第 5 期韦玉和, 等. 盐酸吡格列酮对早期 2 型糖尿病肾病患者足细胞影响的短期观察 417 thy,theefectwasmoreobviousinpatientswithckdstage1. [Keywords] pioglitazonehydrochloride;diabeticnephr

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冈汪
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1 第 25 卷第 5 期 2015 年 9 月江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.25 No.5 Sept.2015 盐酸吡格列酮对早期 2 型糖尿病肾病患者足细胞影响的短期观察韦玉和, 邵雪景, 冯小芬, 赵志勇, 印永 ( 江苏大学附属武进医院内分泌科, 江苏常州 ) [ 摘要 ] 目的 : 观察盐酸吡格列酮对 2 型糖尿病肾病患者足细胞的影响方法 : 收集微量蛋白尿期的糖尿病肾病患者 61 例, 随机分成观察组 (32 例 ) 和对照组 (29 例 ), 两组一般治疗相同, 观察组每天加服盐酸吡格列酮 30mg, 共 12 周测定两组治疗前后尿足细胞排泄数量尿 mindin/ 尿肌酐 (UMCR) 尿白蛋白 / 尿肌酐 (UACR) C 反应蛋白 (CRP) 等指标结果 : 观察组治疗后足细胞数 UACR UMCR CRP 较治疗前及对照组治疗后明显降低 (P<0.05 或 0.01), 对照组治疗前后各指标间的差异无统计学意义观察组 CKD1 期患者治疗后足细胞数 UACR UMCR CRP 明显降低 (P<0.01);CKD2 期患者治疗后 CRP 较治疗前明显降低 (P<0.05), 其余指标有所降低但差异无统计学意义 (P> 0.05) UACR 与足细胞数 (r=0.233,p<0.05),crp(r=0.456,p<0.01),umcr(r=0.612,p<0.01) 呈显著正相关 ;CRP 与 UMCR(r=0.238,P<0.05), 足细胞数 (r=0.417,p<0.01) 呈正相关 ;UMCR 与足细胞数呈正相关 (r= 0.687,P<0.01) 结论: 盐酸吡格列酮对糖尿病肾病患者足细胞有一定的保护作用,CKD1 期患者效果更明显 [ 关键词 ] 盐酸吡格列酮 ; 糖尿病肾病 ; 足细胞 [ 中图分类号 ] R587.2 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2015) DOI: /j.isn y Shortterm observationofefectsofpioglitazonehydrochlorideon podocyteinearlytype2diabeticpatientswithnephropathy WEIYu he,shaoxue jing,fenxiao fen,zhaozhi yong,yinyong (DepartmentofEndocrinology,theAfiliatedWujinHospitalofJiangsuUniversity,ChangzhouJiangsu213002,China) [Abstract] Objective:Toobservetheefectsofpioglitazonehydrochlorideonpodocyteintype2diabetic patientswithnephropathy.methods:atotalof61casesofdiabeticnephropathymicroalbuminuriaperiod patientswererandomlydividedintoexperimentalgroup(32cases)andcontrolgroup(29cases).thegen eraltreatmentwasthesameintwogroups.theexperimentalgroupaddedpioglitazonehydrochloride30mg perday,atotalof12weeks.relativevaluesoftwogroupsweremeasuredbeforeandaftertreatment,the numberofurinarypodocyteexcretionandurinarymindin/creatinine(umcr),urinaryalbumin/creatinine (UACR),Creactiveprotein(CRP)andotherindicators.Results:Thepodocytenumber,UACR,UMCR, andcrpfortheexperimentgroupafterthetherapyhadwitnesedsignificantreductioncomparedwiththose oftheexperimentgroupbeforethetherapyorthecontrolgroupafterthetherapy(p<0.05or0.01).there wasnosignificantdiferencebetweentheindexesofthecontrolgroupbeforeandaftertreatment.thepodo cytenumber,uacr,umcr,crpdecreasedsignificantly(p<0.01)inpatientswithchronickidneydis ease(ckd)stage1.crpdecreasedsignificantlythanbeforeaftertreatment(p<0.05),andotherinde xesdecreasedbutwithoutstatisticaldiference(p>0.05)inpatientswithckdstage2.uacrwasposi tivelycorelatedwithpodocytenumber(r=0.233,p<0.05),crp(r=0.456,p<0.01),umcr(r= 0.612,P<0.01).CRPwaspositivelycorelatedwithUMCR(r=0.238,P<0.05)andpodocytenumber (r=0.417,p<0.01).umcrwaspositivelycorelatedwithpodocytenumber(r=0.687,p<0.01). Conclusion:Pioglitazonehydrochloridehadprotectiveefectonpodocyteinpatientswithdiabeticnephropa [ 作者简介 ] 韦玉和 (1970 ), 男, 江苏盐城人, 主任医师, 主要从事糖尿病临床研究工作

2 第 5 期韦玉和, 等. 盐酸吡格列酮对早期 2 型糖尿病肾病患者足细胞影响的短期观察 417 thy,theefectwasmoreobviousinpatientswithckdstage1. [Keywords] pioglitazonehydrochloride;diabeticnephropathy;podocyte 随着人们对糖尿病肾病发病机制的认识逐渐深入, 足细胞病变在糖尿病肾病蛋白尿的形成肾小球的硬化等进程中的作用越来越受到重视尿 Mindin 蛋白是足细胞损伤的早期标志物之一, 在糖尿病肾病的发病中起一定作用, 肾损伤时尿中 Mindin 排泄量增加 [1] 盐酸吡格列酮具有降糖之外的肾脏保护作用, 但确切机制尚未明了本研究观察 2 型糖尿病微量蛋白尿期患者服用盐酸吡格列酮后尿中足细胞数量和 Mindin 排泄量的变化, 探讨盐酸吡格列酮对 2 型糖尿病患者足细胞的保护作用 1 对象与方法 1.1 病例 61 例 2 型糖尿病患者入选, 为 2013 年 10 月至 2014 年 12 月我院住院或门诊患者糖尿病诊断依据 1999 年 WHO 诊断标准研究对象均符合 1 空腹血糖 <7.0mmol/L, 糖化血红蛋白 (HbA1c)<7% 达 2 个月以上 ;2 高血压服药后血压 <130/90mm Hg2 个月以上 ;3 无心脑肾肝等严重并发症 ;4 脂代谢紊乱者服调脂药正常后停药 2 个月以上复查仍正常 ;5 连续 2 次以上随机尿白蛋白 / 尿肌酐 (UACR) 在 3~30mg/mmol 除降压药外未使用可能影响试验结果的血管活性药物调脂药抗凝药性激素和可能影响蛋白尿的中西药物采取抛硬币法随机分组, 观察组 32 例, 对照组 29 例对照组女 15 例男 14 例, 观察组女 17 例男 15 例 ; 平均年龄 : 对照组 (61.4±4.7) 岁, 观察组 (62.1±5.0) 岁 ; 平均病程 : 对照组 (7.3±2.2) 年, 观察组 (7.5± 2.8) 年 ; 体质量指数 : 对照组 (23.7±2.3)kg/m 2, 观察组 (24.4±2.5)kg/m 2 以上指标两组比较差异无统计学意义 (P>0.05), 具有可比性 1.2 方法两组患者用药情况两组均予糖尿病肾病饮食及适度运动治疗, 入组后观察组加用盐酸吡格列酮 ( 四川宝光药业有限公司 ), 每天 30mg, 并监测血糖减少其他降糖药用量, 试验时间 12 周观察组 12 例对照组 10 例使用胰岛素, 其余患者使用磺脲类降糖药物 ( 格列苯脲或格列齐特 ); 各有 20 例使用二甲双胍 ; 观察组 12 例对照组 11 例因餐后血糖高而使用阿卡波糖 ( 拜糖平 ); 两组各有 12 例使用缬沙坦 3 例服苯磺酸氨氯地平标本采集与检测采集空腹静脉血, 立即用 AU5421 全自动生化分析仪测定空腹血糖肌酐血脂等指标 ; 高效液相色谱法测定 HbA1c, 免疫比浊法测定 C 反应蛋白 (CRP) 晨尿 2500r/min 离心 10min, 取上清液于 -80 冻存统一检测散色免疫比浊法测尿微量白蛋白 ; 酶联免疫吸附法测定尿 Mindin(Mindin 试剂盒购于武汉优尔生科技公司 ), 具体操作方法参照说明书 ; 使用 AU5421 全自动生化分析仪测定尿肌酐, 以同一标本尿肌酐矫正, 尿 Mindin/ 尿肌酐 (UMCR)= 尿 Mindin(pg/mL)/ 尿肌酐 (μmol/l) 1000, 单位为 ng/mmol 按公式计算 UACR 值采用 2006 年中国估算肾小球滤过率 (eg FR) 协作组制定的改良 MDRD 公式计算 egfr,egfr (ml min m -2 )=175 血清肌酐年龄 ( 女性 0.79) 足细胞检测方法 1 取新鲜尿液 100mL, 2500r/min 离心 10min, 弃上清, 留沉渣 200μL 混匀相差显微镜下观察沉渣有形成分, 凡单个核细胞阳性者继续下一步实验 2 凡沉渣中有形成分过于稠密者可用原尿将有形成分调至适度 ( 有形成分平铺不重叠 ), 涂片, 室温干燥 30min, 丙酮 4 固定 10min, 自然干燥备用 3 取上述备用标本进行免疫荧光染色 1% PBS 湿润,1% TritonX 100 浸泡 10min;PBS 漂洗, 胎牛血清白蛋白封闭, 室温 30min; 滴加第一抗体 ( 小鼠抗人 PCX 单克隆抗体, 美国 SantaCruz 公司,1 100)4 过夜 ;PBS 漂洗 ; 滴加第二抗体 (Dylight488 标记山羊抗小鼠 IgG, 美国 Earthox 公司,1 100)37 孵育 30min; 然后加碘化丙啶 (PI,1mg/mL) 于标本上, 室温下避光孵育 5min;PBS 漂洗 ;50% 甘油封片, 荧光显微镜 ( 绿色荧光波长 580nm, 奥利巴斯公司 ) 下观察每份标本低倍镜观察全片, 高倍镜下确认胞膜呈绿色胞核为红色的细胞为足细胞由两位作者同时观察全片, 记录完整足细胞的个数, 并根据稀释倍数计算单位体积尿液的足细胞数 1.3 统计学方法应用 SPSS16.0 统计软件, 计量资料以均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 组间比较采用 t 检验, 治疗前后比较采用配对 t 检验, 各指标间的相关性采用 Pear son 相关分析,P<0.05 为差异有统计学意义

3 418 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷 2 结果 2.1 治疗前后两组患者代谢指标变化情况治疗前两组患者各项代谢指标差异无统计学意义 (P>0.05), 具有可比性观察组治疗后人均胰岛素用量较治疗前明显减少 (P<0.01), 其余指标无明显变化 (P>0.05) 对照组治疗前后各项代谢指标无明显变化 (P>0.05) 见表 1 表 1 治疗前后两组患者代谢指标比较收缩压 (mmhg) 舒张压 (mmhg) 空腹血糖餐后 2h 血糖 HbA1c (%) 人均胰岛素 (U/d) 胆固醇三酰甘油对照组治疗前 120.3± ± ± ± ± ± ± ±0.63 治疗后 118.8± ± ± ± ± ± ± ±0.62 t 值 P 值 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 观察组治疗前 122.5± ± ± ± ± ± ± ±0.67 治疗后 121.8± ± ± ± ± ± ± ±0.66 t 值 P 值 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 <0.01 >0.05 > 治疗前后两组患者观察指标变化情况治疗前两组患者观察指标差异无统计学意义 (P>0.05) 治疗后观察组足细胞数 UACR UM CR CRP 与治疗前及对照组治疗后比较有显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05 或 0.01); 肌酐 egfr 无明显改变 (P>0.05) 对照组治疗前后足细胞数 UACR UMCR CRP 肌酐 egfr 差异均无统计学意义 (P>0.05) 见表 2 表 2 治疗前后两组观察指标变化情况足细胞数 ( 个 /ml) UMCR (ng/mmol) UACR (mg/mmol) CRP (mg/l) 肌酐 (μmol/l) egfr (ml min m -2 ) 对照组治疗前 3.2± ± ± ± ± ±8.03 治疗后 3.3± ± ± ± ± ±8.56 t 值 P 值 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 观察组治疗前 3.2± ± ± ± ± ±6.79 治疗后 2.9±1.1 a 333.5±216.5 b 7.9±4.8 b 4.9±3.8 a 95.2± ±7.86 t 值 P 值 <0.05 <0.01 <0.01 <0.05 >0.05 >0.05 a:p<0.05,b:p<0.01, 与对照组治疗后比较 2.3 观察组患者依不同 CKD 分期比较观察组患者依据慢性肾脏病 (CKD) 分期标准分成 CKD1 期 (egfr 90mL min m -2 ) 和 CKD2 期 (egfr60~89ml min m -2 ) 两个亚组比较治疗前 CKD2 期足细胞数 UMCR CRP UACR 高于 CKD1 期患者, 但差异无统计学意义 (P> 0.05),CKD2 期 egfr 较 CKD1 期显著降低 (t= 9.331,P<0.01) CKD1 期患者治疗后足细胞数 UACR UMCR CRP 显著降低 (P<0.01);CKD2 期患者治疗后 CRP 较治疗前明显降低 (P<0.05), 其余指标有所降低但差异无统计学意义 (P>0.05);2 组患者治疗前后 egfr 均无明显变化 (P>0.05) 见表指标间的相关性分析经 Pearson 相关分析,UACR 与足细胞数 (r= 0.233,P<0.05),CRP(r=0.456,P<0.01),UMCR (r=0.612,p<0.01) 呈显著正相关 CRP 与 UM CR(r=0.238,P<0.05), 足细胞数 (r=0.417,p< 0.01) 呈正相关, 与血糖 HbA1c 胰岛素用量等无明显相关性 (P>0.05) UMCR 与足细胞数呈正相关 (r=0.687,p<0.01)

4 第 5 期韦玉和, 等. 盐酸吡格列酮对早期 2 型糖尿病肾病患者足细胞影响的短期观察 419 表 3 观察组患者依 CKD 分期比较 n 足细胞数 ( 个 /ml) UMCR (ng/mmol) CRP (mg/l) UACR (mg/mmol) egfr (ml min m -2 ) CKD1 期治疗前 ± ± ± ± ±2.68 治疗后 ± ± ± ± ±3.57 t 值 P 值 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 >0.05 CKD2 期治疗前 ± ± ± ± ±4.21 a 治疗后 ± ± ± ± ±4.08 t 值 P 值 >0.05 >0.05 <0.05 >0.05 >0.05 a:p<0.01, 与 CKD1 期治疗前比较 3 讨论足细胞属高度分化细胞, 有独特复杂的结构, 参 [2] 与肾小球毛细血管襻滤过屏障构成龙香菊等发现糖尿病肾病患者的肾小球足细胞数目 ( 即肾小球足细胞密度 ) 与血肌酐呈负相关, 足细胞密度越低说明足细胞的损伤与脱落越严重, 尿中可能检出的足细胞数目越高, 尿足细胞是糖尿病肾病活动进展的指标之一 Mindin( 也称 spondin) 蛋白最先在斑马鱼中发现, 是一个高度同源的细胞外基质蛋白 [3], 是 mindin F spondin 家族的一员 Mindin 蛋白是一种病原微生物的模式识别分子和炎性细胞募集的整合素配体, 对中性粒细胞和巨噬细胞聚集到炎症反应部位至关重要, 在肾脏的表达主要位于足细胞, 损伤的足细胞合成分泌更多的 Mindin [4-5] 本研究结果表明盐酸吡格列酮治疗后尿足细胞数 UACR UMCR 明显改善, 提示盐酸吡格列酮有一定的肾脏保护作用, 并且可能与足细胞相关盐酸吡格列酮肾脏保护作用并不完全依赖于降低血糖调节脂质代谢降低血浆胰岛素水平, 其可能作用于肾脏固有细胞如足细胞等研究证实盐酸吡格列酮可减少足细胞凋亡, 抑制高糖诱导的足细胞肥大, 减少转化生长因子 β(tgf β) 的表达, 抑制炎症反应 [6-7] 慢性低度的炎症反应在糖尿病肾病的发生发展中起着重要作用 2 型糖尿病患者血中 CRP 明显高于健康人, 随着尿白蛋白排泄率的增加而增加, 呈显著正相关, 它可通过多种途径致肾脏损伤 [8] 本研究发现盐酸吡格列酮治疗后 CRP 水平明显下降, 且与尿足细胞数 UMCR UACR 呈正相关, 提示足细胞功能的改善可能与 CRP 的降低有关 CRP 引起局部炎症, 促进白细胞介素 6 黏附因子单核细胞趋化蛋白 1 TGF β 等因子的释放, 上调白细胞抗原表达, 增加自由基和蛋白水解酶, 这些机制参与并导致了足细胞功能异常和脱落, 最终 [9] 导致肾小球结构和功能改变 Pawluczyk 等发现体外试验时低浓度的 CRP 有促进损伤的足细胞修复, 维持其结构完整性和增殖的功能降低糖尿病的炎症反应强度, 维持体内内环境的平衡, 将很可能成为阻止糖尿病肾病发生发展的重要手段既往研究证实盐酸吡格列酮有一定的抗炎作用, 但其确切机制并不明确, 还有待进一步的研究基础研究亦表明盐酸吡格列酮可降低链尿佐菌素诱导的糖尿病大鼠尿中足细胞标志蛋白足盂蛋白的排泄, 并呈一定的时间及剂量依赖性 [10] CKD1 期患者治疗后足细胞数 UACR UMCR 改善较 CKD2 期患者明显可能与炎症水平相对低足细胞损伤程度轻观察时间短等因素有关, 也提示尽早应用盐酸吡格列酮可能有更明显的足细胞保护作用总之, 盐酸吡格列酮有一定的不依赖其降糖效应的肾保护作用, 可能与其减轻非特异性炎症, 进而减轻对足细胞的损伤有关, 还需进一步研究和长期观察 [ 参考文献 ] [1] 邵雪景, 韦玉和, 冯小芬, 等.2 型糖尿病肾病患者尿液 Mindin 的变化及意义 [J]. 江苏医药,2015,41 (8): [2] 龙香菊, 林姗, 张鑫, 等. 糖尿病肾病患者尿足细胞脱落数及其与尿蛋白的关系 [J]. 中华糖尿病杂志, 2010,2(3): [3] JiaW,LiH,HeYW.Paternrecognitionmoleculemind in promotesintranasalclearanceofinfluenzaviruses [J].JImmunol,2008,180(9): ( 下转第 424 页 )

5 424 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 25 卷 againstcisplatin inducedototoxicityviatheregulationof MAPKsandproinflammatorycytokines[J].Biochem BiophysResCommun,2014,449(2): [20] PolatB,HaliciZ,CadirciE,etal.Theefectofα li poicacidinovariectomyandinflammation mediatedos teoporosisontheskeletalstatusofratbone[j].eurj Pharmacol,2013,718(1/3): [21] LakhtinIuV.Comparativeevaluationofshort andlong termtreatmentofperiodontitiswithα lipoicacid[j]. GeorgianMedNews,2013(218): [22] 桂盠, 冯琛琛. 牙周牙髓联合治疗重度牙周炎的疗效分析 [J]. 上海口腔医学,2014,23(4): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 何承志 40acute phaseproteinandinterleukin 6levelsinperio dontaldisease[j].jperiodontol,2014,85(9): [16] demenezesam,desouzagf,gomesas,etal.s ni trosoglutathionedecreasesinflammationandboneresorp tioninexperimentalperiodontitisinrats[j].jperiod ontol,2012,83(4): [17] WuW,YangN,FengX,etal.EfectofvitaminCad ministrationonhydrogenperoxide inducedcytotoxicityin periodontalligamentcels[j].molmedrep,2015,11 (1): [18] DuangXY,WangQ,ZhouXD,etal.Mangiferin:a posiblestrategyforperiodontaldiseasetotherapy[j]. MedHypotheses,2011,76(4): [19] KimJ,ChoHJ,SagongB,etal.α lipoicacidprotects ( 上接第 419 页 ) [4] MurakoshiM,TanimotoM,GohdaT,etal.Mindin:ano velmarkerforpodocyteinjuryindiabeticnephropathy [J].NephrolDialTransplant,2011,26(7): [5] 廖钰, 夏宁.Mindin: 糖尿病肾病足细胞损伤的新型标记物 [J]. 国际内分泌代谢杂志,2012,32(1): [6] MiglioG,RosaAC,RataxxiL,etal.Thesubtypesof peroxisomeproliferator activatedreceptorsexpresedby humampodocytesandtheirroleindecreasingpodocyte injury[j].brjpharmacol,2002,162(1): [7] OkadaT,WadaJ,HidaK,etal.Thiazolidnedionesamel iorate diabetic nephropathy via celcycle dependent mechanisms[j].diabetes,2006,55(6): [8] 王秋月, 陈芬琴, 马小羽, 等.2 型糖尿病患者血中炎症因子尿 MCP 1 与尿白蛋白排泄率的关系 [J]. 中华内分泌代谢杂志,2010,26(5): [9] PawluczykIZ,YangB,PatelSR,etal.Low levelc re activeproteinlevelsexertcytoprotectiveactionsonhu manpodocytes[j].nephroldialtransplant,2011,26 (8): [10] 邢燕, 叶山东, 陈玉米, 等. 不同剂量盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠尿 Podocalyxin 排泄的影响 [J]. 中国糖尿病杂志,2013,21(2): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 何承志

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第 5 期唐莹, 等.α 硫辛酸对 2 型糖尿病牙周炎患者氧化应激及牙周临床指标的影响 421 theperiodontallesionintype2diabeticpatientswithperiodontitisbyreducingthelevelsofoxidative stresandin 第 25 卷第 5 期 2015 年 9 月江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.25 No.5 Sept.2015 α 硫辛酸对 2 型糖尿病牙周炎患者氧化应激及牙周临床指标的影响唐莹 1, 刘国萍 2, 冯亚敏 1, 罗粉 1, 马迎春 3 1, 祝群 (1. 南京医科大学第二附属医院内分泌科, 江苏南京

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