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1 PerkinElmer Biologics Solution Amy Zhang 张薇

2 抗体药物及抗体制备技术发展 Orthoclone-OKT3 100% 鼠源 / 抗原性强 Herceptin (Trastuzumab) Avastin (Bevacizumab) 95% 人源性 / 低抗原性 Humira (Adalimumab) 100% 人源性 Yervoy (Ipilimumab) ( 针对 CLTA-4) 杂交瘤技术 治疗抗体上市 人源化抗体上市 全人源抗体上市 免疫检验点类抗体药物上市 嵌合抗体 抗体人源化 嵌合抗体上市 ADC 药物抗体上市 双特异性抗体上市 PD-1 阻断类抗体药物上市 Ramicade (Infliximab) 65% 人源性 / 低抗原性 Mylotarg (Gemtuzumab) + (Ozogamicin) Removab (Catumaxomab) ( 针对 CD3 & EpCAM) Opidvo (Nivolumab) Keytruda (Perbraolizumab) 鼠源抗体嵌合抗体抗体人源化抗体文库制备抗体文库筛选 杂交瘤筛选 噬菌体展示核糖体展示细菌展示酵母展示细胞展示

3 Chinese biopharma starts feeding the global pipeline Nature Reviews Drug Discovery Published online 29 Jun 2017; doi: /nrd

4 生物大分子制药研发流程 加快研究速度 高内涵细胞显微成像系统 HCS Opera Phenix 临床前活体影像系统 IVIS Spectrum 提高精准治疗 诊疗 高通量多模式检测系统 EnVision HTS 临床数字定量病理系统 Vectra Polaris 靶点确认 抗体筛选 功能验证 临床前 / 临床 工艺开发 文库建立 体系优化 安全评价 测试 生产质控 多标试剂 & 细胞株 Alpha/Lance/Defia/Lite Cell line/ Microplate 抗体分析系统 LabChip GXII 生产 缩短构建时间 自动化样品处理工作站 JANUS Workstation 自动化整合解决方案 Cell::Explore 降低技术成本

5 噬菌体文库 & 杂交瘤抗体筛选技术 通量? 效率? Nature Reviews Drug Discovery 2, 52-62

6 人源 B 细胞抗体 / 疫苗筛选设计 微型化? 自动化? J. Exp. Med Vol. 213 No GlaxoSmithKline Vaccines S.r.l., Siena, Italy

7 抗体 & 克隆鉴定方法 传统 ELISA 免洗微球成像 荧光标记二抗 HRP 标记二抗 待测抗体 待测抗体 包被抗原 抗原偶联微珠 免洗高灵敏 Alpha 免洗细胞成像 荧光标记二抗 供体 受体微珠 待测抗体 待测抗体 表达抗原的细胞

8 不同抗体筛选方法需要的检测仪器 ELISA/TRF/TR-FRET ( 酶标仪 ) VICTOR Nivo EnVision EnSight 免洗高灵敏度 Alpha ( 酶标仪 ) EnVision EnSight 免洗微球成像 ( 成像酶标仪 &HCS) Operetta CLS Opera Phenix EnSight 免洗细胞成像 ( 成像酶标仪 &HCS) Operetta CLS Opera Phenix EnSight

9 杂交瘤筛选 (vs ELISA) 操作简单 免洗高效

10 噬菌体文库筛选 高通量 微型化

11 人源 B 细胞抗体筛选及功能研究 B 细胞鉴定 中和性抗体对人源肺纤维细胞 (IMR-90) 形态学功能性验证

12 抗体筛选自动化整合方案

13 分子水平 :PD-1/PD-L1 免疫检验点阻断剂 企业 美施贵宝默沙东罗氏默克 / 辉瑞阿斯利康 (BMS) (MSD) (Roche) (Merck/Pfizer) (AstraZenaca) 靶点 PD-1 PD-1 PD-L1 PD-L1 PD-L1 商品名 Opdivo Keytruda Tecentriq Bavencin Imfinzi 通用名 Nivolumab Pembrolizumab Atezolizumab Avelumab DuValumab 获批适应症 FDA 批准日期 转移性黑色素瘤非小细胞肺癌晚期肾细胞癌霍奇金淋巴瘤头颈癌尿路上皮癌 ( 日本 ) 晚期黑色素瘤转移性黑色素瘤非小细胞肺癌头颈癌 尿路上皮癌非小细胞肺癌 Merkel 细胞癌 尿路上皮癌 Anti-PD-1 Ab / Anti-PD-L1 Ab

14 细胞水平抗体结合实验 : PD-L1 抗体筛选 CHOK1: Cell Track Green; CHOK1-PDL1: No dye 1st Ab: Mouse-anti PDL1 antibody; 2st: Goat anti-mouse IgG-AlexaFluor647

15 PD-L1 蛋白表达量检测及信号通路研究

16 整孔显微成像系统进行细胞水平 PD-L1 表达量分析

17 Trastuzumab Fc 区改造优化 ADCC 活性

18 Trastuzumab Fc 区改造对 FcγRIIIa 亲和力评价 Label Free (SPR) WT S239D/I332E I332E Alpha S239D/I332E WT I332E Alpha and Label-Free Order of Potency Measurements results are Similar Alpha Data Consistent with Gold Standard BiaCore

19 抗体糖基化检测

20 免疫细胞杀伤肿瘤活性评价 放射性同位素 51Cr 释放检测 LDH 活性光吸收检测 BATDA 时间分辨荧光检测 生物发光检测

21 新一代分子免疫检测 : 时间分辨荧光 (TRF/DELFIA) Low S/N Delay High S/N 镧系元素作为标记物, 代替普通荧光分子 镧系元素荧光寿命可达 µs 级 在激发光熄灭后, 延迟检测发射光信号, 降低荧光背景, 提高信噪比及灵敏度

22 免疫细胞杀伤活性 (DELFIA BATDA Cytotoxicity) Features High sensitivity DELFIA BATDA Cytotoxicity Kit Benefits Less cells required Only non-rad, non-enzymatic assay mimicking 51 Cr release Based on TRF Fast release of label from cytolyzed cells Ability to freeze TDA loaded cells More efficient and mild labelling than for 51 Cr Non-radioactive technology, eliminating radioactive waste disposal, associated stringent procedures and costs Stable signals can be measured over-and-over or the next day --- flexibility 8 hr 51 Cr release test can be shortened to 2-4 hrs Flexibility Shorter labeling time

23 DELFIA 与传统放射性同位素实验结果对比 DELFIA 比同位素方法具有更高的灵敏度 安全性及适用性

24 ELISA( 光吸收 )vs DELFIA(TRF) TMB A450 HRP 解离增强液 Eu Eu 高灵敏度高信噪比线性范围宽信号稳定数据可靠 Eu Labeled Antibodies Anti-mouse Anti-human 鼠源一抗 鼠源一抗 Anti-rabbit Anti-HA 样品 样品 Anti-6His Anti-GST Anti-c-myc 捕获抗体 捕获抗体 Eu, Tb, and Sm labeled Streptavidin Pa

25 无锡人民医院 Chen Guoqian 教授等人, 使用 TRFIA 和 ELISA 两种方法, 检测病人血样中新颖的诊断标记物 HBV PreS1 表面抗原含量, 通过平行对比,TRFIA 在 0.01 ng/ml 极低样品浓度下, 尚有很好的分辨率, 比 ELISA 的检测灵敏度提高超过 16 倍, 动态检测范围提高超过三个数量级, 且对病人血样有更好的抗干扰能力和稳定性 (Journal of Immunoassay and Immunochemistry, 33:2, )

26 Convert ELISA to DELFIA in one step

27 Log[Ratio: Sample/BL] ELISA vs DELFIA TRF-laser: LLD ng/ml ELISA: LLD 0.03 ng/ml Log[concentration] ng/ml Interpolated by 4 parameters Standard Cuvre (ng /ml) Sample ELISA DELFIA LLD /

28 Cell: Explore 客户订制整合系统

29 3D Spheroid Cell Culture and Analysis From HTS To HCS

30 3D 原代肝微组织细胞毒性研究

31 HCS 3D 肿瘤细胞凋亡 & Car-T 细胞浸润分析 蓝色 :Hochest( 肿瘤细胞 ) 绿色 :CAR T 细胞红色 :PI ( 死细胞 )

32 ADCP (Roche) PLoS ONE 11(7): e doi: /journal.pone

33 In Vivo Imaging Solution

34 Luciferase-based Killing 560 nm Luciferase labeled cell PSCA-CAR T cells from three donors (#1, #2, #3) were co-cultured with luciferaseexpressing mel526(psca) or mel526 (TARP) target cells for 2 days. Hillerdal et al. BMC Cancer 2014, 14:30

35 Luciferase-based in vitro in vivo Solution Bioluminescence Detection Bioware for in vitro & in vivo Product Number BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW BW Cell Line Product Description Bioware Brite MCF7-Red-FLuc Bioware Brite A549-Red-Fluc Bioware Brite LL/2-Red-FLuc Bioware Brite SKOV3-Red-FLuc Bioware Brite 4T1-Red-FLuc Bioware Brite NCI-H460-Red-FLuc Bioware Brite Colo205-Red-FLuc Bioware Brite HCT-116-Red-FLuc Bioware Brite HT-29-Red-FLuc Bioware Brite U87MG-Red-FLuc Bioware Brite B16F10-Red-FLuc Bioware Brite K562-Red-FLuc Bioware Brite LNCaP-Red-FLuc Bioware Brite BxPC3-Red-FLuc Bioware Brite 4T1-Red-FLuc-GFP Bioware Brite HT1080-Red-FLuc Bioware Brite PC3-Red-FLuc Bioware Brite PC3-Red-FLuc-GFP Bioware Brite GL261-Red-FLuc Bioware Brite HepG2-Red-FLuc XenoLight D-Luciferin (K+Salt)

36 Quantitative Pathological System

37

38 PerkinElmer CAR-T 细胞治疗研发支持方案

t03phip

t03phip [ ] [ ] [ ] [ ] [ ] [ ] [ ] 1 6.5 2017 12,090 2030 24,570 2017 1,106 9.1% 139 2030 4,068 16.6% 2013 2030 7.3% 7.6% 7.5% 8.1% 72.9 79.2 83.2 93.7 9.1% 110.6 10.1% 128.3 11.0% 147.6 11.8% 166.8 13.1% 12.6%

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