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眺诊宰
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1 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 218, 38(1) 5 doi: /j.issn View this article at: 长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制杨艳飞, 邢育珍 ( 华中科技大学同济医学院附属协和医院口腔科, 武汉 43) [ 摘要 ] 目的 : 研究长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)ANRIL 对口腔鳞状细胞癌细胞增殖及凋亡的影响, 并探讨其机制方法 :qrt-pcr 检测 LncRNA ANRIL 在 SCC-4,Cal-27,TSCCA 及 Tca8113 口腔鳞癌细胞系和正常口腔上皮细胞系 HOK 中的表达, 将 TSCCA 细胞系分成和, 采用 Lipofetamine TM 2 分别转染 lncrna-anril-shrna 及随机对照序列 lncrna- ANRIL-NC, 采用 CCK-8 和克隆形成实验测定细胞增殖, 流式细胞术测定细胞凋亡,Western 印迹检测 Cleaved Caspase-3,KLF2 和 P21 的蛋白表达结果 :LncRNA ANRIL 在口腔鳞癌细胞系 SCC-4, Cal-27,TSCCA 及 Tca8113 中的相对表达量显著高于正常口腔上皮细胞系 HOK(P<.5) 转染,24 及 48 h 后, 与 OD 45 nm 值比较差异均无统计学意义 (P>.5); 转染 72 及 96 h 后, 与 OD 45 nm 值比较差异均有统计学意义 (P<.5) 克隆形成率为 21.54%±2.3%, 显著低于的 53.72%±5.93%() 凋亡率 (14.7%±.9%) 高于 (4.9%±.7%,) 裂解型 Caspase-3 蛋白相对表达量 (4.1±.44) 显著高于的 1.±.3() KLF2 蛋白相对表达量 (.53±.6) 低于 (1.±.3,P<.5) P21 蛋白相对表达量 (.46±.5) 低于 (1.±.3,P<.5) 结论:LncRNA ANRIL 高表达于口腔鳞癌细胞系,lncRNA ANRIL 沉默抑制细胞增殖诱导凋亡, 其机制可能与上调裂解型 Caspase-3, 下调 KLF2 和 P21 蛋白表达有关 [ 关键词 ] 长链非编码 RNA; 口腔鳞状细胞癌 ; 增殖 ; 凋亡 Effect of long non-coding RNA ANRIL on proliferation and apoptosis in oral squamous cell carcinoma and its mechanism YANG Yanfei, XING Yuzhen (Department of Stomatology, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 43, China) Abstract Objective: To investigate the influence of long non-coding RNA (lncrna) ANRIL on proliferation and apoptosis in oral squamous cell carcinoma cell line and its mechanism. Methods: The real time fluorescence 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 邢育珍, xinyuzhen898@126.com 基金项目 (Foundation item): 湖北省自然科学基金 (216CFB67) This work was supported by Natural Science Foundation of Hubei Province, China, (216CFB67).

2 6 临床与病理杂志, 218, 38(1) Keywords quantitative PCR was used to detect and compare lncrna ANRIL level in normal squamous cell line, HOK and four kinds of human oral squamous cell carcinoma cell line (SCC-4, Cal-27, TSCCA and Tca8113). The TSCCA cell line was divided into two groups, ANRIL gene silencing group (transfected with lncrna-anrilshrna by Lipofetamine TM 2) and control group (transfected with negative randomized LncRNA-ANRIL- NC sequence by Lipofetamine TM 2). The proliferation capability and colony forming efficiency was detected by CCK-8 kit and colony formation assay respectively. The cell apoptosis rate was detected and compared upon FACS method between two groups. Finally, the protein levels of Cleaved Caspase-3, KLF2 and P21 was measured and compared between two groups by western blot. Results: The expression level of LncRNA ANRIL among four kinds of human oral squamous cell carcinoma cell line (SCC-4, Cal-27, TSCCA and Tca8113) was significantly higher than that in normal squamous cell line, HOK (P<.5). After transfection for, 24, 48, 72 and 96 hours, the OD 45 nm value of control group vs ANRIL gene silencing group was.38±.4 vs.37±.4 (P>.5),.58±.4 vs.51±.5 (P>.5),.89±.1 vs.67±.6 (P>.5), 1.2±.9 vs.83±.7 (P<.5) and 1.87±.13 vs 1.16±.1 (), respectively. The colony formation rate was 21.54%±2.3% and 53.72%±5.93% in ANRIL gene silencing group and control group, respectively (). The result of FACS method demonstrated that the cell apoptosis rate was 14.7%±.9% in the ANRIL gene silencing group and 4.9%±.7% in the control group, respectively (). Western blot indicated that the expression level of cleaved caspase-3 protein was 4.1±.44 in ANRIL gene silencing group, which was significantly higher than that in control group (). The expression level of KLF2 protein was.53±.6 in ANRIL gene silencing group, which was significantly lower than 1.±.3 in the control group (P<.5). While the expression level of P21 was.46±.5 in the ANRIL gene silencing group, which was significantly lower than 1.±.3 in the control group (P<.5). Conclusion: LncRNA ANTIL was over-expression in human oral squamous cell carcinoma cell line. Silencing lncrna ANTIL could inhibit proliferation and induce apoptosis in human oral squamous cell carcinoma, which mechanism may be associated with up-regulation of Caspase-3, down-regulation of KLF2 and P21 protein. lncrna ANRIL; oral squamous cell carcinoma; proliferation; apoptosis 口腔鳞状细胞癌 (oral cavity squamous cell carcinoma, OSCC) 是头颈颌面部常见的恶性肿瘤之一, 发病率逐年增加 [1] 口腔鳞状细胞癌的治疗常采用手术放化疗和分子靶向治疗, 但由于其恶性程度高, 术后易复发及转移, 故预后不佳 [2] 长链非编码 RNA(long non-coding RNA, lncrna) 是一类长度在 2 nt, 缺少完整的开放阅读框架且不能编码蛋白质的 RNA 片段 [3-4] [4-5] 研究证实 lncrna 与肿瘤增殖侵袭转移及复发相关, 广泛参与肿瘤的发生发展过程 LncRNA ANRIL 是定位于人 9p21 染色体上 CDKN2A/B 基因丛转录的 lncrna, 长度约为 3 8 nt [6-1] 据报道 [6-1], 在多种良恶性疾病中, 均发现 lncrna ANRIL 表达异常然而, 目前鲜见关于 lncrna ANRIL 与口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡关系的报道本研究旨在体外研究 LncRNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌细胞增殖及凋亡的影响并探索其可能的机制 1 材料与方法 1.1 材料口腔鳞癌细胞系 SCC-4, Cal-27, TSCCA, Tca8113 及正常口腔上皮细胞系 HOK 均购自中国协和医科大学实验医学中心细胞库, 实验所需的 KLF2, P21 及 GAPDH 一抗均购自美国 Invitrogen 公司, 二抗购自武汉博士德生物科技有限公司, pcdna3.1 载体均由广州锐博生物公司定制 Lipofectamine TM 2 转染试剂和 RT-PCR 仪购自美国 BD 公司,HBS-196B 酶标仪购自南京德铁实验设备有限公司, 蛋白免疫印迹电泳设备购自美国 Bio-Rad 公司

长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制杨艳飞, 等 7 1.

3 长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制杨艳飞, 等细胞培养转染及分组口腔鳞癌细胞系 SCC-4, Cal-27, TSCCA, Tca8113 及正常口腔上皮细胞系 HOK 均种植于 RPMI 164 培养基, 并培养于 37 5%CO 2 培养箱中, 于 48 h 后消化传代取 TSCCA 细胞系分成两组, 和, 利用 Lipofectamine TM 2 分别转染 pcdna3.1-lncrna-anril-shrna 及 pcdna3.1-lncrna-anril-nc 序列 : 正向 5 ' -GGTCUTCTCUTTGCTCTUTCC-3', 反向 5 ' -GGUUUGUGCUUUGUGUUGUCC-3'; 对照 shrna 序列 : 正向 5'-UUCUCCGAACGUGUCAC- GU TT-3', 反向 5 ' -UCGTGUCUCGTTCGGUG- UUTT-3', 转染浓度为 3 nmol/ 孔 1.3 RNA 提取及实时荧光定量 PCR(qRT-PCR) LncRNA ANRIL 的测定 : 用 All-in-One mirna 抽提试剂盒和 All-in-One mirna qrt-pcr 检测试剂盒提取和分离 RNA, 提取 RNA 后, 采用 NanoDrop1 分光光度计对 RNA 的浓度进行测定, 在 79HT 荧光定量 PCR 系统 ( 美国 Applied Biosystems) 测定通过阈值分析比较, 采用循环数 (Ct) 法对数据行分析处理 ANRIL 引物序列 : 正向 5 ' -GAATTGCGTCATTTAAAGCCTAG- TT-3', 反向 5 ' -GTTTCATCCTACCACTCCCA- ATTA AT-3';GAPDH 正向引物 :5'-TGGCACCCA- GCACAATGAA-3', 反向引物 :3'-CTA AGTCATA- GTCCGCCTAGAAGCA-5' ) 定量采用 2 ΔΔCt 法, GAPDH 为内参, 计算 lncrna ANRIL 的相对表达量 1.4 细胞增殖能力测定 CCK-8 法测定两组细胞增殖能力, 将 ANRIL 基因沉默组和两组细胞消化成单细胞悬液后, 以个 / 孔将 3 组细胞种植于 96 孔板上, 每个孔按 2 µl 的体积上样, 经,1,2,3,4 d 培养后,2 µl CCK-8 溶液加入于每孔中去, 继续培养 1 h 后, 在 45 nm 波长下, 用酶标仪测定各孔吸光度值, 以时间为横坐标, 吸光度值为纵坐标绘制细胞增殖曲线 1.5 细胞凋亡能力测定流式细胞术测定两组细胞凋亡率, 染色采用 Annexin V/PI, 将和两组细胞消化后,Binding Buffer 重悬混匀后, 加入 Annexin V 抗体, 避光染色 1 min 后加入适量 PBS 溶液及 PI 染料, 流式细胞仪检测 Annexin V 阳性细胞比例来确定细胞凋亡率 1.6 Western 印迹采用 Western 印迹法, 将和两组细胞裂解变性后, 上样量为每孔 3 μg 蛋白, 浓缩胶条件为 5 min 8 V, 分离胶条件为 1 min 1 V, 常规转膜, 加入 KLF2, P21 及 GAPDH 一抗, 抗体浓度为 1 : 3, 于 4 孵育过夜, 二抗 (1: 5) 经 37 孵育 4 h 后, PBST 漂洗 3 次, 在增强型化学发光液 (enhanced chemiluminescent,ecl) 液下显影,Quantity One 1-D 分析目标蛋白灰度值, 目标蛋白相对表达量 = 目标蛋白灰度值 /GAPDH 灰度值, 实验重复 3 次, 取平均值 1.7 统计学处理采用 SPSS 17. 统计软件行数据分析和 Prism 软件作图, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x± s) 表示, 两组间的比较采用 t 检验,3 组比较先用方差分析, P<.5 时, 两两比较再用 LSD-t 检验 P<.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 LncRNA ANRIL 在口腔鳞癌细胞系中高表达 qrt-pcr 示 :LncRNA ANRIL 在口腔鳞癌细胞系 SCC-4,Cal-27,TSCCA 及 Tca8113 中的相对表达量分别为 2.58±.19, 3.27±.21, 5.3±.47 及 4.97±.41, 在正常口腔上皮细胞系 HOK 中的相对表达量为 1.±.3, lncrna ANRIL 在口腔鳞癌细胞系中的表达量高于正常口腔上皮细胞系 HOK(P<.5; 图 1) LncRNA ANRIL 的相对含量图 1 LncRNA ANRIL 在口腔磷癌细胞系及正常口腔上皮细胞系中的表达 Figure 1 Expression level of lncrna ANRIL in normal squamous cell line and four kinds of human oral squamous cell carcinoma cell line P<.1 P<.1 正常 SCC-4 Cal-27 TSCCA Tca8113

8 临床与病理杂志, 218, 38(1) http://lcbl.amegroups.com 2.2 LncRNA ANRIL 沉默抑制口腔磷癌细胞增殖转染后,qRT-PCR 示 : lncrna-anril mrna 相对表达量为.25±.2, 显著低于的 1.±.3(P<.1; 图 2A) CCK-8 示 : 转染, 24 及 48 h 后, 与 OD 45 nm 值分别为.38±.

4 8 临床与病理杂志, 218, 38(1) LncRNA ANRIL 沉默抑制口腔磷癌细胞增殖转染后,qRT-PCR 示 : lncrna-anril mrna 相对表达量为.25±.2, 显著低于的 1.±.3(P<.1; 图 2A) CCK-8 示 : 转染, 24 及 48 h 后, 与 OD 45 nm 值分别为.38±.4 vs.37±.4,.58±.4 vs.51±.5 及.89±.1 vs.67±.6, 差异均无统计学意义 ( P>.5); 转染 72 及 96 h 后, 与 OD 45 nm 值分别为 1.2±.9 vs.83±.7 及 1.87±.13 vs 1.16±.1, 差异均有统计学意义 ( P<.5; 图 2B) 克隆形成实验示 :克隆形成率为 21.54%±2.3%, 显著低于的 53.72%±5.93%(; 图 2C) 2.3 LncRNA ANRIL 沉默诱导口腔鳞癌细胞凋亡流式细胞术示 :凋亡率为 14.7%±.9%, 为 4.9%±.7%,凋亡率高于 (; 图 3,4A) A LncRNA ANRIL 的相对含量 B OD 45 nm P<.5 C 克隆形成率 /% 转染时间 /h 图 2 LncRNA ANRIL 沉默抑制口腔磷癌细胞增殖 Figure 2 Silencing lncrna ANRIL expression inhibited the proliferation of oral squamous cell carcinoma cell line (A) 两组 lncrna ANRIL mrna 相对表达量比较 ;(B) 两组细胞增殖曲线 ;(C) 两组克隆形成率比较 (A) Comparison of lncrna ANRIL mrna expression between two groups; (B) Proliferation curve of these two groups; (C) Comparison of clone formation rate between these two groups. 1 4 Q1.5% Q2.84% 1 4 Q1.468% Q2 2.58% FL3-H PI 1 2 FL3-H PI Q4 Q3 Q4 Q % 5.24% % 25.3% FL4-H ANNEXINV-APC FL4-H ANNEXINV-APC 图 3 和的流式细胞术 Figure 3 Flow cytometry between the two groups

5 长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制杨艳飞, 等 9 Western 印迹示 :裂解型 Caspase-3 蛋白相对表达量为 4.1±.44, 为 1.±.3,裂解型 Caspase-3 蛋白相对表达量高于 (; 图 4B,4C) 2.4 LncRNA ANRIL 沉默抑制 KLF2 和 p21 蛋白表达 Western 印迹示 : KLF2 蛋白相对表达量为.53±.6, 为 1.±.3, KLF2 蛋白相对表达量低于 (P<.5; 图 5A,5B) P21 蛋白相对表达量为.46±.5, 为 1.±.3, P21 蛋白相对表达量低于 ( ; 图 5A,5C) A 细胞凋亡率 /% B Cleaved Caspase 3 GAPDH C 裂解型 Caspase 3 蛋白水平图 4 LncRNA ANRIL 沉默诱导口腔鳞癌细胞凋亡 Figure 4 Silencing lncrna ANRIL expression induce apoptosis of oral squamous cell carcinoma cell line (A) 两组细胞凋亡率比较 ;(B)Western 印迹示两组裂解型 Caspase-3 蛋白表达 ;(C) 两组裂解型 Caspase-3 蛋白相对表达量的比较 (A) Comparison of apoptosis rate between these two groups; (B) Expression level of caspase-3 protein by western blot; (C) Comparison of caspase-3 protein expression level between these two groups. A KLF2 p21 GAPDH B KLF2 蛋白质的相对含量 P<.5 C p21 蛋白质的相对含量图 5 LncRNA ANRIL 沉默抑制 KLF2 和 P21 蛋白表达 Figure 5 Silencing lncrna ANRIL expression inhibit the expression of KLF2 and P21 protein (A)Western 印迹示两组 KLF2 和 P21 蛋白表达 ;(B) 两组 KLF2 蛋白相对表达量比较 ;(C) 两组 P21 蛋白相对表达量比较 (A) Expression of KLF2 and P21 protein by Western blot; (B) Comparison of KLF2 protein expression between these two groups; (C) Comparison of P21 protein expression between the two groups.

6 1 临床与病理杂志, 218, 38(1) 3 讨论口腔鳞状细胞癌发病率在肿瘤中位居第 8 位, 全世界每年约有 3 万新发病例, 且发病率逐年增长 [1] 口腔鳞状细胞癌常呈浸润性生长, 具有恶性程度高浸润性强易出现颈部淋巴结转移等特点 [2] 虽然近年来其治疗手段获得了一定的进步, 但其预后依然较差,5 年生存率仍不足 5% [2] LncRNA 与肿瘤的关系已被广泛关注, 因此从 lncrna 的角度寻找口腔鳞状细胞癌的发病机制, 对提高口腔鳞癌诊疗水平具有重要的意义尽管 lncrna 不编码蛋白质, 但其通常协同编码蛋白基因发挥表观遗传学转录及转录后水平, 调控目的基因的功能, 包括染色质构建转录激活蛋白质翻译转录后调控调控细胞分化等同样,lncRNA 与肿瘤的关系十分密切, 其可通过表观遗传调控等方式影响肿瘤细胞增殖转移, 诱导凋亡, 并成为肿瘤治疗靶点及药物 [11-14] [15] LncRNA ANRIL 最早由 Pasmant 等学者在神经系统肿瘤和家族性黑色素瘤中发现, 其在肿瘤 [6-7,9,16-19] 的发生与发展中起重要的调控作用研究表明 lncrna ANRIL 在肺癌肝癌白血病黑色素瘤食管鳞状细胞癌胃癌卵巢癌等肿瘤中高表达, 且 lncrna ANRIL 的表达与肿瘤分期相关, 低表达 lncrna ANRIL 者的生存率显著高于高表达者 [7,9,19] [7] Qiu 等学者证实 :lncrna ANRIL 的过表达使 bcl-2 的 mrna 及蛋白表达水平增加, [8] 促进癌细胞增殖并抑制凋亡而 Huang 等学者发现 lncrna ANRIL 除在肝细胞癌中表达上调外, 还与肿瘤大小及巴塞罗那分级相关, 且下调 lncrna ANRIL 可通过抑制 KLF2 蛋白表达来调控肝癌细胞 [9] 增殖 Nie 等进一步研究发现 lncrna ANRIL 可通过沉默 P21 和 Kruppel 样转录因子 2 的方式抑制肺癌细胞凋亡并促进其增殖本研究首次探索了 lncrna ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响, 并探索了可能的机制首先, 本研究通过荧光定量 PCR 法证实 lncrna ANRIL 在口腔鳞状细胞癌细胞系中高表达, 提示 lncrna ANRIL 可能起促癌基因的作用 [6-7,9,16-19] 前人研究表明 lncrna ANRIL 在多种肿瘤中呈高水平表达, 这与本研究结论一致其次, 本研究采用基因沉默技术和 CCK-8 法发现转染后, lncrna ANRIL 基因沉默后可抑制细胞增殖和克隆形成, 提示 lncrna ANRIL 沉默可抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖进一步流式细胞术发现 :lncrna ANRIL 沉默可诱导口腔鳞癌细胞凋亡 Western 印迹示 : 与相比,lncRNA 细胞的 Cleaved Caspase-3 蛋白表达上调, 而 KLF2 和 P21 的蛋白表达下调, 这提示 lncrna ANRIL 沉默可能通过下调 Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平并上调 KLF2 和 P21 的蛋白表达水平的途径, 抑制口腔鳞癌细胞增殖, 并促进凋亡 Cleaved Caspase-3 是内源性和外源性细胞凋亡途径共同的执行者, 本研究表明 lncrna ANRIL 沉默可上调 Cleaved Caspase-3 蛋白表达, 这也说明 lncrna ANRIL 具有抑制细胞凋亡的作用 [8] Huang 等也证实下调 lncrna ANRIL 可通过抑制 KLF2 蛋白的表达来调控肝癌细胞增殖, 这同样与 [6-7,9,16-19] 本研究结果一致这与其他肿瘤研究中的结果类似当然, 本研究尚存在一些不足之处 : 首先, 口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的相关信号通路未进一步探索 ; 其次,lncRNA ANRIL 的上下游具体调控分子和靶点未进一步探索 ; 最后, 本研究结论依然缺乏相应的动物实验证据, 值得进一步研究总之, 本研究证实 lncrna ANRIL 高表达于口腔鳞状细胞癌细胞系,lncRNA ANRIL 沉默可抑制口腔鳞癌细胞增殖, 并诱导凋亡, 其机制可能与上调 Cleaved Caspase-3 及下调 KLF2 和 P21 的表达有关参考文献 1. Pagedar NA, Chioreso C, Schlichting JA, et al. Treatment selection in oropharyngeal cancer: a surveillance, epidemiology, and end results (SEER) patterns of care analysis[ J]. Cancer Causes Control, 217, 28(1): Mourad M, Jetmore T, Jategaonkar AA, et al. Epidemiological trends of head and neck cancer in the United States: a SEER population study[ J]. J Oral Maxillofac Surg, 217, 75(12): Rinn JL, Chang HY. Genome regulation by long noncoding RNAs[ J]. Annu Rev Biochem, 212, 81: Esteller M. Non-coding RNAs in human disease[ J]. Nat Rev Genet, 211, 12(12): Huarte M. The emerging role of lncrnas in cancer[ J]. Nat Med, 215, 21(11): Chen D, Zhang Z, Mao C, et al. ANRIL inhibits p15(ink4b) through the TGFβ1 signaling pathway in human esophageal squamous cell carcinoma[ J]. Cell Immunol, 214, 289(1/2): Qiu JJ, Lin YY, Ding JX, et al. Long non-coding RNA ANRIL predicts

7 长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制杨艳飞, 等 11 poor prognosis and promotes invasion/metastasis in serous ovarian cancer[ J]. Int J Oncol, 215, 46(6): Huang MD, Chen WM, Qi FZ, et al. Long non-coding RNA ANRIL is upregulated in hepatocellular carcinoma and regulates cell proliferation by epigenetic silencing of KLF2[ J]. J Hematol Oncol, 215, 8(1): Nie FQ, Sun M, Yang JS, et al. Long noncoding RNA ANRIL promotes non-small cell lung cancer cell proliferation and inhibits apoptosis by silencing KLF2 and P21 expression[ J]. Mol Cancer Ther, 215, 14(1): Bochenek G, Häsler R, El Mokhtari NE, et al. The large non-coding RNA ANRIL, which is associated with atherosclerosis, periodontitis and several forms of cancer, regulates ADIPOR1, VAMP3 and C11ORF1[ J]. Hum Mol Genet, 213, 22(22): Zhang J, Li Y, Dong M, et al. Long non coding RNA NEAT1 regulates E2F3 expression by competitively binding to mir 377 in non small cell lung cancer[ J]. Oncol Lett, 217, 14(4): Sun KX, Wu DD, Chen S, et al. LncRNA MEG3 inhibit endometrial carcinoma tumorigenesis and progression through PI3K pathway[ J]. Apoptosis, 217, 22(12): Guttman M, Rinn JL. Modular regulatory principles of large noncoding RNAs[ J]. Nature, 212, 482(7385): 韩煦, 徐晓刚. 长链非编码 RNA 的新认识及与头颈部肿瘤发生的关系 [ J]. 口腔颌面外科杂志, 215, 25(1): HAN Xu, XU Xiaogang. Update on lncrna and its relationship with head and neck tumor[ J]. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, 215, 25(1): Pasmant E, Laurendeau I, Héron D, et al. Characterization of a germline deletion, including the entire INK4/ARF locus, in a melanomaneural system tumor family: identification of ANRIL, an antisense noncoding RNA whose expression coclusters with ARF[ J]. Cancer Res, 27, 67(8): Semenza GL. Targeting HIF-1 for cancer therapy[ J]. Nat Rev Cancer, 23, 3(1): Tano K, Akimitsu N. Long non-coding RNAs in cancer progression[ J]. Front Genet, 212, 3: Zhang EB, Kong R, Yin DD, et al. Long noncoding RNA ANRIL indicates a poor prognosis of gastric cancer and promotes tumor growth by epigenetically silencing of mir-99a/mir-449a[ J]. Oncotarget, 214, 5(8): Hua L, Wang CY, Yao KH, et al. High expression of long non-coding RNA ANRIL is associated with poor prognosis in hepatocellular carcinoma[ J]. Int J Clin Exp Pathol, 215, 8(3): 本文引用 : 杨艳飞, 邢育珍. 长链非编码 RNA ANRIL 对口腔鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其机制 [ J]. 临床与病理杂志, 218, 38(1): doi: /j.issn Cite this article as: YANG Yanfei, XING Yuzhen. Effect of long noncoding RNA ANRIL on proliferation and apoptosis in oral squamous cell carcinoma and its mechanism[ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 218, 38(1): doi: /j.issn

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戊酸雌二醇片联合宫颈注射利多卡因用于绝经后妇女取环的临床效果评价陆琴芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s 370 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊酸雌二醇片联