cat. No. HSTCMAG28PMX13BK) (Cat. No. HSTCMAG28SPMX21) (Bulk Cat. No. HSTCMAG28PMX21BK) Fractalkine/CX3CL1 GM-CSF IFNγ IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-8/CXCL8 IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-17A/CTLA8 IL-21 IL-23 I-TAC/CXCL11 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 MIP-3α /CCL2 TNFα 384-Well Human High Sensitivity T Cell (Coming Soon!) Fractalkine/CX3CL1 GM-CSF IFNγ IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-8/CXCL8 IL-1 IL-28B/IFNλ 3 IL-32α IL-34 IL-35 IL-36/IL-1F8 IL-37/IL-1F7 IL-38/IL-1F1 MPIF/CCL23 MIP-4/PARC/CCL18 YKL4/1CHI3L1 IL-12 (p4) IL-13 IL-17A/CTLA8 IL-21 IL-23 I-TAC/CXCL11 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 MIP-3α /CCL2 TNFα Human Soluble Cytokine Receptor (Cat. No. HSCRMAG-32K) (Cat. No. HSCRMAG32KPX14) (Bulk Cat. No. HSCRMAG32PMX14BK) scd3 segfr sgp13 sil-1ri sil-1rii sil-2rα sil-4r sil-6r srage stnf RI stnf RII svegfr1/sflt-1 svegfr2/skdr/sflk-1 svegfr3/sflt-4 Human Th17 (Cat. No. HTH17MAG-14K) (Cat. No. HT17MG-14K-PX25) (Bulk Cat. No. HT17MAG14PMX25BK) GM-CSF IFNγ IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-9 IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-15 IL-17A/CTLA8 IL-17E/IL-25 IL-17F IL-21 IL-22 IL-23 IL-27 IL-28A/IFNλ 2 IL-31 IL-33/NF-HEV (mature) MIP-3α /CCL2 TNFα TNβ / Lymphotoxinα (LTA) Human CD8+ T Cell (Cat. No. HCD8MAG-15K) (Cat. No. HCD8MAG15K17PMX) (Bulk Cat. No. HCD8MAG15KPX17BK) scd137/4-1bb/tnfrsf9 sfas/tnfrsf6 sfasl GM-CSF Granzyme A Granzyme B IFNγ IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-1 IL-13 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 Perforin TNFα Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 TGFβ3 9

11 Immunology, continued Human Complement Panel 1 (Cat. No. HCMP1MAG-19K) Adipson/Factor D C2 C4b C5 Human MMP Panel 1 (Cat. No. HMMP1MAG-55K) MMP-3 MMP-12 Human MMP Panel 2 (Cat. No. HMMP2MAG-55K) MMP-1 MMP-2 MMP-7 Human TIMP Panel 1 Serum/Plasma samples (Cat. No. HTMP1MAG-54K) TIMP-1 Human TIMP Panel 2 Cell culture samples (Cat. No. HTMP2MAG-54K) TIMP-1 TIMP-2 C5a C9 Factor I Mannose-binding lectin (MBL) Human Complement Panel 2 (Cat. No. HCMP2MAG-19K) C1q C3 C3b/iC3b C4 Factor B Factor H Properdin MMP-13 MMP-9 MMP-1 TIMP-2 TIMP-3 TIMP-4 Human Sepsis Panel 1 (Cat. No. HSP1MAG-63K) sfas/tnfrsf6 sfasl sicam-1 Human Sepsis Panel 2 (Cat. No. HSP2MAG-63K) Granzyme B HSP7 IL-1α IL-8/CXCL8 Human Sepsis Panel 3 (Cat. No. HSP3MAG-63K) Lactotransferrin (LTF) NGAL/Lipocalin-2 Neutrophil Elastase-2 (ELA2) Resistin Thrombospondin-1 (TSP-1) Human Sepsis Panel 4 (Cat. No. HSP4MAG-63K) FGF-13 MMP-8 MIF PAI-1 (total) svcam-1 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 MMP-8 Olfactomedin-4 (OLFM-4) Human Sepsis Panel 5 (Cat. No. HSP5MAG-63K) Neutrophil Elastase-2 (ELA2) Human Skin Skin extracts only (Cat. No. SKINMAG-5K) Cortisol Fibronectin Human Serum Albumin (HSA) Human Immunoglobulin Isotyping (Cat. No. HGAMMAG-31K) IgA IgG1 IgG2 Metabolism / Endocrinology IgG3 IgG4 IgM Human IgE - Single Plex (Cat. No. HGAMMAG-33E) IgE Proteinase-3 (PRTN-3) Involucrin Keratin-1,1 Keratin-6 LPS Human Adipokine Panel 1 Serum/Plasma samples (Cat. No. HADK1MAG-61K) Adiponectin Adipsin/Factor D NGAL/Lipocalin-2 Human Adipocyte Cell culture samples (Cat. No. HADCYMAG-61K) Adiponectin HGF IL-1β IL-6 IL-8/CXCL8 Leptin PAI-1 (total) Resistin Human Adipokine Panel 2 Serum/Plasma samples (Cat. No. HADK2MAG-61K) HGF IL-1β IL-6 IL-8/CXCL8 Insulin Leptin MCP-1/CCL2 NGF TNFα MCP-1/CCL2 NGF PAI-1 (total) Resistin TNFα Human Diabetes (Cat.No. HDIAB-34K-PMX5) (Bulk Cat. No. HDIAB34KPMX5BK) C-Peptide GLP-1 (active) Glucagon Insulin Leptin Human Metabolic Hormone (Cat. No. HMHEMAG-34K) Amylin (active) Amylin (total) C-Peptide Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) GLP-1 (total) Glucagon Human Myokine (Cat. No. HMYOMAG-56K) Apelin BDNF Erythropoietn (EPO) FABP3 Fractalkine/CX3CL1 IL-6 IL-15 Human Liver Protein (Cat. No. HLPPMAG-57K) α -Fetoprotein (AFP) ANGPTL3 ANGPTL4 ANGPTL6 FABP1 Human IGF Binding Protein (Cat. No. HIGFBMAG-53K) IGFBP1 IGFBP2 IGFBP3 IGFBP4 IL-6 Insulin Leptin MCP-1/CCL2 Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) TNFα Irisin LIF Myostatin Oncostatin-M Osteocrin/Musclin SPARC/Osteonectin FGF-19 FGF-21 FGF-23 HGF IGFBP5 IGFBP6 IGFBP7 1

12 Metabolism / Endocrinology, continued Human IGF (Cat. No. HIGFMAG-52K) IGF-1 Cardiovascular IGF-2 Human Pituitary Panel 1 (Cat. No. HPTP1MAG-66K) ACTH Agouti-Related Protein (AgRP) CNTF Human Pituitary Panel 2 (Cat. No. HPTP2MAG-66K) BDNF Prolactin Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone FSH GH LH TSH T3 T4 Human CVD Panel 1 (Cat. No. HCVD1MAG-67K) BNP NT probnp CK-MB LIX/CXCL6/GCP-2 CXCL16 Endocan (ESM-1) FABP3 Human CVD Panel 2 (Cat. No. HCVD2MAG-67K) ADAMTS13 GDF-15 D-dimer sicam-1 NGAL/Lipocalin-2 FABP4 LIGHT Oncostatin (OSM) Placental Growth Factor (PLGF) Troponin I (TnI) Myeloperoxidase (MPO) Myoglobin Serum Amyloid A sp-selectin svcam-1 Human CVD Panel 3 (Acute Phase) (Cat. No. HCVD3MAG-67K) α -2-Macroglobulin Adipsin/Factor D α 1-Acid Glycoprotein (AGP) CRP Fetuin A Fibrinogen Human CVD Panel 4 (Cat. No. HCVD4MAG-67K) se-selectin Follistatin (FST) dpapp-a scd31/specam-1 Haptoglobin sl-selectin Platelet Factor 4 (PF4) Serum Amyloid P von Willebrand Factor (vwf) Pentraxin-3 (PTX3) Tissue Factor (TF) Thrombomodulin Troponin T (TnT) Human Apolipoproteins (Cat. No. APOMAG-62K) Apo AI Apo AII Apo B Bone Human Bone (Cat. No. HBNMAG-51K) ACTH DKK1 FGF-23 IL-1β IL-6 Insulin Leptin Apo CII Apo CIII Apo E Cancer Biomarkers Osteocalcin (OC) Osteopontin (OPN) Osteoprotegerin (OPG) PTH Sclerostin (SOST) TNFα Human RANKL - Single Plex (Cat. No. HRNKLMAG-51K-1) RANKL Human Circulating Cancer Biomarker Panel 1 (Cat. No. HCCBP1MAG-58K) α -Fetoprotein (AFP) CA125 CA15-3 CA19-9 CEA CYFRA21-1 sfas sfasl/tnfrsf6 FGF-2/FGF-basic HCGβ HE4 HGF IL-6 IL-8/CXCL8 Leptin MIF Osteopontin (OPN) Prolactin PSA (free) PSA (total) SCF TGFα TNFα TRAIL/TNFSF1 VEGF-A Human Circulating Cancer Biomarker Panel 2 (Cat. No. HCCBP2MAG-58K) Antithrombin III Complement Factor H (CFH) Extracellular Matrix Protein 1 (ECM1) Vitamin D Binding Protein Vitronectin Human Circulating Cancer Biomarker Panel 3 (Cat. No. HCCBP3MAG-58K) Cathepsin D Ferritin Fibroblast Activation Protein (FAP) Galectin 3 IGFBP3 Melanoma Inhibitory Activity (MIA) Myeloperoxidase (MPO) Sex Hormone Binding Globulin (SHBG) Human Circulating Cancer Biomarker Panel 4 (Cat. No. HCCB4MAG-58K) ALDH1A1 Carbonic Anhydrase 9 (CA9) CD44 EpCAM Hepsin Kallikrein-6 Mesothelin Midkine NCAML1/L1CAM/CD171 Transglutaminase 2 (TGM2) Human Cancer / Metastasis Biomarker Panel 1 (Cat. No. HCMBMAG-22K) DKK1 Periostin GDF15 TRAP Neuron-specific enolase TWEAK (NSE) YKL4/1CHI3L1 Osteonectin (SPARC) Osteoprotegerin (OPG) Human Angiogenesis / Growth Factor Panel 1 (Cat. No. HAGP1MAG-12K) Angiopoietin-2 BMP-9 EGF Endoglin Endothelin-1 FGF-1/FGF-acidic FGF-2/FGF-basic Follistatin (FST) G-CSF HB-EGF HGF IL-8/CXCL8 Leptin Placental Growth Factor (PLGF) VEGF-A VEGF-C VEGF-D 11

13 Cancer Biomarkers, continued Toxicity Human Angiogenesis Panel 2 (Cat. No. HANG2MAG-12K) Angiostatin/Kringle saxl sc-kit/sstem Cell Factor Receptor (SCFR) se-selectin segfr/sher1/serbb1 sher2/segfr2/serbb2 sher3/segfr3/serbb3 shgfr/sc-met sil-6rα sneuropilin-1 (snrp-1) Osteopontin (OPN) PDGF-AB/BB specam-1 Tenascin C (TN-C) Thrombospondin-2 (TSP-2) stie-2 supar svegfr1/sflt1 svegfr2/skdr/sflk-1 svegfr3/sflt-4 Neuroscience Human Amyloid Beta and Tau CSF samples (Cat. No. HNABTMAG-68K) Amyloid beta 1-4 Amyloid beta 1-42 Tau (Thr181) Tau (total) Human Neuroscience Panel 1 (Cat. No. HNS1MAG-95K) α -Synuclein Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) Neuron-Specific Enolase (NSE) PARK5/UCHL1 PARK7/DJ1 Transglutaminase 2 (TGM2) Human Neurodegenerative Disease Panel 1 (Cat. No. HNDG1MAG-36K) α -2-Macroglobulin Apo AI Apo CIII Apo E Complement C3 Factor H Prealbumin/ Transthyretin (TTR) Human Neurodegenerative Disease Panel 2 (Cat. No. HNDG2MAG-36K) α -2-Antitrypsin (A1AT) C4 CRP MIP-4/PARC/CCL18 PEDF Serum Amyloid P (SAP) Human Neurodegenerative Disease Panel 3 (Cat. No. HNDG3MAG-36K) BDNF Cathepsin D sicam-1 Myeloperoxidase (MPO) sncam PAI-1 (total) PDGF-AA PDGF-AB/BB RANTES/CCL5 svcam-1 Human Neurodegenerative Disease Panel 4 CSF samples (Cat. No. HNDG4MAG-36K) Aβ1-4 Aβ1-42 GDNF srage S1B Human Neurological Disorders Panel 3 (Cat. No. HND3MAG-39K) Angiotensinogen (AGT) Contactin-1 Fetuin A Kallikrein-6 Osteopontin (OPN) Human Neuropeptide (Cat. No. HNPMAG-35K) n α -MSH β-endorphin Neurotensin Orexin A Oxytocin Substance P Human Circadian Stress (Cat. No. HNCSMAG-35K) Cortisol Melatonin Soluble Superoxide Dismutase 1 (ssod1) Soluble Superoxide Dismutase 2 (ssod2) Human Kidney Injury Panel 1 Urine samples (Cat. No. HKI1MAG-99K) Calbindin Collagen IV FABP1 GSTα IP-1/CXCL1 KIM-1 Osteoactivin Renin TFF-3 TIMP-1 Human Kidney Injury Panel 2 Urine samples (Cat. No. HKI2MAG-99K) α -1-Microglobulin Albumin Clusterin Cystatin C EGF NGAL/Lipocalin-2 Osteopontin (OPN) Human Kidney Injury Panel 3 Urine samples (Cat. No. HKI3MAG-99K) β-2-microglobulin RBP4 Uromodulin Human Kidney Injury Panel 4 Serum/Plasma samples (Cat. No. HKI4MAG-99K) EGF FABP1 IP-1/CXCL1 Human Kidney Injury Panel 5 Serum/Plasma samples (Call for Availability) α -1-Microglobulin Collagen IV NGAL/Lipocalin-2 Human Kidney Injury Panel 6 Serum/Plasma samples (Cat. No. HKI6MAG-99K) β-2-microglobulin Clusterin Cystatin C RBP4 Human Liver Injury (Cat. No. HLINJMAG-75K) 5'NT/CD73 ARG1 GSTα KIM-1 Osteopontin (OPN) PTH Renin Osteoactivin TIMP-1 Uromodulin MDH1 SDH 12

14 Immunology Metabolism Immunology Non-Human Primate Cytokine / Chemokine Panel 1 (Cat. No. PRCYTOMAG-4K) (Cat. No. PCYTMG-4K-PX23) (Bulk Cat. No. PRCYMAG4PMX23BK) scd4l G-CSF GM-CSF IFNγ IL-1β IL-1Ra IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-8/CXCL8 IL-1 Non-Human Primate Cytokine / Chemokine Panel 2 (Cat. No. PRCYT2MAG4K) IL-12/23 (p4) IL-13 IL-15 IL-17A/CTLA8 IL-18 MCP-1/CCL2 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 TGFα TNFα VEGF-A (Cat. No. PRCYTMAG4K-PX24) (Bulk Cat. No. PRCY2MG4PMX24BK) (Cat. No. PRCYTMAG4K-PX25) (Bulk Cat. No. PRCY2MG4PMX25BK scd137/4-1bb/tnfrsf9 IL-117E/IL-25 Eotaxin/CCL11 IL-21 sfasl/tnfrsf6 IL-22 FGF-2/FGF-basic IL-23 Fractalkine/CX3CL1 IL-28A/IFNλ 2 Granzyme A IL-31 Granzyme B IL-33/NF-HEV (mature) IL-1α IP-1/CXCL1 IL-2 MIP-3α /CCL2 IL-4 Perforin IL-6 RANTES/CCL5 IL-16 TNFβ / Lymphotoxinα (LTA) IL-17A/CTLA8 Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 TGFβ3 Non-Human Primate Metabolic Hormone (Cat. No. NHPMHMAG-45K) Amylin (active) C-Peptide Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) Glucagon IL-6 Insulin Leptin MCP-1/CCL2 Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) TNFα Non-Human Primate Pituitary Panel 1 (Cat. No. NHPPT1MG-46K) ACTH Agouti-Related Protein (AgRP) CNTF FSH GH LH TSH Non-Human Primate Pituitary Panel 2 (Cat. No. NHPPT2MG-46K) BDNF Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone Prolactin T3 T4 Mouse Cytokine / Chemokine Panel I (Cat. No. MCYTOMAG-7K) (Cat. No. MCYTOMAG-7K-PMX) (Bulk Cat. No. MCYTMAG7PMX25BK) (Cat. No. MCYTMAG-7K-PX32) (Bulk Cat. No. MCYTMAG7PMX32BK) Eotaxin/CCL11 G-CSF GM-CSF IFNγ IL-1α IL-1β IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-9 IL-1 IL-12 (p4) IL-12 (p7) Mouse High Sensitivity Panel (Coming Soon!) GM-CSF IFNγ IL-1α IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-13 IL-15 IL-17A/CTLA8 IP-1/CXCL1 KC/GROα /CXCL1 LIF LIX MCP-1/CCL2 M-CSF MIG/CXCL9 MIP-1α /CCL3 MIP-1β/CCL4 MIP-2/CXCL2 RANTES/CCL5 TNFα VEGF-A Mouse Cytokine / Chemokine Panel 2 (Cat. No. MECY2MAG-73K) (Cat. No. MECY2MAG-73KPX) (Bulk Cat. No. MECY2MAG73KPXBK) Erythropoietin (EPO) IL-17A/F Exodus-2/CCL21/6Ckine IL-2 Fractalkine/CX3CL1 MCDC/CCL22 IFNβ1 MCP-5/CCL12 IFNγ MIP-3α /CCL2 IL-11 MIP-3β/CCL19 IL-16 TARC/CCL17 TIMP-1 IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-17A KC/GROα /CXCL1 LIX MCP-1/CCL2 MIP-2/CXCL2 TNFα Mouse Soluble Cytokine Receptor (Cat. No. MSCRMAG-42K) scd3 sgp13 sil-1ri sil-1rii sil-2rα sil-4r sil-6r srage stnf RI stnf RII svegfr1/sflt-1 svegfr2/skdr/sflk-1 svegfr3/sflt-4 13

15 Immunology, continued Mouse Th17 (Cat. No. MTH17MAG-47K) (Cat. No. MT17MAG47K-PX25) (Bulk Cat. No. MT17MAG47PMX25BK) scd4l GM-CSF IFNγ IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-15 IL-17A/CTLA8 IL-17E/IL-25 IL-17F IL-21 IL-22 IL-23 IL-27 IL-28B/IFNλ 3 IL-31 IL-33/NF-HEV (mature) MIP-3α /CCL2 TNFα TNFβ / Lymphotoxinα (LTA) Mouse CD8+ T Cell (Cat. No. MCD8MAG-48K) (Cat. No. MCD8MAG48K-PX15) (Bulk Cat. No. MCD8MAG48KPX15BK) scd137/4-1bb/tnfrsf9 sfas/tnfrsf6 sfasl GM-CSF Granzyme B IFNγ IL-2 IL-4 Mouse MMP Panel 1 Serum/Plasma samples (Cat. No. MMMP1MAG-79K) MMP-2 MMP-3 IL-5 IL-6 IL-1 IL-13 MIP-1β/CCL4 RANTES/CCL5 TNFα MMP-8 Mouse MMP Panel 2 Serum/Plasma samples (Cat. No. MMMP2MAG-79K) prommp-9 MMP-12 Mouse MMP Panel 3 Cell culture samples (Cat. No. MMMP3MAG-79K) MMP-2 MMP-3 MMP-8 prommp-9 MMP-12 Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 TGFβ3 Mouse Immunoglobulin Isotyping (Cat. No. MGAMMAG-3K) IgA IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM Mouse IgE - Single Plex (MTO) (Cat. No. MGAMMAG-3E) IgE Metabolism / Endocrinology Mouse Adipokine Serum/Plasma samples (Cat. No. MADKMAG-71K) IL-6 Insulin Leptin MCP-1/CCL2 Mouse Adipocyte Cell culture samples (Cat. No. MADCYMAG-72K) Adiponectin IL-6 Leptin MCP-1/CCL2 PAI-1 (total) Resistin TNFα PAI-1 (total) Resistin TNFα Mouse Adiponectin - Single Plex Serum/Plasma samples (Cat. No. MADPNMAG-7K-1) Adiponectin Mouse Metabolic Hormone (Cat. No. MMHMAG-44K) Amylin (active) C-Peptide 2 Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) Glucagon IL-6 Insulin Mouse IGF Binding Protein (Cat. No. MIGFBPMAG-43K) IGFBP1 IGFBP2 IGFBP3 Mouse Myokine (Coming Soon!) BDNF Erythropoietin (EPO) FGF-21 Fractalkine/CX3CL1 Follistatin-like Protein 1 (FSTL-1) GDF8 IL-6 Leptin MCP-1/CCL2 Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) Resistin TNFα IGFBP5 IGFBP6 IGFBP7 IL-15 Irisin LIF Oncostatin-M Osteocrin/Musclin SPARC/Osteonectin Mouse Pituitary (Cat. No. MPTMAG-49K) ACTH BDNF FSH GH LH Prolactin TSH Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone Cardiovascular T3 T4 Mouse CVD1 (Cat. No. MCVD1MAG-77K) scd31/specam-1 se-selectin sicam prommp-9 Mouse CVD2 (Cat. No. MCVD2MAG-77K) scd4l CXCL16 Endocan-1 Follistatin (FST) LIGHT PAI-1 (total) sp-selectin Thombomodulin Mouse Acute Phase Panel 1 (Cat. No. MAP1MAG-76K) NGAL/Lipocalin-2 Pentraxin-3 (PTX3) Serum Amyloid A-3 (SAA-3) Mouse Acute Phase Panel 2 (Cat. No. MAP2MAG-76K) Adipsin/Factor D α -1-Acid Glycoprotein (AGP) α -2-Macroglobulin Bone Metabolism Mouse Bone (Cat. No. MBNMAG-41K) ACTH DKK-1 FGF-23 IL-6 Insulin Oncostatin-M Placental Growth Factor (PLGF-2) Troponin I (TnI) Troponin T (TnT) CRP Haptoglobin Serum Amyloid P Leptin Osteoprotegerin (OPG) Sclerostin (SOST) TNFα Mouse Osteocalcin - Single Plex (SPR Cat. No. SPRMBNMAG-41KOC) Osteocalcin (OC) Mouse RANKL - Single Plex (Cat. No. MRNKLMAG-41K-1) RANKL 14

16 Cancer Biomarkers Immunology Mouse Angiogenesis / Growth Factor Panel 1 (Cat. No. MAGPMAG-24K) salk-1 Amphiregulin Angiopoietin-2 Betacellulin scd31/specam-1 EGF Endoglin Endothelin-1 sfasl/tnfrsf6 FGF-2/FGF-basic Follistatin (FST) G-CSF HGF IL-1β Neuroscience Mouse Neuropeptide (Cat. No. RMNPMAG-83K) n α -MSH β-endorphin Neurotensin Toxicity Orexin A Oxytocin Substance P Mouse Kidney Injury Panel 1 (Cat. No. MKI1MAG-94K) β-2-microglobulin IP-1/CXCL1 KIM-1 Renin TIMP-1 VEGF-A Mouse Kidney Injury Panel 2 (Cat. No. MKI2MAG-94K) Clusterin Cystatin C EGF IL-6 IL-17A/CTLA8 KC/CXCL1 Leptin MCP-1/CCL2 MIP-1α /CCL3 Placental Growth Factor (PLGF-2) Prolactin SDF-1/CXCL12 TNFα VEGF-A VEGF-C VEGF-D NGAL/Lipocalin-2 Osteopontin (OPN) Rat Cytokine / Chemokine (Cat. No. RECYTMAG-65K) (Cat. No. RECYMAG65K27PMX) (Bulk Cat. No. RECYMAG65PMX27BK) EGF Eotaxin/CCL11 Fractalkine /CX3CL1 G-CSF GM-CSF GROα /KC/CINC-1 /CXCL1 IFNγ IL-1α IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 Metabolism / Endocrinology Rat Adipokine Serum/Plasma samples (Cat. No. RADPKMAG-8K) IL-1β IL-6 Insulin Leptin Rat Adipocyte Cell culture samples (Cat. No. RADPCMAG-82K) Adiponectin IL-1β IL-6 TGFβ3 Rat Immunoglobulin Isotyping (Cat. No. RGAMMAG-32K) IgA IgG1 IgG2a IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-17A/CTLA8 IL-18 IP-1/CXCL1 Leptin LIX MCP-1/CCL2 MIP-1α /CCL3 MIP-2/CCL8 RANTES/CCL5 TNFα VEGF-A IgG2b IgG2c IgM MCP-1/CCL2 PAI-1 (total) TNFα Leptin PAI-1 (total) TNFα Rat Metabolic Hormone (Cat. No. RMHMAG-84K) Rat Myokine (Coming Soon!) BDNF Erythropoietin (EPO) FGF-21 Fractalkine/CX3CL2 FSTL-1 GDF8 Rat Pituitary (Cat. No. RPTMAG-86K) ACTH BDNF FSH GH Rat Stress Hormone (Cat. No. RSHMAG-69K) ACTH Corticosterone IL-6 IL-15 Irisin LIF Osteocrin/Musclin SPARC/Osteonectin LH Prolactin TSH Melatonin Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone T3 T4 Rat Thyroid (Cat. No. RTHYMAG-3K) T3 T4 Cardiovascular TSH Rat Cardiac Injury Panel 1 (Cat. No. RCI1MAG-87K) Cardiac Troponin I (ctni) Cardiac Troponin T (ctnt) Creatine Kinase Muscle (CKM) Rat Vascular Injury Panel 1 Serum/Plasma samples (Cat. No. RV1MAG-26K) Caveolin-1 GROα /KC/CINC-1 /CXCL1 Connective Tissue Growth Factor (CTGF) IL-6 MCP-1/CCL2 FABP3 Follistatin-like Protein 1 (FSTL1) Myosin Light Chain 3 (MYL3) TIMP-1 PAI-1 (total) TIMP-1 TNFα VEGF-A Amylin (active) C-Peptide 2 Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) Glucagon IL-6 Insulin Leptin MCP-1/CCL2 Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) TNFα Rat Vascular Injury Panel 2 Serum/Plasma samples (Cat. No. RV2MAG-26K) Adiponectin se-selectin sicam-1 von Willebrand Factor (vwf) 15

17 Cardiovascular, continued Toxicity Metabolism / Endocrinology Rat Vascular Injury Panel 3 Serum/Plasma samples (Cat. No. RV3MAG-26K) α -1-Acid Glycoprotein (AGP) α -2-Macroglobulin (A2M) Bone Metabolism Rat Bone Panel 1 Serum/Plasma samples (Cat. No. RBN1MAG-31K) ACTH DKK1 FGF-23 Insulin Rat Bone Panel 2 Cell culture samples (Cat. No. RBN2MAG-31K) ACTH DKK-1 FGF-23 Insulin Leptin Osteocalcin (OC) Rat RANKL - Single Plex (Cat. No. RRNKLMAG-31K-1) RANKL Neuroscience Rat Neuropeptide (Cat. No. RMNPMAG-83K) n α -MSH β-endorphin Neurotensin Fibrinogen Haptoglobin Leptin Osteoprotegerin (OPG) PTH Sclerostin (SOST) Osteopontin (OPN) Osteoprotegerin (OPG) PTH Sclerostin (SOST) Orexin A Oxytocin Substance P Rat Kidney Toxicity Panel 1 Urine samples (Cat. No. RKTX1MAG-37K) Calbindin Clusterin GSTα IP-1/CXCL1 KIM-1 Osteopontin (OPN) TIMP-1 VEGF-A Rat Kidney Toxicity Panel 2 Urine samples (Cat. No. RKTX2MAG-37K) α -1-Acid Glycoprotein (AGP) Albumin β-2-microglobulin Rat Liver Injury (Cat. No. RLI1MAG-92K) ARG1 GOT1 GSTα Immunology Cystatin C EGF NGAL/Lipocalin-2 5'NT/CD73 SDH Canine Cytokine / Chemokine (Cat. No. CCYTOMAG-9K) (Cat. No. CCYTMG-9K-PX13) (Bulk Cat. No. CCYTMAG9KPX13BK) GM-CSF IFNγ IL-2 IL-6 IL-7 IL-8/CXCL8 IL-1 IL-15 IL-18 IP-1/CXCL1 KC-like MCP-1/CCL2 TNFα Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Canine Gut Hormone (Cat. No. CGTMAG-98K) Amylin (total) Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) Glucagon Canine Pituitary (Cat. No. CPTMAG-96K) ACTH BDNF FSH GH Insulin Leptin Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) LH Prolactin TSH Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone Toxicity T3 T4 Canine Kidney Toxicity Expanded Panel 1 Urine samples (Cat. No. CKT1MAG-97K) Clusterin Cystatin C KIM-1 IL-8/CXCL8 NGAL/Lipocalin-2 MCP-1/CCL2 Osteopontin (OPN) Canine Kidney Toxicity Panel 2 Urine samples (Cat. No. CKT2MAG-97K) Albumin β-2-microglobulin RBP4 TFF3 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 TGFβ3 16

18 Immunology Immunology Immunology Feline Cytokine / Chemokine (Cat. No. FCYTMAG-2K-PMX) (Bulk Cat. No. FCYTMAG2KPX19BK) sfas Flt3 Ligand GM-CSF IFNγ IL-1β IL-2 IL-4 IL-6 IL-8/CXCL8 IL-12 (p4) Metabolism / Endocrinology IL-13 IL-18 GRO/KC MCP-1/CCL2 PDGF-BB RANTES/CCL5 SCF SDF-1/CXCL12 TNFα Feline Metabolic Hormone (Cat. No. FMHMAG-29K) Amylin (active) Ghrelin (active) % GIP (total) GLP-1 (active) Glucagon Insulin Leptin Pancreatic Polypeptide (PP) PYY (total) Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone T3 T4 Porcine Cytokine / Chemokine (Cat. No. PCYTMAG-23K) (Cat. No. PCYTMG-23K-13PX) (Bulk Cat. No. PCYTMAG23PMX13BK) GM-CSF IFNγ IL-1α IL-1Ra IL-1β IL-2 IL-4 IL-6 IL-8/CXCL8 IL-1 IL-12 IL-18 TNFα Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 Metabolism / Endocrinology TGFβ3 Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cortisol Estradiol Progesterone T3 T4 Equine Cytokine/Chemokine Panel (Cat. No. EQCYTMAG-93K) (Cat. No. EQCYTMG-93KPX23) (Cat. No. EQCTMG93KPX23BK) Eotaxin/CCL11 FGF-2/FGF-basic Fractalkine/CX3CL1 G-CSF GM-CSF GRO IFNγ IL-1α IL-1β IL-2 IL-4 IL-5 IL-6 IL-8/CXCL8 IL-1 IL-12 (p7) IL-13 IL-17A/CTLA8 IL-18 IP-1/CXCL1 MCP-1/CCL22 RANTES/CCL5 TNFα Multi-species TGFβ - Single Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-1) (Bulk Cat. No. TGFBMAG-64K-1BK) TGFβ1 Multi-species TGFβ - 3 Plex (Cat. No. TGFBMAG-64K-3) TGFβ1 TGFβ2 Metabolism / Endocrinology TGFβ3 Multi-species Steroid/Thyroid Hormone (Cat. No. STTHMAG-21K) Cannot be plexed together. 1. PSA (free) and PSA (total) Available in cat. no. listed These analytes cannot be plexed with other analytes in this panel in serum/plasma Cannot be plexed together: 1. Amylin (active) and Amylin (total). 2. GLP-1 (active) and GLP-1 (total). Premix panel only Cannot be plexed with other analytes in this panel ierum/plasma % Requires a protease inhibitor during sample collection Requires Sample Extraction Serum/Plasma Only Available for Custom Premixed Can be plexed with other 2 Plexes Cannot plex with other phospho Akt H Human M Mouse R Rat Cortisol Estradiol Progesterone T3 T4 17

19 Can be plexed with other 2 Plexes Cannot plex with other phospho Akt Premix panel only AB1: Uses Assay Buffer 1 AB2: Uses Assay Buffer 2 H Human M Mouse R Rat CREB Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated CREB 3 (Ser133) H, M, R CREB 3 H, M, R Erk/MAPK 1/2 Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Erk/MAPK 1/2 3 (Thr185/Tyr187) H, M, R Erk/MAPK 1/2 3 H, M, R Cell Signaling Phosphoprotein + Total 2 Plex Assays IRS1 Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated IRS1 3 (Ser636) H, M IRS1 3 H, M, R Akt Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 (Ser473) H, M, R Akt/PKB 3 H, M, R JNK Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated JNK/SAPK1 3 (Thr183/Tyr185) H, M, R JNK/SAPK1 3 H, M, R Akt1 Phospho/Total - 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt1 (Ser473) H, M, R Akt1 3 H, M, R mtor Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated mtor 3 (Ser2448) H, M, R mtor 3 H, M Akt2 Phospho/Total - 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt2 (Ser474) H, M, R Akt2 3 H, M, R p38 Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB1 or AB2 Analyte Total Phosphorylated p38/sapk2a/b 3 (Thr18/Tyr182) H, M, R p38/sapk2a/b 3 H, M, R Akt3 Phospho/Total - 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt3 (Ser472) H, M, R Akt3 3 H, M, R STAT3 Phospho/Total 2 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated STAT3 3 (Tyr75) H, M, R STAT3 3 H, M, R 18

20 Cell Signaling Akt / mtor (Phosphoprotein) 11 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 (Ser473) H, M, R GSK3α 3 (Ser21) H, M, R GSK3β 3 (Ser9) H, M, R IGF1R 3 (Tyr1135/1136) H, M IR 3 (Tyr1162/1163) H IRS1 3 (Ser636) H, R mtor 3 (Ser2448) H, M p7s6 Kinase 3 (Thr389/412) H, M, R PTEN 3 (Ser38) H, M, R RPS6 3 (Ser235/236) H, M, R TSC2 3 (Ser939) H, M, R Akt / mtor (Total) 11 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 H, M, R GSK3α 3 H, M, R GSK3β 3 H, M, R IGF1R 3 H, M, R IR 3 H, R IRS1 3 H, M, R mtor 3 H, M, R p7s6 Kinase 3 H, M, R PTEN 3 H, M, R RPS6 3 H, M, R TSC2 3 H, M, R Human DNA Damage / Genotoxicity 7 Plex (Cat. No MAG) AB1 Analyte Total Phosphorylated ATR 3 Chk1 Chk2 H2A.X MDM2 3 p21 3 p53 3 (Ser345) 3 (Thr68) 3 (Ser139) 3 (Ser15) MAPK / SAPK (Phosphoprotein) 1 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated ATF2 3 (Thr71) H, M ErK/MAPK 1/2 3 (Thr185/Tyr187) H, M, R HSP27 3 (Ser78) H, M, R JNK/SAPK1 3 (Thr183/Tyr185) H, M, R c-jun 3 (Ser73) H MEK1 3 (Ser222) H, M, R MSK1 3 (Ser212) H, M, R p38/sapk2a/b 3 (Thr18/Tyr182) H p53 3 (Ser15) H STAT1 3 (Tyr71) H, M Early Apoptosis 7 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 (Ser473) H, M, R BAD 3 (Ser112) H Bcl-2 3 (Ser7) H Active Caspase 8 3 H Active Caspase 9 3 H JNK/SAPK1 3 (Thr183/Tyr185) H, M, R p53 3 (Ser46) H 19

21 Cell Signaling, continued Human RTK (Phosphoprotein) (Choose Analytes that Meet your Needs) (Cat. No. HPRTKMAG-1K) AB1 Analyte Total Phosphorylated c-kit (pan Tyr) H c-met/hgfr (pan Tyr) H EGFR (pan Tyr) H ErbB2/HER2 (pan Tyr) H ErbB3/HER3 (pan Tyr) H ErbB4/HER4 (pan Tyr) H FGFR1 (pan Tyr) H Flt3 (pan Tyr) H IGF1R (pan Tyr) H IR (pan Tyr) H MSCFR (pan Tyr) H PDGFRα (pan Tyr) H, M, R PDGFRβ (pan Tyr) H TIE1 (pan Tyr) H TIE2 (pan Tyr) H VEGFR1/Flt-1 (pan Tyr) H VEGFR2/KDR/Flk-1 (pan Tyr) H VEGFR3/Flt-4 (pan Tyr) H, M, R Multi-Pathway (Phosphoprotein) 9 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 (Ser473) H, M, R CREB 3 (Ser133) H, M, R Erk/MAPK 1/2 3 (Thr185/Tyr187) H, M, R NFκ B 3 (Ser536) H JNK/SAPK1 3 (Thr183/Tyr185) H, M, R p38/sapk2a/b 3 (Thr18/Tyr182) H, M, R p7s6 Kinase 3 (Thr389/412) H, M, R STAT3 3 (Ser727) H, M, R STAT5A/B 3 (Tyr694/699) H, M, R Multi-Pathway (Total) 9 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PLB 3 H, M, R CREB 3 H, M, R Erk/MAPK 1/2 3 H, M, R NFκ B 3 H, M, R JNK/SAPK1 3 H, M, R p38/sapk2a/b 3 H, M, R p7s6 Kinase 3 H, M, R STAT3 3 H, M, R STAT5A/B 3 H, M, R NFκ B 6 Plex (Cat. No MAG) AB1 Analyte Total Phosphorylated c-myc 3 H FADD 3 (Ser194) H Iκ Bα 3 (Ser32) H IKKα /β 3 (Ser177/Ser181) H NFκ B 3 (Ser536) H, M TNFRI 3 H Protein Translation 6 Plex (Coming Soon!) Analyte Total Phosphorylated elf2a 3 (Ser51) H, M, R elf-4b 3 (Ser422) H, M, R elf-4e 3 (Ser29) H, M, R elf-4g 3 (Ser118) H, M, R 4E-BP1 3 3 (Thr37/46) H, M, R Src Family Kinase Active Site (Phosphoprotein) 8 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Blk 3 (Tyr389) H, M, R Fgr 3 (Tyr412) H, M, R Fyn 3 (Tyr42) H, M, R Hck 3 (Tyr411) H, M, R Lck 3 (Tyr394) H, R Lyn 3 (Tyr397) H, R Src 3 (Tyr419) H Yes 3 (Tyr421) H, M STAT (Phosphoprotein) 5 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated STAT1 3 (Tyr71) H, M STAT2 3 (Tyr69) H STAT3 3 (Tyr75) H, M, R STAT5A/B 3 (Tyr694/699) H, M, R STAT6 3 (Tyr641) H T-Cell Receptor (Phosphoprotein) 7 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated CD3ε 3 (pan Tyr) H CREB 3 (Ser133) H, M, R Erk/MAPK 1/2 3 (Thr185/Tyr187) H, M, R LAT 3 (pan Tyr) H Lck 3 (pan Tyr) H, M, R Syk 3 (pan Tyr) H ZAP-7 3 (pan Tyr) H TGFβ - 6 Plex (Cat. No MAG) AB2 Analyte Total Phosphorylated Akt/PKB 3 (Ser473) H Erk/MAPK 1/2 3 (Thr185/Tyr187) H, M, R SMAD2 3 (Ser465/467) H, M, R SMAD3 3 (Ser423/425) H, M, R SMAD4 3 H, M, R TGFβRII 3 H 2

22 Cell Signaling, continued MAPmate : Phosphoprotein & Total Single-Plex Assays Plex up to 8 individual MAPmate assays together using our Cell Signaling Buffer and Detection Kit or include them in existing MILLIPLEX Cell Signaling Panels to enhance the panel or serve as controls within the guidelines provided in the protocols. Important MAPmate Guidelines Consult the protocol prior to use. All magnetic MAPmate assays require the Cell Signaling Buffer & Detection Kit (48-62MAG). This kit contains all necessary reagents except the MAPmate assay. Both a filter and flat bottom plate are included for convenience All MAPmate assays use Cell Signaling Assay Buffer 2 The following MAPmate assays should not be plexed together: Phospho-specific and total MAPmate pairs, e.g., total GSK3β and phospho-gsk3β (Ser9) STAT3 (Ser727) and STAT3 (Tyr75) cannot be plexed together GAPDH and β-tubulin GAPDH and β-tubulin MAPmates can be used for normalization with any of the MAPmates Magnetic Bead MAPmate kits Cat. No. Species Homology β-tubulin (total) MAG H, M, R GAPDH (total) MAG H Akt/PKB (assay buffer 2) (Ser473) MAG H, M, R Akt/PKB (assay buffer 2) (total) MAG H, M, R BAD (Ser112) MAG H, M Caspase 3 (Active) 46-64MAG H, M c-jun (Ser73) MAG H, M, R c-kit (total) 46-62MAG H c-met/hgfr (total) 46-65MAG H CREB (Ser133) MAG H, M, R CREB (total) MAG H, M, R EGFR (total) 46-66MAG H ERK/MAPK 1/2 (Thr185/Tyr187) 46-62MAG H, M, R ERK/MAPK 1/2 (total) 46-69MAG H, M, R GSK3β (Ser9) 46-69MAG H, M, R GSK3β (total) MAG H, M, R H2A.X (Ser139) MAG H, M HSP27 (Ser78) 46-67MAG H Iκ Bα (Ser32) MAG H Iκ Bα (total) MAG H JNK/SAPK1 (Thr183/Tyr185) MAG H, M JNK/SAPK1 (total) MAG H, M MEK1 (Ser222) 46-67MAG H, M, R mtor (Ser2448) MAG H, M, R mtor (total) MAG H, M, R NFκ B (Ser536) 46-72MAG H NFκ B (total) 46-71MAG H p21 (total) MAG H p38/sapk2a/b (Thr18/Tyr182) 46-61MAG H, M, R p38/sapk2a/b (total) MAG H, M, R p53 (Ser15) MAG H 21

23 Cell Signaling, continued Magnetic Bead MAPmate kits Cat. No. Species Homology p53 (total) MAG H p7s6k (Thr389/412) MAG H, M, R p7s6k (total) 46-63MAG H, M, R Cleaved PARP (total) MAG H PTEN (total) MAG H, M, R RPS6 (Ser235/Ser236) MAG H, M, R RPS6 (total) MAG H, M, R Src (Tyr419) 46-71MAG H, M, R STAT1 (Tyr71) MAG H, M STAT1 (total) MAG H, M STAT3 (Ser727) MAG H, M, R STAT3 (Tyr75) MAG H, M, R STAT3 (total) MAG H, M, R STAT5A/B (Tyr694/Tyr699) MAG H, M, R Lysates Lysate Description Cat. No. A431: EGF A549: Camptothecin Daudi: IL HEK293: Serum HeLa: IFNα HeLa: Lambda Phosphatase HeLa: TNFα +CalA HeLa: Unstim HeLa:HS/Ars HepG2: DCA HepG2: Insulin HepG2: TGFβ Lysate Description Cat. No. HepG2: Unstim (1) HepG2: Unstim(2) HepG2: Unstim(3) HL-6: PVD HUVEC: Serum Jurkat: Anisomycin Jurkat: H 2 O Jurkat: Paclitaxel Jurkat: Unstim MCF7: IGF NIH3T3: Anisomycin Ramos: PVD

24 服务平台 Merck Life Science Biomarker service 和 Milliplex 认证实验室为您提供高品质实验服务 默克生命科学 BMS 检测服务 : 默克生命科学 BMS 检测服务中心实验室 ( 上海 ) 为您提供专业 规范的 BMS 检测服务 : 默克生命科学提供最全面的高品质检测试剂 Milliplex 试剂盒 : 覆盖多种种属 ( 人 小鼠 大鼠 非人灵长类 狗 猫和猪 ) 在免疫炎症 代谢研究 心血管研究 癌症研究 神经研究 毒性研究以及信号通路等众多领域的 12 多种因子 BMS 检测服务中心实验室拥有全套的 Luminex 液相芯片检测系统平台 : 包括 MAGPIX, Luminex 2 及最高端的 FlexMAP 3D 液相芯片检测平台 BMS 检测服务中心实验室专职技术人员经过严格的认证获得提供服务能力的资质 BMS 检测服务中心实验室严格按照标准流程操作和管理, 保证各环节完善的质量把控和追溯性 BMS 检测服务中心实验室在收到客户样本和试剂盒并确认之后, 在 2 周内完成检测服务提供结果报告, 并跟踪检测服务质量 默克生命科学 BMS 检测服务产品货号 : MAGPIX System 服务产品货号 检测平台 特点 CNBMSLX2 Luminex 2 高灵敏度和检测动力学范围 ; 常 仪器检测 CNBMSMAGPIX MAGPIX 仪器检测 规结果数据形式高灵敏度和检测动力学范围 ; 常规结果数据形式 CNBMSFM3D FlexMap3D 仪器检测 更高的灵敏度和检测动力学范围 ; 更多结果数据形式 Luminex 2 System FLEXMAP 3D System 23

25 默克生命科学 Milliplex 认证实验室 : 为了覆盖更多研究者对于 Milliplex 多因子检测的需求, 使您能够享受在身边的实验服务, 甚至亲眼见证 我们已在全国范围内招募 默克生命科学 Milliplex 液相芯片检测认证实验室 以统一严格的认证标准为科研客户提供最准确 快捷的 Milliplex 试剂盒多重生物标志物检测服务 : 认证实验室覆盖并辐射中国大陆地区主要的区域. 为区域化的客户需求提供最大的便利 默克生命科学对认证实验室进行规范的标准化培训 考核和服务跟踪体系管理 认证实验室平台 人员均经过统一严格规范的资质认证 服务类型包括 Milliplex 试剂盒读板服务 (Endpoint-Reading) 和全套 Milliplex 试剂盒检测和数据分析服务 (Whole-Assay ) 认证实验室采用最全面的高品质 Milliplex 检测试剂盒 : 覆盖多种种属 ( 人 小鼠 大鼠 非人灵长类 犬 猫和猪 ) 在免疫炎症 代谢研究 心血管研究 癌症研究 神经研究 毒性研究以及信号通路等众多领域的 12 多种因子 has successfully completed Service Provider Training from Bioscience Business Unit of Merck Millipore Head of Bioscience, China Awarded in April, 214 服务流程 : 客户与认证实验室就检测服务的类型 数量等信息达成协议 购买默克生命科学的 Milliplex 试剂盒以及认证实验室检测服务 提供合格样本 ( 样品体积可低至 25ul), 即可体验由默克生命科学 Milliplex 认证实验室提供的高品质的多因子液相芯片检测服务 认证实验室覆盖并辐射中国大陆地区最主要科研区域, 为区域化的客户需求提供最大的便利 更多的实验服务问题, 请咨询 : 或全国技术服务热线 :

26 肿瘤研究25 Milliplex 高通量多因子检测平台在不同研究领域中的应用 肿瘤研究 肿瘤早期诊断 Milliplex 多因子检测平台在卵巢癌早期诊断中应用 Diagnostic Markers for Early Detection of Ovarian Cancer Irene V, Ziding F, Gary L, et al. Diagnostic markers for early detection of ovarian cancer.[j]. Clinical Cancer Research An Official Journal of the American Association for Cancer Research, 28, 14(4): IF:8.19 研究背景 : 卵巢癌 (ovarian cancer) 的早期检测能够显著降低疾病的致死率 实验设计 : 362 例健康对照和 156 例确诊卵巢癌样本分为两组 ( 检测组和验证组 ), 使用 Milliplex 技术检测血清样本中 6 种蛋白因子 leptin, prolactin, MIF, osteopontin, IGF-II 和 CA-125 表达水平 小 M 有话说 6 种标志物的 ROC 曲线 结果和意义 : 1: 非侵入性方法 ( 血清 ) 对肿瘤进行早期诊断 2: 多种因子联合检测提高了检测特异性 3:Milliplex 和 ELISA 在不同因子的检测上数据具有很高一致性, 反应出相同的趋势 4:6 种标志物联合检测的诊断价值 ( 灵敏度 95.3%, 特异性 99.4%) 显著高于 CA-125 ( 灵敏度 72%, 特异性 95%) 检测效果 Milliplex 与 ELISA 比较, 对于所有标志物的检测呈现很好一致性 6 种血清标志物的表达水平 Milliplex 高通量蛋白因子检测平台具有高效筛选卵巢癌高危 (high risk) 人群的潜力, 能够有效用于疾病诊断标志物的筛选, 符合当前转化医学的需求 Milliplex 技术在转化医学研究中具有如下 3 种独特优势和价值 : 1 在一次操作中可以检测 8 例样本, 每例样本仅需 25-5ul 便可同时进行超过 4 种标志物的筛选, 有效的节约样本 ( 尤其对神经科学中脑脊液样本, 或眼科学中的泪液样本等 ), 同时也能够显著提高筛选效率 ; 2 使用血清样本而非获取病人病理性的活检组织相对来说对病人是无创伤的方法, 能够显著降低病人在检测中的痛苦 3 肿瘤高危病人的早期诊断能够显著降低肿瘤带来的致死率, 实现对疾病的极早治疗, 有效提高病人的生活质量, 延长病人的生命 因此,Milliplex 技术具有很高的临床应用价值, 能够将基础研究获得的生物标志物快速实现向临床医学的转化, 是当前转化医学重要的研究方向之一 研究也显示,Milliplex 高通量蛋白检测技术和传统 ELISA 方法在检测结果中具有高度一致性, 也保证了该技术在临床检测中的准确性和可靠性

27 肺癌炎症标志物和预后风险评估及与吸烟的相关性 Circulating inflammation Markers and Prospective risk for lung cancer Shiels, M. S., et al. (213). "Circulating inflammation markers and prospective risk for lung cancer." J Natl Cancer Inst 15(24): 研究背景 : 虽然有大量关于肺癌炎症因子病原学的报道, 但是很少有用流行病学系统的结合肺癌病人血清炎症因子的研究 实验设计 : Milliplex 多因子分析平台检测 526 例肺癌样本和 592 例对照样本血清中 77 种炎症标志物表达水平, 使用 Conditional logistic 回归和 weighted Cox 模型评估优势比 (odds ratios,ors) 和累积风险分析 Table1. Characteristics of lung cancer case patients and control subjects Characteristic Control subjects (n=592) Lung cancer case patients (n=526) P * Age at randomization, years <59 14 (17.6) 96 (18.3) (28.2) 146 (27.8) (32.4) 177 (33.7) (21.8) 17 (2.3) Sex Female 212 (35.8) 168 (31.9) Male 38 (64.2) 358 (68.1) Smoking status Never 99 (16.7) 33 (6.3) Former 294 (49.7) 294 (55.9) Current 199 (33.6) 199 (37.8) Pack-years smoked Never smokers 99 (16.7) 33 (6.3) <3 124 (21.) 125 (23.8) (21.6) 128 (24.3) (7.1) 41 (7.8) (33.6) 199 (37.8) Years since quitting smoking Not applicable 298 (5.3) 232 (44.1) < (31.6) 187 (35.6) (18.1) 17 (2.3) Race.11 White 538 (9.9) 467 (88.8) Black 28 (4.7) 4 (7.6) Other 26 (4.4) 19 (3.6) Education (33.6) 211 (4.1) 393 (66.4) 315 (59.9) Body mass index, kg/m 2.53 < (33.5) 195 (37.1) (45.6) 224 (42.6) (19.3) 11 (19.2) Missing 1 (1.7) 6 (1.1) History of emphysema or chronic bronchitis <.1 No 532 (89.9) 428 (81.4) Yes 6 (1.1) 98 (18.6) History of coronary heart disease or heart attack.14 No 519 (87.7) 445 (84.6) Yes 73 (12.3) 81 (15.4) Family history of lung cancer <.1 No 58 (85.8) 398 (75.7) Yes 77 (13.) 123 (23.4) Missing 7 (1.2) 5 (1.) Regularly uses aspirin/ibuprofen.66 No 218 (36.8) 187 (35.6) Yes 374 (63.2) 339 (64.5) 肺癌样本和对照样本基本信息 结果与意义 : 1:11 种标志物 (CRP,SAA, stnfrii], IL-1RA, IL-7, TGF-A, ENA 78/CXCL5, MIG/CXCL9, BCA-1/CXCL13, TARC/CCL17, MDC/CCL22) 与肺癌发病风险显著相关 ; 2: 建立风险分析模型, 使用 4 种因子 (CRP, BCA-1/CXCL13, MDC/CCL22 和 IL-1RA) 能够有效区分曾经具有吸烟史的人群与当前正在吸烟人群对于肺癌的 1 年累积发病风险 基于 4 种独立的炎症因子评估非吸烟人群, 曾经吸烟史人群和当前吸烟人群肺癌的 1 年累积发病风险 小 M 有话说 针对当前存在致病机制 发病症状复杂多样的情况, 单个指标无法对疾病进行特异准确的预测评估的现状 使用多种指标对于肿瘤综合分析更易发现与肿瘤的密切关系, 对疾病评估也更加准确客观 因此使用 Milliplex 技术对多个指标联合分析也能够进一步提高肿瘤的检测效率, 并有效区分不同人群的肿瘤发病风险, 符合当前精准医学希望能够对疾病或病人进一步分期 分级 分类或分型的要求, 从而建立个体化的用药方案和治疗指南 肿瘤研究肿瘤风险评估 26

28 肿瘤研究27 肿瘤分期评估宫颈鳞癌患者血清蛋白谱的改变与肿瘤分期的相关性 Twelve Serum Proteins Progressively Increase With Disease Stage in Squamous Cell Cervical Cancer Patients Zhi W, Ferris D, Sharma A, et al. Int J Gynecol Cancer. 214;24(6): 研究背景 : 鉴定宫颈鳞状细胞癌血清蛋白变化图谱用于疾病致病机理的阐明及发现疾病新的治疗或干预的靶标 实验设计 : 鉴定宫颈鳞状细胞癌血清蛋白变化图谱用于疾病致病机理的阐明及发现疾病新的治疗或干预的靶标 宫颈鳞状细胞癌 I II III 期和癌前病变患者 12 种血清蛋白 ROC 曲线比较 结果与意义 : 1: 发现了 12 种蛋白 (SAA, CRP, stnfri,stnfrii,sil2r, CXCL1, CXCL9, HGF, SCCA, ILGFBP2,CA125 和 CEA) 血清浓度和 AUC ( 曲线下面积 ) 随着疾病的进展显著升高 2: 显著升高的蛋白和多种致病机制相关, 如炎症反应和免疫 血管形成 生长促进 转移 3: 快速发现大量的血清蛋白在不同病人的不同阶段显著不同 宫颈鳞状细胞癌 I II III 期和癌前病变患者 12 种蛋白在血清水平的相互关系 小 M 有话说 Milliplex 多因子联合检测技术不仅能够用于上述介绍的肿瘤早期诊断和风险评估, 也可以根据选择研究疾病发病阶段的不同用于转化医学的不同方向 ( 高危评估, 早期预警 / 诊断, 检测定位, 预后判断, 复发监测 ) 的研究, 甚至深入疾病机理进行探讨

29 肿瘤转移研究血管生成相关因子与非小细胞肺癌转移的相关性研究 A multi-analyte serum test for the detection of non-small cell lung cancer. Farlow, E.C., Vercillo, M.S., Coon, J.S., et al. British Journal of Cancer 21; 13(8):1221. 实验设计 : 用 Milliplex 多因子检测平台对 38 例非小细胞肺癌不同病程阶段的病人样品 17 种血管生成相关因子同时检测 其中 12 位患者记为 T1-2NM( 无转移 ),12 位为 T1-3N1-2M( 局部转移 ),14 位 T1-4N1-2M1 ( 有长程转移 ) 结果与意义 : 1: 与 无转移 现象的病人 ( T1-2N M ) 相比, 发生远程转移的病人 (T1-4N 1-2M 1) 血清中 IL-8,HGF 和 HB-EGF 明显升高, 能够用于肿瘤转移的检测 2: 非侵入方法检测减少病人痛苦 不同标志物在不同肿瘤阶段的表达水平 不同标志物在不同阶段的表达水平 小 M 有话说 中同时使用疾病组和健康组 ), 这样获得的标志物能够特异性用于肿瘤转移的评估, 从而为病人提供个性化用药治疗, 是当前转化医学和精准医学研究的重要应用方向 肿瘤研Milliplex 技术仅对疾病样本进行 ( 而非传统研究究该研究特色是通过 28

30 肿瘤研究29 肿瘤预后评估 Milliplex 多因子检测平台在肝细胞癌 (HCC) 预后评估中的应用 Using multiple cytokines to predict hepatocellular carcinoma recurrence in two patient cohorts. Chen, Z. Y., et al. (214). Br J Cancer 11(3): 研究背景 : 细胞因子和肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,hcc) 的致病机理, 发展和预后具有密切的关系 实验设计 : 179 例肝癌血清样本分为两组 ( 检测组和验证组 ), 用 Milliplex 高通量技术平台检测血清样本中 39 种细胞因子 Patients with HCC underwent RO curative hepatectomy between January 26 and December 21 (n = 1,185) HCC patients with sufficient following-up (n = 446) Cases with qualified serum samples collected before chemotherapy (n = 179) Training cohort (n = 13) Validation cohort (n = 76) Cytokine measurements Cut-off value selection Model construction 疾病样本选择与分组 应用 :CBPC 能提高对 HCC 病人风险的评估 Cytokine measurements Apply cut-off value Model validation Figure 1. A schematic overview of patient selection. The schematic summarises the cases for construction and validation of the classifier. Probability of disease-free survival P <.1 Low risk of recurrence ( n=111) High risk of recurrence ( n=68) Disease-free survival time (months) Survival probability P <.1 Low risk of recurrence ( n=111) High risk of recurrence ( n=68) Overall survival time (months) 结果与意义 : 1: 发现 6 种重要的预后因子用来预测无病存活率 (disease-free-survival,dfs) 和总体存活率 ( overall survival,os),fgf-2, GRO, IL-8, IP-1, VEGF, IFN-a2 2: 整合 6 种因子和 3 个临床特征, 开发出一种新型的细胞因子为基础的预后分类模型 (CBPC) 预测复发和 3 年总体存活率 ( 训练组 : 灵敏度.648, 特异性.918; 验证组 : 灵敏度.585, 特异性.857) IFN-a2 是唯一的单独的疾病预后因子 3: 以细胞因子为基础的预后分类模型 (CBPC ) 能够作为新的筛选方法鉴定术后复发高风险和总体存活时间短的肝癌病人, 从而开展以细胞因子为靶标的治疗 小 M 有话说 Milliplex 技术平台对于肿瘤转化医学和精准医学的典型应用 该类型研究虽然操作简单, 整篇文章仅使用 Milliplex 一项技术, 但是完全满足科学研究中的可行性和创新性需求 如果进一步深挖数据, 该文章也具有很高的可持续性研究价值 : 首先, 该篇文章通过多个因子建立了肝癌新的疾病预测模型, 后续能够进一步扩大样本建立疾病的新的评价体系和标准 ; 其次, 发现的疾病特异性细胞因子也具有潜在作为疾病诊断标志物的价值, 后续能够用于新型疾病诊断试剂盒的开发 ; 另外, 文章发现的疾病显著性相关的细胞因子也是肝癌治疗的潜在靶标, 后续可以开发特异性抗体或抑制剂等治疗药物 ; 最后, 也可以以疾病相关细胞因子为基础, 进行疾病机制和上下游信号通路分子的分析, 从而深入疾病机理研究

31 瘤研究肿肿瘤机制研究 ( 信号通路 ) G-CSF and G-CSFR 在胃肠癌中高表达促进肿瘤细胞增殖和迁移 G-CSF and G-CSFR are highly expressed in human gastric and colon cancers and promote carcinoma cell proliferation and migration. Morris K T, Khan H,, Ahmad A,, et al. G-CSF and G-CSFR are highly expressed in human gastric and colon cancers and promote carcinoma cell proliferation and migration.[j]. British Journal of Cancer, 214, 11(5): 实验设计 : 细胞水平通过 RT-PCR, 流式细胞仪 (Guava easycyte 8HT flow cytometer from Millipore), 信号通路检测 (MAPmates phospho-erk1/2 and RSK from Millipore Milliplex), 增殖 ( ERK 和 RSK 抑制剂来自 Millipore) 和迁移实验研究 G-CSF 和 G-CSFR 在肿瘤细胞的表达以及对胃肠癌细胞增殖, 迁移和信号的影响 D % Epithelial cell G-CSFR Gastric normalexpression Gastric tumor * * Colon normal Colon tumor E % Epithelial cell G-CSF expression 6 * 4 2 Gastric normal Gastric tumor Colon normal Colon tumor * G-CSF 和 G-CSFR 在人肿瘤细胞和胃肠上皮细胞中高表达 MFI MKN-45 AGS * * * * * * MFI Caco-2 DLD1 * * * * * * 1 1 Media 5 ng ml 1 1 ng ml 1 25 ng ml 1 Media 5 ng ml 1 1 ng ml 1 25 ng ml 1 Media 5 ng ml 1 1 ng ml 1 25 ng ml 1 Media 5 ng ml 1 1 ng ml 1 25 ng ml 1 G-CSF 诱导 ERK1/2 和 RSK 信号通路 小 M 有话说 Milliplex 技术不仅仅能够用于转化医学的快速研究, 也能够应用于基础医学, 生命科学的机制研究, 在该文章中能够快速发现疾病相关的信号通路, 避免传统研究中需要购买多种信号通路抗体, 并需要进行大量 Western blot 操作或需要进行大量 Q-PCR 实验, 花费较长的时间精力进行信号通路的筛选和分析, 为你的研究提供更高的效率 此外, 默克不仅能够提供 Milliplex 多因子检测平台, 也能为肿瘤研究以及生命科学的研究提供全面系统的高品质研究工具和解决方案 该研究中还使用了默克公司的 Guava 流式细胞仪和信号通路小分子抑制剂 结果与意义 : 1:G-CSFR 在 9% 的人胃肠肿瘤细胞中高表达,G-CSF 在基质成纤维细胞和肿瘤细胞中高表达 高表达 G-CSF 的肿瘤细胞增加增殖和迁移能力, 肿瘤细胞的亚群表达 干细胞样 (stem-like) 标志物, 这种影响均依赖 ERK1/2 和 RSK1 磷酸化作用 2:G-CSF/R axis 促进胃肠肿瘤的形成, 是潜在的重要的肿瘤治疗靶标 3

32 代谢研31 代谢研究 究研究背景 : 有研究显示血清 CRP 的升高增加心血管疾病的风险 心血管疾病 hscrp 的表达和颈动脉粥样硬化炎症因子的关系 ( 阴性实验结果 ) Plasma levels of high-sensitive CRP do not correlate with inflammatory activity in carotid atherosclerotic plaques. Grufman, H., et al. (214). "Plasma levels of high-sensitive C-reactive protein do not correlate with inflammatory activity in carotid atherosclerotic plaques." J Intern Med 275(2): 实验设计 : Milliplex 技术检测 16 例动脉内膜切除术例血浆样本中 IL-6, IL-1, MCP-1 和 TNF-alpha. Plaque 使用抗 CD68 抗体染色斑块巨噬细胞含量 Table 3 Associations between hscrp and other inflammatory markers in plasma and carotid plaques All plaques ( n = 16) Asymptomatic plaques ( n = 73) Symptomatic plaques ( n = 87) Plasma lipids and WBCs Triglycerides (mmol L 1 ) HDL (mmol L 1 ) LDL (mmol L 1 ) WBC count (1 6 ml 1 ). 2 5 ***. 3 ** Plasma cytokines IL-6 (pg ml 1 ). 2 2 **. 2 5 * IL-1 (pg ml 1 ) TNF-a (pg ml 1 ). 1 7 * MCP-1 (pg ml 1 ) Plaque cytokines IL-6 (pg g 1 p laqu e tis s u e) IL-1 (pg g 1 p laqu e tis s u e) TNF-a (pg g 1 p laqu e tis s u e) MCP-1 (pg g 1 p laqu e tis s u e) Plaque staining a-actin C D 68 O il R ed O WBC, white blood cell; ns, nonsignificant. P =.5, * P <.5, ** P <.1 and *** P <.5. Plaque staining for smooth muscle cells (a -actin), macrophages (CD68) and lipids (Oil Red O) were measured as percentage of total plaque area. 结果与意义 : 1: 在血浆 hscrp 浓度和血小板细胞因子水平或巨噬细胞含量无显著相关性 2: 当前的研究显示不建议将 hscrp 作为血小板炎症的标志物,hsCRP 的升高很可能是亚临床系统性信号 (subclinical systemic) 小 M 有话说 很多老师在研究前会对自己的结果有一个理论预期, 如果实际结果和理论预期不一致, 往往不会讲这些结果进行发表 但是对于这些阴性结果如果分析发现是真实准确的数据, 即使为 阴性, 也具有重要参考价值, 也能够发表高分期刊 在医学研究中, 往往不经意或是微小的操作差异就会造成研究结果的巨大差异, 甚至得出相反的结果 尤其对于临床性质的科学研究而言更为重要, 比如样本的纳入排除标准, 样本的基本临床信息 ( 年龄, 性别, 生理生化指标, 伴发疾病等 ) 和样本病理信息 ( 分级, 分期等 ) 的准确性, 以及样本本身保存, 冻融次数, 溶血情况, 血脂含量等对于研究结果都有一定的影响, 所以在研究中我们既要保证样本信息的准确性也要保证信息记录的完整性, 如果你在使用 Milliplex 技术中对样本的处理存在疑惑, 可以和我们的技术及时沟通, 这样能够充分保证研究结果的真实准确, 哪怕获得的数据是 阴性 的, 也具有非常重要的发表价值

33 减脂 : 限糖还是限脂肪? Calorie for Calorie, Dietary Fat Restriction Results in More Body Fat Loss than Carbohydrate Restriction in People with Obesity Hall K, Bemis T, Brychta R, et al. Calorie for Calorie, Dietary Fat Restriction Results in More Body Fat Loss than Carbohydrate Restriction in People with Obesity[J]. Cell Metabolism, 215, 22(3): (IF:17.565) 实验设计 : 19 例肥胖症患者进行 2 周实验 食物中摄入的热量比基础膳食热量低了 3% 这少吃的 3% 热量, 在第一阶段都只来自糖, 而第二阶段则都只来自于脂肪 同时使用 Milliplex 技术检测血浆 ghrelin, GLP-1, pancreatic polypeptide (PP),PYY,leptin,MCP-1, C-peptide, insulin 和 GIP(human metabolic hormone panel,hmhmag-34k) 和血浆 adiponectin, resistin, and PAI-1 (humaerum adipokine panel A, HADK1-61K-A). 研究方法示意图 Table 4. Overnight-Fasted Plasma Hormone and Metabolite Levels All Subjects Baseline N D RC diet p value N D RF diet p value N p value (RC versus RF) Glucose (mg/dl) Glycerol (mg/l) BHB (mm) Cholesterol (mg/dl) TG (mg/dl) LDL (mg/dl) HDL (mg/dl) Leptin (ng/ml) Ghrelin (pg/ml) MCP1 (pg/ml) GIP (pg/ml) GLP1 (pg/ml) C-peptide (ng/ml) PYY (pg/ml) Insulin (pg/ml) PP (ng/ml) Adiponectin (mg/dl) Resistin (ng/ml) PAI1 (ng/ml) Cortisol (pg/ml) CRP (mg/l) HOMA-IR 87.5 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 6.6 4,49 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± < 等能量限糖 (RC) 和限脂 (RF) 饮食中, 过夜禁食血浆激素和代谢水平 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±.8.511± ± ± ± ± ± ±.15 结果与意义 : 1: 限制糖分的摄入能显著促进体内脂肪氧化 ( 约 43 千卡 / 天 ), 限制脂肪摄入则做不到 但是, 通过限制脂肪摄入所引起的脂肪损失 (89 ± 6 克 / 天 ) 却明显高于限制糖所带来的效果 (53 ± 6 克 / 天 ), 减少相同热量摄入, 从脂肪里减和从糖分里减少, 对身体起到的作用截然不同的 跟限制糖比起来, 限制脂肪的摄入在减脂方面的效果可能优越一点 限制糖分的摄入能显著促进体内脂肪氧化 ( 约 43 千卡 / 天 ), 限制脂肪摄入则做不到 但是, 通过限制脂肪摄入所引起的脂肪损失 (89 ± 6 克 / 天 ) 却明显高于限制糖所带来的效果 (53 ± 6 克 / 天 ), 减少相同热量摄入, 从脂肪里减和从糖分里减少, 对身体起到的作用截然不同的 跟限制糖比起来, 限制脂肪的摄入在减脂方面的效果可能优越一点 2:Milliplex 检测结果显示 RC( 限糖 ) 和 RF( 限脂 ) 饮食都会出现血浆 C-peptide, insulin, insulin resistance, leptin, adiponectin, total cholesterol 和 HDL 的显著降低. RF 饮食中血浆 HDL 和总胆固醇降低程度更大, LDL 下降仅在 RF 饮食中出现. 血浆 TG 下降仅在 RC 饮食出现. 血浆 b-hydroxybutyrate and ghrelin 升高仅在 RC 饮食出现. 血浆 GIP 在 RC 饮食升高和 RF 饮食降低. 3: 尽管结果得到了数学模型的支持, 但同样的模型也预测, 随着时间的延续, 这样的差异将趋于减少 样本并不多, 无法给想要减肥的人群一个更加精准的新方向 < < < < 小 M 有话说 肥胖患者激素和代谢水平的变化能够为减肥提供更加针对性的指导, 本篇研究的核心内容就是少吃肉比少吃糖减肥效果更好一些, 但是如果真正减肥可能还是那句老话 少动嘴, 多动腿 代谢研究肥胖研究 32

34 代谢研究33 胃肠短路手术降低炎症与血栓标志物 Roux-en-Y Gastric Bypass Decreases Pro-inflammatory and Thrombotic Biomarkers in Individuals with Extreme Obesity Netto B D M, Bettini S C, Clemente A P G, et al. Decreases Pro-inflammatory and Thrombotic Biomarkers in Individuals with Extreme Obesity[J]. Obesity Surgery, 214, 25(6): 研究背景 : 炎症导致肥胖患者体内胰岛素抵抗和内皮功能失调, 引发心血管疾病. 本研究评价胃肠短路手术 (RYGB) 后体重降低早期效应 ( 炎症和血栓状态 ) 实验设计 : 41 例经历 RYGB 手术过度肥胖患者, 进行手术前和术后 6 个月的人体测量 (Anthropometric) 和临床状态, 炎症标志物检测 Hyperleptinemic patients (n=2) Non-hyperleptinemic patients (n=21) a) PAI-1 (pg/ml) Leptin CRP ICAM-1 b) Resistin PAI c) Adiponectin * IL-1 RYGB 术前伴有高 Leptin 血症的病态肥胖和非 Leptin 血症的病态肥胖样本 PAI-1 浓度 RYGB 术后 6 月前炎症因子和抗炎因子水平 (pro- and anti-inflammatory) 的变化 Leptin (a), CRP (a), ICAM-1 (a), resistin (b), and PAI-1 (b). anti-inflammatory 标志物变化, adiponectin and IL-1 (c) 结果与意义 : 1:Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 浓度在伴有 Leptin 血症 ( hyperleptinemia) 肥胖个体高于非 Leptin 血症个体 相对于基线值, 术后 BMI 降低 ( 12.9 kg/m2) 腰围显著降低 (126.2 to 11.4 cm) 血浆总胆固醇, LDL, TG 和 Glu 也降低 前炎症标志物也发现降低 : PAI ±6. %, CRP 18.8±3.4 %, ICAM ±5.7 %, leptin 27.9±3.2% 和 resistin 69.3 ±5.8% 2:TNF-α 和 leptin/adiponectin 比率显著降低 抗炎细胞因子 adiponectin 和 IL-1 显著升高 3: 发现伴有 Leptin 血症的肥胖个体有更高水平的 PAI-1 表达

35 HBV 病毒竟能 训练 胎儿免疫应答? Trained immunity in newborn infants of HBV-infected mothersif Hong M, Sandalova E, Low D, et al. Trained immunity in newborn infants of HBV-infected mothers.[j]. Nature Communications, 215, 6. 研究背景 : 新生儿是 HBV 慢性感染的一个大的受害群体, 通常研究认为, 乙肝病毒利用新生儿免疫系统的不成熟, 通过诱导宿主产生免疫耐受建立持续的慢性感染状态 实验设计 : 在其研究中, 使用 Milliplex(MAP Human Cytokine/ Chemokine Magnetic Bead Panel Premixed 42 Plex) 检测血浆和培养细胞上清中细胞因子浓度 pg ml 1 pg ml 1 pg ml Suppressive Anti-viral IL-1 IL-12p4 IFN- α2 * 15 * 4 ** Eotaxin ** pg ml 1 pg ml 1 pg ml 结果与意义 : 1: 出生前接触 HBV 病毒能够诱导胎儿建立一种 " 被训练 " 的免疫状态, 这种 " 训练 " 能够促进胎儿固有免疫细胞成熟以及 Th1 细胞的发育, 这一过程会进一步增强脐带血中免疫细胞应答细菌感染的能力 研究发现这些 " 训练 " 效应与细胞因子环境改变有关, 主要存在 IL-1 水平较低, 同时在多数情况下还伴随高水平的 IL-12p4 和 IFN-α2 等情况 2: 研究结果揭示了 HBV 病毒与天然宿主之间存在的潜在共生关系, 并着重提出在出生前接触病毒, 会诱导胎儿免疫系统产生高度可塑性 pg ml 1 pg ml Th17 IL-17 **** Pro-inflammatory Anti-inflammatory IL -6 IL -8 TNF-α IL-1ra 4 * 4 ** 3 *** 1,5 ** , Healthy HBV Healthy HBV Healthy HBV Healthy HBV 1, Healthy Healthy HB V HBV 5, 4, 3, 2, 1, Healthy Healthy HB V Chemokines/growth factors G-CSF GM-CSF GRO ** 25 * 8, *** HBV pg ml Healthy Healthy HBV HBV pg ml 1 pg ml 1 pg ml , 4, 2, Healthy Healthy HBV HBV 小 M 有话说 Th1/Th2 cytokine ratio IL-12p7/IL-1 ratio Health y 该研究完全颠覆了大家对乙肝感染传统观念, 有助于大家对这种流行疾病的认识 有助于理解出生前 HBV 暴露如何形成新生儿的总体免疫反应, 并转变我们看待乙肝病毒的方式 尽管 HBV 会在以后的生活中导致疾病, 但在生命早期它实际上可能对人类有益 什么叫训练免疫 : 检查 HBV 阳性母亲脐带血中的免疫细胞, 发现无论是先天免疫细胞, 还是适应性免疫细胞, 都更加有活性和成熟, 并且能更好应对细菌挑战, 这种现象称为 训练免疫 (trained immunity) 文章作者表示感染慢性 HBV 的年轻成年人 ( 年龄在 14 至 3 岁 ) 没有免疫耐受性, 他们具有的免疫细胞不能够抵御病毒 下一步, 他计划检测 HBV 感染在儿科患者中的影响 (2-12 岁 ), 以确定免疫系统如何响应病毒, 将为慢性乙肝的治疗 ( 从青少年或更早 ) 奠定基础 * HBV High levels of IL-12p4 and IFN-a2, and low levels of IL-1 and pro-inflammatory cytokines in the CB of Asian HBVt mothers. (a) CB plasma cytokines were determined by multiplex assay ieven healthy controls and ten HBVt mothers. Horizontal line represents the median. (b) Ratio of Th1/Th2 cytokine (IL-12p7/IL-1) in healthy and HBV-exposed CB. 代谢研究肝病 34

36 免疫研究35 免疫研究 传染性疾病研究新型免疫标志物可预测携带肺结核 (TB) 的 HIV 患者的早死及并发症风险 Immunological profiling of tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome and non-immune reconstitution inflammatory syndrome death in HIV-infected adults with pulmonary tuberculosis starting antiretroviral therapy: a prospective observational cohort studyif Ravimohan, S., et al. (215). "Immunological profiling of tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome and non-immune reconstitution inflammatory syndrome death in HIV-infected adults with pulmonary tuberculosis starting antiretroviral therapy: a prospective observational cohort study." Lancet Infect Dis 15(4): 研究背景 : 共感染的晚期 HIV/TB 患者有结核关联的免疫重建炎症综合征 (tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome,tb-iris) 风险, 在抗病毒 (antiretroviral therapy,art) 治疗后很快死亡 TB-IRIS 与 ART 后细胞免疫反应快速恢复相关, 比较早期死亡患者和 TB-IRIC 患者之间免疫反应及生物标志物特性的差异 实验设计 : 21 例来自博茨瓦纳的患者使用 Milliplex 技术检测 29 种血浆生物标志物 基于 ART 治疗后 6 个月的记录结果将病人为 4 组 : TB-IRIS 组, 早期死亡组, 存活组 ( 无 TB-IRIS), 进行抗逆转录病毒疗法前后的反应情况的评估 Control (n=118) TB-associated IRIS (n=32)* p value p corr Death (n=17) p value p corr EGF ( ) 92 7 ( ) ( ) 1 36 VEGF 123 ( ) 16 2 ( ) ( ) 28 5 G-CSF ( ) 88 4 ( ) ( ) 29 5 GM-CS 34 5 (2 51 4) 18 3 ( ) ( ) 3 2 IL-1RA 78 7 ( ) 9 4 ( ) ( ) 25 5 IL-1α 2 1 ( ) 9 4 ( ) ( ) IL-1β 1 2 ( 8 3 9) 8 ( 8 3 2) ( 8 1 9) 77 8 IL (1 7 3) 1 (1 3 ) (1 11 4) 4 58 IL ( ) 1 5 ( 7 5 9) ( ) IL ( ) 3 ( ) ( 5 7 7) IL ( ) 1 3 (5 21 3) ( ) IL-7 21 ( ) 15 8 ( ) ( ) IL ( ) 14 6 ( ) ( ) IL ( ) 14 5 ( ) ( ) 3 2 IL-12p4 15 ( ) 7 4 ( ) ( ) IL-12p7 9 8 ( ) 6 3 ( ) ( ) IL (1 2 1 ) 1 7 ( ) ( ) 27 5 IL-17a 3 3 ( ) 1 4 ( 7 3 8) ( ) IFNα 53 3 ( ) 71 8 ( ) ( ) IFNγ 18 8 ( ) 16 3 (5 34 9) ( ) IP ( ) 4185 ( ) ( ) MCP ( ) ( ) ( ) 3 8 MIP-1α 13 3 ( ) 1 4 ( ) ( ) MIP-1β 66 9 ( ) 63 7 ( ) ( ) Eotaxin ( ) 18 ( ) ( ) 6 31 TNFα 41 4 ( ) 38 2 (27 6 5) ( ) 2 2 Data are median pg/ml (IQR). TB=tuberculosis. IRIS=immune reconstitution inflammatory syndrome. p corr=benjamini-hochberg-corrected p value. EGF=epidermal growth factor. VEGF=vascular endothelial growth factor. G-CSF=granulocyte colony-stimulating factor. GM-CSF=granulocyte-macrophage colony-stimulating factor. IL=interleukin. IFN=interferon. IP=IFNγ induced protein. MCP=monocyte chemoattractant protein. MIP=macrophage inflammatory protein. TNF=tumour necrosis factor. *Includes one patient who had TB-associated IRIS and died. p and p corrvalues comparing controls with patients with TB-associated IRIS. p and p corrvalues comparing controls with deaths. Significant associations. : Baseline biomarker concentrations associated with TB-associated IRIS and early mortality in patients with advanced HIV and TB starting antiretroviral therapy 接受 ART 治疗的晚期 HIV/TB 患者中 TB-IRIS 和早期死亡组病人的细胞因子基线浓度 TB-associated IRIS* Death GM-CSF 15 ( 5 48) 3 ( ) IL-2 41 ( 18 96) 1 4 ( ) IL-3 39 ( 17 86) 1 1 ( ) IL-12p4 32 ( 14 75) 1 4 ( ) IL-12p7 28 ( 12 69) 1 4 ( ) IL ( 18 86) 2 ( ) IL-17a 33 ( 14 78) 1 7 ( ) IL-6 4 ( 18 89) 2 8 ( ) IL-1 5 ( ) 3 5 ( ) MCP ( ) 9 (1 8 ) TNFα 99 ( 32 3 ) 7 8 ( ) Eotaxin 5 4 ( ) 3 6 ( ) G-CSF 53 ( 2 1 4) 3 6 ( ) IP-1 4 ( ) 2 9 ( ) Data are adjusted odds ratio (95% CI). Log 1transformed baseline values of biomarkers that were associated with TB-associated IRIS or death at p< 1 in unadjusted analyses (see table 3) were used to establish association with paradoxical TB-associated IRIS and death in a logistic regression model. TB=tuberculosis. IRIS=immune reconstitution inflammatory syndrome. GM-CSF=granulocytemacrophage colony-stimulating factor. IL=interleukin. MCP=monocyte chemoattractant protein. TNF=tumour necrosis factor. G-CSF=granulocyte colonystimulating factor. IP=IFNγ induced protein. *TB-associated IRIS associations are adjusted for body-mass index and nevirapine use. Models included CD4 cell count before antiretroviral therapy, female sex, and presence of baseline opportunistic infections. Independent association between biomarker and outcome. : Relation of baseline biomarker concentrations to TB-associated IRIS and early mortality in patients with advanced HIV and tuberculosis starting antiretroviral therapy 接受 ART 治疗 4 周后的晚期 HIV/TB 患者中 TB-IRIS 和早期死亡组病人的细胞因子浓度浓度变化 结果与意义 : 1:TB-IRIS 组在 pre-art 有较低的 IL-6 浓度. 然而早期死亡组在 pre-art 有较高的 MCP-1 和 TNFα 浓度. ART 治疗后, TB-IRIS 组 IL-6 和 TNFα 浓度和对照相比进一步增加. 死亡组和对照组相比 G-CSF, IL-12p4 和 IL-15 因子浓度进一步增加. 在 ART 中,CD4 细胞数量在对照组和 TB-IRIS 相似, 但是在死亡组中数量降低 2: 阐明晚期 HIV/TB 患者在 ART 治疗前后 TB-IRIS 和死亡人群明确的免疫学 profiles. 抗逆转录病毒疗法的患者机体中鉴别出了新型的免疫生物标志物, 可帮助预测携带肺结核 (TB) 的 HIV 患者的早死及并发症风险 对于开发新型疗法从而降低患者机体炎症, 同时还可以促进患者的免疫恢复提供了新的研究线索 3: 患者机体中较低水平的 IL-6,IL-15 及 GM-CSF 和其患 IRIS 的风险增加直接相关, 高水平的 MCP-1 及 TNF-α 和患者的死亡风险增加直接相关 然而 IRIS 及早期死亡的患者在进行抗逆转录病毒疗法开始后的免疫反应和炎性反应会明显增加, 包括 IL-6,TNF-α 及 G-CSF 在内的四种生物标志物也和患者的 TB-IRIS 风险增加存在独立相关的关系, 而另外五种生物标志物则和患者死亡风险增加相关, 包括 IL-1RA 和 G-CSF

37 Expression profiles of circulating cytokines, chemokines and immune cells in patients with hepatitis B virus infection. Lian, J. Q., et al. (214). Hepat Mon 14(6): e 实验设计 : 用流式细胞仪和 Milliplex 多因子检测平台对 69 例位慢性乙肝患者的 5 种免疫细胞亚群和 46 细胞因子 / 趋化因子进行检测 CXCL9 (pg/ml ) G-CSF (pg/ml) P =.29 P =.18 P =.256 P =.168 P =.3 P =.14 P =.255 P = P =.694 P =.254 NC AsC B CH P =.56 P =.17 P =.4612 CXCL1 (pg/ml ) MCP-3 (pg/ml) P =.1128 P =.2 P =.263 P =.34 CXCL11 (pg/ml ) P =.86 P =.395 P =.154 结果与意义 : 1:CXCL9, CXCL1, CXCL11 和 IL-1 在 HBV 人群升高, 与 ALT 阳性相关 ;G-CSF, MCP-3 和 IFN-γgamma 在 HBV 人群表达降低, 与病毒学研究结果 (virological findings) 或肝炎症 ( liver inflammation) 无相关性 2:CXCR3 相关趋化因子与慢性 HBV 肝炎症具有相关性,, MCP-3 和 G-CSF 被 HBV 感染 infection 抑制 细胞因子和趋化因子表达模式更好的理解慢性 HBV 感染的发病机理 infection pathogenesis P =.933 NC AsC B CH NC AsC B CH NC AsC B CH IFN-γ (pg/ml) IL-1 (pg/ml) 慢性 HBV 感染患者 CXCL9 (A), CXCL1 (B), CXCL11 (C) 和 IL-1 (D) 的浓度与正常对照组和无症状的 HBV 携带者组相比升高. G-CSF (E), MCP-3 (F) 和 IFN-γ (G) 的表达在 HBV 感染者浓度降低 HBV 患者的 CXCL9 (A), CXCL1 (B), CXCL11 (C), and IL-1 (D) 表达和血清 ALT 正相关. 免疫研究乙肝和炎症因子的相关性研究 36

38 免疫研究37 先天性免疫鉴定先天性免疫反应中重要调控因子 KLF-2 The Myeloid Transcription Factor KLF2 Regulates the Host Response to Polymicrobial Infection and Endotoxic Shock Mahabeleshwar G, Kawanami D, Sharma N, et al. The Myeloid Transcription Factor KLF2 Regulates the Host Response to Polymicrobial Infection and Endotoxic Shock[J]. Immunity, 211, 34(5): 实验设计 : 用流式细胞仪和 Milliplex 多因子检测平台对 69 例位慢性乙肝患者的 5 种免疫细胞亚群和 46 细胞因子 / 趋化因子进行检测 研究亮点 : KLF2 deficiency confers a proinflammatory phenotype to myeloid cells Myeloid KLF2 deficiency renders animals resistant to polymicrobial infection Myeloid KLF2 deficiency renders animals susceptible to endotoxic shock KLF2 negatively regulates the NF-κB-HIF-1α axis in macrophages (A)MILLIPLEX MAP mouse cytokine-chemokine panel 分析 Lyz2cre and Lyz2cre Klf2fl/fl 小鼠血浆炎症细胞因子 D 1 dex (SI) Shock ind TNF- IL-1 F 8 2 IFNp<.94 p<.31 p<.15 n=16 Lyz2cre 6 Lyz2cre 15 Lyz2cre Lyz2cre Lyz2cre Lyz2cre Klf2 fl/fl Klf2 fl/fl 4 1 Klf2 fl/fl H 12 MIP-1 pg/m ml plasma Lyz2cre Lyz2cre Klf2 fl/fl n=32 Saline Eplasma pg/ml p p<.27 LPS 2 pg/ ml plasma n=32 Saline 2 LPS plasma pg/ml p I 6 MCP-1 p<.1 Lyz2cre Lyz2cre 4 Klf2 fl/fl 5 J 8 ml plasma 6 4 n=32 Saline Lyz2cre Lyz2cre Klf2 fl/fl p<.122 IL-17 p<.63 Lyz2cre Lyz2cre Klf2 fl/fl 结果与意义 : 1: 鉴定 Kruppel-like transcription factor 2 (KLF2) 作为骨髓细胞激活的潜在调控因子 2: 人败血症中发现骨髓细胞暴露在低氧 / 细菌中诱导 HIF-1a, 同时 KLF2 表达降低,KLF2 是 NF-kB-dependent HIF-1 转录的潜在抑制因子, 在多种微生物感染及内毒素血症中具有关键作用 3:KLF2 是骨髓细胞激活的补充抑制因子, 在先天性免疫反应必需的调控因子 ; 小 M 有话说 n=32 Saline LPS pg/ 2 LPS n=1 G 15 plasma pg/ml p IL-6 p<.23 Lyz2cre Lyz2cre Klf2 fl/fl n=32 Saline LPS 1 5 K 4 /ml plasma pg / n=32 Saline n=32 Saline LPS LPS (E K) LPS (21 mg/kg) 刺激年龄和性别匹配的 Lyz2cre and Lyz2cre Klf2fl/fl 小鼠. 4 hr 后分别收集 LPS 或对照组刺激的血浆样本. MILLIPLEX MAP mouse cytokine and chemokine panel 分析炎症细胞因子 研究使用 Milliplex 对小鼠血浆细胞因子进行检测 使用 Milliplex 在小鼠等少量及珍贵样本的检测中具有明显的优势 : 每只小鼠血浆 / 血清无法提供足够体积样本进行多因子及多时间点的筛选, 如果使用传统的 ELISA,WB 或 / 和荧光定量检测中需要使用大量体积的样本, 给实验分组和动物饲养带来很多不便, 此外传统方法对于大量数目样本的筛选也是难以想象的工作强度, 同时多次实验操作会对结果的重复性和稳定性带来影响 因此使用 Milliplex 能够在此类研究中显著提高研究效率, 并有效保证研究结果的准确性和稳定性

39 儿童严重哮喘分子表型 The molecular phenotype of severe asthma in children. Fitzpatrick A M, Melinda H, Fernando H, et al. Journal of Allergy & Clinical Immunology, 21, 125(4): e18. 实验设计 : 使用 Milliplex 多因子检测平台检测 53 例哮喘儿童和 3 例成年的支气管肺泡灌洗液 (BAL) 和肺泡巨噬细胞裂解液 (AM) 中的 23 种细胞因子 / 趋化因子表达水平 Adult control (n = 3) Moderate asthma (n = 22) Severe asthma (n = 31) IL-1 β (.1).7 ±.7 α (.23).6 ±.7 α (.36) IL-2.5 ±.8 (.37).7 ±.5 (.21).8 ±.11 (.62) IL-4.53 ±.73 ( 2.76).65 ±.84 ( 2.4).55 ±.74 ( 2.8) IL-5.6 ±.16 (.75).29 ±.56 ( 2.3).39 ± 1.3 ( 4.53) IL-6.59 ±.48 ( ) 5.6 ± 3.73 α ( ) 8.27 ± α ( ) IL-7.76 ± 1.69 ( 8.52) 1.24 ± 1.3 ( ).94 ±.98 ( ) IL-1.1 ±.3 (.15).81 ± 1.86 ( 8.19).69 ± 1.46 ( 7.33) IL-12 (p7).4 ±.6 (.19).1 ±.11 (.39).14 ±.18 (.81) IL-13.2 ±.12 (.55).62 ±.52 α ( 2.32) 1.4 ± 1.4 α ( 5.96) IFN γ.3 ±.13 (.6).26 ±.38 ( 1.41).14 ±.21 (.91) GM-CSF.21 ±.21 (.75).34 ±.29 ( 1.).22 ±.25 ( 1.32) TNF α.19 ±.17 (.4.74).51 ±.91 ( ) 1.47 ± 5.4 ( ) 支气管肺泡灌洗液 (BAL fluid) 细胞因子浓度 (pg/ml) Adult control (n = 3) Moderate asthma (n = 22) Severe asthma (n = 31) GRO (CXCL1) 455 ± 391 ( ) 354 ± 1971 α (166 1,) 2657 ± 1615 α ( ) IL-8 (CXCL8) 2.8 ± 2.9 ( ) 28.3 ± 26.6 α (4. 14) 45.2 ± 49.1 α ( ) IP-1 (CXCL1) 248 ± 284 ( ) 762 ± 637 α ( ) 132 ± 2145 α (46 1,) MCP-1 (CCL2) 27.6 ± 19.5 ( ) 43.5 ± 34.2 ( ) 177 ± 63 ( ) MIP-1 α (CCL-3) 1.2 ± 1.2 ( 2.9) 5.3 ± 8.8 ( 37.8) 57.9 ± 268 ( 1288) MIP-1 β (CCL-4) 3. ± 3.2 ( 15.) 2.8 ± 23.6 α (1.6 16) 19.1 ± 32.3 α ( 161) RANTES (CCL5) 25.6 ± 49.1 (.4 199) 18 ± 78.2 α ( ) 21 ± 235 α ( ) MCP-3 (CCL7) () 8.7 ± 7.8 α ( 27.9) 12.2 ± 15.3 α ( 73.5) Eotaxin (CCL11).1 ±.4 ( 1.5).8 ± 2.9 ( 13.4) 6.8 ± 29.9 ( 144) MDC (CCL22) 34.3 ± 24.2 ( 85.9) 57.4 ± 26.5 α ( ) 9.8 ± 98.2 α ( ) Fractalkine (CX3CL1) 6.7 ± 26.8 ( ) 142 ± 88.1 α ( 358) 141 ± 79.4 α ( 312) 支气管肺泡灌洗液 (BAL fluid) 趋化因子浓度 (pg/ml) 结果与意义 : 1: 在支气管肺泡灌洗液中, IL-13 和 IL-6 在哮喘组和对照组之间有显著区别,GRO, RANTES, IL-12, IFNγ 和 IL-1 在不同程度哮喘病人中表达水平存在差异 2: 在肺泡巨噬细胞裂解液中,IL-6 在哮喘组和对照组中具有最显著的差异 3: 通过 Milliplex 多因子检测平台进行多因子联检, 可以对不同程度的儿童哮喘进行分类, 结果可能有助于儿童靶向治疗方法的发展 免疫研究过敏性疾病研究 38

40 免疫研究39 自身免疫性疾病风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,ra) 细胞因子表达 Cytokine expression and cytokine-based T cell profiling in South Indian rheumatoid arthritis Mariaselvam C M, Aoki M, Salah S, et al. Cytokine expression and cytokine-based T cell profiling in South Indian rheumatoid arthritis[j]. Immunobiology, 214, 219(1): 目标研究背景 : 检测风湿性关节炎 (Rheumatoid arthritis,ra) 细胞因子, 发现潜在生物标志物 实验设计 : 48 例 RA 病人和 49 例健康对照样本, 初步使用 qpcr 分析 Th1, Th2, Th17 和 Tregs 细胞特异性的细胞因子和转录因子, 进一步使用 Milliplex 技术检测因子的血浆蛋白表达水平 A) B) C) D) IFNg, pg/ml TNF-, pg/ml R A <.1 R A <.1 HC HC IL-12p4, pg/ml IL-6, pg/ml R A R A.3 E) F) G) H) <.1 RA 患者和对照外周血血清细胞因子比较 结果与意义 : 1: 发现 RA 患者 T-bet (for Th1),GATA-3 (for Th2),FoxP3 (for Tregs),IFN-γ 和 IL-1 基因表达水平显著低于健康对照 RA 患者 IL-12p4 和 TNF-α 转录水平高于健康对照 RA 患者血浆蛋白水平普遍高于对照组样本 2: 虽然在这些细胞和分子研究进程中没有获得一种特定标志物具有显著的诊断和预后价值, 但是发现转录因子与血浆细胞因子的变化显示 RA 患者 T 细胞亚群存在潜在的失调, 具有显著的炎症表型 HC HC IL-4, pg/ml IL-17A, pg/ml <.1 R A R A <.1 HC HC IL-1, pg/ml IL-1, pg/ml R A HC.1 R A HC

41 CXCR3 配体早期预测 T 细胞介导的肾移植后急性排斥 Serum levels of CXCR3 ligands predict T cell-mediated acute rejection after kidney transplantation. Huang H, Xu X, Yao C, et al. [J]. Molecular Medicine Reports, 214, 9(1):45-5. 实验设计 : 肾移植后 1 个月进行肾组织活检, 其中 32 例样本具有 T 细胞介导的急性排斥,38 例样本稳定 收集急性排斥和稳定的血清样本, 用 Milliplex 高通量多因子技术检测平台检测其中的 CXCR3 配体, MIG, IP-1 和 I-TAC 的表达水平 Table II. Levels of chemokines (median, pg/ml) in the serum of patients following transplantation. Patients Type of chemokine Acute rejection Stable function P-value MIG 4,271 1,148 <.1 IP I-TAC 移植后病人血清趋化因子水平 (median, pg/ml) Table III. The calculated area under the curve (AUC) for chemokine levels. Type of chemokine AUC SD P-value 95% CI MIG < IP < I-TAC MIG + IP < MIG + I-TAC < IP-1 + I-TAC < MIG + IP-1 + I-TAC < 趋化因子的曲线下面积 (AUC) 计算 趋化因子水平的 ROC(Receiver-operating characteristic) 曲线. 结果与意义 : 1: 急性排斥的血清样本 MIG (4,271 pg/ml), IP-1 (686.7 pg/ml) 和 I-TAC (44.32 pg/ml) 显著高于稳定组的样本 2:ROC 曲线显示使用 Milliplex 多因子进行血清中 MIG, IP-1 和 I-TAC 的联合检测能够提供非侵入性且高效的方法用于肾移植后 T 细胞介导的急性排斥的早期预测 免疫研究移植研究 4

42 神经性疾病研究41 神经性疾病研究 神经降压素在自闭症儿童血清中表达 Neurotensin is increased ierum of young children with autistic disorder. Neurotensin is increased ierum of young children with autistic disorder. Angelidou A, Francis K, Vasiadi M, et al. Journal of Neuroinflammation, 21, 7 (2):48. 研究背景 : 孤独症谱系障碍 ( Autism spectrum disorders, ASD) 是儿童早期出现的一种神经发育失调 与 core symptoms 相关, 包括在社交技能, 语言和非语言交流存在障碍等 目前还没有明确的发病机制和诊断检测 许多自闭症儿童也有 过敏样 症状 然而, 实验显示肥大细胞的激活与非过敏性诱发剂无关 实验设计 : 用 Milliplex 多因子技术平台检测 19 例自闭症儿童 ( 男 16 和女 3; 平均年龄 3.±.4 岁 ) 和 16 例健康对照 ( 男 13 和女 3; 平均年龄 3±1.2 岁 ) 血清中 3 种刺激肥大细胞的神经肽 (neurotensin, b-endorphin 和 substance P) 表达水平的差异 Figure 1 Serum levels of neurotensin in ASD patients (n = 19; 16 males and 3females; mean age: 3 ±.4 years; range: years) and controls (n = 16; 13 males and 3 females; mean age: 3 ± 1.2 years; range: years). Serum was analyzed using Milliplex MAP, based on the Luminex xmap technology by Millipore. The horizontal lines indicate the means. Figure 2 Serum levels of β-endorphin in ASD patients (n = 19; 16 males and 3females; mean age: 3 ±.4 years; range: years) and controls (n = 16; 13 males and 3 females; mean age: 3 ± 1.2 years; range: years). Serum was analyzed using Milliplex MAP, based on the Luminex xmap technology by Millipore. The horizontal lines indicate the means. ASD 病人的 neurotensin,b-endorphin 和 substance P 血清水平 (n = 19; 16 males and 3 females); Figure 3 Serum levels of substance P in ASD patients (n = 19; 16 males and 3females; mean age: 3 ±.4 years; range: years) and controls (n = 16; 13 males and 3 females; mean age: 3 ± 1.2 years; range: years). Serum was analyzed using Milliplex MAP, based on the Luminex xmap technology by Millipore. The horizontal lines indicate the means. 结果与意义 : 3 种神经肽中只有 neurotensin (NT) 和对照相比显著升高 ( 6.5 ± 6. pg/ml ± 12.4 pg/ml) b-endorphin 和 substance P (SP) 水平无显著变化 由此可以推断,NT 能刺激免疫细胞, 尤其肥大细胞, 可能对脑部炎症反应和自闭症产生具有直接影响

43 Serum brain-derived neurotrophic factor (BDNF)levels in epilepsy Hong, Z., et al. (214). "Serum brain-derived neurotrophic factor levels in epilepsy." Eur J Neurol 21(1): 实验设计 : Milliplex 技术检测 135 例癫痫患者和 34 例健康血清样本的脑源性神经营养因子 (BDNF) 表达水平 Table 3 Monthly versus less frequent Weekly versus less frequent Daily versus less frequent 不同性别样本中血清 BDNF 水平 Summary of receiver operating characteristic curve results for serum BDNF a A ll people with AUC P value epilepsy Cut-off value (pg/ml) Sens (%) A 使用 ROC(receiver operating characteristic) 曲线评价血清 BDNF 作为癫痫患者严重性的标志物 结果与意义 : 1: 不同性别和对照样本血清 BDNF 水平具体显著区别 BDNF 诊断阈值 (cut-off values) 临界值 626 pg/ml, 对于从偶发癫痫 (fewer seizures) 中区别日常和频繁发作 (daily or more frequent seizures) 灵敏度 8% 和特异性 9% 2: 血清 BDNF 浓度与癫痫疾病严重性相关, 能够作为癫痫严重性评估的辅助标志物. (a) Males with epilepsy Spec (%) AUC P value Cut-off value (ng/ml) Sens (%) Females with epilepsy Spec (%) AUC P value Cut-off value (ng/ml) < 血清 BDNF 的 ROC 曲线结果 Sens (%) Spec (%) 神经性 癫痫 ( 血清脑源性神经营养因子作为癫痫潜在诊断标志物 ) 疾病研究神经系统疾病检测 42

44 神经性疾病研43 神经退行性疾病 - 阿尔茨海默病 ( 唾液样本 ) 唾液 tau 作为阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,ad) 潜在标志物究Salivary tau species are potential biomarkers of Alzheimer disease Min Shi, Yu-Ting Sui, Elaine R. Salivary tau species are potential biomarkers of Alzheimer disease[j]. Journal of Alzheimers Disease, 211, 27(2). 研究背景 : tau 蛋白磷酸化在阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,ad) 致病机理中具有重要作用. 脑脊液 (CSF) 中磷酸化 Tau 和总 Tau 的升高, 结合 Aβ42 的降低已经作为灵敏性的 AD 诊断标志物. 但是 CSF 的获取相对较为困难且是有创. 因此 CSF 对于 AD 的早期诊断和筛选并不是非常理想的样本来源. 实验设计 : Milliplex 技术定量检测 21 例 AD 患者,38 例健康对照样本的唾液总 tau 蛋白 ( t-tau), 磷酸化 tau(p-tau) 和 Aβ42 浓度 AD 病人和健康对照 (CTRL) 样本唾液 t-tau 和 p-tau 蛋白水平 (A) AD 病人组 t-tau 蛋白表达水平低于对照组, 但是在唾液 t-tau 蛋白水平标准化 (normalizing) 后区别减弱 (B) AD 病人组 p-tau 蛋白表达水平高于对照组, 无论是否标准化 (normalized) 唾液 t-tau 水平 (C) AD 病人的 p-tau/t-tau 比率显著升高 结果与意义 : 1:AD 患者 phosphorylated tau/ total tau 比率显著高于健康对照 2: 显示唾液 tau 蛋白能作为 AD 诊断的理想标志物, 特别在疾病早期阶段, 甚至在无症状 (asymptomatic) 样本筛选中, 为 AD 患者提供更大的治疗窗口 (therapeutic window)

45 Amyloid Beta-42 (Aβ-42), neprilysin and cytokine levels. A pilot study in patients with HIV related cognitive impairments Mothapo K M, Stelma F, Janssen M, et al. Amyloid Beta-42 (Aβ-42), neprilysin and cytokine levels. A pilot study in patients with HIV related cognitive impairments[j]. Journal of Neuroimmunology, 215, 282: 研究背景 : HIV 相关痴呆 (HAD) 与淀粉样蛋白 (amyloid-beta,aβ) 沉积有关 实验设计 : Milliplex 技术检测 32 例 HIV 相关的认知损伤 (HIV-related cognitive impairments,hci),22 例 HIV 认知功能正常 (normal cognitive functioning,nf) 和 1 例非 HIV 对照样本脑脊液和血浆 amyloid beta-42 (A β-42), neprilysin (NEP) 和细胞因子表达水平 A -42 (pg/ml) a) CSF and plasma Amyloid beta-42 HCI CSF p=.53 p=.97 p=.74 NF CSF Controls CSF HCI plas ma p=.28 NF plasm a p=.1 p=.3 HCI, NF 和对照组 CSF 和血浆 Aβ-42 浓度和 NEP 活性 Controls plasma 结果与意义 : 1:Aβ-42 在 HCI (67%) 中表达水平相对在 NF (29%) 和 controls (1%) 升高 显示在 CSF 中 IL-8 水平在 HCI 相对 NF 升高 ( 无显著区别 ) 2: 初步研究显示脑脊液中 IL-8 和血浆 Aβ-42 可能作为 HCI 潜在标志物 pg/ml HCI CSF p=.57 p=.11 NF CSF b) IL-8 CSF and plasma p=.88 Controls CSF HCI pla s ma p=.44 NF plasm a p=.8 p=.3 Controls plasma HCI, NF 和对照组 CSF 和血浆细胞因子浓度 神经性HIV 相关的认知损伤 脑脊液和血浆样本疾病研究44

46 信号通路研究45 信号通路研究 IL5 激活的嗜酸细胞细胞中 Siglec-8 介导的细胞死亡机制 :ROS 增强的 MEK/ERK 激活 Mechanism of Siglec-8 mediated cell death in IL-5 activated eosinophils: Role for reactive oxygepecies enhanced MEK/ERK activation. Gen K, Maha A, Bochner B S, et al. Mechanism of Siglec-8 mediated cell death in IL-5 activated eosinophils: Role for reactive oxygepecies enhanced MEK/ERK activation[j]. Journal of Allergy & Clinical Immunology, 213, 132(2): 研究背景 : 阐明 Siglec( 唾液酸结合的 Ig 样凝集素 )8 介导激活的嗜酸细胞死亡的机制 实验设计 : 竞争性的 anti Siglec-8 抗体和 IL-5 处理外周血嗜酸细胞. Milliplex 技术 ( 1 phosphoproteins related to human MAPK Kit), 流式细胞,Western Blot( 化学发光 HRP 检测试剂盒和 MEK1 inhibitors U126 来自默克公司 ) 检测 MAPK 的磷酸化作用和细胞功能 荧光检测 ROS 累积 A DHR MFI 1 不同刺激导致凋亡或坏死的死细胞的形态学和百分率图示 1 Media IL-5 + anti-siglec-8 IL-5 + anti-siglec-8 + PD IL-5 + anti-siglec-8 + DPI [hr] p-erk [1min] ERK [1min] IL-5 anti-siglec-8 PD DPI ratio 结果与意义 : Anti Siglec-8 抗体和 IL-5 共刺激显著提高细胞死亡 ( 坏死, 而非凋亡 ) 率 共刺激情况下, 细胞外 ERK1/2 和 MEK1 磷酸化被显著提高 ;MEK1 抑制剂阻碍共刺激诱导的死亡 ROS 抑制剂能够防止共刺激诱导的 ERK 磷酸化和细胞死亡的增加 进一步显示 ROS 是细胞共刺激 ERK 激活的上游调节子 B Milliplex phospho-mapk bead 检测嗜酸细胞 (n =4 donors) 裂解物 (anti Siglec-8/IL-5 共刺激后 MEK/ERK 通路表达上调 ) anti Siglec-8/IL-5 共刺激的 MEK/ERK 上调位于 ROS 产物的下游 A, 二氢罗丹明 123 (DHR) 进行细胞染色, 流式细胞分析 ROS 水平. B, 刺激 1min 后, 收集细胞裂解物进行 Western blotting 分析

47 细胞治疗 Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia Davila M L, Isabelle R, Xiuyan W, et al. Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia.[j]. Science Translational Medicine, 214, 6(224):224ra25-224ra25. 研究背景 : 在肿瘤的治疗中,CAR T 细胞治疗是当前最有效的方法之一, 但是在 CAR T 细胞治疗过程中也存在着一些副作用, 细胞因子释放综合症 (Cytokine release syndrome,crs) 是 CAR-T 细胞治疗中最常见也是最危险, 最严重且可能致死的并发症, 患者在输注 CAR-T 细胞后,T 细胞 B 细胞 NK 细胞等释放大量的炎性介质 ( 如细胞因子和趋化因子 ), 触发急性炎症反应诱导上皮及组织损伤, 导致微血管渗漏 心衰甚至死亡 因此对 CAR T 治疗患者细胞因子的监测非常重要 实验设计 : 研究中使用 Milliplex 多因子检测平台检测 16 例 B 细胞急性淋巴细胞白血病 (B cell acute lymphoblastic leukemia,b-all)) 血清中 39 种细胞因子的水平, 进行细胞因子释放综合症 (CRS) 评价 Table 3. Diagnostic criteria for scrs secondary to CAR T cells. Criteria for scrs Fevers for at least three consecutive days Two cytokine max fold changes of at least 75 or one cytokine max fold change of at least 25 At least one clinical sign of toxicity such as hypotension (requiring at least one intravenous vasoactive pressor) or, Hypoxia ( PO 2 < 9%) or, Neurologic disorders (including mental status changes, obtundation, and seizures) B) 选择的 7 种升高的炎症性细胞因子在 scrs 过程中的变化倍数. The highlighted box represents changes 75-fold and above. Correlation was assessed for pretreatment tumor burden and cytokine elevations for patients diagnosed with scrs. 建立 CRS 诊断标准包括 :(i) 发热至少持续 3 天,(ii) 两种细胞因子浓度最高值至少升高 75 倍或一种细胞因子浓度最高值至少升高 25 倍,(iii) 至少出现一种毒性临床症状如低血压 ( 至少一项静脉血管压力 ), 或缺氧 ( 血氧浓度 < 9%), 或神经系统症状 ( 包括神志改变, 迟钝和癫痫发作 ) 39 种细胞因子的检测, 发现可根据 7 种细胞因子在病人体内显著升高, 这些因子和病人的临床症状一致, 能够作为判断 CRS 的严重程度 细胞治疗Milliplex 在 CAR-T 细胞治疗中应用 46

48 胞治疗小 M 有话说细# CAR T cells/µl # CAR T cells/µl d6 MSK-ALL4 d6 d8 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 12d 14d 16d 18d 2d 22d Time point MSK-ALL14 d14 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 12d 14d 16d 18d 2d 22d Time point CART cells/µl T max d MSK-ALL5 d6 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 12d 14d 16d 18d 2d Time point MSK-ALL17 d1 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 12d 14d 16d 18d 2d 22d Time point Steroids administered Tocilizumab administered d Temperature ( ºC) Temperature (ºC) CAR T cells/µl MSK-ALL7 d9 d1 d16 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 12d 14d 16d 18d 2d 22d Criteria for scrs Time point MSK-ALL13 Pre-Rx 2d 4d 6d 8d 1d 11d 12d 14d 16d 18d 2d 22d Time point 类固醇 (steroids) 和 / 或塔西单抗 (tocilizumab) 对 CAR T 细胞治疗过程中出现 scrs 的治疗效果 Treated initial three scrs patients with lymphotoxic high-dose steroids, >1mg daily of prednisone equivalent, rapidly reversed symptoms but concurrently ablated 19-28z CAR T cells. The IL-6R blocking (mab) tocilizumab may ameliorate scrs rapid resolution of scrs after IL-6R blockade reduced patients fevers and scrs symptoms within 1 to 3 days similar to steroid therapy, but not result in dampened expansion of the 19-28z CAR T cells 结果与意义 : 1:CAR T 细胞具有非常好的治疗效果, 整体完全缓解率 88% 2: 建立 CRS 诊断标准, 发现 7 种显著升高的细胞因子, 可作为判断 CRS 的严重程度 3:CRP 可作为一个标志物用来判断对病人 CRS 干预的效果 4:IL-6 受体阻断剂塔西单抗 (tocilizumab) 可有效抑制 CRS, 类固醇药物也可抑制 CRS, 但对 CAR-T 的疗效也会造成影响, 可作为 tocilizumab 无效的替代方案 5:CAR-T 细胞治疗对急性 B 淋巴细胞白血病非常有效, 细胞因子释放综合症 (CRS) 为其主要副作用, 可通过 IL-6 受体阻断剂进行辅助治疗 d6 d9 CRP 的 ROC 曲线 :CRP 2 mg/dl 列入诊断严重细胞因子释放综合征依据, 以替代用细胞因子升高水平为依据的诊断 ROC 的 AUC 为.968. 病人 CRP 2 mg/dl 具有较高的发生 CRS 的风险 ( 灵敏度 86%; 特异性 1%). 该论文作者迈克尔 萨德莱恩 (Michel Sadelain) 是 CAR T 领域最杰出的科学家之一, 也是 CAR 细胞嵌合抗原受体 (chimeric antigen receptor) 细胞的命名者 纽约斯隆凯特林癌症纪念中心 (Memorial Sloan Kettering Cancer Center) 细胞工程与基因转移研究中心 (Center for Cell Engineering and Gene Transfer) 的主任, 朱诺 (JUNO) 公司联合创始人, 针对淋巴细胞白血病 CAR T 细胞药物 JCAR15 项目负责人, JCAR15 目前已获得 FDA 突破性疗法认证 Temperature (ºC) 47

49 疫苗研究 BCG Vaccination Induces Different Cytokine Profiles Following Infant BCG Vaccination in the UK and Malawi BCG Vaccination Induces Different Cytokine Profiles Following Infant BCG Vaccination in the UK and Malawi. Lalor M K, Sian F, Patricia G S, et al. Journal of Infectious Diseases, 211, 24(7): 实验设计 : 研究表明非洲马拉维的婴儿接种卡介苗后, 免疫效果弱于与英国的初生婴儿 因次, 采集两个国家接种卡介苗 3 个月以及 12 个月后的婴儿全血样本, 通过 Milliplex 多因子检测平台同时检测血样中的 42 种细胞因子, 对比不同细胞因子表达水平的差异 血清中 42 种不同蛋白因子的检测 : A, Proinflammatory cytokines; B, T helper 2, regulatory, and T cell activation cytokines 结果与意义 : 1: 在两个国家接种婴儿的血清样本中, 有 27 种细胞因子表达不同, 其中 7 种因子在英国接种卡介苗的婴儿表达量较高, 主要是 Th1 细胞相关的 ;2 种因子在马拉维接种婴儿表达量较高, 主要涉及不同的细胞因子种类, 如促炎症因子 IL17 调节 T 细胞 Th2 趋化因子 生长因子相关 2: 实验表明, 马拉维的婴儿会对卡介苗产生免疫反应, 但是细胞因子表达情况与英国婴儿接种后不同 两个地区的婴儿的免疫后有可能存在两种不同的免疫保护途径 3:Milliplex 多因子检测平台可以同时检测多种细胞因子的表达水平, 快速鉴定疫苗注射后的效果及免疫反应相关通路 疫苗研( 非洲 ) 两个国家的初生婴儿接种卡介苗后免疫保护的差异发比较英国和马拉维 48

50 药物研发49 药物研发 药效评估阿托伐他汀联合吸入性倍氯米松调节吸烟性哮喘的炎性唾液介质 Atorvastatin in combination with inhaled beclometasone modulates inflammatory sputum mediators imokers with asthma Thomson, N. C., et al. (215). "Atorvastatin in combination with inhaled beclometasone modulates inflammatory sputum mediators imokers with asthma." Pulm Pharmacol Ther 31: 1-8. 研究背景 : 明确阿托伐他汀单独或联合皮质类固醇在唾液细胞因子, 趋化因子和生长因子在哮喘发病机理作用, 及与 asthma control questionnaire (ACQ) 和 / 或 asthma quality of life questionnaire (AQLQ) 评分相关性 实验设计 : 39 例患有不同程度哮喘的吸烟唾液样本, 比较阿托伐他汀和安慰剂 (4 周 ), 然后吸入倍氯米松 (4 周 ) Milliplex 对唾液上清液中的 35 种因子检测 阿托伐他汀治疗, 安慰剂, 阿托伐他汀结合吸入型倍氯米松, 或单独倍氯米松治疗后的唾液样本因子浓度. 结果与意义 : 1: 单独吸入倍氯米松, 唾液因子浓度并不降低. 阿托伐他汀和安慰剂相比唾液 CCL7, IL-12p7, scd4l, FGF-2, CCL4, TGF-alpha and MMP-8 浓度显著降低, 当结合倍氯米松, 和单独 ICS 相比, 唾液 MMP-8, IL-1beta, IL-1, MMP-9, scd4l, FGF-2, IL-7, G-CSF 和 CCL7 浓度下降. 阿托伐他汀和吸入型皮质类固醇激素 (ICS) 中 ACQ 和 / 或 AQLQ 评分的升高与 G-CSF, IL-7, CCL2 和 CXCL8 的降低相关. 2: 在患有哮喘的吸烟人群中, 通过阿托伐他汀单独或联合吸入倍氯米松短期治疗能够降低唾液中对吸入皮质类固醇无反应的部分细胞因子, 趋化因子和生长因子的浓度

51 药物毒性评估 大环内酯类抗生素抑制慢性阻塞性肺病唾液细胞细胞因子和趋化因子 Macrolide antibiotics broadly and distinctively inhibit cytokine and chemokine production by COPD sputum cells in vitro Marjanović N, Bosnar M, Michielin F, et al. Macrolide antibiotics broadly and distinctively inhibit cytokine and chemokine production by COPD sputum cells in vitro[j]. Pharmacological Research, 211, 63(5): 研究背景 : 大环内酯类抗生素具有广泛抗炎活性对慢性阻塞性肺病 (COPD) 具有很好的治疗效果 明确其免疫调节活性 实验设计 : 从人 COPD 样本分离的细胞, 研究阿奇霉素, 克拉霉素, 红霉素和罗红霉素刺激炎症因子的产生 比较大环内酯类与其他 3 种抗炎化合物 : 皮质类固醇地塞米松,PDE4 抑制剂罗氟斯特和 p38 激酶抑制剂 SB2358 Median concentrations with IQR (pg/ml) ofinflammatory mediators spontaneously generated during an overnight incubation of cells isolated from COPD patients (N = 6). Analyte Median (IQR) Analyte Median (IQR) Table 4 Summary profile ofinhibitory effects (according to LSD test at 5%) of azithromycin (AZM), clarithromycin (CAM), erythromycin (ERM), roxithromycin (RXM) at 5 M or dexamethasone (DEX), roflumilast (ROF) and SB2358 (SB) at 1 M opontaneous production ofinflammatory mediators from COPD sputum cells. Analyte AZM CAM ERM RXM DEX ROF SB IL-1 IL-1 IL-1ra 8 (56 137) 449 ( ) 535 ( ) CCL2 CCL22 CXCL1 495 ( ) 15 (85 396) 482 ( ) IL ( ) CXCL5 672 ( ) IL (77 721) CXCL ( ) TNF- 533 ( ) CXCL1 212 (82 551) CCL2 168 (68 48) G-CSF 1269 ( ) CCL3 636 ( ) GM-CSF 384 (24 943) CCL5 157 (44 42) PAI-1 3 (22 47) IL-1 IL-1 IL NT + NT + + IL NT NT TNF CCL CCL CCL CCL CXCL CXCL CXCL G-CSF GM-CSF PAI NT NT ++: statistically significant inhibition 5%; +: statistically significant inhibition <5%; : statistically significant increase; : no statistically significant effect; NT=not tested. COPD 病人 (N= 6) 分离的细胞过夜培养自发产生的炎症介质的浓度 (Median concentrations with IQR, pg/ml) COPD 病人唾液细胞中,5μM 阿奇霉素 (AZM), 克拉霉素 (CAM), 红霉素 (ERM), 罗红霉素 (RXM) 或 1μM 地塞米松 (DEX), 罗氟斯特 (ROF) 和 SB2358 (SB) 对炎症介质自发产生的抑制作用 (LSD test at 5%) 结果与意义 : 1:3 种大环内酯类药物 ( 阿奇霉素, 克拉霉素和罗红霉素 ) 的作用下,IL-1β, IL-6, IL-1, TNF-α, CCL3, CCL5, CCL2, CCL22, CXCL1, CXCL5 和 G-CSF 浓度释放具有显著的降低 轻微抑制 IL-1,CXCL8,GM-CSF 和 PAI-1 的产生 红霉素具有较弱的活性 定性与定量检测显示大环内酯类和其他化合物相比具有更确定的免疫调节效应, 特别对趋化因子 (CCL3, CCL5, CCL2, CCL22 和 CXCL5), IL-1, G-CSF 和 PAI-1 的释放 2: 免疫调节因子的调节能进一步明确大环内酯类在 COPD 抗炎活性中的生物标志物 药物研发Table 3 5

52 妇产科研究51 妇产科研究 怀孕与非怀孕妇女子宫颈阴道分泌物免疫调节因子比较 Immunomodulatory factors in cervicovaginal secretions from pregnant and non-pregnant women: a cross-sectional study Immunomodulatory factors in cervicovaginal secretions from pregnant and non-pregnant women: a cross-sectional study. Walter J, Fraga L, Orin M J, et al. BMC Infectious Diseases, 211, 11 (4):1-7. 研究背景 : 孕妇由于未知原因会增加 HIV 感染风险 而黏膜免疫在 HIV 发病机理中的作用并不清楚 实验设计 : 用 Milliplex 多因子技术检测 21 例怀孕女性和 24 例非怀孕健康女性子宫颈阴道灌洗液 ( cervicovaginal lavages,cvl) 中 39 种免疫调节因子的浓度 发现怀孕与非怀孕妇女阴道分泌物中免疫调节因子区别, 指导后续研究 Figure 1 Scatter plot of CCL22 concentration in cervicovaginal lavages with gestational age among 21 pregnant and 24 nonpregnant women. Non-pregnant women were assigned a gestational age of weeks. 21 例怀孕和 24 例非怀孕女性子宫颈阴道 CCL22 浓度的散点图. 结果与意义 : 1:26 种免疫调节因子在至少一半数量的子宫颈阴道灌洗液 (CVL) 样本中被检测到 孕妇 CVL 样本中 CCL22 浓度比非孕妇低 3 倍 ( 29.6 pg/ml versus 89.7 pg/ml) CVL 中 CCL22 的浓度与胎龄负相关, 与年龄正相关 2: 怀孕和 CCL22 浓度降低相关 CCL22 在 HIV 传播中的作用需要进一步实验研究 3:Milliplex 多因子检测平台可以同时检测几十种免疫调节因子, 快速发现孕妇和非孕妇免疫调节因子表达水平的差异 指示和 HIV 传播可能相关的因子

53 五官科和皮肤科 干眼症患者泪液中细胞因子和趋化因子表达高低与临床症状相关性分析 Correlations between tear cytokines, chemokines, and soluble receptors and clinical severity of dry eye disease Correlations between tear cytokines, chemokines, and soluble receptors and clinical severity of dry eye disease. Na K S, Mok J W, Kim J Y, et al. [J]. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 212, 53(9): 实验设计 : 将 133 例病人和 7 例健康人群, 根据干眼症 (dry eye disease) 发病程度分为 4 组, 用 Milliplex 多因子检测平台对泪液中的细胞因子 / 趋化因子进行检测 不同程度的干眼病人和对照组泪液细胞因子表达水平 干眼病人的 IL-1b, IL-6, Il-16, IL-33, TGFα 和 G-CSF 表达水平显著升高 不同程度的干眼病人泪液细胞因子 IL-12 (p4), IFN-c, IL-17A 和 IL-4 的表达水平与对照组相比显著降低 结果与意义 : 1: 干眼症人群 IL-1b, IL-6, IL-16, IL-33, G-CSF, TGF-a,Fractalkine, MCP-1, MIP-1d, ENA-78, sil-1ri, sgp 13, sil-6r, segfr, stnfr2 细胞因子显著升高, 与干眼症临床严重性显著相关 2: 干眼症人群泪液中 15 种细胞因子升高,4 种细胞因子降低 3:IL-6 和 IL-1 b 水平的升高是干眼症病人最早期的表现 4: 通过多因子联合检测快速鉴定干眼症, 提高了鉴定的及时性和准确性 五官科和皮肤: 科眼科疾病研究 52

54 五官科和皮肤科53 皮肤科疾病高通量分析酒渣鼻患者泪液和血清中炎症因子表达水平 Determination of Tear and Serum Inflammatory Cytokines in Patients with Rosacea Using Multiplex Bead Technology Correlations between tear cytokines, chemokines, and soluble receptors and clinical severity of dry eye disease. Na K S, Mok J W, Kim J Y, et al. [J]. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 212, 53 (9): Determination of Tear and Serum Inflammatory Cytokines in Patients with Rosacea Using Multiplex Bead Technology. Pinar T Y, Nilgun A, Banu B, et al. Ocular Immunology & Inflammation, 213, 21(5): 实验设计 : 用 Milliplex 多因子技术检测 12 例酒渣鼻未伴发眼病,2 例酒渣鼻伴发眼病,22 例健康人群中泪液与血清中 IL-1a, IL-6, IL-8, IL-1, MCP-1,MIP-1a, EGF 和 VEGF 的表达水平 TABLE 2. Comparison of tear cytokine levels in rosacea patients with and without ocular involvement and control subjects. IL-1 α (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-6 (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-8 (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-1 (pg/ml) Mean SD Median (Range) MCP-1 (pg/ml) Mean SD Median (Range) MIP-1 α (pg/ml) Mean SD Median (Range) VEGF (pg/ml) Mean SD Median (Range) EGF (pg/ml) Mean SD Median (Range) Rosacea patients without ocular involvement (group 1) ( ) ( 48.29) ( ) ( ) ( ) ( 66.44) ( ) ( ) Rosacea patients with ocular involvement (group 2) ( 72.8) ( 15.37) ( ) ( 15.55) ( ) ( ) ( ) ( ) Healthy subjects (group 3) ( ) ( 66.53) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 不同酒渣鼻病人 ( 是否伴发眼部病变 ) 和对照组样本的泪液细胞因子表达水平的比较 TABLE 3. Comparison of serum cytokine levels in rosacea patients with and without ocular involvement and control subjects. IL-1 α (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-6 (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-8 (pg/ml) Mean SD Median (Range) IL-1 (pg/ml) Mean SD Median (Range) MCP-1 (pg/ml) Mean SD Median (Range) MIP-1 α (pg/ml) Mean SD Median (Range) VEGF (pg/ml) Mean SD Median (Range) EGF (pg/ml) Mean SD Median (Range) Rosacea patients without ocular involvement (group 1) ( 49.1) ( 17.35) ( 24.81) ( ) ( ) ( 43.33) ( ) ( ) Rosacea patients with ocular involvement (group 2) ( ) ( 51.86) ( 19.3) ( 27.82) ( ) ( 94.43) ( 24.19) ( ) Control subjects (group 3) ( 57.53) ( 23.96) ( 46.84) ( ) ( ) ( 42.86) ( ) ( 15.56) 不同酒渣鼻病人 ( 是否伴发眼部病变 ) 和对照组样本的血清细胞因子表达水平的比较 结果与意义 : 1: 疾病人群的泪液中 IL-1 和 VEGF 水平显著低于健康人群 ; 未伴发眼病的酒渣鼻患者血清中 IL-8 水平显著低于伴发眼病组 2: 眼泪分解时间 (Tear breakup time) 与 IL-1 正显著相关, 与 MCP-1 负相关 3: 泪液 IL-1( 抗炎因子 ) 水平降低导致炎性视角面 (ocular surface environment), 加剧炎症 后续增加伴发眼病的样本量确定细胞因子的作用 ρ NS α,β,δ NS α,β,δ NS α,β,δ.8 α.1 β NS δ NS α,β,δ NS α,β,δ.25 α.1 β < NS δ NS α,β,δ ρ NS α,β,δ NS α,β,δ.4 β NS α, δ NS α,β,δ NS α,β,δ NS α,β,δ NS α,b,δ NS α,β,δ (A) 眼泪 IL-1 浓度和眼泪分解时间的相关性. (B) 眼泪 MCP-1 浓度和眼泪分解时间的相关性.

55 系统医学 系统生物学方法被用来比较患有活性和休眠结核的患者与健康对照组所表达基因的转录谱 An interferon-inducible neutrophil-driven blood transcriptional signature in human tuberculosis Berry M P R, Graham C M, McNab F W, et al. An interferon-inducible neutrophil-driven blood transcriptional signature in human tuberculosis[j]. Nature, 21, 466(739): 实验设计 : Milliplex 技术检测血清样本的 63 种细胞因子 (cytokines), 趋化因子 (chemokines), 可溶性受体 (soluble receptors), 生长因子 (growth factors), 粘附分子 (adhesion molecules) 和急性期蛋白 (acute phase proteins) 的表达水平, 检测因子包括 MMP-9, CRP, serum amyloid A, EGF, eotaxin, FGF-2, Flt-3 ligand, fractalkine, G-CSF, GM-CSF, GRO, IFN-a2, IFN-c, IL-1, IL-12p4, IL-12p7, IL-13, IL-15, IL-17, IL-1a, IL-1b, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, CXCL1 (IP1), MCP-1, MCP-3, MIP-1 a, MIP-1b, PDGF-AA, PDGF-AB/BB, RANTES, soluble CD4 ligand, soluble IL-2RA, TGF-a, TNF-a, VEGF, MIF, soluble Fas, soluble Fas ligand, tpai-1, soluble ICAM-1, soluble VCAM-1, soluble CD3, soluble gp13, soluble IL-1RII, soluble IL-6R, soluble RAGE, soluble TNF-RI, soluble TNF-RII, IL-16, TGF-b1, TGF-b2 and TGF-b3. Interferoignalling a Cytoplasm Nucleus b Cytokine/growth factor Enzyme Kinase Peptidase Phosphatase Transcription regulator Transmembrane receptor Transporter Unknown Relations Interferon-inducible gene expression in active TB. 结果与意义 : 1: 筛选出血液中 393 种肺结核病的转录物 2: 鉴定出 86 种肺结核标志物以和其它感染疾病进行区分 Over-represented transcripts IFN inducible gene expression is dominant in the TB transcriptional signature. c, Milliplex 技术检测 12 例健康对照和 13 例 active TB 病人的 interferon-α2, and d, IFN-γ 和 e, CXCL1 (IP1) 的血清水平. 系统医学Complex 54

56 系统医学55 Milliplex 在健康人群中应用 Milliplex 技术对于健康人群和老年人群血清细胞因子检测 Serum cytokine profiles in healthy young and elderly population assessed using multiplexed bead-based immunoassays Kim, H. O., et al. (211). "Serum cytokine profiles in healthy young and elderly population assessed using multiplexed bead-based immunoassays." J Transl Med 9: 113. 研究背景 : 脂代谢和细胞因子是免疫细胞功能和分化的关键因子, 这些因子的失调与多种疾病相关 实验设计 : Milliplex 技术检测 55 例 ( age >65) 和 55 例 ( age <45) 健康人群血清中 22 种细胞因子的表达水平 Table 1. Correlation between age and serum cytokine concentration. Day Day 7 ρ R 2 p value ρ R 2 p value PDGF-BB E E IL-1b E E-2.52 IL-1Rα E E-4.94 IL-2 not applicable not applicable IL E E-3.63 IL E E IL E E IL E E IL E E IL E E IL E E-4.85 IL-12p E E IL E E IL-15 not applicable not applicable IL E E Eotaxin.2 4.5E-2.156* E-2.224* FGF-b E E-2.7 G-CSF E E GM-CSF not applicable not applicable IFN-γ E E IP E E MCP E-2.399* E-2.223* MIP-1α E E-2.62 MIP-1β E E RANTES E E TNF-α E E-2.16 VEGF.5 1.5E E Pvalue with * are significant (P<.5) In bold are highlighted spearman correlation that are different between Day and Day 7 Results shown are ρ, R 2 values and p values calculated from Spearman correlation and linear regression for both Day and Day 7. doi: /journal.pone.7691.t1 不同年龄样本人群的免疫细胞因子平均基础临床值 Figure 1 Simple correlation between age and serum biomarkers (scd4l, G-CSF, GM-CSF, and TGF- α in pg/ml). The axis is age. The Y axis consists oflog transformed scd4l, G-CSF, GM-CSF and TGF-a. Simple correlation analysis was performed between age and the cytokines. Age showed significant positive correlation with log transformed scd4l (R =.257, P =.7) and log transformed TGF-α (R =.232, P =.15), whereas age showed significant negative correlation with log transformed G-CSF (R = -.232, P =.16) and log transformed GM-CSF (R = -.249, P =.9). 年龄和血清标志物 (scd4l, G-CSF, GM-CSF 和 TGF-a in pg/ml) 的相关性 结果与意义 : 1: 老年人群 scd4l 和 TGF- a 细胞因子水平显著升高, 老年人群 G-CSF, GM-CSF 和 MCP-1 细胞因子表达水平显著降低 2: 集中检测年龄相关显著变化的细胞因子及其他血清标志物及他们在年龄相关疾病形成中的潜在作用 小 M 有话说 使用 Milliplex 技术不仅能够对不同类型的疾病样本进行检测, 同样选择健康人群样本也可以进行分析, 本研究针对不同年龄健康人群血清细胞因子表达水平的分析, 对于一些疾病的进展具有潜在预测价值, 能够作为疾病进展研究的血清标志物

57 系统医学建立正常人群免疫炎症因子的参考值 Baseline Levels and Temporal Stability of 27 Multiplexed Serum Cytokine Concentrations in Healthy Subjects Biancotto, A., et al. (213). "Baseline levels and temporal stability of 27 multiplexed serum cytokine concentrations in healthy subjects." PLoS One 8(12): e7691. 研究背景 : 细胞因子是检测免疫系统重要的标志物 实验设计 : Milliplex 技术检测 144 例健康人群血清样本 27 种细胞因子表达水平 Figure 1. Cytokine concentrations in bridge sample. Results show mean concentrations of analytes for the bridge sample assayed in 1 plates with the bars representing the standard errors of the mean. doi: /journal.pone.7691.g1 bridge 样本细胞因子浓度. Figure 3. Concentrations for three cytokines ierum specimens measured at Day and Day 7 for all 144 healthy volunteers. Serum cytokine concentrations were measured oamples at day and day 7. Each data point corresponds to a matched measurement at Day (black circle) and Day 7 (black square). These plots demonstrate 3 of the 27 analytes and display RANTES (A), IL-7 (B), IL-9 (C) concentrations. doi: /journal.pone.7691.g3 144 例健康血清样本在第 天和第 7 天的 3 种细胞因子浓度 结果与意义 : 1: 选择两个时间点 ( 第 天和第 7 天 ) 进行分析, 显示 3 种细胞因子 (IL-2, IL-15 和 GM-CSF) 低于检测下限,5 种细胞因子 (RANTES, MCP-1, VEGF, MIP-1 β 和 PDGF-BB) 血清浓度在第 天和第 7 天具有显著性区别 2: 提供正常人血清样本细胞因子浓度能够作为检测基线或标准 小 M 有话说 Figure 2. Mean concentrations for cytokines ierum samples at Day and Day 7. Serum cytokine concentrations were measured on matched samples at Day and Day 7. Paired T-tests were performed to measure the significance of the difference of the mean between Day and Day 7. Cytokines for which %CV is higher than 2% are shown with *. doi: /journal.pone.7691.g2 第 天和第 7 天血清样本的平均细胞因子浓度 当前多种疾病, 包括自身免疫性, 过敏性, 肿瘤, 心血管疾病, 糖尿病, 退行性疾病, 感染性疾病等均认为和免疫与炎症反应具有密切关系 目前已建立了正常人群的生化和生理指标参考值, 能够对于一些疾病进行很好的预测 如果进一步对正常人群进行免疫指标的大量检测建立健康人群免疫蛋白因子参考值也是具有非常重要的意义和价值, 能够对当前多种重要疾病尤其是慢性病和老年病具有潜在的预测价值 而 Milliplex 高通量多蛋白因子分析技术中每例样本仅需微量体积便能获得多达 4 种免疫指标数值, 在建立正常人群免疫指标参考值的方面具有非常明显的优势和应用价值 56

58 文献列表 作者 author 文章题目 title 期刊 journal 影响因子 IF 关键词 key words 学科 / 科室试剂盒 kit Ravimohan, S., et al. Immunological profiling of tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome and non-immune reconstitution inflammatory Lancet Infect Dis 15(4): HIV,TB 结核病 病原 : 传染病 HIV,TB 结核 syndrome death in HIV-infected adults with pulmonary tuberculosis starting antiretroviral therapy: a prospective observational cohort study. Hong M, Sandalova E, Low D, et al. Hao X P, Lucero C M, Turkbey B, et al. Pegu A, Asokan M, Wu L, et al. Lai R P J, Meintjes G, Wilkinson K A, et al. Trained immunity in newborn infants of HBV-infected mothers[j]. Experimental colitis in SIV-uninfected rhesus macaques recapitulates important features of pathogenic SIV infection[j]. Activation and lysis of human CD4 cells latently infected with HIV-1[J]. HIV-tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome is characterized by Toll-like receptor and inflammasome Nature communications, 215, 6: 6588 Nature communications, 215, 6:82 Nature communications, 215, 6:8447 Nature communications, 215, 6: HBV 感染的母亲 细胞因子试剂盒 细胞因子试剂盒 HIV, 结核 TLR 病原 / 免疫 / 传染病病原 :SIV, 非人灵长类病原 :SIV, 非人灵长类病原 : 病毒 / 细菌 ( 传染病 ) HCYTOMAG-63K PRCYTOMAG-4K PRCYTOMAG-41K HCYTOMAG-62K signalling[j]. Berry MP, O'Garra A., et al An interferon-inducible neutrophil-driven blood transcriptional signature in human tuberculosis. Nature. 21; 466(739): 系统医学 / 结核杆菌 病原 : 细菌 ( 传染病 ) Human Cytokine Panel Publications, Human CVD Panel Ndhlovu ZM, Kaufmann DE., et al. High-dimensional immunomonitoring models of HIV-1-specific CD8 T-cell responses accurately identify subjects achieving spontaneous viral control. Blood. 213; 121(5): HIV ( 病毒 - 传染病 ) 病原 : 病毒 ( 传染病 ) High Sensitivity Human Cytokine Milliplex Samstein R M, Josefowicz Extrathymic generation of regulatory T cells in placental mammals S Z, Aaron A, et al. mitigates maternal-fetal conflict.[j]. Cell, 212, 15(1): Mahabeleshwar G, Kawanami D, Sharma N, et al. Pestal K, Funk C C, Snyder J M, et al. The Myeloid Transcription Factor KLF2 Regulates the Host Response to Polymicrobial Infection and Endotoxic Shock[J]. Isoforms of RNA-Editing Enzyme ADAR1 Independently Control Nucleic Acid Sensor MDA5-Driven Autoimmunity and Multi-organ Development[J]. Immunity, 211, 34(5): Immunity, 215, 43(5): 小鼠, 细胞因子 自身免疫, 器官发育 免疫 : 先天性免疫发育 / 免疫 MCYTOMAG-72K Zaiss M M, Rapin A, Lebon L, et al. Kobayashi T, Glatz M, Horiuchi K, et al. Fitzpatrick AM, Higgins M, Holguin F, Brown LA, The Intestinal Microbiota Contributes to the Ability of Helminths to Modulate Allergic Inflammation[J]. Dysbiosis and Staphyloccus aureus Colonization Drives Inflammation in Atopic Dermatitis[J]. The molecular phenotype of severe asthma in children. Immunity, : Immunity, 215, 42(4): J Allergy Clin Immunol 细胞因子试剂盒, 小鼠过敏性皮肤炎, 细胞因子哮喘 过敏性疾病 过敏性疾病 : 过敏性皮肤炎过敏 : 变态反应科 MCYTOMAG-71K MCYTOMAG-73K High Sensitivity Human Cytokine Teague WG. 21; 125(4): e18. Milliplex Fitzpatrick A M, Melinda H, Fernando H, et al. Kearley J, Silver J S, Sanden C, et al. The molecular phenotype of severe asthma in children[j]. Cigarette Smoke Silences Innate Lymphoid Cell Function and Facilitates an Exacerbated Type I Interleukin-33-Dependent Response to Infection[J]. Journal of Allergy & Clinical Immunology, 21, 125(4): e18. Immunity, 215, 42(3): 支气管肺泡灌洗液, 肺泡巨噬细胞裂解液细胞因子试剂盒 过敏性疾病 : 哮喘, 儿童 免疫 : 香烟 ( 公卫 ) HCYTOMAG-6K Laidlaw B J, Cui W, Production of IL-1 by CD4+ regulatory T cells during the resolution of 2.4 CD4 CD8 IL-1 免疫 : MCYTOMAG-74K Amezquita R A, et al. Vasanthakumar A, Moro K, Xin A, et al. infection promotes the maturation of memory CD8+ T cells[j]. The transcriptional regulators IRF4, BATF and IL-33 orchestrate development and maintenance of adipose tissue-resident regulatory T Nature immunology, 215, 16(8): Nature immunology, 脂肪组织, 小鼠 Treg 细胞免疫 : Treg 细胞 MCYTOMAG-75K cells[j]. Brentjens R J, Rivière I, Park J H, et al. Safety and persistence of adoptively transferred autologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemotherapy refractory B-cell Blood, 211, 细胞治疗 肿瘤免疫 : 细胞治疗 leukemias[j]. 118(18): Pegram H J, Lee J C, Hayman E G, et al. Caruana I, Savoldo B, Hoyos V, et al. Brentjens R J, Davila M L, Isabelle R, et al.. Tumor-targeted T cells modified to secrete IL-12 eradicate systemic tumors without need for prior conditioning[j]. Heparanase promotes tumor infiltration and antitumor activity of CAR-redirected T lymphocytes[j]. CD19-targeted T cells rapidly induce molecular remissions in adults with chemotherapy-refractory acute lymphoblastic leukemia.[j]. Blood, 212, 119(18): Nature medicine, 215, 21(5): Science Translational 细胞治疗 细胞治疗 细胞治疗 肿瘤免疫 : 细胞治疗肿瘤免疫 : 细胞治疗肿瘤免疫 : 细胞治疗 Medicine, 213, Davila M L, Isabelle R, Xiuyan W, et al. Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia.[j]. 5(177): Science Translational 细胞治疗 肿瘤免疫 : 细胞治疗 Medicine, 214, Chmielewski M, Hahn O, Rappl G, et al. Hye A, Lovestone S., et al. T cells that target carcinoembryonic antigen eradicate orthotopic pancreatic carcinomas without inducing autoimmune colitis in mice[j]. Plasma proteins predict conversion to dementia from prodromal disease. 6(224):224ra25-224ra25. Gastroenterology, 212, 143(4): e2. Alzheimers Dement. 214; 细胞治疗 前驱症状的疾病 肿瘤免疫 : 细胞治疗神经 : 前驱症状 Human Kidney Injury 1(6): e2 Panel,Human Neurodegenerative Ghamari-Langroudi M, G-protein-independent coupling of MC4R to Kir7. 1 in hypothalamic 代谢类试剂盒 神经 Panel Publications Digby G J, Sebag J A, et al. neurons[j]. Nature, : MMHMAG-44K Roper L K, Briguglio J S, Evans C S, et al. Sex-specific regulation of follicle-stimulating hormone secretion by synaptotagmin 9[J]. Nature communications, 215, 6: 代谢类试剂盒 神经 : 垂体前叶, 促卵泡激素 MMHMAG-45K 57

59 作者 author 文章题目 title 期刊 journal 影响因子 IF 关键词 key words 学科 / 科室试剂盒 kit Monteiro-Sepulveda M, Touch S, Mendes-Sá C, et al. Hall K D, Bemis T, Brychta R, et al. Dalmas E, Toubal A, Alzaid F, et al. Julian Carretero, William Y. Kim,et al. Gen K, Maha A, Bochner B S, et al. Ariës IM, Jerchel IS, van den Dungen RE, van den Berk LC, Boer JM, Horstmann MA, Escherich G, Pieters R, den Boer ML. Miethke AG, Saxena V, Shivakumar P, Sabla GE, Simmons J, Chougnet CA. Lu W, You R, Yuan X, et al. Hanrahan EO, Lin HY, Kim ES, Yan S, Du DZ, McKee KS, Tran HT, Lee JJ, Ryan AJ, Langmuir P, Johnson BE, Heymach JV. Wenzel L, Osann K, Hsieh S, Tucker JA, Monk BJ, Nelson EL. Younes A, Sureda A, Ben-Yehuda D, et al. Jejunal T Cell Inflammation in Human Obesity Correlates with Decreased Enterocyte Insulin Signaling[J]. Calorie for Calorie, Dietary Fat Restriction Results in More Body Fat Loss than Carbohydrate Restriction in People with Obesity[J]. Irf5 deficiency in macrophages promotes beneficial adipose tissue expansion and insuliensitivity during obesity[j]. Integrative genomic and proteomic analyses identify targets for Lkb1-deficient metastatic lung tumors. Mechanism of Siglec-8 mediated cell death in IL-5 activated eosinophils: Role for reactive oxygepecies enhanced MEK/ERK activation[j]. EMP1, a Novel Poor Prognostic Factor In Pediatric Leukemia Regulates Prednisolone Resistance, Cellular Proliferation, Migration and Adhesion Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia. The microrna mir-22 inhibits the histone deacetylase HDAC4 to promote TH17 cell-dependent emphysema[j]. Distinct patterns of cytokine and angiogenic factor modulation and markers of benefit for vandetanib and/or chemotherapy in patients with non-small-cell lung cancer. Psychosocial telephone counseling for survivors of cervical cancer: results of a randomized biobehavioral trial. Panobinostat in patients with relapsed/refractory Hodgkin's lymphoma after autologous stem-cell transplantation: results of a phase II study[j]. Cell metabolism, 215, 22(1): Cell metabolism, 215, 22(3): Nature medicine, 215, 21: Cancer Cell. 21;17(6): Journal of Allergy & Clinical Immunology, 213, 132(2): Blood 213; 122(21): 616 J Hepatol. 21; 52(5): Nature immunology, : J Clin Oncol. 21; 28(2): J Clin Oncol. 215; 33(1): Journal of Clinical Oncology, 212, 3(18): 肠上皮细胞 代谢类试剂盒 肥胖, 小鼠模型 肺癌 信号通路, 磷酸化作用 小儿白血病, 细胞迁移, 粘附 肝脏病 肺气肿 非小细胞肺癌 宫颈癌 肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma 代谢 / 内科 / 内分泌 肥胖 / 代谢 肥胖 / 代谢 信号通路 : 肺癌信号通路, 细胞死亡 信号通路 : 肿瘤, 小儿白血病 消化 消化内科 : 呼吸科, 肺气肿肿瘤 : 肺癌, 呼吸科 肿瘤 : 宫颈癌, 妇科 肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma HTH17MAG-14K HMMHMAG-34K MCYTOMAG-7K Human Cytokine Panel HCYTOMAG-61K Human CVD Panel Younes A, Romaguera J, Fanale M, et al. P Shiels, M. S., et al. Chaput N, Louafi S, Bardier A, Charlotte F, Vaillant JC, Ménégaux F, Rosenzwajg M, Lemoine F, Klatzmann D, Taieb J. Gunter M J, Wang T, Cushman M, et al. Blanchard C, Stucke E M, Rodriguez-Jimenez B, et al. Hoffman LM, Foreman NK., et al. Blonska M, Zhu Y, Chuang H H, et al. Lim CC, Banning AP., et al hase I study of a novel oral Janus kinase 2 inhibitor, SB1518, in patients with relapsed lymphoma: evidence of clinical and biologic activity in multiple lymphoma subtypes[j]. Circulating inflammation markers and prospective risk for lung cancer. Identification of CD8+CD25+Foxp3+ suppressive T cells in colorectal cancer tissue. Circulating Adipokines and Inflammatory Markers and Postmenopausal Breast Cancer Risk[J]. A striking local esophageal cytokine expression profile in eosinophilic esophagitis[j]. Molecular sub-group-specific immunophenotypic changes are associated with outcome in recurrent posterior fossa ependymoma. Jun-regulated genes promote interaction of diffuse large B-cell lymphoma with the microenvironment[j]. With the "universal definition," measurement of creatine kinase-myocardial band rather than troponin allows more accurate diagnosis of periprocedural necrosis and infarction after coronary intervention. Journal of Clinical Oncology, 212, 3(33): J Natl Cancer Inst 15(24): Gut. 29; 58(4):52-9. Journal of the National Cancer Institute, 215, 17(9): djv169. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 211, 127(1): e7. Acta Neuropathol. 213; 127(5): Blood, 215, 125(6): J Am Coll Cardiol. 211; 57(6): 肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma 肺癌 结直肠癌 肿瘤 : 乳腺癌 Breast cancer 肿瘤 : 食管癌 Esophagus cancer: 嗜酸细胞性食管炎室管膜瘤 肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma 心血管疾病 肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma 肿瘤 : 肺癌, 呼吸科肿瘤 : 结直肠癌, 消化科 肿瘤 : 乳腺癌 Breast cancer 肿瘤 : 食管癌 Esophagus cancer: 嗜酸细胞性食管炎肿瘤 : 室管膜瘤, 神经肿瘤 : 淋巴瘤 Lymphoma 心血管 Human Cytokine Panel High Sensitivity Human Cytokine Milliplex Human CVD Panel Shiels MS, Chaturvedi AK., et al. Miller W P, Srinivasan S, Panoskaltsis-Mortari A, et al. Cigarette Smoking and Variations in Systemic Immune and Inflammation Markers GVHD after haploidentical transplantation: a novel, MHC-defined rhesus macaque model identifies CD28 CD8+ T cells as a reservoir of breakthrough T-cell proliferation during costimulation blockade and sirolimus-based immunosuppression[j]. JNCI J Natl Cancer Inst (214) 16(11): dju294 doi:1.193/jnci/dju294 Blood, 21, 116(24): 吸烟, 细胞因子 CD8 T 细胞, 移植排斥 公共卫生, 吸烟 移植科 58

60 根据实验需要选择最适合的蛋白平台 Flexibility and sensitivity: our platforms fit your purpose. Protein Detection Platforms ELISA Luminex platform Fit for Purpose Quantitative Sensitivity Plate reader compatibility Most widely used Multiplex detection Flexible platform Sample Volume Dynamic Range Multiplex Capability Custom Assay Support Yes pg 5-1 µl Yes Yes pg ~25 µl Yes Gyrolab workstation Fully automated High precision Yes pg < 5 µl Yes Singulex Erenna system Ultrasensitivity High performance Yes fg 5-1 µl Yes Good Performance Strong Performance Superior Performance Not recommended Recommended GyroMark HT Assays: 高通量, 仅需 1ul 样本量, 实现 nano 级检测 Kit Species Catalog No. Clusterin Rat GYRCLU-37K Cystatin C Rat GYRCYSC-48K GLP-1 Active Multi-species GYGLP1A-35K GLP-1 Total Multi-species GYGLP1T-36K Glucagon Multi-species coming soon! Insulin Human GYHINS-14K Insulin Rat/Mouse GYRMI-13K KIM-1 Rat GYRKIM1-2K NGAL/Lipocalin-2 Rat GYRNGAL-5K -2 Microglobulin Rat GYRB2M-49K Description Species Status IL-6 Human Custom TNF Human Custom IL-6 Mouse Custom TNF Mouse Custom 试剂盒定制服务请联系 :

61 ELISA 和 RIA: 目标蛋白定量, 保证数据准确性和批次一致性 Neuroscience: Neuropeptide & Neurodegenerative ELISA Kits Get a complete picture of the complex, interconnected nervous system functions and dysfunctions with reliable quantification of biomarkers. Trust Merck Millipore s neuropeptide and neurodegenerative ELISA kits to precisely quantify soluble biomarkers iera and lysates. Neuroscience Description -Synuclein Species Human, Mouse, Rat Standard Curve Range Sensitivity Sample Volume Cat. No. 3 6 ng/ml 3 ng/ml 1 µl NS4 Amyloid, 1-4 Human 16 5 pg/ml 4 pg/ml 5 µl EZHS4 Amyloid, 1-42 Human 16 5 pg/ml 5 pg/ml 5 µl EZHS42 Amyloid, Set Human Contains 1 each of EZHS4 and EZHS42 EZHS-SET Amyloid (Brain), Human 16 5 pg/ml 4 pg/ml 5 µl EZBRAIN4 1-4 Amyloid (Brain), 1-42 Human 16 5 pg/ml 5 pg/ml 5 µl EZBRAIN42 Amyloid (Brain), Set Human Contains 1 each of EZBRAIN4 and EZBRAIN42 EZBRAIN-SET BDNF Human, Rat pg/ml 7.8 pg/ml 5 µl CYT36 (Brain-Derived Neurotrophic Factor) GFAP (Glial Human, Mouse, ng/ml 1.5 ng/ml 1 µl NS83 Fibrillary Acidic Protein) Rat NGF (Nerve Growth Mouse, Rat 1 1 pg/ml 1-15 pg/ml 5 µl CYT34 Factor) NPY Human 5-1 pg/ml 2 pg /ml 5 µl EZHNPY-25K (Neuropeptide Y) NPY Mouse, Rat.1-2 ng/ml.4 ng/ml 2 µl EZRMNPY-27K (Neuropeptide Y) PEDF (Pigment Human ng/ml.9 ng/ml 5 µl CYT42 Epithelium-Derived Factor) Phosphorylated Multi-species ng/ml.585 ng/ml 1-1 µl NS17 Neurofilament, (pnf-h) Sandwich S1B Human pg/ml 1.3 pg/ml 5 µl EZHS1B-33K 6

62 Metabolic/Endocrine ELISAs Get a complete picture of metabolism and endocrinology with sensitive, specific and reliable quantitation of circulating biomarkers. Our broad range of ELISA kits can help elucidate therapeutic mechanisms of action, reveal the possibility for early diagnosis of disease, predict toxicity, and more, particularly for studies of metabolic disease. ELISAs for Circulating Metabolism and Endocrine Biomarkers Description Species Standard Curve Range Sensitivity Sample Volume Cat. No. Bulk Packaging Cat. No.* Adiponectin Human ng/ml.2 ng/ml 1 µl EZHADP-61K EZHADP-61BK Adiponectin Mouse 1 5 ng/ml.2 ng/ml 1 µl EZMADP-6K EZMADP-6BK Adiponectin Rat ng/ml.4 ng/ml 1 µl EZRADP-62K Amylin (active) Human 1 1 pm.7 pm 5 µl EZHA-52K EZHA-52BK C-Peptide Human.2 2 ng/ml.5 ng/ml 1 µl EZHCP-2K EZHCP-2BK C-Peptide Canine.2-1 ng/ml.24 ng/ml 25 µl EZCCP-47K EZCCP-47BK C-Peptide 2 Mouse, Rat pm 15. pm 2 µl EZRMCP2-21K FGF-21 Human pg/ml 1. pg/ml 5 µl EZHFGF21-19K FGF-21 Mouse, Rat , pg/ml 1. pg/ml 1 µl EZRMFGF21-26K FGF-23 Human pg/ml 3.5 pg/ml 5 µl EZHFGF23-32K EZHFGF23-32BK FGF-23 Mouse ng/ml.69 pg/ml 2 µl EZMFGF23-43K FGF-23 Rat.82-2 ng/ml.5 ng/ml 5 µl EZRFGF23-42K Ghrelin (active) Human 25 2 pg/ml 15. pg/ml 2 µl EZGRA-88K EZGRA-88BK Ghrelin (active) Mouse, Rat 25 2 pg/ml 8. pg/ml 2 µl EZRGRA-9K Ghrelin (total) Human 1 5 pg/ml 5. pg/ml 2 µl EZGRT-89K EZGRT-89BK Ghrelin (total) Mouse, Rat.1 1 ng/ml.4 ng/ml 2 µl EZRGRT-91K GIP (total) Human pg/ml 4.2 pg/ml 2 µl EZHGIP-54K EZHGIP-54BK GIP (total) Mouse, Rat pg/ml 4.2 pg/ml 1 µl EZRMGIP-55K EZRMGIP-55BK GLP-1 (active) Multi-species 2 1 pm 1. pm 1 µl EGLP-35K EGLP-35BK GLP-1 High Sensitivity (active) Multi-species See data sheet.14 pm 5 µl EZGLPHS-35K EZGLPHS-35BK GLP-1 (total) Multi-species pm 1. pm 2-5 µl EZGLP1T-36K EZGLP1T-36BK GLP-2 Multi-species 1-64 ng/ml.3 ng/ml 5 µl EZGLP2-37K * Bulk packaging now available oelect kits more environmentally friendly and saves space (1 kit equivalent). Please consider using the GLP-1 High Sensitivity Assay, EZGLPHS-35K Preferred assay for measuring GLP-1 (active) Chemiluminescent assay 61

63 ELISAs for Circulating Metabolism and Endocrine Biomarkers (continued) Description Glucagon Species Human, Mouse, Rat Standard Sample Bulk Packaging Curve Range Sensitivity Volume Cat. No. Cat. No.*.2-2 ng/ml.3 ng/ml 15-3 µl EZGLU-3K EZGLU-3BK Growth Mouse, Rat.7 5 ng/ml.7 ng/ml 1 µl EZRMGH-45K EZRMGH-45BK Hormone Insulin Human 2 2 µu/ml 1. µu/ml 2 µl EZHI-14K EZHI-14BK Insulin Rat, Mouse.2 1 ng/ml.1 ng/ml 1 µl EZRMI-13K EZRMI-13BK Insulin (Animal Human 2 2 µu/ml.85 µu/m 2 µl EZHIASF-14K serum free) Leptin Canine.78 5 ng/ml.21 ng/ml 2 µl EZCL-31K Leptin Mouse.2 3 ng/ml.5 ng/ml 1 µl EZML-82K EZML-82BK Leptin Rat.2 3 ng/ml.8 ng/ml 1 µl EZRL-83K EZRL-83BK Leptin "Dual Human.5 1 ng/ml.2 ng/ml 25 µl EZHL-8SK EZHL-8BK Range" Omentin-1 Human 2-2 ng.ml.23 ng/ml 2 µl EZHØMNTN1-29K Pancreatic Human pg/ml 12.3 pg/ml 5 µl EZHPP-4K EZHPP-4BK Polypeptide Procollagen Type Human lot dependent 3. ng/ml 5 µl EZPIIANP-53K IIA N-Propeptide (PIIANP) Proinsulin (total) Human 2 2 pm.5 pm 2 µl EZHPI-15K EZHPI-15BK PYY (total) Human 1 2 pg/ml 6.5 pg/ml 2 µl EZHPYYT66K RBP4 Human.14 1 ng/ml.7 ng/ml 1 µl EZHRBP4-18K Resistin Human.16 5 ng/ml.2 ng/ml 2 µl EZHR-95K EZHR-95BK SAA-3 Mouse.78-5 µg/ml.78 µg/ml 1 µl EZMSAA3-12K 62

64 Cytokine / Chemokine ELISA Kits Cytokines are soluble proteins and peptides that modulate activities of cells and tissues, under both normal and pathological conditions. Merck Millipore s high-quality, cost-effective cytokine/chemokine ELISAs provide consistent and reliable measurements for your studies of inflammation, immune response, metabolism, neurological disorders and more. ELISAs for Circulating Cytokines Description Species Cat. No. CRP Human CYT298 CRP Rat CYT294 IFN Human EZHIFNG IFN Mouse EZMIFNG IL-1 Human EZHIL1B IL-2 Human EZHIL2 IL-2 Mouse EZMIL2 IL-4 Human EZHIL4 IL-4 Mouse EZMIL4 IL-6 Human EZHIL6 IL-6 Mouse EZMIL6 Cell Signaling ELISAs STAR (Signal Transduction Assay Reaction) ELISA kits are a fast, sensitive method to for measuring relative levels of total and phosphorylated signaling proteins with phospho-specific antibodies. Easily quantitate the phosphorylatiotates of key signaling proteins, second messengers transmitting intracellular signals and apoptosis pathway proteins using these kits in less than five hours with minimal hands-on time. STAR ELISAs Description Cat. No. camp HTS (5X) camp HTS ERK 1/ Phospho-Akt (Ser473) Phospho-EGFR (Tyr1173) Phospho-ERK1/2 (T183/Y187) Phospho-I B (Ser32) Description Species Cat. No. IL-6 Rat EZRIL6 IL-8 Human EZHIL8 IL-1 Human EZHIL1 IL-1 Mouse EZMIL1 IL-12(p7) Human EZHIL12 IL-13 Human EZHIL13 IL-15 Human EZHIL15 IL-17A Rat EZRIL17A IL-17F Mouse EZMIL17F TNF- Human EZHTNFA TNF- Mouse EZMTNFA TNF- Rat EZRTNFA Extracellular Matrix (ECM) Gain deeper insights into cell adhesion, migration, differentiation, invasion and survival by quantitating circulating ECM proteins using our sensitive, specific and reliable ECM ELISA kits. ECMs Description Species Cat. No. Quantimatrix Fibronectin Human ECM3 Quantimatrix Laminin Human ECM31 E-Selectin Human ECM33 ICAM-1 Human ECM335 VCAM-1 Human ECM34 SCD26 Human ECM345 MMP-2 Human ECM492 MMP-9 Human ECM494 TIMP-1 Human ECM496 TIMP-2 Human ECM498 63

65 Radioimmunoassays (RIAs) RIAs have long been considered a valuable, economical and accurate way to measure protein concentration. However, as many researchers move away from using radioactive material, we would like to recommend that you consider using our ELISA or MILLIPLEX kits for you research needs. RIAs Description Species Standard Curve Range Sensitivity Sample Volume Cat. No. Adiponectin Human lot dependent 1 ng/ml 5 µl HADP-61HK C-Peptide Canine ng/ml.15 ng/ml 5 µl CCP-24HK C-Peptide Human.1 5 ng/ml.1 ng/ml 5 µl HCP-2K Ghrelin (active) Human lot dependent 7.8 pg/ml 5 µl GHRA-88HK Ghrelin (total) Human lot dependent 93 pg/ml 5 µl GHRT-89HK GLP-1 (active) Multi-species 1 5 pm 3 pm 3 µl GLP1A-35HK GLP-1 (total) Multi-species 1 1 pm 3 pm 3 µl GLP1T-36HK Glucagon Multi-species 2 4 pg/ml 2 pg/ml 5 µl GL-32K Insulin Porcine 2 2 µu/ml 2 µu/ml 5 µl PI-12K Insulin Rat.1 1 ng/ml.1 ng/ml 5 µl RI-13K Insulin LisPro Multi-species µu/ml 2.5 µu/ml 1 µl LPI-16K Insulin (sensitive) Rat.2 1 ng/ml.2 ng/ml 5 µl SRI-13K Insulin Specific Human 2-2 µu/ml 2 µu/ml 5 µl HI-14K Leptin Human.5 1 ng/ml.5 ng/ml 5-1 µl HL-81K Leptin Multi-species 1 5 ng/ml 1 ng/ml 5 µl XL-85K Leptin (sensitive) Human.5 1 ng/ml.5 ng/ml 5 µl SHL-81K Proinsulin Human 2 1 pm 2 pm 1-2 µl HPI-15K PYY Mouse, Rat lot dependent 15.6 pg/ml (78.1 pg/ml) 1 µl (2 µl) RMPYY-68HK PYY (3-36) Human lot dependent 2 pg/ml <1 µl PYY-67HK PYY (total) Human lot dependent 1 pg/ml <1 µl PYYT-66HK 64

66 Erenna 单分子免疫检测平台 生物标志物检测突破性技术, 灵敏度高达到 ELISA 的 1 倍 Erenna 单分子免疫检测技术是蛋白生物标志物检测领域的突破性新技术 利用激光聚焦于爱里斑中单个荧光标记分子, 人类首次实现了在单分子水平对蛋白进行计量, 并造就了 1 倍于 ELISA 技术的超高检测灵敏度 Erenna 单分子检测技术具备宽至 4 个 log 的大动态检测范围, 可根据靶标丰度和成本灵活选择实验方案, 便于自行开发检测试剂盒, 接近于 ELISA 的易用性等特征 该技术已被广泛应用于多种疾病生物标志物的检测, 包括心血管疾病, 炎症, 糖尿病, 神经疾病, 癌症等等, 使研究者对生物标志物的应用和认识达到了全新的高度 更重要的是, 针对创新性生物标志物的研究,Erenna 免疫检测系统提供工具, 帮助研究者便捷地自行开发和优化检测试剂盒, 实现全新生物标志物的高效率检测 默克的 Erenna 仪器平台 试剂盒以及专家定制化服务为疾病和生物标志物研究提供三位一体的研究工具, 必将加速和助力转化医学研究 65

67 Erenna 单分子检测技术的主要特点 : 1. 突破性的超高检测灵敏度 Erenna 单分子检测技术与 ELISA 操作一样简便, 但灵敏度可达到 ELISA 的约 1 倍, 成功实现浓度在 fmol 级别蛋白靶标的检测 高能量的激光通过爱里斑聚焦于溶液里的单个荧光素标记二抗分子, 产生的荧光闪烁进行数字化计量, 从而实现 单分子检测 灵敏度远高于传统 ELISA,Multiplex 等技术的全新单分子检测方法使种类远多于已知蛋白的未知蛋白靶标检测成为现实, 将带来全新的基础和转化医学新发现 2. 宽至 4 个 log 的大动态检测范围 Erenna 动态检测范围超过 4 个 log, 有利于蛋白靶标表达量存在巨大差异的样本进行同时检测 3. 根据靶标丰度灵活选择实验方案 Erenna 既可使用磁珠又可使用普通 96 孔板作为抗体包被介质 在灵敏度和成本方面取得了巧妙平衡 4. 便于自行开发检测试剂盒 开创性的新技术往往会应用于开创性的工作 如果检测的是全新的标志物, 默克提供整套的试剂盒开发工具, 可在极短时间内开发新检测试剂盒 Plate-Based Discovery Immunoassay Kits Analyte Catalog No. LLoQ (pg/ml) Sample Type Mouse IL Serum Mouse IL Serum Mouse IL Serum Mouse IL Serum Mouse IL-17A Serum Mouse IL-17F Serum Mouse IL Serum Mouse IL Serum Mouse TNF Serum 66

68 216 年 Milliplex 讲座, 欢迎预约! 讲座标题 蛋白液相芯片检测平台 (Milliplex) 在精准 / 转化医学领域的应用 ( 前沿科学系统讲座 ) 蛋白液相芯片检测 (Milliplex) 技术如何快速发表文章 适用多学科, 多方向和多领域 蛋白液相芯片检测 (Milliplex) 技术在 CAR T 细胞治疗中应用的最新进展 CAR T 细胞治疗细胞因子释放综合症 (CRS) 必备检测方法 蛋白液相芯片检测 (Milliplex) 技术在医学中应用 ( 基础研究和临床研究提供专业性讲座 ) 主要内容 蛋白多因子检测 Milliplex 技术在精准 / 转化医学如 : 新型细胞治疗 CAR-T 癌症 感染与免疫性疾病 神经退行性疾病 代谢疾病等领域, 以及疫苗评估, 药物筛选等的应用实例分析 ; 为疾病的预防, 早期诊断和个体化治疗提供新的策略 1. 成功发表文章的核心要素 2. Milliplex 发表文章的优势 3. 应用 Milliplex 技术设计课题, 操作实验及分析结果 4. Milliplex 技术撰写文章模板大全 ( 经典文献分享 ) 1.CAR T 细胞治疗技术的背景 原理和发展 2.CAR T 细胞治疗国内外科研和行业最新进展 3.CAR T 细胞治疗中 CRS 的检测, 预防和治疗 4.Milliplex 技术原理及在 CRS 检测中的优势 基础医学 : 生化与分子 ; 药理学 ; 免疫学 ; 病原生物学 ; 神经生物学 ; 细胞生物学 ; 药学 ; 流行病学 ; 公共卫生学 ; 运动医学等 临床研究科室 : 血液病科 ; 消化科 ; 心血管科 ; 风湿病科 ; 儿科 ; 神经科 ; 肾脏病科 ; 呼吸科 ; 皮肤科 ; 肿瘤科 ; 感染科 ; 变态反应科 ; 骨科 ; 口腔科 ; 耳鼻喉 ; 眼科 ; 妇产科 ; 移植科 ; 检验科 ; 细胞治疗等 网络课堂 : 如何用 Milliplex 平台快速发文章 文章成功发表的要素? 有哪些资源可以利用? 有哪些研究方向思路? 如何设计课题? 如何操作实验? 如何分析结果? 如何撰写文章? 主讲人 : 默克生命科学部门应用科学家张涛博士讲座时长 :2 分钟 上海 北京北京市朝阳区曙光西里甲 5 号凤凰置地广场 A 座写字楼 18 层电话 :(1) 传真 :(1) 邮编 :135 广州广州市黄埔大道西 638 号富力科讯大厦 83A 室电话 :(2) 传真 :(2) 邮编 :51627 成都成都市锦江区东大街芷泉街东方广场 C 座 11 楼 7 号电话 :(28) 传真 :(28) 邮编 :6161 上海市浦东新区张江高科晨晖路 88 号二号楼 2 楼电话 :(21) 传真 :(21)58342 邮编 :2123 本资料中所有内容 ( 包括但不限于产品图片 公司 logo 等 ) 为德国默克集团所有, 未经允许, 任何人或实体不得擅自使用或转载