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- 饮钰 郎
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1 骨 有 明 訊 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 形 態 關 係 之 研 究 科 別 : 生 物 科 第 48 屆 科 學 展 覽 北 二 區 佳 作 作 者 : 呂 苹 瑋 范 競 勻 指 導 老 師 : 陳 季 瑄 老 師
2 壹 摘 要 本 研 究 以 人 類 的 子 宮 頸 癌 細 胞 (HeLa cell) 為 細 胞 骨 架 的 觀 察 對 象, 經 過 培 養 與 繼 代, 利 用 免 疫 螢 光 染 色, 以 山 羊 的 肌 動 蛋 白 絲 抗 體 (Goat anti-β-actin antibody) 偵 測 骨 架,4',6 - 二 脒 基 -2- 苯 基 吲 哚 (4',6-diamidino-2-phenylindole) 偵 測 細 胞 核 經 一 系 列 的 探 討 後, 發 現 當 細 胞 與 細 胞 間 密 度 越 高 時, 肌 動 蛋 白 絲 越 短 越 鬆 且 方 向 一 致 性 低, 我 們 推 測 極 有 可 能 是 因 為 伸 展 空 間 受 限 所 致, 密 度 低 則 反 之 另 外, 我 們 也 研 究 細 胞 有 絲 分 裂 (M phase) 到 不 同 階 段 時, 細 胞 形 狀 的 變 化 及 其 骨 架 的 關 係, 我 們 除 了 發 現 到 肌 動 蛋 白 絲 在 細 胞 分 裂 時, 會 較 分 裂 前 後 更 密 更 錯 綜 複 雜 之 外, 我 們 更 探 討 細 胞 核 內 在 分 裂 時 會 出 現 綠 色 點 狀 螢 光, 違 反 肌 動 蛋 白 絲 抗 體 的 專 一 性 貳 研 究 動 機 高 一 下 學 期 的 生 物 課, 同 學 間 在 做 書 報 討 論 時 有 聊 到 在 不 同 細 胞 週 期 時, 細 胞 形 態 會 有 變 化, 於 是 我 們 想 知 道, 在 分 裂 期 時 細 胞 要 如 何 利 用 骨 架 完 成 分 裂 又 同 時 要 維 持 細 胞 的 穩 定 性 此 外, 我 們 也 對 細 胞 的 形 狀 和 其 骨 架 變 化 的 關 係 十 分 感 興 趣 再 者, 生 物 界 存 在 各 種 形 狀 的 細 胞, 例 如 : 長 條 分 節 的 肌 肉 細 胞 扁 平 的 表 皮 細 胞 神 經 細 胞 雙 凹 圓 盤 狀 的 紅 血 球 細 胞 柱 狀 細 胞.. 除 了 部 分 原 因 是 為 了 適 應 環 境 及 發 揮 其 功 能 外, 細 胞 的 形 狀 想 必 也 跟 細 胞 骨 架 有 密 切 關 聯, 在 詢 問 老 師 後, 以 普 遍 利 用 的 HeLa cell 為 研 究 對 象, 並 開 始 著 手 構 思 在 閱 讀 科 學 期 刊 時, 我 們 得 知 骨 架 分 為 微 質 管 中 間 絲 與 肌 動 蛋 白 絲 三 種, 經 由 查 詢 資 料 後 發 現, 微 質 管 已 有 許 多 相 關 研 究 及 豐 富 的 資 料, 所 以 我 們 決 定 以 相 同 方 法 觀 察 較 少 人 探 討 的 肌 動 蛋 白 絲, 期 待 能 有 所 突 破 肌 動 蛋 白 絲 中 間 絲 197
3 微 質 管 參 研 究 目 的 實 驗 一 : 了 解 細 胞 間 疏 密 程 度 與 細 胞 骨 架 的 關 係 實 驗 二 : 細 胞 有 絲 分 裂 到 各 期 形 態 與 細 胞 骨 架 的 關 係 肆 研 究 器 材 與 材 料 1. 海 拉 細 胞 2. 培 養 皿 3. P-1000,P-200,P-20 的 微 量 吸 管 ( 分 注 器 ) ml 的 微 量 管 5. 蓋 玻 片 與 載 玻 片 6. 螢 光 顯 微 鏡 7. 1X PBS 緩 衝 液,pH PBST 緩 衝 液 (1X PBS 加 0.05%Tween-20) 9. 非 離 子 界 面 活 性 劑 (triton X-100), 用 PBS 作 為 溶 劑 10. 4% 的 福 馬 林, 用 PBS 作 為 溶 劑 螢 光 顯 微 鏡 11. 安 佳 脫 脂 奶 粉 12. 山 羊 的 肌 動 蛋 白 絲 一 級 抗 體 (Goat anti-β-actin antibody 以 下 簡 稱 一 級 抗 體 ) 13. 驢 子 的 肌 動 蛋 白 絲 二 級 抗 體 (Fluorescein-conjugated anti-donkey IgG 及 Rhdamine Red 以 下 簡 稱 二 級 抗 體 ) 14. 4',6- 二 脒 基 -2- 苯 基 吲 哚 (4',6-diamidino-2-phenylindole 簡 稱 DAPI) 15. Mounting Solution( 甘 油 加 水 或 加 PBS 緩 衝 液 ) 16. Immersion( 油 鏡 ) 198
4 伍 研 究 過 程 與 方 法 一 細 胞 的 繼 代 與 保 存 ( 一 ) 細 胞 之 繼 代 細 胞 培 養 3~4 天 左 右, 可 將 細 胞 株 或 初 代 細 胞 繼 代 (passage) 培 養 1. 將 細 胞 培 養 液 移 去 後, 以 PBS 緩 衝 液 洗 細 胞 面, 再 將 PBS 緩 衝 液 倒 去 2. 加 入 少 許 之 TV 溶 液 ( 以 能 覆 蓋 細 胞 面 為 原 則 ) 在 37 作 用 數 分 鐘 單 層 的 細 胞 將 會 逐 漸 變 成 單 一 細 胞, 然 後 從 培 養 角 瓶 脫 落 3. 取 細 胞 培 養 液 於 800rpm 離 心 10 分 鐘 然 後 將 細 胞 消 化 液 倒 掉, 再 將 細 胞 懸 浮 於 培 養 基 內, 置 於 37 培 養 ( 二 ) 細 胞 之 保 存 與 解 凍 1. 取 培 養 兩 天 左 右 之 細 胞, 以 蛋 白 酶 將 單 層 細 胞 消 化 為 單 一 細 胞 後, 將 細 胞 懸 浮 於 細 胞 保 存 液 (90% 胎 牛 血 清 及 10%DMSO) 然 後 將 細 胞 液 分 裝 於 1.5ml 的 微 量 離 心 管, 並 置 於 保 麗 龍 內, 以 紗 布 包 裹, 隨 後 置 於 -70 過 夜 再 將 細 胞 移 入 -196 液 態 氮 保 存 2. 若 要 解 凍 細 胞, 可 將 細 胞 從 液 態 氮 桶 取 出, 並 迅 速 置 於 37 之 水 浴 內, 使 其 迅 速 解 凍, 隨 後 離 心 將 DMSO 移 去, 再 將 細 胞 懸 浮 於 培 養 基 內, 於 37 培 養 箱 培 養 二 細 胞 免 疫 螢 光 染 色 1. 將 培 養 在 蓋 玻 片 上 的 細 胞, 置 於 35mm 的 培 養 皿 2. 吸 去 培 養 液, 加 入 PBS 緩 衝 液 清 洗 ( 照 片 一 ) 3. 吸 去 福 馬 林, 加 入 PBS 緩 衝 液 清 洗 4. 用 非 離 子 界 面 活 性 劑 打 洞, 靜 置 10 分 鐘 5. 吸 去 非 離 子 界 面 活 性 劑, 加 入 PBS 緩 衝 液 清 洗 6. 加 入 酪 蛋 白, 靜 置 約 一 小 時 ( 亦 可 置 於 4 冰 箱 放 隔 夜 ) 7. 吸 去 酪 蛋 白, 加 入 PBST 緩 衝 液 清 洗 ( 照 片 二 ) 8. 吸 去 PBST 緩 衝 液, 加 入 一 級 抗 體 ( 與 PBS 稀 釋 成 1:4) 成 表 面 張 力, 靜 置 3 小 時 ( 可 放 隔 夜 ) ( 照 片 三 ) 9. 吸 去 一 級 抗 體 加 入 PBST 緩 衝 液 清 洗 三 次 各 20 分 鐘 10. 加 入 二 級 抗 體 ( 與 PBS 緩 衝 液 稀 釋 成 1:20), 靜 置 半 小 時 ( 照 片 四 ) 11. 吸 去 二 級 抗 體 ( 可 回 收 ), 加 入 PBST 清 洗 三 次, 每 次 40 分 鐘 越 久 越 好 12. 吸 去 PBST 緩 衝 液, 加 入 DAPI( 與 PBS 稀 釋 成 1:1) 在 蓋 玻 片 上 形 成 表 面 張 力, 靜 置 半 小 時 13. 吸 去 DAPI, 加 入 PBST 緩 衝 液 清 洗 14. 吸 去 PBST 緩 衝 液, 加 入 去 離 子 水 ( 立 即 吸 出 ), 重 複 2 次 15. 在 載 玻 片 上 滴 一 滴 Mounting Solution 將 蓋 玻 片 緩 慢 反 蓋 上 照 片 五 16. 吸 去 玻 片 邊 緣 多 餘 之 Mounting Solution 並 在 蓋 玻 片 四 周 塗 上 指 甲 油 封 片 照 片 六 * 補 充 說 明 : 1. 所 有 實 驗 步 驟 皆 在 室 溫 完 成 199
5 2. 清 洗 若 無 註 明, 則 皆 是 三 次, 每 次 間 隔 10 分 鐘 3. 加 入 的 溶 液 皆 須 漫 過 整 個 蓋 玻 片 4. 酪 蛋 白 來 自 安 佳 脫 脂 奶 粉, 並 用 PBS 作 為 溶 劑, 調 成 5%, 代 替 小 牛 血 清 蛋 白 (BSA) 5. 一 級 抗 體 若 要 放 隔 夜 需 覆 蓋 過 整 個 培 養 皿, 且 濃 度 要 較 高 6. 其 中 實 驗 一 因 不 需 觀 察 細 胞 核, 故 可 跳 過 步 驟 照 片 一 : 吸 去 培 養 液 照 片 二 :Blocking 照 片 三 : 一 級 抗 體 做 表 面 張 力 照 片 四 : 二 級 抗 體 做 表 面 張 力 照 片 五 : 滴 Mounting Solution 並 蓋 蓋 玻 片 照 片 六 : 以 指 甲 油 封 片 200
6 陸 步 驟 原 理 說 明 原 理 一 : 肌 動 蛋 白 絲 的 螢 光 染 色 間 接 免 疫 螢 光 抗 體 (IndirectImmunofluorescence) 先 用 一 級 抗 體 去 跟 抗 原 結 合, 再 用 標 有 螢 光 物 質 的 抗 體 ( 二 級 抗 體 ) 去 偵 測 一 級 抗 體 而 因 為 抗 原 與 一 級 抗 體 結 合 後 再 用 二 級 抗 體 去 偵 測 時, 一 個 ( 抗 原 - 一 級 抗 體 ) 複 合 物 可 能 與 兩 個 以 上 標 有 螢 光 物 質 的 二 級 抗 體 結 合, 便 因 此 使 螢 光 反 應 放 大, 就 是 所 謂 的 訊 息 放 大 反 應 以 牛 奶 ( 或 血 清 ) 覆 蓋 住 triton 所 產 生 的 雜 質, 即 抑 制 非 特 異 性 物 質 的 結 合 方 法 一 : 細 胞 膜 的 打 洞 Triton X-100 Triton X-100 細 胞 膜 雜 質 及 釋 出 的 細 胞 質 以 非 離 子 界 面 活 性 劑 (triton X-100) 洞 穿 細 胞 膜, 使 一 級 抗 體 能 夠 通 過 細 胞 膜 並 偵 測 骨 架 打 洞 後 會 有 胞 內 與 胞 外 的 物 質 進 出, 由 細 胞 釋 出 的 物 質, 會 在 之 後 用 緩 衝 液 清 洗 掉 201
7 方 法 二 :Blocking 酪 蛋 白 或 小 牛 血 清 蛋 白 (BSA) 抑 制 非 特 異 性 結 合, 如 此 一 級 抗 體 便 可 偵 側 到 肌 動 蛋 白 絲, 帶 有 螢 光 團 的 二 級 抗 體 再 與 一 級 抗 體 結 合, 發 出 螢 光 原 理 二 : 細 胞 核 的 螢 光 染 色 (DAPI 為 染 劑 ) 1. DAPI 兩 端 的 NH2 釋 出 一 個 電 子, 使 其 帶 正 電, 鑲 嵌 在 DNA 雙 股 螺 旋 帶 負 電 的 鹼 基 之 間 2. DNA 雙 股 螺 旋 與 DAPI 結 合, 用 以 偵 測 細 胞 核 ( 右 圖 ) 3. 在 螢 光 顯 微 鏡 觀 察 下,DAPI 染 劑 是 用 紫 外 光 波 長 的 光 線 激 發 當 DAPI 與 雙 股 DNA 結 合 時, 最 大 吸 收 波 長 為 358nm, 最 大 發 射 波 長 為 461nm, 其 發 散 光 的 波 長 範 圍 含 蓋 了 藍 色 至 青 綠 色 DAPI 也 可 以 和 RNA 結 合, 但 產 生 的 螢 光 強 度 不 及 與 DNA 結 合 的 結 果, 其 發 散 光 的 波 長 範 圍 約 在 400nm 左 右 下 圖 是 我 們 用 此 方 法 做 出 的 結 果 : 成 功 的 呈 現 出 綠 色 為 肌 動 蛋 白 絲 所 在 位 置, 藍 色 為 細 胞 核 202
8 實 驗 一 : 細 胞 間 疏 密 程 度 與 細 胞 骨 架 的 關 係 1. 以 下 先 以 六 張 照 片 說 明 疏 密 不 同 的 細 胞 組, 在 電 腦 不 同 的 處 理 下 所 呈 現 的 情 形 ( 倍 率 60X) 較 疏 組 : 細 胞 數 約 2~5 個 較 密 組 : 細 胞 數 約 55~65 個 ( 一 ) 螢 光 下 的 肌 動 蛋 白 絲 ( 綠 色 ) 螢 光 下 的 肌 動 蛋 白 絲 ( 綠 色 ) ( 二 ) 螢 光 下 的 細 胞 核 ( 藍 色 ) 螢 光 下 的 細 胞 核 ( 藍 色 ) ( 三 ) 沒 有 螢 光 的 細 胞 整 體 沒 有 螢 光 的 細 胞 整 體 203
9 2. 下 表 為 細 胞 疏 密 度 不 同 的 細 胞 組 其 肌 動 蛋 白 絲 所 呈 現 的 情 形 : 較 疏 組 較 密 組 圖 當 細 胞 形 狀 拉 的 較 長 時, 骨 架 沿 著 細 胞 膜 延 伸 圖 肌 動 蛋 白 絲 呈 交 叉 排 列 圖 在 細 胞 較 疏 的 環 境 下 骨 架 較 長 圖 肌 動 蛋 白 絲 分 佈 較 平 均 圖 肌 動 蛋 白 絲 呈 現 幾 乎 互 相 平 行 204 圖 肌 動 蛋 白 絲 分 佈 無 明 顯 方 向 性
10 3. 下 表 為 細 胞 間 疏 密 之 比 較 : 細 胞 疏 密 度 比 較 項 目 較 疏 組 較 密 組 1. 一 致 性 較 高 ( 見 圖 1-3-1) 骨 架 方 向 的 一 致 性 2. 接 近 平 行 ( 見 圖 1-3-1) 1. 一 致 性 較 低 ( 見 圖 1-1-2) 2. 錯 綜 複 雜 ( 見 圖 1-2-2) 3. 順 著 細 胞 伸 展 的 方 向 ( 見 圖 1-2-1) 3. 沒 有 明 顯 的 伸 展 方 向 ( 見 圖 1-1-2) 1. 較 長 ( 見 圖 1-3-1) 骨 架 長 短 及 粗 細 2. 粗 細 無 明 顯 相 對 關 係 1. 較 短 ( 見 圖 1-3-2) 2. 粗 細 無 明 顯 相 對 關 係 細 胞 形 狀 可 延 展 較 長, 細 胞 形 狀 較 長 伸 展 空 間 有 限, 細 胞 形 狀 較 圓 骨 架 張 力 因 延 展, 骨 架 線 條 拉 的 較 緊 由 細 胞 膜 邊 緣 可 看 出 鬚 狀 的 骨 架, 線 條 拉 的 較 鬆 實 驗 二 : 細 胞 有 絲 分 裂 各 期 型 態 與 細 胞 骨 架 的 關 係 細 胞 週 期 可 分 為 G1 G2 S M 四 期 G1 為 細 胞 生 長 期 S 為 DNA 複 製 期 G2 為 細 胞 分 裂 準 備 期,M 期 為 細 胞 分 裂 期 下 圖 為 細 胞 週 期 的 螢 光 染 色, 綠 色 藍 色 紅 色 依 序 為 紡 綞 絲 (Spindle microtubule) 染 色 體 (Chromosomes) 及 細 胞 骨 架 (cytoskeleton); 其 中 除 第 一 張 圖 為 G2 期, 餘 皆 為 M 期 中 的 各 期 : 205
11 M 期 為 本 實 驗 所 觀 察 的 時 期, 即 細 胞 真 正 進 行 有 絲 分 裂 的 時 期 下 為 不 同 分 裂 時 間 點 的 實 驗 照 片 : 圖 3-1 上 圖 皆 為 尚 未 進 行 分 裂 的 兩 顆 細 胞, 可 看 出 細 胞 核 內 沒 有 點 狀 的 螢 光 物 質 下 面 十 張 照 片 從 剛 開 始 進 行 分 裂 到 分 裂 結 束, 可 大 致 描 述 M 期 的 分 裂 情 形 兩 張 為 一 組 ( 左 為 有 染 色 時, 右 為 原 本 之 細 胞, 可 對 照 比 較 各 階 段 細 胞 的 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 核 的 變 化 ): 1. 圖 分 裂 時 細 胞 核 出 現 被 綠 色 螢 光 標 記 的 物 質 圖 可 清 楚 看 到 兩 個 細 胞 核 206
12 2. 圖 骨 架 模 糊 無 清 楚 線 條 圖 可 清 楚 看 到 兩 個 細 胞 核 相 連 3. 圖 質 內 骨 架 模 糊 散 亂 圖 核 尚 有 部 分 連 接 207
13 4. 圖 兩 顆 細 胞 逐 漸 成 形 並 分 離 圖 核 已 完 全 分 開 5. 圖 細 胞 分 裂 末 期, 核 中 已 無 綠 色 點 狀 螢 光 出 現 圖 細 胞 核 已 完 全 分 開 208
14 捌 討 論 在 實 驗 一, 我 們 觀 察 細 胞 在 疏 密 環 境 不 同 時 細 胞 的 形 態 與 骨 架 的 關 係, 但 是 細 胞 是 如 何 感 受 到 與 其 他 細 胞 之 間 疏 密 度 的 不 同 呢? 我 們 認 為, 細 胞 是 因 為 受 其 他 細 胞 擠 壓 所 致, 所 以 在 細 胞 與 細 胞 間 較 疏 鬆 時, 細 胞 因 為 可 以 盡 量 延 伸, 平 貼 於 培 養 皿 上, 故 整 體 形 狀 較 長, 肌 動 蛋 白 絲 也 拉 的 較 長, 同 時 也 較 緊 繃, 彼 此 呈 現 平 行 之 關 係 而 細 胞 在 較 緊 密 的 環 境 下, 因 為 無 空 間 可 伸 展, 所 以 骨 架 較 短, 且 拉 的 較 鬆, 骨 架 有 交 錯 排 列 的 情 形 驗 證 細 胞 形 狀 的 伸 縮 與 肌 動 蛋 白 絲 的 控 制 有 密 切 關 係 在 實 驗 二, 我 們 觀 察 細 胞 在 M 期 的 分 裂 情 形 與 骨 架 變 化 之 關 係 實 驗 結 果 發 現, 在 細 胞 分 裂 時, 原 本 線 條 清 楚 的 骨 架 此 時 變 得 模 糊, 在 細 胞 膜 邊 緣 呈 現 散 亂 的 分 布, 此 外, 細 胞 核 中 出 現 點 狀 的 螢 光, 到 了 分 裂 完 成 時, 核 中 的 點 狀 螢 光 消 失, 而 骨 架 也 重 新 出 現 就 一 般 認 知 而 言, 骨 架 的 位 置 是 在 細 胞 核 至 胞 膜 之 間, 與 肌 動 蛋 白 絲 特 異 性 結 合 的 抗 體 不 應 該 會 偵 測 到 其 他 物 質, 為 此 奇 特 現 象, 我 們 做 了 以 下 天 馬 行 空 的 推 測, 探 討 核 中 物 質 的 出 現 原 因 : 1. 分 裂 時 細 胞 的 不 穩 定, 使 核 內 某 種 物 質 也 一 併 被 激 發, 表 現 出 螢 光 2. 分 裂 時, 核 膜 的 通 透 性 大 量 增 加, 少 部 份 接 在 二 抗 上 的 螢 光 團 破 碎 並 經 由 沒 有 專 一 性 的 孔 道 進 入 核 內 3. 分 裂 時 細 胞 的 不 穩 定, 使 因 變 化 而 散 亂 的 骨 架, 帶 著 一 級 抗 體 二 級 抗 體 及 螢 光 團 一 併 進 入 核 內 4. 就 我 們 拍 出 的 照 片 而 言, 取 樣 了 五 十 幾 盤 細 胞, 卻 很 難 找 到 剛 好 分 裂 到 一 半 的 細 胞, 可 見 細 胞 的 分 裂 速 度 非 常 快, 所 以 我 們 的 實 驗 結 果 照 片 才 會 多 偏 重 在 快 要 分 裂 及 剛 分 裂 完 這 部 份 5. 核 內 可 能 存 在 肌 動 蛋 白 絲, 在 分 裂 時 為 了 維 持 形 狀 的 穩 定 性, 會 從 原 本 的 游 離 奘 聚 合 成 明 顯 的 骨 架, 以 便 控 制 細 胞 核 的 分 裂, 所 以 才 有 M 期 出 現 被 螢 光 標 記 的 物 質 玖 結 論 1. 細 胞 與 細 胞 間 密 度 越 低, 其 肌 動 蛋 白 絲 越 長 方 向 性 越 一 致, 鮮 少 交 錯, 且 明 顯 地 順 著 細 胞 伸 展 方 向, 密 度 越 高 則 反 之 2. 細 胞 在 分 裂 時 的 肌 動 蛋 白 絲, 較 分 裂 前 更 為 密 集, 直 到 分 裂 後 才 又 出 現 和 原 來 一 樣 明 顯 的 絲 狀 3. 一 般 在 生 長 期 之 細 胞, 核 內 不 會 有 綠 色 螢 光 ( 對 肌 動 蛋 白 絲 有 高 度 專 一 性 ), 但 在 細 胞 分 裂 時, 核 內 出 現 被 標 記 螢 光 之 物 質, 且 持 續 至 兩 個 細 胞 核 完 全 分 離 拾 感 想 與 未 來 展 望 這 次 能 夠 完 成 這 項 研 究 首 先 特 別 感 謝 師 長 及 學 姊 學 長 們, 在 這 一 年 多 來, 不 論 是 實 驗 操 作 上 的 指 導, 或 是 理 論 的 基 本 概 念 解 說, 對 我 們 來 說 都 是 很 大 的 收 穫 與 難 得 的 經 驗 再 者, 也 要 感 謝 有 這 次 專 題 研 究 的 機 會, 從 一 開 始 的 靈 感 激 發 蒐 集 資 料, 到 開 始 著 手 進 行 研 究, 這 中 間 的 過 程 是 我 們 最 珍 惜 的, 不 僅 學 到 了 許 多 學 術 上 的 知 識, 也 學 會 如 何 對 一 件 事 思 考 209
15 提 出 問 題 與 想 法 更 學 會 與 他 人 溝 通 交 換 彼 此 意 見, 相 信 在 不 久 後 的 將 來, 在 接 觸 學 問 的 研 究 身 處 群 體 生 活 勇 於 提 出 自 己 的 想 法 和 接 納 他 人 的 意 見 皆 有 相 當 大 的 幫 助 此 外, 也 要 感 謝 自 然 科 教 師 長 期 以 來 的 指 教 與 陪 伴, 在 我 們 遇 到 困 難 時, 恰 如 其 分 地 給 予 懇 切 的 建 議, 並 和 我 們 討 論 實 驗 的 內 容, 提 醒 我 們 一 些 需 要 改 進 的 地 方 當 然 還 有 傳 授 親 身 經 驗 的 學 姊 不 時 為 我 們 打 氣 的 學 妹 及 互 相 鼓 勵 一 同 奮 鬥 的 同 學 們 這 次 的 實 驗 是 暫 時 告 一 段 落, 未 來 我 們 希 望 能 朝 以 下 幾 點 進 一 步 發 展 : 1. 進 一 步 研 究 同 是 細 胞 骨 架 的 中 間 絲 微 質 管 與 細 胞 型 態 的 關 係, 如 此 一 來, 掌 握 到 三 種 骨 架 的 形 態, 可 再 做 疊 合 或 是 分 開 分 析 比 較, 得 到 細 胞 骨 架 與 型 態 更 進 一 步 的 相 對 關 係 2. 生 物 界 存 在 各 種 形 狀 的 細 胞, 例 如 : 長 條 分 節 的 肌 肉 細 胞 扁 平 的 表 皮 細 胞 神 經 細 胞 雙 凹 圓 盤 狀 的 紅 血 球 細 胞 柱 狀 細 胞.. 除 了 部 分 原 因 是 為 了 適 應 環 境 及 發 揮 其 功 能 外, 細 胞 的 形 狀 想 必 也 跟 細 胞 骨 架 有 密 切 關 聯, 更 深 入 針 對 各 種 不 同 形 狀 的 細 胞, 以 相 同 的 免 疫 螢 光 染 色 方 法, 探 討 與 其 骨 架 的 關 係, 並 比 較 之 3. 利 用 縱 向 切 片, 在 電 腦 上 組 合 成 一 個 立 體 結 構 的 細 胞, 藉 以 研 究 細 胞 在 分 裂 時 期 與 其 骨 架 的 變 化, 細 胞 如 何 利 用 骨 架 的 變 化 維 持 穩 定 性 及 進 行 分 裂, 立 體 結 構 比 平 面 更 為 精 準 可 信 4. 以 特 定 的 無 毒 螢 光 染 劑, 擴 散 通 過 細 胞 膜, 再 利 用 細 胞 之 粒 線 體 激 發 螢 光, 即 可 在 螢 光 顯 微 鏡 下 觀 察 立 體 動 態 的 細 胞 分 裂 情 形 與 骨 架 的 運 動 關 係 5. 以 破 壞 骨 架, 來 摧 毀 細 胞, 在 藥 學 上 已 運 用 廣 泛 ( 如 Vincristine), 除 了 病 變 的 細 胞 外, 能 否 也 應 用 在 病 毒 上, 值 得 研 究 6. 應 激 纖 維 (Stress Fiber) 由 肌 動 蛋 白 絲 構 成, 目 的 在 於 與 細 胞 膜 接 合, 穩 定 聚 焦 接 觸 點 ( 下 圖 之 紅 點 ), 以 便 細 胞 黏 貼 在 物 體 表 面 可 做 免 疫 螢 光 染 色 進 一 步 觀 察 該 點 7. 利 用 同 步 化 使 所 有 培 養 皿 上 的 細 胞 週 期 同 時 進 行, 假 定 共 10 盤 細 胞, 培 養 在 培 養 皿 上 後, 每 兩 小 時 拿 出 一 盤 培 養 皿 做 免 疫 螢 光 染 色, 便 可 更 精 確 的 鎖 定 分 裂 週 期, 拍 到 細 胞 核 與 細 胞 核 分 裂 到 一 半 的 照 片, 也 能 一 次 做 更 大 量 的 取 樣, 以 利 比 較 210
16 拾 參 考 資 料 及 其 他 一 書 籍 : 1. Campbell 李 家 維 等 編 譯 (2001) 生 物 學 偉 明 圖 書 出 版 2. 林 榮 培 楊 揚 輝 螢 光 顯 微 鏡 檢 查 法 行 政 院 農 業 委 員 會 家 畜 試 驗 所 3. 魏 保 生 主 編 細 胞 和 分 子 生 物 學 科 學 出 版 社 二 網 頁 : 1. 螢 光 顯 微 鏡 下 的 細 胞 National Institute for Medical Research 2. 維 基 百 科
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去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶
第 一 节 细 胞 培 养 的 相 关 技 术 1 细 胞 的 复 苏 概 述 复 苏 细 胞 要 求 快 速 融 化 的 手 段, 这 样 可 以 保 证 细 胞 外 结 晶 在 很 短 的 时 间 内 即 融 化 避 免 由 于 缓 慢 融 化 使 水 分 渗 入 细 胞 内 形 成 胞 内 再 结 晶 对 细 胞 造 成 损 害 用 品 培 养 液 吸 管 离 心 管 培 养 瓶 步 骤 [1]
生物真题+模拟卷(14).FIT)
教 师 招 聘 考 试 中 学 生 物 全 真 模 拟 试 卷 ( 一 ) 渊 时 间 院 120 分 钟 满 分 院 100 分 冤 一 尧 单 项 选 择 题 渊 圆 园 小 题 袁 每 小 题 员 分 袁 共 圆 园 分 冤 员 援 关 于 人 体 细 胞 功 能 和 结 构 的 叙 述 袁 正 确 的 是 渊 粤 援 在 细 胞 核 内 砸 晕 粤 能 够 传 递 和 表 达 遗 传 信 息
附件四:作品送展表(夾於作品說明書第一頁,請勿裝訂)
嘉 義 市 第 31 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 果 真 有 酵 - 水 果 酵 素 的 應 用 關 鍵 詞 : 水 果 酵 素 環 保 編 號 : 1 摘 要 本 研 究 主 要 的 目 的 是 蒐 集 常 見 的 水 果, 利 用 多 餘 的 果 皮 和 剩 餘 的 果 肉 製 造
校园之星
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( 总 第 1094 1095 期 ) 浙 江 省 人 民 政 府 主 办 2015 年 10 月 20 日 出 版 省 政 府 文 件 浙 江 省 人 民 政 府 关 于 全 面 开 展 县 域 经 济 体 制 综 合 改 革 的 指 导 意 见 ( 浙 政 发 2015 31 号 ) (3) 省
( 总 第 1094 1095 期 ) 浙 江 省 人 民 政 府 主 办 2015 年 10 月 20 日 出 版 省 政 府 文 件 浙 江 省 人 民 政 府 关 于 全 面 开 展 县 域 经 济 体 制 综 合 改 革 的 指 导 意 见 ( 浙 政 发 2015 31 号 ) (3) 省 政 府 办 公 厅 文 件 浙 江 省 人 民 政 府 办 公 厅 关 于 公 布 全 省 行 政
國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
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臺 北 縣 立 樟 樹 國 中 96 學 年 度 第 二 學 期 區 域 性 自 然 科 學 領 域 資 賦 優 異 教 育 方 案 實 施 計 劃 一 依 據 : ( 一 ) 特 殊 教 育 法 第 二 十 九 條 ( 二 ) 特 殊 教 育 法 施 行 細 則 第 四 條 第 二 項 ( 三 ) 身 心 障 礙 及 資 賦 優 異 學 生 鑑 定 標 準 二 目 的 : ( 一 ) 推 廣 資
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(CIP) : /,. - :,2004.1 ISBN 7-116-03999-6... -.R161-62 CIP ( 2003) 117262 : : : : 31, 100083 : ( 010 ) 82324508 ( ) : http: www.gph.com.cn : zbs@ gph.com.cn : ( 010 ) 82310759 : : 787 mm 1092mm 1 / 32
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中 国 太 平 洋 人 寿 保 险 股 份 有 限 公 司 世 纪 行 人 身 意 外 伤 害 保 险 (C 款 ) 条 款 太 平 洋 人 寿 [2013] 意 外 伤 害 保 险 062 号 阅 读 指 引 本... 阅 读 指 引 有 助 于 理 解 条 款, 对 本 合 同 内 容 的 解 释 以 条 款 为 准 您 拥 有 的 重 要 权 益 本 合 同 提 供 的 保 障 在 保 险 责
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在全区2014年上半年经济工作
西 秀 区 人 民 政 府 公 报 西 秀 区 人 民 政 府 主 管 主 办 2015 年 10 月 21 日 第 3 期 目 录 主 任 : 张 勇 副 主 任 : 王 启 平 委 员 : 朱 霞 益 齐 林 梁 晓 雯 诸 永 红 汪 波 熊 杰 叶 会 飞 主 编 : 朱 霞 益 执 行 副 主 编 : 齐 林 副 主 编 : 王 海 潘 盛 斌 吴 丁 李 昌 军 王 幸 何 午 编 审
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“关于北京重点高校在校生回乡就业意愿调查问卷”
0 目 一 前 言...1 1.1 调 研 背 景 及 调 研 目 的...1 1.1.1 调 研 背 景 北 京 就 业 形 势 及 大 环 境 下 的 回 乡 就 业 趋 势...1 1.1.2 调 研 目 的 北 京 市 重 点 高 校 在 校 生 的 回 乡 就 业 意 愿...1 1.2 调 研 方 法 及 成 果 概 述...1 二 调 研 数 据 和 分 析...2 2.1 基 本
Microsoft Word - 愛吐沙的蛤蜊
編 號 :A311 組 別 : 國 小 組 科 別 : 自 然 科 類 別 : 生 物 作 品 名 稱 : 愛 吐 沙 的 蛤 蠣 作 者 : 黃 柏 慎 黃 映 慈 易 秋 蓉 指 導 老 師 : 賴 敏 婉 李 愛 雯 作 者 學 校 : 桃 園 縣 平 鎮 市 忠 貞 國 民 小 學 桃 園 縣 平 鎮 市 第 46 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 自 然
标题
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我 可 以 向 你 们 保 证 以 下 的 内 容 100% 真 实, 请 您 一 定 耐 心 看 完 从 医 15 年 来, 我 也 反 复 告 诉 病 人 这 些 事 实 但 是 没 有 人 愿 意 去 听, 更 没 有 人 愿 意 去 相 信 或 许, 我 们 的 同 胞 们 真 的 需 要
保 健 : 顶 尖 专 家 谈 癌 症 2014-03-22 权 健 3813 服 务 中 心 环 境 污 染 不 良 生 活 方 式 与 现 代 社 会 生 活 造 成 的 精 神 压 力 等 等 原 因, 使 得 我 国 癌 情 汹 涌, 人 们 也 日 益 变 得 谈 癌 色 变 最 新 数 据 显 示, 中 国 每 天 8550 人 成 为 癌 症 患 者 ; 中 国 癌 症 患 者 年 轻
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科展作品說明書--情定水果 香邀你我
中 華 民 國 第 四 十 四 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 國 小 組 生 活 與 應 用 科 學 科 080802 臺 北 縣 三 重 市 興 穀 國 民 小 學 指 導 老 師 姓 名 黃 小 紋 黃 書 卿 作 者 姓 名 邵 雅 慈 蔡 旻 真 許 瀚 心 王 澤 雄 黃 一 崧 中 華 民 國 第 四 十 四 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明
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附 件 : 紫 光 古 汉 000590- 置 出 1.72 亿 元 应 收 帐 款 明 细 清 单 客 户 金 额 湖 南 清 华 紫 光 古 汉 药 业 有 限 公 司 16,099,600.00 湖 南 清 华 紫 光 古 汉 药 业 有 限 公 司 14,339,504.00 广 东 省 揭 东 县 新 特 药 公 司 4,610,491.11 衡 阳 市 康 馨 医 药 有 限 责 任 公
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2005-11 看 不 见 的 星 球 告 诉 我 一 些 迷 人 的 星 球 吧, 我 不 喜 欢 残 酷 和 恶 心 的 场 面 你 说 好 吧, 我 笑 着 点 点 头, 当 然, 没 问 题 希 希 拉 加 希 希 拉 加 是 一 个 迷 人 的 星 球, 鲜 花 和 湖 泊 让 所 有 旅 人 过 目 不 忘 在 希 希 拉 加, 你 见 不 到 一 寸 裸 露 的 土 壤, 每 一 块
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宏 泰 人 壽 住 院 醫 療 保 險 附 約 除 外 責 任 本 次 送 審 條 文 前 次 送 審 條 文 說 明 第 十 一 條 : 被 保 險 人 因 下 列 原 因 所 致 之 疾 病 或 傷 害 而 住 院 診 療 者, 本 公 司 不 負 給 付 該 被 保 險 人 各 項 保 險 金 的 責 任 一 被 保 險 人 之 故 意 行 為 ( 包 括 自 殺 及 自 殺 未 遂 ) 二
兽医临床诊断学实验指导
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103- 衛 生 與 護 理 類 專 業 科 目 ( 一 ) 1. 有 關 原 始 生 物 起 源 的 演 化 大 方 向 中, 下 列 何 者 正 確? (A) 由 好 氧 厭 氧 (B) 由 構 造 複 雜 構 造 簡 單 (C) 由 異 營 自 營 (D) 由 多 細 胞 單 細 胞. 植 物 的 莖 頂 及 根 尖 細 胞 利 用 能 量 進 行 細 胞 分 裂, 與 下 列 何 種 生 命
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宜蘭縣風景區管理所五峰旗風景特定風景區開放行動咖啡車作業投標須知
宜 蘭 縣 礁 溪 鄉 湯 圍 溝 公 園 委 託 經 營 管 理 契 約 書 立 契 約 書 人 宜 蘭 縣 政 府 ( 以 下 簡 稱 甲 方 ) 為 充 分 利 用 湯 圍 溝 公 園 空 間 效 益, 並 提 昇 遊 憩 服 務 品 質, 特 委 託 ( 以 下 簡 稱 乙 方 ) 經 營 管 理, 特 訂 定 本 契 約, 契 約 內 容 如 后 : 第 一 條 : 一 契 約 文 件 及
第 二 十 七 章 一 夜 苦 熬 第 二 十 八 章 租 房 同 居 第 二 十 九 章 二 人 世 界 第 三 十 章 取 消 面 试 第 三 十 一 章 中 暑 卧 床 第 三 十 二 章 找 到 工 作 第
商 场 风 月 之 新 欢 旧 爱 七 寸 明 月 / 著 第 一 章 凌 晨 惊 梦... 4 第 二 章 前 台 MM... 7 第 三 章 陪 赌 陪 嫖... 11 第 四 章 淫 声 荡 语... 15 第 五 章 孤 儿 报 恩... 19 第 六 章 一 招 断 腕... 21 第 七 章 惹 毛 警 察... 26 第 八 章 痛 扁 犯 人... 29 第 九 章 薄 惩 邢 科...
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报 告 简 要 丽 江 古 城 位 于 云 南 省 西 北 部, 始 建 于 宋 末 元 初 古 城 西 北 方 30 公 里 处 是 海 拔 5596 米 的 玉 龙 雪 山 及 第 四 世 冰 川 遗 迹 丽 江 古 城 在 南 宋 时 期 就 初 具 规 模, 已 有 八 九 百 年 的 历
丽 江 古 城 托 管 挂 牌 可 行 性 分 析 报 告 上 海 文 化 产 权 交 易 所 申 江 文 化 商 品 运 营 服 务 平 台 二 零 一 六 年 七 月 报 告 简 要 丽 江 古 城 位 于 云 南 省 西 北 部, 始 建 于 宋 末 元 初 古 城 西 北 方 30 公 里 处 是 海 拔 5596 米 的 玉 龙 雪 山 及 第 四 世 冰 川 遗 迹 丽 江 古 城 在
有 不 良 企 图 时, 就 要 立 即 躲 开 他 当 你 实 在 难 以 分 辨 对 方 是 真 心 实 意 还 是 虚 情 假 意 时, 可 向 父 母 老 师 或 周 围 较 成 熟 和 亲 近 的 朋 友 请 教, 请 他 们 帮 你 分 析 情 况, 做 出 判 断 此 时, 拒 绝 帮
第 一 章 女 生 安 全 2009 年 11 月 2 日 深 夜,51 岁 的 农 民 李 某 翻 墙 进 入 某 中 学 行 窃, 他 悄 悄 来 到 一 小 屋 前, 并 无 所 获 见 屋 内 3 名 少 女 都 已 熟 睡, 便 生 邪 念, 欲 行 不 轨 3 少 女 慷 醒 后, 遭 李 某 的 殴 打 和 猥 亵, 其 中 一 名 16 岁 女 生 乘 机 溜 出 房 外, 将 房
《垓下歌》 項羽
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內 容 及 試 題 範 例 術 科 評 量 規 範 評 分 標 準 一 (, 工 具 與 材 料 由 本 校 提 供, 考 生 無 須 自 備 ) ( 一 ) 基 本 焊 接 工 具 操 作 及 辨 識 基 本 手 工 具 設 備 ( 二 ) 測 驗 時 間 50 分 鐘 ( 三 ) 工 具 與 材
104 學 年 度 高 級 中 等 學 校 特 色 招 生 職 業 類 科 甄 選 入 學 內 容 審 查 表 學 校 名 稱 ( 全 銜 ) 私 立 治 平 高 中 日 期 104 年 4 月 25 日 ( 六 ) 科 班 名 資 訊 科 特 色 班 項 目 基 本 焊 接 工 具 操 作 辨 識 基 本 手 工 具 設 備 一 可 聯 接 性 : 術 科 命 題 規 範 命 題 內 容 基 本
交 通 部 公 路 總 局 新 竹 區 監 理 所 104 年 第 2 次 契 約 服 務 員 甄 試 試 場 序 號 試 場 序 號 姓 名 A01 A02 A03 A04 A05 A06 A07 A08 A09 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A16 張 齡 文 王 美 蕙 吳
交 通 部 公 路 總 局 新 竹 區 監 理 所 104 年 第 2 次 契 約 服 務 員 甄 試 試 場 規 則 一 考 生 應 於 考 試 當 日 攜 帶 國 民 身 分 證 正 本 或 其 他 足 資 證 明 身 分 之 證 件 於 上 午 8 時 50 分 前 至 本 所 行 政 大 樓 2 樓 道 安 教 室 入 場 考 試, 未 攜 帶 者 一 律 不 得 參 加 考 試 ; 冒 名
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化学实验基本操作-加热、干燥和冷却.doc
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摘 要 我 們 將 日 常 生 活 上 常 吃 到 的 蔬 菜 水 果, 利 用 與 水 酒 精 作 為 溶 劑, 製 作 出 濃 度 相 同 的 溶 液, 觀 察 透 過 配 合 菜 瓜 布 清 潔 各 種 汙 垢 的 能 力 如 何, 我 們 還 利 用 了 黑 糖 水 與 蔬 果 進 行 一
作 品 名 稱 : 清 潔 汙 垢 - 天 然 ㄟ 尚 好 摘 要 我 們 將 日 常 生 活 上 常 吃 到 的 蔬 菜 水 果, 利 用 與 水 酒 精 作 為 溶 劑, 製 作 出 濃 度 相 同 的 溶 液, 觀 察 透 過 配 合 菜 瓜 布 清 潔 各 種 汙 垢 的 能 力 如 何, 我 們 還 利 用 了 黑 糖 水 與 蔬 果 進 行 一 個 月 的 發 酵, 以 一 個 禮 拜
( CIP) /. :, 2003 ISBN 7 81010 776 3.......... R24 65 CIP ( 2003) 102280 ( 2 ) 1200 ( 201203) 850 mm 1168 mm 1 /16 30. 5 881 5 301 10 400 2003 12 2 20
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題 目 : 誰 的 氣 量 大? 班 級 : 六 年 六 班 科 目 : 自 然 科 組 員 : 劉 芊 華 宋 瑀 恬 詹 舒 評 戴 宜 君 ( 第 九 組 ) 指 導 老 師 : 顏 君 叡 壹 研 究 動 機 五 年 級 自 然 課 曾 學 習 過 簡 易 滅 火 器 的 製 作, 從 寶 特 瓶 中 不 斷 的 冒 出 的 氣 泡, 令 我 們 覺 得 非 常 有 趣 它 的 原 理 是
X MGC X 22 X 23 X MGC X BALB/c 26 X MGC X MGC X MGC X..
1 0 3 8 4 9726023 UDC X MGC80-3 2000 7 2000 7 2000 7 2000 6 22.3.4...11..11 12 13 15 15 20 20 X MGC80-3. 22 X 22 X 23 X MGC80-3.23 X BALB/c 26 X MGC80-3.27 X MGC80-3 28 29 29 30 31 32 33 X MGC80-3 34 X..34.35.36
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