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琉答友
7 years ago
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1 临床检验方法学评价山西医科大学第一医院检验科杨泽华

2 新的临床项目开展通常需要进行一下工作 : 方法学性能的评价 1. 精密度评价 : 2. 准确度评价 : 3. 最低检测限 4. 线性范围 5. 试剂的稳定性 6. 抗干扰性能 7. 参考区间诊断性能 : 1. 灵敏度 2. 特异性

3 一定量检测方法的精密度评价临床上对病人标本测定时, 通常只是测定一次就发报告, 这就是在临床检验中为什么将方法仪器或检测系统的精密度作为其性能的第一位的原因现在一般推荐临床检测方法的批内 SD 应小于 1/4TE, 天间 SD 应小于 1/3TE 在实际使用过程中, 一台仪器上可能进行许多项目的检测, 决不能以一项检测的精密度评价结果代替所有项目的评价结果

4 美国临床实验室标准委员会 (NCCLS), 现更名为临床实验室标准研究院 (CLSI), 为临床定量测定方法精密度的评价出版了 EP- 5 文件, 该文件经多次修改, 于 1999 年正式批准,2004 年在次修改, 发布为 EP-5A2 文件

5 不精密度分为批内不精密度批间不精密度天间不精密度总不精密度临床医师只关心总不精密度, 而实验室工作人员便于分析问题, 把总不精密度拆分为几项

6 精密度评价方案 : 试剂和校准品的选取标本的选取标本浓度的确定标本数量持续时间

7 试剂和校准品的选取在整个评价过程中可以选取同一批号的试剂和校准品, 但是这样会低估该实验室的精密度, 最好使用使用不同批次的试剂和校准品, 以更加客观地反映该实验室的精密度

8 评价标本的选取应该选取与与临床标本具有相似性质的材料如果可能的话最好选用稳定的冷冻保藏的混合血清必要时也可以使用稳定的商品化的人血清基质质控品

9 标本浓度的确定通常推荐两个浓度的标本, 当然也可以使用更多浓度的标本在本方案中对两个不同浓度的标本分别进行评价两个浓度值应尽可能跨越测量范围的大部分如果使用两个浓度以上, 另外的浓度值尽可能与实验室使用的医学决定水平相接近如果想要与厂商说声明的精密度值做比较, 那么就应该选取与厂商所采用的浓度接近的值如果厂商要确立一个测定项目的精密度, 应该选取高低接近医学决定水平的三个浓度分别进行评价如果这三个浓度的精密度或者相对精密度一致, 那么这三个浓度的结果就足以说明问题如果在这三个浓度处所获得的结果不一致或者有较大的差异, 那么为了更加全面的反映方法的性能, 就应该选取更多的浓度进行评价

10 标本数量为了正确地反映所评价方法的真实精密度, 就需要足够的数据每天应分析两批如果因为质控或其他原因需要弃去一批测定, 那么应该在找到原因并且在纠正错误之后重测一批每个浓度的每批次测定应测定两次每批都应进行质控品的测定以确定数据的可接受性每批测定应改变标本和质控品的顺序为了更好地反映实际操作情况, 如果可能的话, 每批测定至少包括 10 份病人标本每天每批次之间的间隔时间至少为 2 小时

11 持续时间至少 20 天 ( 不包括有离群值的测量日 )

12 本次讲座以血清 ADA 的测定为例来说明

13 仪器的熟悉阶段其中包括 : 仪器的操作保养标本的制备试剂的配置定标仪器工作状态的监测等仪器应在本实验室安装使用足够长的时间以熟悉各种问题的解决办法对于决大多数仪器,5 天时间就足够了根据仪器的复杂程度以及操作者的技能, 该时间可长可短

14 评价程序的熟悉由于评价实验中一些步骤在常规标本检测中并不碰到, 为了避免这些步骤对精密度评价实验的干扰, 在正式评价之前应实际进行一段时间的实验这有助于对评价方案的熟悉此步骤应进行到轻松地获取 5 天次的实验结果为止在评价方案的熟悉阶段快要结束时, 应进行精密度的初步评价进行 20 次测定, 理想情况下, 进行两个或多个浓度的测定

15 仪器精密度的初步评价目的熟悉仪器的操作初步判断仪器的性能确立离群值判断的界限如何进行在熟悉评价程序之后, 对同一标本进行 20 次测定, 最好进行两个浓度的标本的测定计算 SD 和 CV, 如果与预期的差距较大, 应与厂商联系, 直到问题解决为止

16 初步评价结果

29 二利用病人标本进行方法学比对和偏倚的估计

30 实验室准备用一个检测系统或测定方法进行测定标本前, 应和原有检测系统或者公认的参考方法一起检测一批病人标本, 对测定结果进行统计分析, 用以估计新方法的偏倚, 如果偏倚在允许范围内, 说明使用新方法代替原有检测系统不会引入明显的偏倚, 可以在临床使用

31 美国临床实验室标准研究院 (CLSI), 原来为 NCCLS, 致力于制定一系列评价临床方法的文件 CLSI 是一个全球性多学科非赢利性的标准化和教育性团体, 旨在促进医疗卫生领域中的标准化进程和应用 CLSI 的文件有以下三种形式 : 标准 (Standard) 指南 (Guideline) 报告 (Report)

32 多数 CLSI 文件可在 2 个水平上达成一致, 即提议 (Proposed), 此类文件编号为 P 批准 (Approved), 编号为 A 根据评价或数据收集的需要, 部分文件也可以介于上述两者之间, 即暂定 (tentative) 还有一类委员会报告, 则是尚未通过一致化的文件, 编号为 R

33 目前 CLSI 公布的与方法学评价有关的文件主要有 : EP(Evaluation protocol )5-A 临床化学精密度评价批准指南 EP6-A 定量分析方法的线性评价 EP7-A 临床化学干扰实验 EP9-A2 用患者标本进行方法学比较和偏倚评估 EP10-A2 定量实验方法的初步评价 EP14-A 基质效应的评价

34 以 BECKMAN DxC800 和 ROCHE MODULAR P 模块 HDL-C 测定比对为例来说明 ( 一 ) 首先确立比较方法和实验方法以 Roche 生化分析系统作为比较方法 (Comparative method) (X), Beckman DxC800 作为实验方法 (Test method)(y)

35 ( 二 ) 标本的选取实验时间至少做 5 天, 时间长一点更好 ; 至少做 40 份标本 ( 如每天至少做 8 份病人标本 ), 多一点更好尽可能使 50% 的实验标本分析物的含量在参考区间外可报告内, 各个标本分析物含量越宽越好, 进行双份测定, 最后取平均值用于结果的计算使用当天采集的标本, 一份标本不够时可以将浓度相近的两份标本混合

36 ( 三 ) 标本的测定整个实验必须有室内质量控制, 失控时不能进行比对实验比对标本最好在相同时间内进行测定, 一般应在 2 小时内完成检测标本按顺序排列先测一遍, 然后将顺序倒过来进行第二次检测

37 ( 四 ) 数据的上报和离群值的检验比对结果应以两种方式上报, 一种为打印结果, 另一种为 Excel 格式的电子版结果

38 ⑴ 方法内离群点的检验按以下公式分别计算每个标本用比较方法和实验方法两次重复测定的差值的绝对值, ΔXi= xi1-xi2 ΔYi= yi1-yi2 这里 i 代表标本号, 总共的标本数量为 N 按以下方法计算上述绝对值的平均值,

40 ⑵ 方法间离群值的检验

42 ( 五 ) 散点图的绘制

46 ( 六 )X 数据范围是否足够宽的估计

47 ( 七 ) 回归方程的计算

48 ( 八 ) 计算偏倚的估计值及其相应的 95% 可信区间

51 ( 九 ) 结果的解释

52 三临床检验项目检测限的建立 : 意义 : 一些项目的灵敏度对于临床具有重要的指导价值, 比如肿瘤标志物毒物感染性疾病标志物 hscrp ctni TSH 等, 检测灵敏度是这些项目的重要性能指标以 TSH 检测试剂盒的发展为例 : 第一代 TSH 检测试剂盒 : 为采用离心沉降技术的放免试剂, 分析灵敏度为 1-2mIU/L; 由于灵敏度太低, 对甲亢的诊断意义不大 ; 第二代 TSH 检测试剂盒 : 采用固相放射免疫技术, 分析灵敏度为 mIU/L; 由于具有较好的灵敏度, 因此在甲亢的诊断中开始发挥作用 ; 第三四代 TSH 检测试剂盒 ; 都使用了化学发光免疫技术, 分析灵敏度分别可达 mIU/L 和 mIU/L, 比第一代试剂盒提高了 2-3 个数量级, 使其成为甲亢诊断的首选指标

53 概念 : 空白限 (limit of blank, LoB): 空白样品杯观察到的最大检测结果检出限 (limit of detection, LoD): 样品中分析物的最小量, 可以在规定的可能性条件下予以检出, 虽然也许还不能被量化为实际的值定量限 (limit of quantitation,loq): 样品中分析物的最小量, 在规定的可接受精密度和正确度下被定量地确定正确度 (truness): 大量检测结果的均值和可接受参考值的一致性程度正确度通常以偏倚表示依据 CLSI 发布的 EP17-A 文件进行

56 基本步骤 : 1. 确定 LoB 的程序至少进行 60 次空白测定, 数据如果是正态分布, 则 LoB=X+1.645S; 如数据为非正态分布, 则 LoB=Pct 100-α 2. 确定 LoD 的程序选择 4 到 6 个浓度为 LoB1 到 4 倍 LoB 的低浓度样本, 至少获得 60 个重复测定结果如果是正态分布, 则 LoD=LoB+C β S; 如果是非正态分布 LoD=LoB+D S,β 3. 确定 LoQ 的程序对 3 到 5 个不同样品至少作 5 批, 至少 40 次检测结果

57 实例 :HBsAg 检测限的确立 1. 空白限的确立 (LoB)

58 第 95 百分位数应为 95.5 秩号的观察结果 : LoB=( )/2=0.012

59 2. 检出限 (LoD) 的建立 :

60 LoD=LoB+D S,β Ds,β= 中位数 - 第 5 百分位数的值 = =0.018 LoD= =0.030

61 3. 定量限 (LoQ) 的确立 : 预期样本浓度样本数 X±S Bias CV(%) TE ± ± ± ± ± TE=Bias+2CV

62 概念 : 四线性范围的确立线性范围 : 检测系统结果具有可接受线性的范围, 即 : 非线性误差小于规定的误差线性 : 提供的检测结果和检测样品中分析物浓度呈比例的能力意义 : 对于病情观察和疗效评估具有重要意义依据文件 :EP-6A 多项回归 :y=a+b 1 x( 一次多项式或线性拟合 ) y=a+b 1 x+b 2 x 2 ( 二次多项式 ) y+=a+b 1 x+b 2 x 2 +b 3 x 3 ( 三次多项式 )

63 基本步骤 : 标本的制备检测数据处理结果分析根据散点图对数据作出初步判断根据统计回归方程的标准误进行判断, 其中标准误最小的回归方程为最好拟合使用 t 检验判断回归方程的非线性系数是否具有统计学意义判断每一个点的最佳回归的预测值和线性预测值的差值是否在允许范围内

64 实例 :ALT 线性范围的确立表 1 不同稀释度样本的配制方法稀释度 L 加入量 (μl) H 加入量 (μl)

65 稀释度第一次第二次平均值差值差值百分数

66 绘制测定值的散点图

67 阶别系数符号系数值系数 SE t 检验自由度 1 b 回归标准误 B B B B B B B B

68 查 t 界值表, 自由度为的 95% 双侧 t 界值分别为测量均值一次多项预期值三次多项预期值线性偏离线性偏离百分数

69 阶别系数符号 1 b B B B 系数值系数 SE t 检验自由度 B B B B B 回归标准误查 t 界值表, 自由度为的 95% 双侧 t 界值分别为

70 测量均值一次多项预期值二次多项预期值线性偏离线性偏离百分数

71 阶别系数符号 1 b 系数值系数 SE t 检验自由度回归标准误 B B B B B B B B

72 查 t 界值表, 自由度为的 95% 双侧 t 界值分别对于三次方程的回归系数 B2 和 B3 均小于 2.145, 即与 0 相比无显著性差别对于二次方程的回归系数 B2 小于 2.132, 即与 0 相比无显著性差别所以在浓度 44 到 1297 范围内,ALT 的测定呈线性关系

73 总结一下线性范围建立的基本步骤 : 1. 使用统计软件建立一次二次和三次多项式的拟合曲线 : 2. 使用 t 检验判断非线性是否具有显著性 ; 3. 使用回归标准误找出最佳拟合曲线 ; 4. 判断非线性回归的预期值与线性回归的预期值是否满足质量要求

74 1. 方法学评价为室内质量控制奠定了基础 : 西格玛值 =(TEa-Bias)/CV TEa 的来源 : Bias 的来源 : CV 的来源 : 六西格玛的质量水平 : 百万分子 3.4 的质量缺陷举例说明 : ALT 的方法学性能 2. 室内质量控制是室间质量评价的基础 : 3. 良好的室内质量控制和室间质量评价结果才能保证良好的病人检测结果

75 谢谢!

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! %! &!! % & 张海峰姚先国张俊森借鉴的有效教育概念本文利用年间的中国省级面板数据估计了平均教育年限教育数量和平均师生比率教育质量对地区劳动生产率的影响本文的实证分析结果表明以师生比率衡量的教育质量对劳动生产率有显著且稳健的正效应在均值处师生比率每上升一个标准差有助于提高地区劳动生产率约教育数量对劳动生产率的影响大小部分取决于教育质量的高低教育质量越高教育数量对劳动生产率的促进效应越大