自身抗体检测的特点 : 三 多 一 差 检验项目多 方法多 :ELISA 免疫印迹 (WB) 化学发光免疫试验 (CLIA) 间接免疫荧光试验 (IIF) 放射免疫试验 (RIA) 对流免疫电泳法 (CIE) 免疫双扩散法 (DID) 流式荧光免疫试验 (Luminex) 等 手工操作多 不同方法或

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1 自身抗体临床检测的质量保证 李金明国家卫生计生委临床检验中心

2 自身抗体检测的特点 : 三 多 一 差 检验项目多 方法多 :ELISA 免疫印迹 (WB) 化学发光免疫试验 (CLIA) 间接免疫荧光试验 (IIF) 放射免疫试验 (RIA) 对流免疫电泳法 (CIE) 免疫双扩散法 (DID) 流式荧光免疫试验 (Luminex) 等 手工操作多 不同方法或试剂间结果可比性 较差

3 自身抗体检测的临床意义 自身免疫病的诊断 疾病活动性指标

4 检验申请单 ; 标本采集 运送和保存 ( 分析前 ) 涉及临床医生标本采集环节和实验室 结果报告解释及临床应用 ( 分析后 ) 质量保证 室内质控 ( 分析中 ) 涉及实验室人员和临床医生 质量控制 涉及实验室 室间质评 ( 分析中 ) 涉及实验室

5 目前自身抗体检测质量保证方面存在的问题 实验室环境条件不能满足要求仪器设备维护校准不够试剂方法不会进行性能验证以及没有批间质检 SOP 没有可操作性没有开展室内质量控制 没有参加室间质量评价或不知道为何要参加? 人员培训不够, 不会进行能力评估不与临床沟通或沟通不够

6 分析前

7 标本采集 运送和保存中的关键点 容器 : 密闭的 一次性 无菌 采集方法 : 人 ( 训练有素 ) 防污染 保存时间和温度 :4 可保存 2-3 天, 更长时间, 则在 -20 以下, 避免反复冻融 合格标本 : 容器完整 量够 时间符合要求 外观符合要求 ( 避免重度溶血和脂血标本, 其会增加非特异荧光背景 )

8 分析中

9 实验室环境条件的控制 温度 湿度 不只是为了仪器设备运行 抗原抗体结合反应与环境温度和湿度均有关系

10 实验室仪器设备及管理 加样器 : 维护 校准 荧光显微镜 : 维护 校准 水浴箱 : 维护 校准 酶标仪 : 维护 校准 洗板机 : 维护 离心机 : 维护 生物安全柜 : 维护 冰箱 : 维护

11 理想的试剂 试剂方法的性能验证及每批试剂的质检 性能指标 : 重复性 ( 精密度 ) 准确性 ( 定量 : 回收率 标准物质等 ; 定性 : 方法学比较等 ) 线性范围 ( 定量 ) 分析特异性参考区间测定下限抗干扰能力

12 自身抗体国际标准物质 ( 一 ) 项目编号浓度 (IU/ 瓶 ) 研制者 ANA( 均质型 ) WHO66/ CLB 抗 ds DNA 抗体 WHO Wo/ CLB RF WHO-64/1 100 CLB APF WHO-64/1 100 CLB FITC 抗 Hu Ig WHO CLB 抗 RNP 抗体 WHO anti-rnp CLB 抗甲状腺球蛋白抗体 WHO65/ NIBSC 抗胰岛细胞抗体 97/ NIBSC 抗谷氨酸脱羧酶抗体 97/ NIBSC

13 自身抗体国际标准物质 ( 二 ) 项目编号浓度 (IU/ 瓶 ) 研制者 抗酪氨酸磷酸酶抗体 97/ NIBSC 抗心磷脂抗体 93/ NIBSC 狼疮抗凝物 96/522 NIBSC ANA( 均质型 核周型 ) ANA#1(IS2072) AF-CDC 抗 ds DNA 抗体 ANA( 颗粒型 ) ANA#2(IS2073) AF-CDC 抗 SSB/La 抗体 ANA 抗核抗体 ( 颗粒型 ) ANA#3(IS2074) AF-CDC 抗 U1-RNP 抗体 ANA#4(IS2075) AF-CDC 抗 Sm 抗体 ANA#5(IS2076) AF-CDC

14 自身抗体国际标准物质 ( 三 ) 项目编号浓度 (IU/ 瓶 ) 研制者 抗核抗体 ( 核仁型 ) ANA#6(IS2100) AF-CDC 抗 f i b r i l l a r i n 抗体 (U3-RNP) 抗 SSA\Ro 抗体 ANA#7(2105) AF-CDC 抗核抗体 ( 着丝点型 )ANA#8(2134) AF-CDC 抗 Scl-70 抗体 ANA#9(2135) AF-CDC 抗 Jo-1 抗体 ANA#10(2187) AF-CDC 抗 PM/Scl 抗体 ANA#11(2310) AF-CDC 抗 SSA/Ro 抗体 Lot#C103BG 滴度 1:4~1:32 CAP

15 WHO 抗核抗体国际标准物质 66/233 的使用 Holborow 等建议,: 如果一个特定的实验室 WHO 66/233 的测定终点是 1:160, 则终点稀释度含 100*1/160=0.625 IU/ml 不同实验室和检测系统间的差异可通过以相同的 IU/ml 来报告结果来减小或消除 WHO 66/233 的缺点是其不适用于斑点型或其他型核荧光的参考, 并且当总抗体量相近, 但亲合力不同, 给出的终点也不同 此外, 该标准物质所含的 ANA 多为 IgG, 因此最好是用于含 IgG 类 ANA 活性的测定结果的比较 Holborow EJ, et al. In: Wick et al, eds. Immunofluorescence Technology, Selected Theoretical &Clinical Aspects. New York: Elsevier Biomedical Press, 1982:1 10.

16 理想的操作 木桶理论

17 质量管理的 灵魂 标准操作程序 (SOP) 是实验室的 最高标准! SOP 等于试剂盒说明书吗? 源于一些标准文件 ( 如仪器试剂说明书 国际国内标准文件 ) 和实验室实际工作经验积累 因此高于相关标准文件!!! 有可操作性的 SOP 是质量管理的 灵魂!

18 室内质控方法

19 非统计学方法 方法 : 在检测临床标本的同时, 检测一定数量 ( 与临床标本的数量相适应 ) 的已知弱阳性 ( 与试剂宣称的测定下限相适应 ) 和阴性的质控样本 质控规则 : 阳性检测为阳性 ( 反应性 ), 阴性检测为阴性 ( 非反应性 ), 表示为 在控

20 质控品从哪来? 日常检验阳性样本的收集 弱阳性质控品 :ELISA CLIA 等 (S/CO 比值 1.5~4.0 的样本 );ANA( 有临床意义的起始稀释度样本 );LIA( 能见到可判断为阳性条带的样本 ) 较强阳性质控样本? 阴性质控品 : 日常检验的阴性标本

21 ANA 均质型 较强阳性样本 1:100 1:160 1:320 弱阳性样本 1:640 1:1000

22 Levey-Jennings 质控图方法 也称 Shewhart 质控图, 是由美国的 Shewhart 于 1924 年首先提出, 并用于工业产品的质量控制 二十世纪五十年代初,Levey-Jennings 将其引入临床检验的质量控制 经 Henry 和 Segalove 的改良, 即为目前常用的 Levey- Jennings 质控图

23 质控图

24

25 常用质控规则的符号及定义 符号定义 1 2S 1 个质控测定值超出均值 ±2SD 控制限 1 3S 1 个质控测定值超出均值 ±3SD 控制限 2 2S 2 个连续的质控测定值同时超出均值 +2SD 或 2SD 控制限 R 4S 同一批测定中,2 个不同浓度质控品测定值之间的差值超出 4SD 控制限 4 1S 4 个连续的质控测定值同时超出均值 +1SD 或 1SD 控制限 7 T 7 个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化 10 X 10 个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧

26 失控处理的 20 字原则 查出异因 采取措施 保证消除 不再出现 纳入标准 预防! 防止同样的问题出现第二次是质量管理的 精髓!

27 分析用质控 ( 图 )

28 控制用质控 ( 图 )

29 为什么要参加 室间质量评价 (EQA)? 政府法规规定? 评审要求? 自我教育 (Self-education)? 质量改进需要?

30 如何进行和使用 EQA? EQA 样本应与临床标本同等对待同时检测 ( 特殊对待 : 重复多次检测 使用常规检测不用的 好方法 检测等 ) EQA 对实验室的质量改进作用 : 出现检测结果不符问题 - 寻找原因并评估对血液标本的检测错误风险 - 采取措施进行改进 ( 仪器设备 试剂 人员操作流程等 ) 能不能对 EQA 样本特殊对待? 能不能与别的实验室对结果? 甚至直接采用厂家的结果?

31 起来, 不愿做 奴隶 的人们! 不做 质量管理 的奴隶! 必然王国 : 对 质量管理 及其规律还没有形成真正的认识, 不能自觉地支配实验室按质量管理要求运行的一种状态 在社会历史中, 必然王国指人受盲目必然性的支配, 特别是受自己所创造的社会关系的奴役和支配的社会状态 要做 质量管理 的主人! 自由王国 : 认识了 质量管理 及其规律, 并自觉依照这一认识来支配实验室按质量管理要求运行的一种状态 在社会历史中, 自由王国指人自己成为自然界和社会的主人, 摆脱了盲目性, 能够自觉地创造自己历史的社会状态

32 分析后

33 结果的报告与解释 结果解释的责任属于临床实验室, 应根据所检测的人群解释结果 临床解释的责任属于临床医生, 其应根据临床信息解释结果 临床实验室与临床医生的对话对适当利用实验室数据非常重要

34 ANA 检测结果的正确解读 患者年龄, 性别, 参考值范围? 用药史? 是否有肿瘤或病原体感染? 荧光染色模式? 滴度信息? 自身免疫病的疑似程度?

35 如何正确地理解和应用自身抗体 检测结果 : 临床实验室方面 应在充分阅读理解试剂盒说明书的基础上, 建立检测报告的标准操作程序 (SOP) 与相应的临床科室医生充分交流沟通, 使得临床医生能充分理解结果的报告方式及内在含义, 以及在标本采集 患者用药上可能对检验结果的影响, 从而尽可能避免标本收集环节可能给结果带来的影响 可能的话, 在结果报告单上加上对结果的综合解释

36 如何正确地理解和应用自身抗体检测结果 : 临床医生方面 根据检验目的, 正确地开出检验申请单 是诊断? 还是治疗预后判断? 对检验结果不应是固定的静止的去看待, 应以动态的纵向的和横向的方式去看 作为一个特定的患者, 某一次检测, 什么样的结果都有可能出现 出现某种不合理结果, 既可能是由于患者免疫状态的反映, 也可能是标本中的干扰因素所致的假阳性或假阴性, 或实验室不可知原因的检测错误 不能单纯依据临床症状来判断检测结果的真伪

37

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