118 新医学 2016 年 2 月第 47 卷第 2 期妊娠结局的能力仍不清楚有研究认为胚胎发育和扩张等级是预测种植成功与否的重要指标 [5 6] [7] Shapiro 等认为内细胞团质量与种植率相关, [8] Gardner 等认为滋养细胞质量与种植率呈正相关本研究回顾分析了本中心 10

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裟李
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1 117 解冻后囊胚形态学评分对复苏单囊胚人工周期移植临床妊娠的影响临床研究论著李为玉陈攀宇方丛梁晓燕摘要目的分析在玻璃化冷冻复苏单囊胚移植周期中, 解冻后囊胚扩张程度内细胞团和滋养细胞质量对临床妊娠的影响方法收集 1005 例第一周期复苏单囊胚移植的资料, 进行囊胚扩张内细胞团和滋养细胞评分, 采用二分类 Logistic 回归 (Enter 法 ) 分析, 评估 3 项评分及年龄对临床妊娠的影响结果解冻后第 5 日单囊胚 (D5) 移植组第 6 日单囊胚 (D6) 移植组的临床妊娠率分别为 54 61% 38 49%, 组间比较差异有统计学意义 (P<0 01),D5 移植组女方年龄低于 D6 组 (P<0 01);D5 单囊胚解冻后内细胞团评分低和年龄大是临床妊娠结局的危险因素 (OR=1 733, 95%CI:1 213~2 475;OR=0 938,95%CI:0 906~0 972,P 均 <0 001), 囊胚扩张程度及滋养细胞与妊娠结局无关 (P 均 >0 05);D6 囊胚解冻移植中妊娠与非妊娠组的囊胚扩张程度内细胞团滋养细胞均与妊娠结局无关结论在进行冷冻复苏单囊胚移植时,D5 囊胚优先考虑内细胞团质量关键词单囊胚移植 ; 冷冻复苏胚胎移植 ; 形态学评分 ; 内细胞团 ; 滋养层细胞 Efectofblastocystmorphologicalscoringonclinicalpregnancyinsinglefrozen thawedblastocyst transfercycles LiWeiyu,ChenPanyu,FangCong,LiangXiaoyan ReproductiveCenter,theSixthAfiliated HospitalofSunYat senuniversity,guangzhou510610,china Corespondingauthor,FangCong,E mail:fangconggd@163 com Abstract Objective Toevaluatetheefectofembryoexpansion,innercelmasandtrophecto dermqualityonclinicalpregnancyduringsinglefrozen thawedblastocysttransfercycles Methods Atotalof 1005cyclesofsingleblastocysttransferwerecolectedforgradingofembryoexpansion,innercelmasand trophectodermscoring Binarylogisticregresionwasutilizedtoasestheefectofthesemorphologicalscores onclinicalpregnancy Results Clinicalpregnancyrateintheembryoat5daftersingleembryotransfer(D5) was54 61%,significantlyhighercomparedwith38 49% inthed6(p<0 01) Theageofpatientsinthe D5transfergroupweresignificantlyyoungerthanthoseintheD6group(P<0 01) Low innercelmassco ringandhigh agewereriskfactorsofclinicalpregnancyind5singlefrozen thawedbalstocysttransfer(or= 1 733,95%CI:1 213~2 475;OR=0 938,95%CI:0 906~0 972,bothP<0 001),whereasembryo expansionandtrophectodermwerenotcorelatedwithclinicalpregnancy(bothp>0 05) Embryoexpansion, innercelmasandtrophectoderm scoringwerenotasociatedwithclinicalpregnancyind6singleblastocyst transferbetweenpregnantandnon pregnantgroups Conclusion InD5frozen thawedsingleblastocysttrans fer,innercelmasscoringshouldbeemphasized Keywords Singleblastocysttransfer;Frozen thawedembryotransfer; Morphologicalscoring;Innercelmas;Trophectoderm 随着体外受精胚胎移植 (IVF ET) 技术的飞跃发展以及治疗经验的不断积累, 多胎妊娠发生率不断升高, 单胚胎移植已成为国内外专家的共识 [1 2] 囊胚培养有利于挑选发育潜能较高的胚胎 [3] 其中如何挑选囊胚进行单胚胎移植成为临床的关键囊胚质量有 3 项评价指标 : 胚胎扩张程度内细胞团和滋养细胞质量 [4] 当这 3 项指标达到最佳状态时妊娠率最高, 然而每一项指标预测 DOI: /j isn 基金项目 : 广东省自然科学基金资助项目 (s ) 作者单位 : 广州, 中山大学附属第六医院生殖医学中心通讯作者, 方丛,E mail:fangconggd@foxmail com

2 118 新医学 2016 年 2 月第 47 卷第 2 期妊娠结局的能力仍不清楚有研究认为胚胎发育和扩张等级是预测种植成功与否的重要指标 [5 6] [7] Shapiro 等认为内细胞团质量与种植率相关, [8] Gardner 等认为滋养细胞质量与种植率呈正相关本研究回顾分析了本中心 1005 例玻璃化冷冻复苏第一周期单囊胚移植的临床妊娠结果, 探讨临床妊娠结局与囊胚扩张程度内细胞团滋养细胞质量的相关性, 以期更好地指导临床工作一研究对象材料与方法 2010 年 6 月至 2015 年 4 月在我中心第一周期行冷冻复苏单囊胚移植 1005 例其中第 5 日单囊胚 (D5) 移植 727 周期 (D5 移植组 ), 第 6 日单囊胚 (D6) 移植 278 周期 (D6 移植组 ) 纳入标准 :1 患者既往无冷冻移植周期, 此次为第一周期复苏单囊胚移植 ;2 女方年龄小于或等于 45 岁 ; 3 已使用激素替代治疗 (HRT) 周期进行内膜准备排除标准 : 有子宫腺肌症宫腔粘连移植日子宫内膜小于 7mm 者二方法 1 囊胚培养及囊胚评分常规体外受精或单精子胞浆内注射受精 (IC SI), 受精后第 3 日将符合囊胚培养评分标准的胚胎转移至囊胚培养基 (G5series, 瑞典 ) 行囊胚培养 [9] 第 5 6 日观察胚胎并按照 Gardner 评分系统对胚胎扩张进行评分 : 根据囊腔扩张程度进行分期, 囊腔小于胚胎体积的 50% 为 1 期, 超过 50% 为 2 期, 占满整个胚胎为 3 期, 囊腔扩张透明带变薄为 4 期, 囊胚开始从透明带里孵出为 5 期, 囊胚完全孵出为 6 期 [10] 对处于 3~6 期的囊胚内细胞团和滋养外胚层进行评分 :1 内细胞团评分, 细胞数量多且分布紧密为 A 细胞数量较少且分布松散为 B 细胞数量极少则为 C;2 滋养外胚层评分, 较多的细胞形成连接紧密的上皮层为 A 较少的细胞连接松散为 B 细胞少且体积大为 C 以 A 为高 B 为中 C 为低本中心胚胎冷冻的标准为 :D5 评分达 3BB 及以上的进行冷冻, 若第 5 日未达以上标准, 则继续培养至第 6 日再按照以上标准冷冻当患者无符合 3BB 以上标准的囊胚时, 经告知后并签署知情同意书后对次级胚胎进行冷冻 2 囊胚的冷冻与复苏冷冻复苏囊胚采用本中心常规玻璃化冷冻及复苏方法操作, 囊胚在冷冻复苏后采用激光系统 (ZILOS tklaserzonadrilsystem, 美国 Hamilton ThornBioscience) 进行辅助孵化, 体外培养 2~3h 后进行胚胎移植 3 内膜准备采用 HRT 准备内膜, 自月经第 3 日开始使用戊酸雌二醇 ( 补佳乐, 拜耳 ), 根据内膜生长情况调整用量内膜达到 7mm 及以上且雌激素作用时间不少于 10d 时开始肌内注射黄体酮 40mg/d, 黄体酮注射后的第 5 日或第 6 日进行移植 4 妊娠结局评价移植后 12 日测血清 β 人绒毛膜促性腺激素 (β HCG), 若 β HCG> 50U/L, 则定义为妊娠妊娠阳性者移植 35d 后行阴道 B 超, 见孕囊为临床妊娠三统计学处理采用 SPSS13 0 软件进行统计分析计量资料以 x±s 珋表示, 组间比较采用 t 检验, 无序分类资料组间比较采用 χ 2 检验, 有序分类资料组间比较采用 Wilcoxon 秩和检验多因素分析采用多变量 Logistic 回归分析模型 (Enter 法 ) P<0 05 为差异有统计学意义结果一 D5 D6 移植组的一般情况及移植结局比较根据纳入和排除标准筛选出 1005 个周期 D5 D6 移植组患者不孕年限不孕类型 BMI 移植日子宫内膜厚度胚胎复苏率流产率早产率比较差异均无统计学意义 (P>0 05) 与 D6 移植组相比,D5 移植组患者年龄较低临床妊娠率较高 (P 均 <0 01), 见表 1 二 D5 D6 复苏囊胚评分与临床妊娠关系分析 D6 复苏囊胚的妊娠与非妊娠组间年龄比较差异有统计学意义 (P<0 05),2 组间胚胎扩张程度内细胞团及滋养细胞比例比较差异均无统计学意义 (P 均 >0 05) D5 复苏囊胚的妊娠与非妊娠组间的胚胎扩张程度比较差异无统计学意义 (P> 0 05),2 组间内细胞团滋养细胞和年龄比较差异均有统计学意义 (P 均 <0 05), 见表 2 Logis tic 回归分析 ( 赋值 : 妊娠 =1; 非妊娠 =0) 发现低内细胞团评分对临床妊娠的 OR 值最高 (1 733, 95%CI:1 213~2 475,P<0 01), 年龄大也是临床妊娠结局的危险因素 (OR=0 938,95%CI: 0 906~0 972), 而滋养细胞及胚胎扩张程度与临床妊娠结局无关 (P 均 >0 05), 见表 3

3 119 表 1 D5 D6 移植组的一般情况及妊娠结局比较项目周期数 D5 移植组 (727 周期 ) D6 移植组 (278 周期 ) χ 2 /t 值 P 值年龄 ( 岁 ) ± ± <0 001 不孕年限 ( 年 ) ± ± 不孕类型 [ 周期 (%)] 原发性不孕症 (44 0) 111(39 9) 继发性不孕症 (56 0) 167(60 1) BMI(kg/m 2 ) ± ± 子宫内膜厚度 (mm) ± ± 胚胎复苏率 [ 例 (%)] (100) 278(100) 临床妊娠 [ 例 (%)] 是 (54 6) 107(38 5) 20 9 <0 001 否 (45 4) 171(61 5) 流产 [ 周期 (%)] 是 60 47(11 8) 13(12 1) 否 (88 2) 94(87 9) 早产 [ 周期 (%)] 是 12 9(3 4) 3(3 2) 否 (97 4) 91(96 8) 注 : 胚胎复苏率 = 复苏胚胎数 / 解冻胚胎数表 2 D5 D6 移植组囊胚评分与临床妊娠结局的单因素分析项目临床妊娠 (D5 移植组,727 周期 ) - + Z/t 值 P 值临床妊娠 (D6 移植组,278 周期 ) - + Z/t 值 P 值胚胎扩张期期期期内细胞团 A B C 滋养细胞 < A B C 年龄 32 4± ± < ± ±

4 120 新医学 2016 年 2 月第 47 卷第 2 期表 3 D5 移植组囊胚评分与临床妊娠结局的多因素分析项目 β 值 SE 值 Wald 值 P 值 OR 值 95%CI 内细胞团 ~2 475 滋养细胞 ~1 867 胚胎扩张 ~1 185 年龄 < ~0 972 讨研究发现, 在 25~37 岁患者中单囊胚与双囊胚移植后妊娠率分别为 73 8% 77 5%, 活产率分别为 59 0% 60 7%, 而后者双胎率高达 47 6% [11] 多胎妊娠会导致一系列的产科并发症, 如早产流产妊娠期高血压疾病等 [12] 具有较高发育潜能的优质单囊胚在保证妊娠率的同时可有效降低双胎妊娠率, 降低了产妇与围生儿的危险我中心第一周期复苏单囊胚移植 1005 周期数据显示, 临床妊娠率为 50 15% (504/1005) 囊胚的选择是单胚胎移植技术的关键, 现阶段国内普遍采用囊胚 Gardner 形态学评分这一经典方法胚胎扩张程度内细胞团滋养细胞这三者之间具有相对独立性, 移植时给囊胚选择带来困惑 [13] [14] Honnma 等对 1087 例冷冻复苏第一周期单囊胚移植进行分析, 认为滋养细胞与继续妊娠率有关, 而内细胞团以及胚胎扩张程度对继续妊娠率没有影响, 考虑以后发育为胎盘的滋养细胞在着床过程中起着至关重要的作用, 同时胎盘分泌 HCG 介导母胎界面的免疫抑制, 为胚胎的继续发育提供保障, 所以滋养细胞质量对临床妊娠有重要的预测 [15] 作用 Kovacic 等对 1396 个囊胚和桑椹胚分析发现内细胞团与植入潜能相关性最大,Takahashi [16 18] 等也有相似的结论, 认为内细胞团将来发育成为胎儿, 是妊娠的关键因素, 胎儿的异常直接影响滋养层细胞功能以及胚胎发育速度, 由此认为内细胞团比滋养细胞层和胚胎扩张程度有更重要的意义本中心数据显示,1005 周期冷冻复苏第一周期单囊胚移植中, 内细胞团滋养细胞及年龄与临床妊娠率均有相关, 囊胚扩张程度与妊娠率没有相关性, 这与 Kovacic 和 Takahashi 等报道一致根据胚胎发育天数分为 D5 和 D6, 分别对两亚组分析, 数据显示在 D5 单囊胚解冻后内细胞团评分低年龄大均是临床妊娠结局的独立危险因素, 滋养细胞及囊胚扩张程度与妊娠结局无关,D6 囊胚解冻移植中妊娠组与非妊娠组的囊胚扩张程度内细胞论团滋养细胞比较差异均没有统计学意义, 说明 D6 单囊胚妊娠结局除胚胎形态学评分之外仍有其他重要的影响因素, 但不排除由于样本量较少而得不到有意义的统计学差异同时本研究还发现在冷冻复苏第一周期单囊胚移植中,D5 囊胚移植的临床妊 [19] 娠率显著高于 D6 囊胚, 这与李城等的报道一致综上所述, 第一周期解冻后 D5 内细胞团评分以及患者年龄升高是影响临床妊娠率的危险因素, 其中内细胞团评分低的相对风险值更高, 提示我们在进行冷冻复苏单囊胚移植时, 对于 D5 胚胎优先考虑内细胞团质量参考文献 [1] GotoS,KadowakiT,TanakaS,HashimotoH,KokeguchiS, ShiotaniM Predictionofpregnancyratebyblastocystmorphologi calscoreandage,basedon1,488singlefrozen thawedblasto cysttransfercycles FertilSteril,2011,95(3): [2] HarbotleS,HughesC,CutingR,RobertsS,BrisonD;Aso ciationofclinicalembryologists& The(ACE)BritishFertility Society(BFS) ElectiveSingleEmbryoTransfer:anupdateto UK BestPracticeGuidelines Hum Fertil(Camb),2015,18 (3): [3] Ahlstr ma,westinc,reismere,wiklandm,hardarsont Trophectodermmorphology:animportantparameterforpredicting livebirthaftersingleblastocysttransfer HumReprod,2011,26 (12): [4] Ahlstr ma,westinc,wiklandm,hardarsont Predictionof livebirthinfrozen thawedsingleblastocysttransfercyclesbypre freezeandpost thawmorphology HumReprod,2013,28(5): [5] ParksJC,McCalieBR,JaneschAM,SchoolcraftWB,Katz JafeMG Blastocystgeneexpresioncorelateswithimplantation potential FertilSteril,2011,95(4): [6] 林海燕, 李予, 王文军, 陈向红, 阙文清, 陈玉珍, 杨冬梓, 张清学超促排卵周期中获卵数多于 20 个患者的临床分析新医学,2012,43(9): [7] ShapiroBS,DaneshmandST,GarnerFC,AguireM,Hudson C,ThomasS Evidenceofimpairedendometrialreceptivityafter ovarianstimulationforinvitrofertilization:aprospectiverandom izedtrialcomparingfreshandfrozen thawedembryotransfersin highresponders FertilSteril,2011,96(2): [8] GardnerDK,LaneM,StevensJ,SchlenkerT,Schoolcraft

121 WB Blastocystscoreafectsimplantationandpregnancyoutcome: towardsa single blastocysttransfer FertilSteril, 2000, 73 (6):1155 1158 [9] 贾磊, 岳超敏, 宫晓, 方丛, 张敏芳, 梁晓燕移植复苏周期第 5 日和第 6 日冻融囊胚发育潜能的比较新医学,

5 121 WB Blastocystscoreafectsimplantationandpregnancyoutcome: towardsa single blastocysttransfer FertilSteril, 2000, 73 (6): [9] 贾磊, 岳超敏, 宫晓, 方丛, 张敏芳, 梁晓燕移植复苏周期第 5 日和第 6 日冻融囊胚发育潜能的比较新医学, 2013,44(11): [10] 岳超敏, 方丛, 宫晓, 李俐琳, 李婷婷, 梁晓燕. 囊胚解冻过夜培养后移植对妊娠结局的影响. 中山大学学报 ( 医学科学版 ),2013,34(3): [11] UbaldiFM,CapalboA,ColamariaS,FereroS,MaggiuliR, VajtaG,SapienzaF,CimadomoD,GiulianiM,GravotaE, VaiareliA,RienziL Reductionofmultiplepregnanciesinthe advancedmaternalagepopulationafterimplementationofanelec tivesingleembryotransferpolicycoupledwithenhancedembryo selection:pre andpost interventionstudy HumReprod,2015, 30(9): [12] 连伟玲, 金海霞, 孙莹璞, 辛志敏, 宋文妍. 新鲜周期选择性移植单个囊胚对降低多胎妊娠风险的作用. 生殖与避孕,2012,32(6): [13] HilMJ,RichterKS,HeitmannRJ,Graham JR,TuckerMJ, DeCherneyAH,BrownePE,LevensED Trophectoderm grade predicts outcomes ofsingle blastocysttransfers FertilSteril, 2013,99(5): [14] HonnmaH,BabaT,SasakiM,HashibaY,OhnoH,Fukunaga T,EndoT,SaitoT,AsadaY Trophectodermmorphologysignifi cantlyafectstheratesofongoingpregnancyandmiscariagein frozen thawedsingle blastocysttransfercycleinvitrofertiliza tion FertilSteril,2012,98(2): [15] KovacicB,VlaisavljevicV,ReljicM,Cizek SajkoM Develop mentalcapacityofdiferentmorphologicaltypesofday5human morulaeandblastocysts ReprodBiomedOnline,2004,8(6): [16] TakahashiT,IgarashiH,AmitaH,HaraS,KurachiH Celular andmolecularmechanismsofvarioustypesofoocyteagingreprod MedBiol,2011,10(4): [17] MaheshwariA,GrifithsS,BhatacharyaS Globalvariationsin theuptake ofsingle embryo transfer Hum Reprod Update, 2011,17(1): [18] 薛侠, 施文浩, 师娟子, 张四林, 赵皖秋, 孙宏志, 周寒鹰, 田莉, 刘珊 D5 选择性的单囊胚移植和双囊胚胎移植妊娠结局比较. 生殖医学杂志,2014,23(4): [19] 李城, 李梅, 马水英, 吴克良, 赵海滨, 陈子江不同发育天数冻融单囊胚移植的临床结局比较现代妇产科进展, 2014,23(2): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 林燕薇 )

西安交通大学学报医学版第卷近年来随着辅助生殖技术的飞速发展通过辅助生殖技术助孕的夫妇数量逐年增加而如何提高临床妊娠率种植率降低流产率并最终生育一个健康活产儿一直是试管技术进一步发展的核心方向首先随着囊胚培养技术的稳定发展移植囊胚甚至是移植一枚优质的单囊胚已经成为趋势体外

西安交通大学学报医学版第卷近年来随着辅助生殖技术的飞速发展通过辅助生殖技术助孕的夫妇数量逐年增加而如何提高临床妊娠率种植率降低流产率并最终生育一个健康活产儿一直是试管技术进一步发展的核心方向首先随着囊胚培养技术的稳定发展移植囊胚甚至是移植一枚优质的单囊胚已经成为趋势体外第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"$ %&&!& 技术方法研究激光人工皱缩对囊胚玻璃化冷冻后妊娠结局的影响任文娟师娟子李明昭张四林薛侠赵皖秋洪慧慧周党侠西安交通大学基础医学院病理学系陕西西安西北妇女儿童医院生殖中心陕西西安摘要目的探讨囊胚激光人工皱缩预处理方法 $%& 在人囊胚玻璃化冻融中的应用效果方法选取年月日至年月日期间的患者行解冻囊胚周期