),, ACD, DNA 50μl, / (, 2001) DNA, TE, PCR, 16SA 5 CGC CTG TTT AAC AAA AAC AT 3 ; 16SB 5 CCG GTT GAA CTC AGA TCA 3 (U

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1 40 5 Vol.40, No OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Sep., 2009 (Lutjanus) 16S rrna * ( ) 9 DNA 16S rrna PCR,, 561bp GenBank 9 16S rrna A T G C 28.5% 22.1% 23.6% 25.8%, AT GC, 18 MEGA3.1 72, 44, 75.61%, / ,, ,, (Argyrops spinifer), NJ, 9 9 9,, 16S rrna,, Q DNA,,,,,, (, 1998; Kitaur et al, 1998; Dbermiller et al, 2003) DNA, 16S rrna, (, 2001a) (Lutjanus) (Perciformes) (Lutjanidae),,, (Chow et al, 1993; Gold et al, 1997; Santamaria et al, 1999), (, 2005;, 2005;, 2004;, 2005; Guo et al, 2007a, b; Liu et al, 2007; Yusong et al, 2008) 9 (L. russelli) (L. fulviflamma) (L. erythropterus) (L. argentimaculatus) (L. vitta) (L. stellatus) (L. sebae) (L. vaigiensis) (L. johni) DNA 16S rrna,, 9 16S rrna, 18, , (, *, ;, 2007BAD29B03 ;, A ,,, liucw@gdou.edu.cn : , :

2 ),, ACD, DNA 50μl, / (, 2001) DNA, TE, PCR, 16SA 5 CGC CTG TTT AAC AAA AAC AT 3 ; 16SB 5 CCG GTT GAA CTC AGA TCA 3 (Ui et al, 2001), PCR Hema8000, 25μl, 10 Buffer 2.5μl 0.2mmol/L dntps 0.2μmol/L 1.5mmol/L MgCl 2 1.5U Taq ( ), DNA 100ng, 25μl PCR 94 5min 94 50s, 52 1min, 72 1min, min, 4 PCR 1.5% PCR 1.2.3, MEGA3.1(Kumar et al, 1994) 18, NJ 16S rrna, S rrna PCR,, 560bp, bp 16S rrna, 16S rrna, GenBank, 1 MEGA3.1 ( 1), GC 50%( 48.5%), AT 50%, 18, A+T (50.6%) G+C (49.4%), 16S rrna (GAO et al, 2003) A 表 1 18 种笛鲷 mtdna 16S rrna 的碱基组成及数据库登录号 Tab.1 The base composition of mtdna 16S rrna and GenBank accession number of 18 Lutjanus species T(%) C(%) A(%) G(%) G+C(%) (bp) L. russelli DQ444478* L. fulviflamma DQ444479* L. erythropterus DQ444480* L. argentimaculatus DQ444481* L. vitta DQ444482* L. stellatus DQ444483* L. johni DQ444484* L. sebae DQ444485* L. vaigiensis DQ444486* L. synagris AY L. jocu AY L. griseus AY L. decussatus AF L. novemfasciatus AY L. peru AY L. analis AY L. argentiventris AY L. campechanus AY *

3 5 : (Lutjanus) 16S rrna %, T 22.1%,, 9 GenBank S rrna S rrna, 561bp 27, L.russelli -AGGTCTCGC CTGCGCGTGT GACTATAAGT TTAACGGCCG CGGTATTTTG ACCGTGCGAA GGTAGCGCAA TCACTTGTCT TTTAA [ 85] L.fulviflamma -.C.GT......C [ 85] L.erythropterus -...C......C [ 85] L.argentimaculatus C.-..G [ 85] L.vitta -.C..T......C [ 85] L.stellatus C [ 85] L.johni AG.T......C.TGTG...G [ 85] L.sebae C [ 85] L.vaigiensis -...AT.....C.-..G [ 85] L.synagris -...C......C [ 85] L.jocu -...C......C [ 85] L.griseus -...C......C [ 85] L.decussatus -...C......C [ 85] L.novemfasciatus C [ 85] L.peru [ 85] L.analis -...C......C [ 85] L.argentiventris [ 85] L.campechanus -...C......C [ 85] L.russelli ATGGAGACCT GTATGAATGG CATAACGAGG GCTTAGCTGT CTCCTATTTC CAGTCAATGA AATTGATCTC CCCGTGCAGA AGCGG [170] L.fulviflamma [170] L.erythropterus CC... A [170] L.argentimaculatus A......C... A [170] L.vitta G [170] L.stellatus T... A [170] L.johni T... A [170] L.sebae C... A [170] L.vaigiensis [170] L.synagris C... A [170] L.jocu C... A [170] L.griseus C... A [170] L.decussatus C [170] L.novemfasciatus C... A [170] L.peru C... A [170] L.analis C... A [170] L.argentiventris C... A [170] L.campechanus C... A [170] L.russelli GGATACGCAC ATAAGACGAG AAGACCCTAT GGAGCTTTAG ACACCAAAGC AGACCATGTT AAGCATCCCA -AAACAAAGA ACCAA [255] L.fulviflamma...A GA......A..A G... [255] L.erythropterus...C.C G.....A......T.C...T -...G.G -..G. [255] L.argentimaculatus...A CT..C T...G.G.TT.. [255] L.vitta...T G A..C...G -...G GT... [255] L.stellatus...A G A..C G... [255] L.johni GA....T.....A..C G GTT.. [255] L.sebae...CTC A......GA C...T -.G.T...G...G. [255] L.vaigiensis...AT A..C...G -.G...G... [255] L.synagris...T GA......A..C... -G..T...G... [255] L.jocu G C... -G..T...G G... [255] L.griseus G C T...G GT... [255] L.decussatus...T A..C G... [255] L.novemfasciatus...A T CT..G -...G.TT.. [255] L.peru...TT GA......A..C G... [255] L.analis...TTT GA......A..C... -G...G G... [255] L.argentiventris G C T...G GT... [255] L.campechanus...TT GA......A... -.G...G... [255] L.russelli ACCAAATGAT CCCTGCTCTA ATGTCTTTGG TTGGGGCGAC CGCGGGGAAA TACAAAACCC CCACGTGGAA CGAGAACACC TCC-T [340] L.fulviflamma......TC C......T [340] L.erythropterus...G...A...C.C C T...G... C.--. [340] L.argentimaculatus......C C GG... C..-. [340] L.vitta......C T..T...-. [340] L.stellatus...C...C C [340] L.johni...G...C...C C......T... T...G......C. [340] L.sebae...G...G...TC.C G... C..-. [340] L.vaigiensis...A C [340] L.synagris...GC...C C G [340] L.jocu......C C G... C..-. [340] L.griseus......C C......T......G... C.--. [340] L.decussatus......C C T [340] L.novemfasciatus......C C G [340] L.peru...GC...C C G [340] L.analis...GC...TC C G [340] L.argentiventris......C C GT... C..-. [340] L.campechanus...GC...C C [340] Fig S rrna ( ) The sequence of 16S rrna gene fragment in 18 Lutjanus species ( )

4 L.russelli CTCACAACCA AGAGCTCCCG CTCTAGTAAA CAGAAATTCT GACCAATCAG ATCCGGCACA AGCCGATCAA CGGACCGAGT TACCC [425] L.fulviflamma T [425] L.erythropterus...T.....T....AC......CA......GCT [425] L.argentimaculatus...G TCT [425] L.vitta C [425] L.stellatus A A GA [425] L.johni...T A TG [425] L.sebae A......C......T [425] L.vaigiensis C T [425] L.synagris [425] L.jocu G T [425] L.griseus T [425] L.decussatus C.G T [425] L.novemfasciatus T [425] L.peru G CT [425] L.analis [425] L.argentiventris G T [425] L.campechanus G CT [425] L.russelli TAGGGATAAC AGCGCAATCC CCTTTTAGAG GCCATATCGA CAAGGGGGTT TACGACCTCG ATGTTGGATC AGGACATCCT AATGG [510] L.fulviflamma [510] L.erythropterus T... A......A [510] L.argentimaculatus [510] L.vitta A [510] L.stellatus [510] L.johni A [510] L.sebae A [510] L.vaigiensis [510] L.synagris [510] L.jocu [510] L.griseus [510] L.decussatus [510] L.novemfasciatus [510] L.peru [510] L.analis [510] L.argentiventris [510] L.campechanus [510] L.russelli TGCAGCCGCT ATTAAGGGTT CGTTTGTTCA ACGATTAAAG TCCTACGTGA TC [562] L.fulviflamma [562] L.erythropterus [562] L.argentimaculatus [562] L.vitta [562] L.stellatus [562] L.johni [562] L.sebae [562] L.vaigiensis [562] L.synagris [562] L.jocu [562] L.griseus [562] L.decussatus G [562] L.novemfasciatus [562] L.peru [562] L.analis [562] L.argentiventris [562] L.campechanus [562] Fig S rrna ( ) The sequence of 16S rrna gene fragment in 18 Lutjanus species ( ) 4.81% 72, 12.83%, 44 ( 61.11%, ) 75.61% (Transition), 24.39% (Transversion), / % MEGA ( 2), 9 ( ) 6.9,,,,,, 9 2.3,,, 2.3 Kimura MEGA 18 ( 3), (Neighbor-joining) ( 3)

5 5 : (Lutjanus) 16S rrna 567

6 568 40

7 5 : (Lutjanus) 16S rrna NJ Fig.3 Neighbor-joining phylogenetic tree of 18 Lutjanus species using A. spinifer as the outgroup 3, , , ,,, (, 2004) 7, 0.6, 3, 18,, 18, 9,,, 0.57%, 17, NJ,,,,,,, 9,,,,, 2 3 9, 1.93%,, 9 9,,,,, DNA,, DNA, (2005) 16S rrna, (2002) 16S rrna,, 16S rrna, (2001b) 16S rrna,, (2004) 6 16S rrna 18,,,,

8 570 40,,, mtdna Cytb RFLP., 29(3): ,,, :, ,,, 2001a. 16S rrna COI., 25(12): 46 48,,, 2001b. 16S rrna., 31(5): ,,, S rrna., 33(5): ,, DNA., 5(3): ,,, S rrna., 15(2): ,,, AFLP., 27(2): ,,, S rrna., 11(2): ,, DNA., 24(1): 9 12 J, E F, T, 2001.,,, ( ). :, Chow S, Clarke M E, Walsh P J, PCR-RFLP analysis on thirteen western Atlantic snappers (subfamily Lutjaninae): A simple method for species and stock identification. Fishery Bulletin U S, 91: Dbermiller L E, Pfeiler E, Phylogenetic relationships of elopo morph fishes inferred from mitochondrial ribosomal DNA sequences. Mol Phylogenet Evol, 26(2): GAO Tian-xiang, LI Jian, WANG Qing-yin, Sequence analysis on mitochondrial 16S rrna gene in Fenneropenaeus chinensis. Journal of Fishery Sciences of China, 10(5): Gold J R, Sun F, Richardson L R, Population structure of red snapper from the Gulf of Mexico as inferred from analysis of mitochondrial DNA. Transactions of the American Fisheries Society, 126: Guo Y, Wang Z, Liu C et al, 2007a. Phylogenetic relationships of south China Sea snappers (Genus Lutjanus; Family Lutjanidae) based on mitochondrial DNA sequences. Mar Biotechnol (NY), 9(6): Guo Y, Wang Z, Liu C et al, 2007b. Isolation and characterization of microsatellite DNA loci from Russell s snapper (Lutjanus russellii). Molecular Ecology Notes, 7(6): Kitaur J, Yamamoto G, Nishida M, Genetic variation in populations of the diamond-shaped squid Thysanoteuthis rhombus as examined by mitochondrial DNA sequence analysis. Fisheries Science, 64(4): Kumar S, Tamura K, Nei M, MEGA: Molecular evolutionary genetic analysis. Ver.l1.02. University Park, the Pennsylvania State University, Liu Li, Liu Chu-Wu, Genetic diversity and molecular markers of five snapper species. Chinese Journal of Agricultural Biotechnology, 4(1): Santamaria A, Chavez E A, Fishery evaluation: Lutjanus speru (Pisces: Lutjanidae) from Guerrero, Mexico. Revista De Biologia Tropical, 47(3): Ui W H, Chan J P, Tai S S et al, One-Step PCR Amplification of complete arthropod mitochondrial genomes. Molecular Phylogenetics and Evolution, 19(3): Yusong Guo, Zhongduo Wang, Chuwu Liu et al, Sequencing and analysis of the complete mitochondrial DNA of Russell s snapper (L. russellii). Progress in Natural Science, 18(10):

9 5 : (Lutjanus) 16S rrna 571 SEQUENCE COMPARISON AND SYSTEMATIC ANALYSIS OF mtdna 16S rrna GENOMIC FRAGMENTS OF LUTJANUS LIU Chu-Wu, XU Tian-Jun, LIU Li, GUO Yu-Song, DONG Qiu-Fen (Fisheries College, Guangdong Ocean University, Zhanjiang, ) Abstract MtDNA 16S rrna genomic fragments of nine Lutjanus were amplified by PCR; and the purified product yielded a systematic sequence with 561bp being sequenced. The contents of A, T, G and C are respectively 28.5%, 22.1%, 23.6% and 25.8%. The contents of AT are slightly higher than those of GC, and the difference in base composition in 18 Lutjanus species is the minimum. Comparison with MEGA 3.1 software revealed 72 variation loci, of which 44 are information loci. For base replacement, 75.61% are caused by transition in it, and the ratio of transition/transversion is 3.1. The results of heredity distances computing show that the sequence difference is from to , of which those of L. russelli and L. fulviflamma, L. russelli and L. vaigiensis are the smallest, while those of L. erythropterus and L. fulviflamma, L. erythropterus and L. vitta are the largest. By choosing Argyrops spinifer as outgroup and integrating the 16S rrna homologous sequences of other nine Lutjanus from GenBank, the molecular phylogenetic trees with NJ method was constructed. The result shows that the nine Lutjanus in the research is away from the other nine s in terms of evolutionary relationship, and the nine Lutjanus from South China Sea keep relative long heredity distance between each other with obvious genetic diversity. Key words Lutjanus, 16S rrna, Sequence comparison, Molecular systematic analysis

48 5 ( Pinctada) ( P. fucata ), 3 [ 7 ] ( P. maxima ) ( P. albina), ( P. margaritifera) ( P. nigra) RAPD, ( P. chemnitzi), ( Pteria penguin) [ 1-2 ] [

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