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1 2017 年 4 月第 27 卷第 4 期中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE April, 2017 Vol. 27 No. 4 研究报告 ICR 小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的动态组织学观察董宁, 刘岩, 张田田, 阮建平 ( 陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室, 西安交通大学口腔医学院口腔预防科, 西安, 陕西 ) 摘要目的了解 ICR 小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点, 为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础方法分别取 E( 胚胎 )11 5 E12 5 E13 5 E14 5 E15 5 E16 5 E17 5 和 E18 5 d 的胎鼠和 PN( 出生后 )2 d 的新生小鼠的头部或下颌骨, 固定脱钙包埋后行连续切片, 进行 HE 染色, 在显微照相系统下进行观察记录, 分析 ICR 小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律结果 E11 5 d 为牙胚发育始动,E12 5 d 牙胚向蕾状期过渡,E13 5 d 进入蕾状期, 帽状期为 E14 5 ~ E15 5 d, 钟状期开始于 E16 5 d, 出生后 2 d 牙体硬组织开始逐渐形成结论 ICR 小鼠胚胎 11 d 至出生后第 2 天是研究下颌第一磨牙牙胚发育机制的最佳时机关键词牙齿发育 ;ICR 小鼠 ; 下颌第一磨牙 ; 中图分类号 R 33 文献标识码 A 文章编号 (2017) doi: j. issn Establishment of first mandibular molar development of the time sequence in ICR mice DONG Ning, LIU Yan, ZHANG Tian tian, RUAN Jian ping ( Clinical Research Center of Shaanxi Province for Dental and Maxillofacial Diseases, Department of Preventive Dentistry, College of Stomatology, Xi an Jiaotong University, Xi an , China) Abstract Objective This study aims to understand the characteristics of the time sequence of ICR mouse first mandibular molar tooth germ development through dynamic observation. Methods Tooth germ of Embryos ( E11 5, E12 5, E13 5, E14 5, E15 5, E16 5, E17 5 and E18 5) and postnatal (PN1, PN2) mice were obtained. The heads (E E15 5) and mandibles ( E16 5 PN2) of mice were dissected, fixed and embedded for serial sections and HE staining. All the results were assessed under light microscopy. Results The tooth germ underwent various development stages including the bud, cap and bell stages. Mouse odontogenesis was initiated at E11 5. Proliferation of oral epithelium formed the bud stage at E13 5. Then the cap stage was observed at E E15 5 and the bell stage was appeared beginning from E16 5. The pre dentin was observed at PN1, as well as the dentin at PN2. Conclusions Establishing the regular development pattern of the first mandibular molar of ICR mice will provide a reliable basis for the future use in the specific tooth germ developmental research. Key words Odontogenesis; ICR Mouse; First mandibular molar tooth; Development 牙齿的发育是外胚层来源的上皮细胞及颅神经脊来源的间充质细胞相互作用的结果, 因此牙齿是研究上皮间充质反应的重要器官模型之一, 也是研究器官发育分子机制的一个经典模型系统 [1] [ 基金项目 ] 陕西省科技计划项目 (2015SF - 153) [ 作者简介 ] 董宁 ( ), 男, 研究方向 : 口腔预防医学 donnin@ 163. com [ 通讯作者 ] 阮建平 ( ), 男, 研究方向 : 牙齿发育及氟化物对牙齿的影响 ruanjp@ mail. xjtu. edu. cn

2 64 中国比较医学杂志 2017 年 4 月第 27 卷第 4 期 Chin J Comp Med, April 2017,Vol. 27. No. 4 然而, 不同于一般的器官发生, 牙齿的形成经历了发育矿化和萌出 3 个不同的阶段, 其复杂性远远甚于其他组织从而使人们对其发育机制的了解和认识程度远远低于其他组织因此, 了解 ICR 小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点, 为进一步研究牙齿的发育形成机制和相关影响因素提供模式实验动物就显得尤为重要 1 材料和方法 1 1 实验动物及实验环境 SPF 级鼠龄为 4 周的 ICR 小鼠, 体重 18 ~ 20 g, 购自于西安交通大学医学部医学实验动物中心 [SCXK( 陕 ) ], 实验于西安交通大学医学部医学实验动物中心动物房进行 [ SYXK( 陕 ) ], 常规饲食饮水 1 2 仪器与试剂 SW CJ 1F 超净工作台 ( 苏净安泰, 中国苏州 ); TOMY ES 315 型高压蒸汽消毒器 ( Tomy, 日本 ); 石蜡切片机 ( Leica, 德国 ); 恒温培养箱 ( Memmert, 德国 );Nikon DXM1200 显微照相系统 (Nikon, 日本 ) 多聚甲醛 10% EDTA 无水乙醇二甲苯双氧水氯化钙碳酸氢钾碳酸氢钠磷酸二氢钠苏木素伊红 (HE) 染色试剂盒以上试剂均为国产市售分析纯 1 3 动物实验 ICR 小鼠以雌雄比 2:1 合笼, 观察阴道栓出现的当日中午定为胚胎发育的 0 5 d( E0 5), 新生鼠鼠龄计算以出生当天中午定为出生后第 0 5 天 (PN0 5) 对孕鼠分笼饲养, 分别取样本为 E11 5 E12 5 E13 5 E14 5 E15 5 E16 5 E17 5 和 E18 5 的胎鼠和 PN1 PN2 的新生小鼠每组 30 个样本, 分别产自 3 个不同母体, 且保证取材时各组孕鼠生命体征平稳无异常, 胎鼠分离后测量头径, 组内各标本误差不超过 1 mm 孕鼠及新生小鼠脱颈处死后, 分离胎鼠头部 ( E11 5 E12 5 E13 5 E14 5 E15 5 ) 或下颌骨 ( E16 5 E17 5 E18 5 PN1 PN2) 用 PBS 清洗后置于 4% 多聚甲醛液中, 4 固定 24 ~ 48h 梯度脱水, 石蜡包埋 E16 5 ~ PN2 标本需先经过 ph 7 的 10% EDTA 脱钙, 隔日换液至完全脱钙 ( 即探针刺穿无阻力 ) 将石蜡标本, 以 5 μm 厚度进行连续切片, 头部标本作冠状切片, 下颌骨标本行矢状切片捞片,60 烤箱烘干备用 ; 切片预热, 经二甲苯脱蜡后, 梯度酒精 (100% 95% 80% 70% ) 脱水, 流水冲洗 5 min, PBS 洗 3 次 ; 行 HE 染色组织切片光学显微照相系统观察并记录结果, 统计各发育期内不同牙胚形态特征出现的频次, 计算百分率 2 结果 2 1 ICR 小鼠下颌第一磨牙牙胚形态学观察所有的 ICR 孕鼠均在 E19 5d 生产, 即 PN1d E11 5: 口腔上皮局部增生下陷, 形成牙板上皮 ( 图 1A) E12 5: 上皮细胞增殖聚集, 牙板上皮进一步增厚, 向蕾状期过渡 ( 图 1B) E13 5: 增厚的牙板上皮内陷入间充质, 形成上皮蕾, 周围有增生的间充质细胞集聚包绕, 进入蕾状期 ( 图 1C) E14 5: 上皮蕾继续向间充质中生长, 体积增大, 上皮基底部向内凹陷, 表明牙胚发育开始向帽状期发育 ( 图 1D) E15 5: 牙胚进入帽状期上皮继续延伸, 基底凹陷进一步加深, 形如帽子, 即为成釉器成釉器可见三层细胞结构 : 外釉上皮层内釉上皮层和星网状层成釉器中央基底上方可见釉结下方的间充质细胞形成球形凝聚区, 构成牙乳头外周可见明显的细胞及结缔组织包绕构成牙囊 ( 图 1E) E16 5: 牙胚进入钟状早期成釉器继续生长, 星网状层增厚, 其与内釉上皮层之间出现中间层细胞, 上皮凹陷更深, 其周缘继续生长, 上皮转折处为颈环, 成釉器形似吊钟, 即为钟状期 ( 图 1F) E17 5: 牙胚进入钟状期上皮继续伸长, 颈环结构更加明显, 中间层细胞清晰可辨, 牙尖处可见继发釉结形成 ( 图 1G) E18 5: 牙冠形态已可辨认, 内釉上皮层内陷加深, 内釉上皮层极化明显, 逐渐变为高柱状, 对应牙乳头有间充质细胞层诱导分化为可辨的成牙本质细胞层未见牙体硬组织产生 ( 图 1H) PN1(E19 5): 牙体硬组织开始分泌形成, 牙胚发育进入钟状晚期内釉上皮细胞向高柱状形态分化成为成釉细胞, 中间层更加明显可见牙尖处可见逐渐发育成熟的成釉细胞和成牙本质细胞开始分泌形成釉基质和前期牙本质 ( 图 1J) PN2: 牙体组织继续形成中牙冠形态更加清晰可辨, 各层结构明确前期牙本质继续沉积增厚, 其上可见薄层牙本质和新生牙釉质, 牙尖处尤

中国比较医学杂志２０１７年４月第２７卷第４期ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＡｐｒｉｌ２０１７Ｖｏｌ２７Ｎｏ４为明显图１Ｋ２２６５样本在Ｅ１１５ｄ观察到了牙板上皮增厚可以明确统计分析对各发育期内观察到的形态学特征进行汇总以出现频次计算百分比结果显示图２６０的ＩＣＲ小鼠下颌第一磨牙牙胚发育始动于胚

3 中国比较医学杂志２０１７年４月第２７卷第４期ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＡｐｒｉｌ２０１７Ｖｏｌ２７Ｎｏ４为明显图１Ｋ２２６５样本在Ｅ１１５ｄ观察到了牙板上皮增厚可以明确统计分析对各发育期内观察到的形态学特征进行汇总以出现频次计算百分比结果显示图２６０的ＩＣＲ小鼠下颌第一磨牙牙胚发育始动于胚胎１１５ｄ而８０的样本在Ｅ１３５ｄ观察到蕾状期牙胚形态特征Ｅ１４５ｄ到Ｅ１５５ｄ组具备帽状期形态注ＡＥ１１５牙板上皮增厚内陷ＢＥ１２５牙胚向蕾状期发育ＣＥ１３５进入蕾状期ＤＥ１４５帽状期ＥＥ１５５帽状期ＦＥ１６５钟状早期ＧＥ１７５钟状期ＨＥ１８５钟状期ＪＰＮ１Ｅ１９５钟状晚期ＫＰＮ２进入牙体组织形成期ｄｅ牙板上皮ｂ上皮蕾ｍｅ间充质细胞层ｅｏ成釉器ｄｐ牙乳头ｏｅｅ外釉上皮层ｓｒ星网状层ｅｋ釉结ｉｅｅ内釉上皮层ｄｆ牙囊ｓｉ中间层ｓｅｋ继发釉结ｏｂ成牙本质细胞ｐａ前成釉细胞ｐｄ前期牙本质ａｂ成釉细胞ｐｅ前期牙釉质ｄ牙本质图１不同发育阶段ＩＣＲ小鼠下颌第一磨牙牙胚ＨＥ染色形态学观察ＡＥ标尺２０ μｍＦＫ标尺５０ μｍＮｏｔｅＡＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｄｅｎｔａｌｓｈｅｅｔａｔＥ１１５ＢＴｏｏｔｈｇｅｒｍｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｔｏｂｕｄｓｔａｇｅａｔＥ１２５ＣＢｕｄｓｔａｇｅａｔＥ１３５ＤＣａｐｓｔａｇｅａｔＥ１４５ＥＣａｐｓｔａｇｅａｔＥ１５５ＦＥａｒｌｙｂｅｌｌｓｔａｇｅａｔＥ１６５ＧＢｅｌｌｓｔａｇｅａｔＥ１７５ＨＥ１８５ｄｕｒｉｎｇｂｅｌｌｓｔａｇｅＪＬａｔｅｂｅｌｌｓｔａｇｅａｔＰＮ１Ｅ１９５ＫＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄｅｎｔｉｎａｎｄｅｎａｍｅｌａｔＰＮ２ｄｅｄｅｎｔａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｂｂｕｄｍｅｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅｅｏｅｎａｍｅｌｏｒｇａｎｄｐｄｅｎｔａｌｐａｐｉｌｌａｏｅｅｏｕｔｅｒｅｎａｍｅｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｓｒｓｔｅｌｌａｔｅｒｅｔｉｃｕｌｕｍｅｋｅｎａｍｅｌｋｎｏｔｉｅｅｉｎｎｅｒｅｎａｍｅｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｄｆｄｅｎｔａｌｆｏｌｌｉｃｌｅｓｉｓｔｒａｔｕｍｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍｓｅｋｓｅｃｏｎｄａｒｙｅｎａｍｅｌｋｎｏｔｏｂｏｄｏｎｔｏｂｌａｓｔｓｐａｐｒｅａｍｅｌｏｂｌａｓｔｓｐｄｐｒｅｄｅｎｔｉｎａｂａｍｅｌｏｂｌａｓｔｓｐｅｐｒｅｅｎａｍｅｌｄｄｅｎｔｉｎＦｉｇ１ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅＩＣＲｍｏｕｓｅｆｉｒｓｔｍａｎｄｉｂｕｌａｒｍｏｌａｒｔｏｏｔｈｇｅｒｍｄｕｒｉｎｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅｓＡＥＢａｒ２０ μｍＦＫＢａｒ５０ μｍ

4 66 中国比较医学杂志 2017 年 4 月第 27 卷第 4 期 Chin J Comp Med, April 2017,Vol. 27. No. 4 注 :n, 无改变 ;ds, 牙板 ;bu, 蕾状期 ;c, 帽状期 ;be, 钟状期 ;d, 牙本质 ;pe, 前期牙釉质图 2 各发育期的牙胚形态学特征分布 Note. n, none; ds, dental sheet; bu, bud stage; c, cap stage; be, bell stage; d, dentin; pe, pre enamel. Fig. 2 Distribution of morphological features during the first mandibular molar tooth germ development stages of the ICR mouse 特征的样本分别占 66 7% 和 90% 与之类似, 一半以上的样本在 E16 5 d 进入钟状期, 并在 PN1d 到达钟状晚期, 开始分泌牙体硬组织 ( 66 7% ); 而 PN2d90% 以上的样本观察到牙本质及早期牙釉质的分泌形成 3 讨论牙齿的形成是一连续过程, 包括三个主要阶段 : 牙胚的发育牙体组织形成和牙齿萌出从口腔外胚层的增厚起始, 牙胚发育历经蕾状期帽状期, 最终在钟状期形成牙冠的形态, 此阶段为牙胚形态发生完成期 ; 随后牙齿发育进入牙本质及牙釉质等组织分化形成阶段, 当牙冠接近发育完全时, 牙根开始发生, 其间伴随牙周组织逐渐形成, 直至萌出后与其他胚胎器官相似, 牙胚的发育也是口腔上皮和外胚间充质之间相互诱导时序性作用的结果, 是一个复杂的多因素调控的生物学过程 [2] 许多生物分子被证实参与了牙胚发育中的细胞分化和牙形态发生的调控, 如各种生长因子粘附分 [3 - 子转录因子信号分子细胞外基质分子等 5] 但是关于牙胚发育确切机制的研究仍在深入进行中, 这个过程中仍有新的因子不断地被发现报道出来发育生物学的基础性研究中, 一直采用小鼠牙齿作为动物模型之一来研究上皮间充质交互反应组织分化模式发育等 [6] 与小鼠相比, 猪狗乃至猴等大型动物的生理基础和牙齿发育再生模式与人类更为接近, 且 RETN 基因同源性分析结果显示这些大型动物与人类的亲缘关系更近 [7] 其中, 小型猪不仅被证实为是较为理想的异种移植供体, 且在口腔医学研究领域也有应用小型猪建立牙髓坏死模型及颌骨改建方面的研究 [8,9] 然而, 大型动物昂贵的使用成本繁殖及研究周期长基因组信息不完善等缺点使其在基因水平和分子机制研究领域的应用远不及小型啮齿类动物模型应用广 [10 - 泛 12] 而小鼠牙胚获取方便易于基因操控及体外培养, 同时可异位移植发育分化为牙齿样器官 [13] 更重要的是, 尽管与人的牙列不同, 但小鼠的磨牙牙胚发育与人类牙齿发育阶段类似, 并在发育早期具有相似的分子调控机制和基因表达 [14] 证明小鼠磨牙可以被当作研究人类牙齿生理及病理性发育的良好模型, 因此确定小鼠磨牙的发育时序对于进一步从分子生物学角度研究牙齿生长发育规律有着重要的意义然而研究发现不同品系小鼠不仅繁殖能力及行为学表现不同, 且主要脏器和器官的重量和长度均存在显著性差异 [15,16],ICR 小鼠的胃和大脑心脾较 KM 小鼠和 NIH 小鼠更大 [17,18] 在牙齿发育中, 不同品系的小鼠其磨牙胚发育阶段亦略有不同 [19,20] ICR 小鼠由于其繁殖力强遗传操控性好等特点, 已成为国际上最为通用的实验品系之一而对 ICR 小鼠磨牙胚发育的

5 中国比较医学杂志 2017 年 4 月第 27 卷第 4 期 Chin J Comp Med, April 2017,Vol. 27. No 时相规律目前尚未见有报道本研究动态观察了 ICR 小鼠牙胚从开始发育到硬组织形成这一过程的形态学变化发现 ICR 小鼠的妊娠期为 19 5 d, 这与 BALB / c 近交系小 [21] [19] 鼠和 ICR / Jcl 系小鼠的妊娠时间一致, 接近于 albino 系小鼠的 20 d [22] 啮齿类动物磨牙发育中首个出现的可观察到的形态学特征是牙板的形成, 表现为 E11 E12 d 出现口腔上皮的局部增厚 [23] 实验观察到 ICR 小鼠在 E11 5 d 出现上皮增厚, 牙胚开始发育, 这与 BALB / c 近交系小鼠和 albino 系小鼠和 Swiss 小鼠的 E11 到 E12 d 的发育开始时间基本一致 [24], 而比 ICR / Jcl 系小鼠的 E12 5 d 稍早牙胚的发育始动于上皮与间充质的反应, 调控因素非常繁杂, 上皮中特异性表达的信号分子 Shh Wnt BMP 等, 间充质中转录因子 Msx1 和 Pax9 等, 以及 FGF 与 BMP 信号通路间的拮抗反应都决定着牙胚早期发育的时序和方向 [25-27], 而不同物种的调控机制不尽相同联系本研究观察到的结果可以推断, 不同品系小鼠之间, 其牙胚发育早期涉及的信号调控机制也并不完全相同随后的发育过程中, 牙板上皮不断向内折叠, 形成成釉器, 而周围包绕细胞不断聚集形成牙齿间充质, 二者开始相互诱导促使牙胚不断发育, 经历蕾状期帽状期钟状期直至发育完成本实验观察到,ICR 小鼠牙胚在 E13 5 d 处于蕾状期,E14 5 d 开始向帽状期过渡 ;E15 5 d 可观察到明显的原发性釉结, 显示此时期牙胚进入牙尖形态分化期 ;E16 5 d 进入钟状早期, 随着牙胚不断发育, 牙尖位置及牙冠形态愈加成型, 至钟状晚期, 上皮来源的成釉细胞和间充质来源的成牙本质细胞逐渐分化形成并明显分层排列 ;PN1 开始出现硬组织矿化 ; 此结果与 BALB / c 近交系小鼠和 C57 小鼠较为一致, 而均略早于 ICR / Jcl 系小鼠 ( 蕾状期 E13 E14 帽状期 E15 ~ E16 钟状早期 E17), 可能与时间点的计算方式不同有关本实验通过观察 ICR 小鼠的下颌第一磨牙牙胚动态发育过程, 表明 :E11 5d 为牙胚发育的起始阶段, 蕾状期为 E13 5, 帽状期为 E14 5 E15 5, 钟状期开始于 E16 5, 出生后两天牙体硬组织开始逐渐形成, 预示着牙胚发生的完成, 牙齿发育进入组织形成期实验结果为将来针对牙胚特定发育时期的研究提供了可靠依据参考文献 : [ 1 ] Thesleff I. Current understanding of the process of tooth formation: transfer from the laboratory to the clinic [ J]. Aust Dent J, 2014, 59 (Suppl 1): [ 2 ] Thesleff I. Epithelial mesenchymal signaling regulating tooth morphogenesis [J]. Cell Sci, 2003, 116: [ 3 ] Zhang YD, Chen Z, Song YQ, et al. Making a tooth: growth factors, transcription factors, and stem cells [ J]. Cell Res, 2005,15: [ 4 ] Pispa J, Thesleff I. Mechanisms of ectodermal organogenesis [J]. Dev Biol, 2003, 262: [ 5 ] Li L, Yuan G, Liu C, et al. Exogenous fibroblast growth factor 8 rescues development of mouse diastema vestigial tooth ex vivo [J]. Dev Dyn, 2011, 240: [ 6 ] Thesleff I, Pispa J. The teeth as models for studies on the molecular basis of the development and evolution of organs [M]. In: CM Chuong, RG Landes, eds. Molecular Basis of Epithelial Appendage Morphogenesis. Austin, TX 1998: [ 7 ] 鲁帅尧, 龙海亭, 禹文海, 等. 人类与部分实验动物 RETN 基因同源性分析 [ J]. 中国实验动物学报,2012, 20 (5 ): [ 8 ] 庞琳琳, 张会永, 杨关林. 巴马小型猪在医学研究中的应用进展 [J]. 中国实验动物学报,2014, 22(1): [ 9 ] 陈华. 小型猪在医学研究领域的应用进展 [ J]. 中国实验动物学报,2008, 16(5): [10] Tuker AS, Fraser GJ. Evolution and developmental diversity of tooth regeneration [J]. Semin Cell Dev Biol, 2014, 25-26: [11] 王福, 吴志芳, 李阳, 等. 利用大型动物模型研究牙发育及再生的优劣势 [J]. 口腔医学研究,2015, 31(6): [12] 刘新玉, 董伟, 张连峰. 小鼠的遗传分析技术及疾病模型 [J]. 中国比较医学杂志, 2005(1): [13] Zhang YD, Chen Z, Song YQ, et al. Making a tooth: growth factors, transcription factors, and stem cells [ J]. Cell Res. 2005, 15(5): [14] Lan Y, Jia S, Jiang R. Molecular patterning of the mammalian dentition [J]. Semin Cell Dev Biol, 2014, 25-26: [15] 李腾飞, 孙秀萍, 石哲, 等. 不同品系小鼠在三种常见抑郁检测方法中的行为学表现 [J]. 中国比较医学杂志, 2011, 21 (8): [16] 殷昆仑, 张长勇, 王天奇, 等. GDF 9 和 BMP 15 在不同品系小鼠中的多态性和生殖能力关联分析 [J]. 中国比较医学杂志, 2013, 23(3): [17] 胡一江, 李辉, 刘海燕, 等. 三个不同品种小鼠主要器官重量及长度的比较 [ J]. 中国比较医学杂志, 1997, 7 (2): [18] 卢胜明, 胡建武, 车路平, 等. 10 种常用 SPF 级实验大小鼠体重及主要脏器的测定 [J]. 实验动物科学, 2007, 24(3): [19] Gaete M,Lobos N,Torres Quitana MA. Mouse tooth development time sequence determination for the ICR / Jcl strain [ J]. J Oral Sci, 2004, 46(3): [20] Gaunt, WA. The development of the molar pattern of the mouse (Mus musculus) [J]. Acta Anat ( Basel), 1955; 24(3-4):

６８２１中国比较医学杂志２０１７年４月第２７卷第４期２４９６８２２ＣｏｈｎＳＡＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｍｏｌａｒｔｅｅｔｈｉｎｔｈｅａｌｂｉｎｏｍｏｕｓｅ２３ＲｕｃｈＪＶＴｏｏｔｈｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＭＩｎ２４２５ｐｌａｙｓａｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎ

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6 ６８２１中国比较医学杂志２０１７年４月第２７卷第４期２４９６８２２ＣｏｈｎＳＡＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｍｏｌａｒｔｅｅｔｈｉｎｔｈｅａｌｂｉｎｏｍｏｕｓｅ２３ＲｕｃｈＪＶＴｏｏｔｈｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＭＩｎ２４２５ｐｌａｙｓａｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｏｄｏｎｔｏｇｅｎｉｃｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅ陈筑高波李明云ＢＡＬＢｃ小鼠下颌第一磨牙的动态组织学观察Ｊ贵州医药２０１２３６９７７６７７８ＪＡｍＪＡｎａｔ１９５７１０１２９５３２０ＤｅｎｔｉｎａｎｄＤｅｎｔｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓＡＬｉｎｄｅｅｄＢｏｃａＲａｔｏｎＦＬＣＲＣＰｒｅｓｓ１９８４ｐｐ４７７９ＤａｓｓｕｌｅＨＲＭａｃＭａｈｏｎＡＰＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｔｏｏｔｈＪＤｅｖＢｉｏｌ１９９８２０２２１５２２７ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄＡｐｒｉｌ２０１７Ｖｏｌ２７Ｎｏ４ｄｕｒｉｎｇｅａｒｌｙｔｏｏｔｈｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＪＤｅｖＢｉｏｌ２００９３３４１７４２６１８５Ｎｅｕｂ üｓｅｒＡＰｅｔｅｒｓＨＢａｌｌｉｎｇｓＲｅｔａｌＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎＦＧＦａｎｄＢＭＰ４ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓＡｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇｔｈｅｓｉｔｅｓｏｆｔｏｏｔｈｆｏｒｍａｔｉｏｎＪＣｅｌｌ２７１９９７９０１４７５５ＯＣｏｎｎｅｌｌＤＪＨｏＪＷＭａｍｍｏｔｏＴｅｔａｌＡＷｎｔｂｍｐｆｅｅｄｂａｃｋｃｉｒｃｕｉｔｃｏｎｔｒｏｌｓｉｎｔｅｒｔｉｓｓｕｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｄｙｎａｍｉｃｓｉｎｔｏｏｔｈｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓＪＳｃｉＳｉｇｎａｌ２０１２５２０６ｒａ４ＣｈｅｎＪＬａｎＹＢａｅｋＪＡｅｔａｌＷｎｔｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇ修回日期２０１６１１０１简讯小型猪吹管麻醉方法介绍刘天文王帆张杰民李军刘晓程泰达国际心血管病医院天津３００４５７小型猪麻醉的传统方法为腹腔注射２０ｍｇｋｇ氯胺酮００２５ｍｇｋｇ阿托品有人对麻醉方法进行改进肌内注射氯胺酮复合戊巴比妥钠２或１用陆眠宁复合氯胺酮进行基础麻醉或诱导麻醉效果良好首都医科大学平谷教学医院曾用陆眠宁复合咪达唑仑完成诱导麻醉４但以上方法使３用较为狭小的笼具去限制动物的活动致使生性胆小的小型猪在实验前就出现躁狂应激影响麻醉药品的使用剂量及实验数据采集泰达国际心血管病医院以下简称泰心医院下腹腔或肌内注射麻醉但多数动物会出现惊恐神情紧张的表现以及笼内疾走冲撞笼壁试图外逃等强烈的应激行为既影响麻醉效果又影响相关的检查项目如动物应激后血糖会升高心率加快甚至出现心律失常影响１８ＦＦＤＧ心肌代谢显像泰心医院动物实验中心在２０１２２０１５年利用自制麻醉吹管完成２００余例小型猪实验保证实验动物在安静自由的环境下最小应激反应的条件下完成基础麻醉符合国际实验动物的福利伦理要求下转第８８页动物实验中心也曾借鉴其他科研单位的动物笼具设计利用可移动挡板限制动物的活动完成皮图１自制麻醉吹管图２麻醉吹针

牙的发育

第二章牙的发育 Chapter 2 Development of Teeth Designed and produced by Dr. Wang Li 1 概述牙及其支持组织是从上下颌突和额鼻突的外胚层及外胚间叶细胞发育而来牙齿发育是一长期复杂的生物学过程牙齿发育是一个连续的过程, 包括牙胚的发生牙体组织形成和牙齿的萌出 Designed and produced by Dr. Wang