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1 38 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2013, 48 (1): 布格呋喃抗焦虑及抑郁作用的电生理机制陈春林, 王伟平, 王 * 玲, 王晓良 ( 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 北京 ) 摘要 : 研究布格呋喃 (AF-5) 抗焦虑及抑郁作用的电生理学机制采用全细胞膜片钳技术, 观察 AF-5 对原代培养大鼠皮层神经元上电压依赖性钠离子通道电压依赖性钾离子通道电压依赖性 L- 型钙离子通道 γ- 氨基丁酸 (GABA) 依赖的氯离子通道以及稳定转染于 HEK293 细胞系上 Kv2.1 通道电流的影响结果表明, AF-5 能明显抑制原代培养大鼠皮层神经元上电压依赖性延迟整流钾电流 (I K(DR) ) L- 型钙通道电流 (I L-Ca ) 以及稳定转染于 HEK293 细胞系上 Kv2.1 通道电流, 其 IC 50 分别为和 5.29 μmol L 1, 但对电压依赖性钠通道电流 (I Na ) 瞬时外向钾电流 (I K(A) ) 以及 GABA 介导的氯离子通道电流的抑制作用较弱研究表明, AF-5 的抗焦虑及抑郁作用可能与其抑制以 Kv2.1 为主的神经元 I K(DR) 及 I L-Ca 有关关键词 : 布格呋喃 ; 延迟整流钾通道电流 ; 电压依赖性 L- 型钙通道电流 ; Kv2.1; 膜片钳中图分类号 : R963 文献标识码 : A 文章编号 : (2013) Electrophysiology mechanisms of 4-butyl-alpha-agarofuran: a new anxiolytic and antidepressant drug CHEN Chun-lin, WANG Wei-ping, WANG Ling, WANG Xiao-liang * (State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing , China) Abstract: To investigate the electrophysiology mechanisms of new anxiolytic and antidepressant drug: 4- butyl-alpha-agarofuran (AF-5), patch clamp-recording was used to test the effects of AF-5 on voltage-dependent sodium currents, voltage-dependent potassium currents, L-type voltage-dependent calcium currents and GABA dependent Cl currents in primary cultured rat cortical neurons. Effects of AF-5 on Kv2.1 currents, expressed stably in HEK293 cells, were also tested. Our results showed that, delayed rectifier potassium currents (I K(DR) ), L-type voltage-dependent calcium currents (I L-Ca ) in primary cultured rat cortical neurons and Kv2.1 currents in HEK293 cells were significantly inhibited by AF-5, with IC 50 as 6.17, 4.4 and 5.29 μmol L 1 respectively. However, voltage-dependent sodium currents (I Na ), GABA dependent Cl currents and transient outward potassium currents (I K(A) ) in primary cultured rat cortical neurons were not significantly blocked by AF-5. Our results concluded that, blocked I K(DR) and I L-Ca currents may be one of the mechanisms of anxiolytic and antidepression actions of AF-5. Key words: AF-5; delayed rectifier potassium current; L-type voltage-dependent calcium current; Kv2.1; patch clamp-recording 焦虑症是以发作性或持续性情绪焦虑和紧张为收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 国家重大新药创制科技重大专项 (2012ZX ). * 通讯作者 Tel: , Fax: , wangxl@imm.ac.cn 主要临床表现的神经症, 是目前常见的心理疾病以往研究认为 5- 羟色胺 (5-HT) 等单胺类神经递质紊乱是该病的主要发病机制, 而近年研究发现, 钠钾等离子通道通过调节神经元的兴奋性与焦虑症等情 [1, 绪障碍性疾病的发生发展有着密切的关系 2]

2 陈春林等 : 布格呋喃抗焦虑及抑郁作用的电生理机制 39 布格呋喃 (AF-5) 为中国医学科学院药物研究所的科研人员从传统名贵中药沉香中分离得到的 α 沉香呋喃的衍生物药理研究发现, AF-5 具有明显的抗焦虑及抑郁作用, 在小鼠高架十字迷宫实验大鼠群居接触实验小鼠爬梯等焦虑模型以及小鼠强迫游泳等抑郁模型中能显著对抗各种因素引起的焦虑及 [3, 抑郁情绪 4] 临床前研究表明, AF-5 的抗焦虑作用较强, 抗焦虑剂量与地西泮相仿, 抗焦虑谱明显宽于丁螺环酮, 口服有效与传统抗焦虑药相比, AF-5 的镇静作用不明显, 无肌松作用, 不引起共济失调, 对学习记忆活动无明显损害, 因而可能成为一种中枢 [3, 神经毒副作用小特异性高的新型抗焦虑药物 4] 已进行的机制研究表明, AF-5 对脑内 27 种神经递质受体均无明显结合作用, 但能降低脑区 5-HT 浓度, 目前尚未发现 AF-5 的作用靶点以及具体作用机制 [5] 鉴于钠钾氯等离子通道在调节神经元兴奋性等影响机体情绪功能中的重要作用, 本研究拟考察 AF-5 对神经元细胞膜上电压依赖性钠钾钙和氯离子通道的作用, 并探讨其抗焦虑及抑郁作用的电生理学机制材料与方法实验动物和细胞株新生 12 h 内 Wistar 大鼠, 购自北京维通利华实验动物技术有限公司, 许可证编号 : SCXK ( 京 ) 稳定转染 Kv2.1 钾通道的人胚胎肾 293 (human embryonic kidney 293, HEK293) 细胞由中国医学科学院药物研究所药理室提供实验仪器 EPC-9 型膜片钳放大器 : 德国 HEKA 公司 ; PP-83 型电极拉制仪 : 日本 Narishige 公司 ; 三维微操纵器 MP-225: 美国 SUTTER 公司 ; CO 2 培养箱 : 美国 Thermo Fisher Scientific 公司试剂与溶液 AF-5 由中国医学科学院药物研究所合成室提供 ( 相对分子质量 262), 纯度 > 99%; 氯化胆碱氯化镁 HEPES EGTA ATP-2Na 阿糖胞苷 L- 谷氨酰胺多聚赖氨酸及荷包牡丹碱 (bicuculline) 均为美国 Sigma 公司产品 ; 胰蛋白酶 (trypsin) 为 Amresco 公司产品 ; 胎牛血清 (fetal bovine serum, FBS) 为 Hyclone 公司产品 ; DMEM 为 Gibco 公司产品其余试剂为国产分析纯, 由北京试剂公司提供记录钾电流和 Kv2.1 通道电流的细胞外液成分 (mmol L 1 ): choline chloride 140, KCl 5, MgCl 2 1, HEPES 10, glucose 10, ph 7.40 记录钾电流和 Kv2.1 通道电流的电极内液成分 (mmol L 1 ): KCl 140, MgCl 2 2, EGTA 10, HEPES 10, ATP-2Na 2, ph 7.20 记录钙电流的细胞外液成分 (mmol L 1 ): choline chloride 110, TEA-Cl 20, 4-AP 10, MgCl 2 1, BaCl 2 10, HEPES 10, glucose 10, TTX , ph 7.40 记录钙电流的电极内液成分 (mmol L 1 ): CsCl 110, TEA-Cl 30, EGTA 10, HEPES 10, ATP-Mg 3, ph 7.20 记录钠电流的细胞外液成分 (mmol L 1 ): NaCl 110, MgCl 2 1, TEA-Cl 20, 4-AP 10, HEPES 10, glucose 10, ph 7.40 记录钠电流的电极内液成分 (mmol L 1 ): CsCl 110, MgCl 2 2, EGTA 10, HEPES 10, TEA-Cl 30, ATP-2Na 2, ph 7.20 记录 GABA 依赖氯离子通道电流的细胞外液成分 (mmol L 1 ): NaCl 110, MgCl 2 1, KCl 5, CaCl 2 0.5, HEPES 10, glucose 10, 调 ph 至 7.40 记录 GABA 依赖氯离子通道电流的电极内液成分 (mmol L 1 ): CsCl 110, MgCl 2 2, EGTA 10, HEPES 10, ATP-2Na 2, 调 ph 至 7.20 原代神经元培养新生 12 h 大鼠断头后快速分离皮层组织, 置于冰浴的 35 mm 培养皿内 ; 0.25% 胰蛋白酶消化液 37 消化 10 min, 用含有血清的培养基终止消化并缓慢吹打至无明显组织块, 过滤, r min 1 离心 5 min; 倾去上清液, 加入适量培养基, 接种于 35 mm 培养皿, 置于 5% CO 2 37 培养箱, 48 h 后加入 10 μmol L 1 阿糖胞苷, 每 3~4 天换液 1 次细胞于 7~10 天内进行全细胞膜片钳实验全细胞膜片钳记录进行膜片钳实验时, 将 35 mm 培养皿内培养基换成细胞外液 (1.8 ml) 玻璃微电极 ( 原料 : GG17, 外径 : 15 mm, 内径 : 7.5 mm) 由 PP-83 型拉制仪分两步拉制, 充灌电极内液后电阻为 3~5 MΩ 在倒置相差显微镜下选择边缘整齐胞内无明显颗粒的细胞, 移动电极并轻压细胞表面, 用负压使电极尖端与细胞表面形成 GΩ 封接后, 以较大负压破膜, 对电容及电极串联阻抗进行补偿, 形成全细胞记录方式 EPC-9 型膜片钳放大器连接到 IBM 计算机, 电流采用 3 khz 低通滤波, 采样率为 20 khz 应用 Pulse 8.5 程序进行刺激发放和信号采集所有实验均在室温 (23~25 ) 下进行统计学处理用 Pulsefit 8.5 软件测量原始电流数据, 所有数据均以 mean ± SEM 表示, 采用 Paired t-test 比较给药前后电流密度及通道动力学参数的变化 ; P < 0.05 认为有显著性差异用 Boltzmann 方程对给药前后电流的激活与失活进行拟合得到通道的相关动力学参数

3 40 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2013, 48 (1): 结果 1 AF-5 对大鼠皮层椎体神经元电压依赖性延迟整流钾电流 (I K(DR) ) 和瞬时外向钾电流 (I K(A) ) 的影响 AF-5 能剂量依赖性地抑制原代培养大鼠皮层椎体神经元细胞膜上的 I K(DR) 其中, AF-5 (3 10 和 30 μmol L 1 ) 能显著抑制 I K(DR) (P < 0.05, paired t-test), 抑制率分别为 20.4% 68.5% 和 79.5% 经 Hill 方程拟合后得出 AF-5 抑制 I K(DR) 的 IC 50 为 6.17 μmol L 1, 斜率因子 p 为 3.17 ( 图 1A 和 1D) 对 I K(DR) 的通道动力学研究表明, AF-5 能影响 I K(DR) 的激活和失活过程 AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 I K(DR) 的半数激活电压 (V 1/2 ) 向超极化方向移动 6.7 mv, Figure 1 Effect of 4-butyl-alpha-agarofuran (AF-5) on I K(DR) in primary cultured rat cortical neurons. A: Original currents of I K(DR) before and after 10 μmol L 1 AF-5; B: Original traces of the steady-state inactivation of I K(DR) in the absence and presence of 10 μmol L 1 AF-5; C: Effects of AF-5 on I V curve of I K(DR); D: Concentration respond curve for the blocking action of AF-5 on I K(DR) currents; data were fitted with the equation: I/I control = 100 [max/1+(ic 50/C) p ], where I/I control is the normalized current, IC 50 is the concentration for half maximal action, and p is Hill coefficient; E: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state activation curves of I K(DR); the curve was fitted with a Boltzmann equation: G/G max = 1/{1+exp[ (V V 1/2)/k]}, where G/G max is the normalized conductance, V is the membrane potential, V 1/2 is the voltage at half-maximal activation, and k is the slope factor; F: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state inactivation curve of I K(DR); the curve was fitted with a Boltzmann equation: I/I max = 1/{1+exp[(V V 1/2)/k]}, where I/I max is the normalized current, V is the membrane potential, V 1/2 is the voltage at half-maximal inactivation, and k is the slope factor. n = 4

4 陈春林等 : 布格呋喃抗焦虑及抑郁作用的电生理机制 41 由 (5.3 ± 5.7) mv 移至 ( 1.4 ± 6.7) mv AF-5 还能降低通道的激活速率, 斜率因子由给药前的 11.2 ± 0.5 升高至给药后的 51.1 ± 13.9 (P < 0.05, paired t-test) AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 I K(DR) 的半数失活电压 (V 1/2 ) 向超级化方向移动 40.7 mv (P < 0.01, paired t-test), 加速 I K(DR) 的失活 ; 而斜率因子没有明显变化, 对照组 : 20.8 ± 2.0, AF-5 (10 μmol L 1 ): 14.7 ± 0.7, 见图 1B 1E 及 1F AF-5 (10 μmol L 1 ) 还能抑制瞬时外向钾电流 I K(A) 但抑制率仅约为对延迟整流钾电流 (I K(DR) ) 抑制率的一半, 为 32.5% ( 图 2) 2 AF-5 对大鼠皮层椎体神经元电压依赖性 L- 型钙通道电流 (I L-Ca ) 的影响 AF-5 能剂量依赖性地抑制原代培养大鼠皮层椎体神经元上 I L-Ca 其中 AF-5 (10 μmol L 1 ) 能显著抑制 I L-Ca, 其抑制率为 54.1% ( 图 3A) 经 Hill 方程拟合后得出 AF-5 抑制 I L-Ca 的 IC 50 为 4.4 μmol L 1, 斜率因子 p 为 2.8 ( 图 3D) L-Ca 的通道动力学研究表明, AF-5 能明显影响 I L-Ca 的激活失活过程 AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 I L-Ca 的激活曲线向超极化方向移动 8.8 mv (P < 0.01, paired t-test); 斜率因子无明显变化, 对照组 : 6.4 ± 0.8, AF-5 (10 μmol L 1 ): 4.2 ± 0.9 同时, AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 I L-Ca 的失活曲线向超级化方向移动 30.5 mv (P < 0.05, paired t-test), 加速 I L-Ca 的失活 ; 而斜率因子没有明显变化, 对照组 : 34.5 ± 6.2, AF-5 (10 μmol L 1 ): 31.9 ± 11.3, 见图 3B 3E 及 3F 3 AF-5 对稳定转染于 HEK293 细胞上 Kv2.1 通道电流的影响 AF-5 能剂量依赖性地抑制稳定转染于 HEK293 细胞上的 Kv2.1 通道电流 AF-5 (10 和 30 μmol L 1 ) 能显著抑制 Kv2.1 电流, 抑制率分别为 62.5% 和 75.7% ( 图 4A) 经 Hill 方程拟合后得出 IC 50 为 5.29 μmol L 1, 斜率因子 p 为 1.9 ( 图 4D) Kv2.1 的通道动力学研究表明, AF-5 也能影响 Kv2.1 的通道动力学 AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 Kv2.1 的激活曲线向去极化方向移动, 半激活电压 (V 1/2 ) 由 (14.6 ± 4.0) mv 移至 (29.31 ± 2.3) mv; 斜率因子没有明显变化, 对照组 : 12.6 ± 1.5, AF-5 (10 μmol L 1 ): 15.3 ± 2.2 同时, AF-5 (10 μmol L 1 ) 也明显将 Kv2.1 的失活曲线向超级化方向移动, 半激活电压移动 20.5 mv (P < 0.05); 斜率因子也明显增加, 对照组 : 11.6 ± 0.9, AF-5 (10 μmol L 1 ): 19.3 ± 2.3, 见图 4B 4E 及 4F 4 AF-5 对原代培养大鼠皮层椎体神经元电压依赖性钠通道电流的影响 AF-5 对大鼠皮层椎体神经元电压依赖性钠电流 (I Na ) 并无明显的抑制作用, AF-5 (10 μmol L 1 ) 对该电流的抑制率仅为 5.3% 见图 5 5 AF-5 对原代培养皮层椎体神经元细胞膜上 GABA 依赖的氯离子通道 (I GABA(Cl )) 电流的影响神经元细胞膜上由 GABA 诱导出的电流能被 I GABA(Cl ) 特异性抑制剂荷包牡丹碱明显抑制, 这表明所记录的 GABA 所诱导的电流为 I GABA(Cl ) AF-5 (10 μmol L 1 ) 能将 I GABA(Cl ) 电流从 ( ± 533.7) pa 降为 (793.5 ± 437.5) pa, 抑制率为 29.5%, 但差异无统计学意义 (P > 0.05, paired t-test, n = 3) 结果表明, AF-5 能抑制皮层椎体神经元细胞膜上 I GABA(Cl ) 电流, 但其抑制率明显低于其对 I K(DR) 和 I L-Ca 的作用 ( 图 6) 讨论本研究观察了新型抗焦虑及抑郁药 AF-5 对神经元细胞膜上电压依赖性的钠钾钙氯等离子通道的影响结果表明, AF-5 能显著抑制皮层椎体神经元细胞膜上的电压依赖性延迟整流钾通道电流 (I K(DR) ) Figure 2 Effect of AF-5 on I K(A) in primary cultured rat cortical neurons. A: Total outward K + current (left) and I K (DR) (right) were stimulated with protocol; B: Original currents of I K(A) before and after 10 μmol L 1 AF-5 in primary cultured rat cortical neurons. I K (A) was isolated by subtracting current traces of (A) right from those of (A) left

5 42 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2013, 48 (1): Figure 3 Effect of AF-5 on I L-Ca in primary cultured rat cortical neurons. A: Original currents of I L-Ca before and after 10 μmol L 1 AF-5; B: Original traces of the steady-state inactivation of I L-Ca in the absence and presence of 10 μmol L 1 AF-5; C: Effects of AF-5 on I V curve of I L-Ca; D: Concentration respond curve for the blocking action of AF-5 on I L-Ca currents; data were fitted with the equation: I/I control = 100 [max/1+(ic 50/C) p ]; E: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state activation curves of I L-Ca; the curve was fitted with a Boltzmann equation: G/G max = 1/{1+exp[ (V V 1/2)/k]}; F: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state inactivation curve of I L-Ca; the curve was fitted with a Boltzmann equation: I/I max = 1/{1+exp[(V V 1/2)/k]}. n = 4 以及电压依赖性 L- 型钙通道电流 (I L-Ca ), 而对电压依赖性钠通道电流 (I Na ) GABA 诱导的氯通道电流 (I GABA(Cl )) 和瞬时外向钾通道电流则作用较弱钾离子通道是目前发现的亚型最多作用最复杂的一类离子通道, 在兴奋性细胞和非兴奋性细胞 [6, 中均有表达, 并在众多生理功能中起着重要作用 7] 神经元细胞膜上的钾离子通道电流分为延迟整流钾电流瞬时外向钾电流以及背景钾电流 [8] 研究表明, 经典的钾离子通道阻断剂 TEA 等能直接降低小鼠强迫游泳中的静止时间, 表现出抗抑郁作用 ; 而钾通道开放剂则能增加其静止时间 [9] 同时, 对经典的抗焦虑抑郁药的研究发现, 氟西汀能在治疗浓度显著抑制神经元上的延迟整流钾电流以及瞬时外向钾电流, [10, 这可能是其抗焦虑及抑郁作用的机制之一 11] 本实验中, AF-5 对 I K(DR) 具有明显的抑制作用, 其 IC 50 为 6.17 μmol L 1, 但对瞬时外向钾电流作用较小因此, AF-5 对神经元电压依赖性钾电流的影响应该主要以延迟整流钾电流为主同时对大鼠脑内大量表达的延迟整流钾通道亚型 Kv2.1 的研究发现, AF-5 能显著抑制 Kv2.1 通道电流, 其抑制程度与对 I K(DR) 的作

6 陈春林等 : 布格呋喃抗焦虑及抑郁作用的电生理机制 43 Figure 4 Effect of AF-5 on Kv2.1 currents. A: Original currents of Kv2.1 before and after 10 μmol L 1 AF-5; B: Original traces of the steady-state inactivation of Kv2.1 in the absence and presence of 10 μmol L 1 AF-5; C: Effect of AF-5 on I V curve of Kv2.1; D: Concentration respond curve for the blocking action of AF-5 on Kv2.1 currents; data were fitted with the equation: I/I control = 100 [max/1+(ic 50/C) p ]; E: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state activation curves of Kv2.1; the curve was fitted with a Boltzmann equation: G/G max = 1/{1+exp[ (V V 1/2)/k]}; F: Effect of 10 μmol L 1 AF-5 on the steady-state inactivation curve of Kv2.1; the curve was fitted with a Boltzmann equation: I/I max = 1/{1+exp[(V V 1/2)/k]}. n = 4 用类似, IC 50 为 5.29 μmol L 1 但动力学特征则与大脑皮层延迟整流钾通道不同, AF-5 使 Kv2.1 的激活曲线向去极化方向移动, 使失活曲线向超极化方向移动结果说明, AF-5 抗焦虑及抑郁作用不仅通过抑制中枢系统 Kv2.1 通道电流, 对其他延迟整流钾电流 I K(DR) 也有影响神经突触间递质的释放与突触前膜内钙离子浓度有着重大关系神经元兴奋时, 突触前膜以 L- 型钙离子通道为主的钙通道开放, 引起大量钙离子内流, 增加胞内钙离子浓度, 从而推动含递质的囊泡向膜靠近并释放递质作者的实验发现, AF-5 能明显抑制原代培养大鼠皮层椎体神经元中 L- 型钙离子通道电流因而, 作者认为, AF-5 可能通过抑制 L- 型钙离子通道介导的钙通道电流, 降低胞内钙离子浓度, 起到调控神经元功能影响神经递质释放及神经保护作用 GABA 受体及其介导的氯离子电流在焦虑的发生及抗焦虑药物的研发中有重要意义现有抗焦虑药,

7 44 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2013, 48 (1): 成为研发新型抗焦虑及抑郁药物的新靶点, 除 Kv2.1 亚型, 其他钾离子通道亚型的作用也有待确认 References [1] Mirza R, Bright L, Stanhope J, et al. Lamotrigine has an anxiolytic-like profile in the rat conditioned emotional response test of anxiety: a potential role for sodium channels? [J]. Figure 5 Effect of AF-5 on I Na in primary cultured rat cortical neurons. Original currents of I Na before and after 10 μmol L 1 AF-5 were evoked by 50 ms puls from 70 mv to +20 mv Figure 6 Effect of AF-5 on GABA induced currents. A: Original traces of GABA induced currents at holding potential of 70 mv; B: Original traces of GABA induced inward currents before and after 10 μmol L 1 AF-5 如地西泮等苯二氮类药物, 主要是以激动 GABA 受体增大氯离子内流降低神经元兴奋性, 从而达到抗焦虑作用但该类药物在抗焦虑作用的同时也会引起耐药性镇静等严重不良反应通过对 AF-5 的研究发现, AF-5 在 10 μmol L 1 时仅轻微抑制该通道电流, 可见 AF-5 的抗焦虑作用并不依赖于 GABA 受体, 因而与地西泮等药物的作用机制不同综上所述, AF-5 可能通过作用于脑内 Kv2.1 及多种延迟整流钾通道和 L- 型钙离子通道, 影响神经元的兴奋性以及神经元功能, 从而产生抗焦虑及抑郁作用本研究结果还提示, 脑内钾离子通道很可能 Psychopharmacology, 2005, 180: [2] Guo W, Todd KG, Bourin M, et al. Additive effects of glyburide and antidepressants in the forced swimming test: evidence for the involvement of potassium channel blockade [J]. Pharmacol Biochem Behav, 1996, 54: [3] Guo JT, Wang WJ, Fang HJ, et al. Novel agarofuran derivatives, their preparation, pharmaceutical composition containing them and their use as medicine: WO, [P] [4] Liu Q, Wang DH, Li C, et al. Synthesis and CNS activities of α-agarofuran derivatives [J]. Chin J Med Chem ( 中国药物化学杂志 ), 2003, 13: [5] Zhang Y, Wang WJ, Zhang JJ. Effects of novel anxiolytic 4- butyl-alpha-agarofuran on levels of monoamine neurotransmitters in rats [J]. Eur J Pharmacol, 2004, 504: [6] MacKinnon R. Potassium channels [J]. FEBS Lett, 2003, 555: [7] Wickenden A. K(+) channels as therapeutic drug targets [J]. Pharmacol Ther, 2002, 94: [8] Henne J, Pöttering S, Jeserich G. Voltage-gated potassium channels in retinal ganglion cells of trout: a combined biophysical, pharmacological, and single-cell RT-PCR approach [J]. J Neurosci Res, 2000, 62: [9] Galeotti N, Ghelardini C, Caldari B, et al. Effect of potassium channel modulators in mouse forced swimming test [J]. Br J Pharmacol, 1999, 126: [10] Yeung SY, Millar JA, Mathie A. Inhibition of neuronal Kv potassium currents by the antidepressant drug, fluoxetine [J]. Br J Pharmacol, 1999, 128: [11] Choi JS, Choi BH, Ahn HS, et al. Fluoxetine inhibits A-type potassium currents in primary cultured rat hippocampal neurons [J]. Brain Res, 2004, 1018:

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untitled Acta Physiologica Sinica, February 25, 2007, 59 (1): 63-70 http://www.actaps.com.cn 63 CA3 1 1 2 2 2 2 2,* 1,* 1 2 300071 CA3 (transient outward potassium current, I A )(delayed rectifier potassium current,