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环宗政
7 years ago
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!" #$# # %&'& & 临床研究在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义党万太王婧谢文光周京国川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充成都中医药大学临床医学院四川成都甘肃中医学院甘肃兰州摘要目的探讨可溶性白细胞分化抗原 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义方法选取例急性患者例非患者和名健康对照者 & 用实时荧光定量聚合酶链反应 ()*& 检测其外周血单个核细胞 *+,&% 中 &' 的 - 表达水平用酶联免疫吸附法./01 检测各组血浆 %&' 白介素 0/) 肿瘤坏死因子 () 蛋白表达水平用免疫比浊法测定各组血浆 & 反应蛋白 & * 含量检测各组白细胞计数 +& 嗜中性粒细胞绝对值淋巴细胞绝对值 / 单核细胞绝对值, 等血常规及血尿酸等指标变化比较组指标的差异并分析其与 *+,&% 的 &'- 表达及血浆 %&' 表达的相关性结果组 *+,&% 中 &'- 表达量高于 & 组 & 与组血浆 %&' 蛋白表达低于组且组表达低于 & 组组 & * 蛋白水平高于 & 与组组血浆 0/) () 蛋白水平均显著高于 & 组且组 0/) 蛋白水平高于组组和组 +& 高于 & 组分别组, 均高于 & 组组, 高于组与组均显著高于 & 组组 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关组血浆 %&' 蛋白表达与呈正相关 2 结论 %&' 在患者的炎症反应中表达异常提示 %&' 在患者的炎症反应中可能发挥重要的调控作用关键词痛风性关节炎 %&' 炎症白介素 0/) 肿瘤坏死因子 ()& 反应蛋白 & * 中图分类号 32 文献标志码 3!"# $"$" % ""& '"$#$ " ' 4") 45 65"7 80. $")7#4"7 9 65"7)7#: 0"% 5 # $:; $#-4 : :74" 0--#": :7 $ ;5 54 $:% 5 4 :; :15!#4",$ 5!4 &: $7$ 4"!:"7 1!:: :;& 5"5!4,$ 5!5"$ &$"7 # "5 $ %5 :;( 4 5 5:"4 &5"$%$,$ 5!5"$&$"7 # 4"%# "5 $ %5 :;( 4 5 5:"4 &5"$%$,$ 5!5"$/4" :#&5"4 " #"## ( & )'* ( "+, - )." ##-/! &0 )'* -/! (#". (( # *1* ",# '*1* " # &,#(# "# & 0," ',( " ". 2$* & 0 )- ( ". " &)." ".". # "0 ( ".." ".". # ( *1*'*1* " &3 "#. ( )'* 0"# ## " # & 收稿日期,, 修回日期,, 基金项目国家自然科学基金资助项目 '&3 四川省科技创新苗子工程资助项目 '&,3 $ ". '' $# # " '&3" # " -4# $ # -#'&,3 通迅作者周京国 &2,"( "(,"( &# 王婧为共同第一作者 & 优先出版 (((&#&# "&22&)&&3&&,,!" # $ #!"

2 期党万太王婧谢文光等 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义 3 #"( *1* )'*0 #"# -/! &&3 #" ( " '*1* 0 #"# *1*&& 0(# ( '*1* && 0 #"# *1* #" ( " '*1* &&3 #" ( 00/)" () #"# *1* " '*1* && 3 #"( '*1* 0, #"# *1* && "03/#"# *1*#"( &"3/#"# '*1*#"( && "01)"!5 #"# *1*#"( &"!5 #"# *1*#" ( '*1* && "0 * #"# *1*"'*1*#"( &&( #. ( )'*0", -/!*1* & &&* #( ". (1) " 0 '*1* &2 && ""0 )'* -/! "1* ( # #& () *.., # #, ', # )- 痛风 7:# 是一种单钠尿酸盐 -:":%: 5#- #) 4 $,1 沉积所致的晶体相关性关节病与嘌呤代谢紊乱及或尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关属于代谢性风湿病范畴研究发现除代谢因素外免疫与炎症也参与痛风的发病尤其是固有免疫 5""4 $5--#"5 在痛风的急性炎症发生发展过程中发挥着重要作用 &' 即 /*1 5 : :) %4!4 5 $ 受体最初是一种存在于巨噬细胞单核细胞等细胞表面的白细胞分化抗原 &' 属于固有免疫反应系统的模式识别受体在体内以种形式存在膜 &'-$- 4"$&'-&' 和可溶性 &'%&'%&' 是 &' 分子在体内的主要存在形式是调控 /*1 作用于非髓样细胞的重要介质血浆中的 %&' 能特异性识别结合 /*1 或 /*1 脂多糖结合蛋白 5 : : %4!!4 5 $ 5" 5"7 : $5"/+* 复合物递呈给 (: 样受体 (:5 $ $!$: %(/ %(/ 通过 0/) 信号转导通路中的信号分子髓样分化因子 -$ :55;$ $" 54 5:" ;4! : 33,'33 端粒重复序列结合蛋白 $ :) -$ 5!) $ $4 5" 5"7;4! : ( 等间的相互作用激活核因子 +"#! $4 ;4! : ) 44)+ 信号转导通路引起多种炎性细胞因子的合成与分泌最终导致过度的全身炎症反应及组织器官损伤已有研究显示 %&' 在炎性肠病等多种疾病中发挥 ) 重要的作用然而 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的作用仍不清楚本研究通过 ()*& 法检测患者 *+,&% 的 &'- 表达水平并结合相关实验及临床指标进行分析探讨 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义对象与方法临床资料应用 2 年美国风湿病协会 & 痛风诊断标准排除肾脏心血管血液疾病引起的继发性痛风排除合并感染或自身免疫性疾病者收集年 2 月至年 3 月川北医学院附属医院风湿门诊和住院的例急性痛风性炎节炎 4!# $7:# 4 5 5% 患者例非 ":")4!# $7:# 4 5 5% 患者均为男性年龄 2 岁病程 3 年健康对照 $4!:":& 组为名同期在川北医学院附属医院体检的健康男性年龄 2 岁入选者实验室指标均无异常且无心血管系统疾病糖尿病肝脏疾病及痛风等病史并排除感染及自身免疫性疾病各组人群年龄差异无统计学意义该实验通过当地伦理委员会的同意与支持所有参与者均签订知情同意书 + 主要试剂与仪器 * 5-$1! 5 ( $47$" <5 5 7'. 4%$ *$ ;$!$4 (5-$ 试剂盒 1 + (, 日本 (4<4 4 公司 0/) 北京四正柏生物科技有限公司 ()./01 <5 试剂盒博士德生物工程有限公司 =#4" 5 5"$./01 #) -4"%&' >'1% $-% 1 +$! -4")&:#$ 原装 & * 试剂 +$! -4")&:#$ 公司 +.&<, 特种蛋白分析仪 0,,.3+.&<,&/(. 1 2 实时 *& 仪 +0 公司 1,- 实时荧光定量. 检测 / 的表达变化实时荧光定量 *& 检测的基因引物设计依据 $"+4" 中人肌动蛋白 )4! 5"&' 由南京金斯!" # $ #!"

3 西安交通大学学报医学版第卷瑞生物科技有限公司合成 )4! 5" 上游引物?) ((((& ( ( && &)? 下游引物?) &( & &( &&(& )? 片段大小 &' 上游引物?)( &(&&&(&(&( (&) ()? 下游引物?)&&& (&&( (& () ( ()? 片段大小取外周静脉血 -/ 用肝素钠抗凝用人淋巴细胞分离液 5!: 无菌分离 *+,&% 严格按照说明书操作提取 *+,&% 的总并进行电泳检测完整性!' 的合成严格按照逆转录试剂盒说明书操作 % 终止反应将逆转录的!' 在 +02 实时 *& 仪上进行检测 / 的反应体系 1 + (, /8 $;$ $"!$'$ / 上下游引物各 -: / 3/ 灭菌蒸馏水 / 反应条件为 2@ -5"2@ %@ -5" 共个循环以 A & 值进行统计分析目的基因 - ) 表达水平,(0 检测血清 01 / 101./01 <5 检测严格按照操作说明进行各孔用酶标仪在 "- 测定吸光度值用试剂盒标准品制作标准曲线根据样品的吸光度值在坐标上找出对应的浓度样品最终浓度所测浓度 B 稀释倍数收集临床实验指标及检测方法所有受试者禁食于清晨采集肘静脉血用 8.) 全自动血液分析仪检测血常规包括白细胞计数 5 $ ::!:#"+& 嗜中性粒细胞绝对值 7 4"# :! $ 淋巴细胞绝对值 - :! $/ 单核细胞绝对值 -:":! $, 用日立 ) 全自动生化分析仪检测血尿酸 # 5!4!5 血清 & * 检测采用免疫比浊法统计学分析采用 1*112 统计软件进行统计分析各组实验数据采用表示组间比较采用单因素方差分析 "$) 4 C 各组间数据若不符合正态分布采用秩变换进行转换组间两两比较采用最小显著差数法各组间的相关分析采用相关分析为差异有统计学意义 + 结果 +, 各组. 的 / 表达各组 *+),&% 的提取效果良好图组患者 *+,&% 的 &'- 表达量高于 & 组差异有统计学意义组表达与 & 组相比较差异无统计学意义图 + 图 & 图各组. 的 / 表达 57.$%%5:":;&'- 5"*+,&%5"7:# 4 5 5% *+,&% 的质量电泳图 +& 患者 *+,&% 的 &'- 表达 +,+ 各组血浆.01 / 1 蛋白的表达组血浆 %&' 蛋白水平高于 & 和组但组低于 & 组差异均有统计学意义分别图组 & * 蛋白表达高于 & 与组差异有统计学意义图 + 组血浆 0/) () 蛋白表达均高于 & 组且组 0/) 蛋白表达显著高于组差异均有统计学意义均图 & + - 各临床指标的比较组和组 +& 均高于 & 组差异均有统计学意义分别图组, 均高于 & 组组患者, 高于组差异均有统计学意义均图与组均高于 & 组差异有统计学意义图 + 与组 / 与 & 组相比较差异均无统计学意义 +,/ 表达与其临床实验指标的相关性组 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关与 +&/, & *() 均未见相关性与 & 组 *+,&% 的 &' - 表达与 +&/, & *0/) () 均未见相关性!" # $ #!"

4 期党万太王婧谢文光等 %&' 在痛风性关节炎患者炎症反应中的变化及其意义图 + 各组血浆. 和 01 / 1 表达 57 ($$$%%5:"%:;%&' & * +0/)4" ()&5" $4%-4:;7:# 4 5 5% 4 5$" % 图 - 各组血常规与血尿酸检测指标的比较 57 &:- 4 5%:":; :::# 5"$ 4" +5"7:# 4 5 5% 4 5$" % +, 血浆蛋白表达与其临床实验指标的相关性组血浆 %&' 蛋白表达与呈正相关 2 与 & 组血浆 %&' 蛋白表达与 +&/, & * 0/) () 均未见相关性组血浆 %&' 蛋白表达与 +&/, & *0/) () 均未见相关性 - 讨论近年来痛风的发病率呈明显增高的趋势已引起了医学界的高度重视有研究表明炎症与免疫在痛风发病过程中发挥重要作用研究表明,1 晶体主要通过识别细胞表面受体而激活细胞启动炎 3 症反应固有免疫的 (: 样受体 (: ) 5 $ $)!$: (/ 与 (: 样受体 (: ) 5 $ $!$ ) : (/ 可协助,1 晶体识别并激活巨噬细 2 胞,1 晶体可能通过激活 (/ % 或 &' &' 等使 (/ % 激活介导炎症反应研究已证实痛风患者外周血 0/) 明显升高 0/) 通过与 0/) 受体结合激活 0/) 信号通路和,'33 依赖的 )+ 信号转导通路引起大量的 0/) () 0/)3 等促炎因子表达产生炎症级联放大效应本研究结果显示患者急性期 *+,&% 的 &' - 表达量显著高于健康对照组而患者非急性期较健康对照差异无统计学意义进一步检测血浆 %&' 蛋白表达结果显示患者急性期表达显著高于健康对照与非急性期组这提示 &' 在痛风的急性炎症反应中可能发挥重要调控作用已知 %&' 是级急性蛋白 /+* 是级急性蛋白 0/) 可抑制 %&' 的表达而 0/) 则促进其表达且有研究显示 %&' 是体内固有的 /*1 和 () 的拮抗剂本研究发现患者急性与非急性期 0/) () 表达均显著高于健康对照组提示 %&' 在痛风的炎症反应中可能发挥双向调控作用其机制可能与 %&' 对 *+,&% 的双重调节效应相关该机制同时可能与痛风炎症反应的自限性相关本研究检测并分析患者 +&, 结果显示除患者非急性期与健康对照相比较差异无统计学意义外患者急性期的!" # $ #!"

5 3 西安交通大学学报医学版第卷 +&, 均显著高于健康对照组且非急性期组, 显著低于急性期组表明在患者的病变过程中炎症反应较为显著值得注意的是本研究对实验相关指标进行相关性分析后发现患者 *+,&% 的 &'- 表达与 0/) 呈正相关患者血浆 %&' 表达与患者呈正相关提示 &' 可能参与患者炎症的发生并发挥重要的调控作用其机制有待进一步研究参考文献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编辑国荣!" # $ #!"

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