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1 硕士学位论文 (2006 届 ) 维生素 K 4 维生素 D 及钙对绝经期妇女骨折早期骨代谢的影响 Effects of vitamin K 4, vitamin D and calcium on bone metabolism in early period of fracture in postmenopausal women 研究生姓名指导教师姓名专业名称研究方向论文提交日期 程璐茜朱圣陶营养与食品卫生学临床营养 2006 年 5 月

2 苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人郑重声明 : 所提交的学位论文是本人在导师的指导下, 独立进行研究工作所取得的成果 除文中已经注明引用的内容外, 本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果, 也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体, 均已在文中以明确方式标明 本人承担本声明的法律责任 研究生签名 : 日期 : 学位论文使用授权声明 苏州大学 中国科学技术信息研究所 国家图书馆 清华大学论文合作部 中国社科院文献信息情报中心有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档, 可以采用影印 缩印或其他复制手段保存论文 本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致 除在保密期内的保密论文外, 允许论文被查阅和借阅, 可以公布 ( 包括刊登 ) 论文的全部或部分内容 论文的公布 ( 包括刊登 ) 授权苏州大 学学位办办理 研究生签名 : 日期 : 导师签名 : 日期 :

3 中文摘要 中文摘要 [ 目的 ] 为了更好的研究维生素 K 维生素 D 及钙对骨质疏松症的治疗作用, 本实验通过给予绝经期骨折病人不同剂量的维生素 K 4 维生素 D 及钙, 观察服药前后血液中血清钙 血清磷 碱性磷酸酶 总骨钙素 游离型骨钙素 结合型骨钙素的变化情况, 以期探讨三种药物的作用情况 ; 通过观察凝血酶原时间 活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间观察不同剂量维生素 K 4 维生素 D 和钙对凝血系统的影响 [ 方法 ] 选择 2004 年 9 月至 2005 年 4 月骨折住院病人共 59 例, 女性, 已绝经, 年龄 71.26±7.39( x ±SD), 分为 7 组 按析因分析试验设计, 给病人口服维生素 K 4 两个剂量, 分别为 4mg 和 36mg; 维生素 AD 丸两个剂量, 分别为 1 粒和 3 粒, 钙尔奇 D 两个剂量, 分别为无或 1 粒 采用全自动生化仪测定血清钙 血清磷 碱性磷酸酶 ; 采用放射免疫法测定总骨钙素 游离型骨钙素 结合型骨钙素 甲状旁腺激素 降钙素 ; 采用全自动凝血分析仪测定凝血酶原时间 活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间 [ 结果 ] 1 血清钙 血清磷和碱性磷酸酶在骨折后早期均有显著性变化, 钙能提高血清钙的含量, 维生素 K 4 对碱性磷酸酶的变化有影响, 维生素 K 4 维生素 D 和钙对血清磷有联合作用 2 不同剂量间的维生素 K 4 和钙对血清总 BGP 游离型 BGP 结合型 BGP 还是 BGP 结合率变化差异有显著性, 且其值随维生素 K 4 和钙的剂量增大而呈上升趋势 维生素 K 4 维生素 D 和钙对各类骨钙素有交互作用, 提示骨钙素水平变化受维生素 K 4 维生素 D 和钙的影响, 并且联合作用优于单独作用 3 当血清钙 血清磷正常时, 维生素 K 4 维生素 D 和钙对甲状旁腺激素的分泌无直接影响 4 凝血功能正常时, 高剂量维生素 K 4 对凝血系统无影响 5 高剂量维生素 K 4 和高剂量钙联合使用时, 凝血酶时间延长, 提示大剂量的维生素 K 和钙同时使用, 可能会产生抗凝血作用, 而不是促凝血作用 关键词 : 维生素 K 4 维生素 D 钙骨代谢凝血系统作者 : 程璐茜指导老师 : 朱圣陶教授 I

4 英文摘要 Effects of vitamin K 4, vitamin D and calcium on bone metabolism in early period of fracture in postmenopausal women Abstract [Objective]: The purpose of this research is to observe the effect of different dosage of vitamin K 4, vitamin D and calcium on bone metabolism of postmenopausal women with in the beginnings of fracture. Postmenopausal women with fracture received different dosages of vitamin K 4, vitamin D and calcium. The effects on bone metabolism were evaluated by the parameters of serum calcium (Ca), serum phosphorus (P), serum alkaline phosphatase (ALP), serum bone gla protein (BGP), serum parathormone (PTH), and serum calcitionin (CT). The effects on blood coagulation system were evaluated by pro-time prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT) and thrombin time (TT). [Method]: Fifty-nine inpatients with fracture during Sep to Apr.2005, age of 71.26±7.39 ( x ±SD), were assigned to seven groups and received different dosage of vitamin K 4, vitamin D and calcium for 20 days. The Ca, P and ALP were measured by automatic biochemistry analysis machine; BGP, PTH, CT were measured by radio immunoassay. The PT, APTT and TT were measured by automatic blood coagulation analysis machine. [Result]: 1.The Ca, P and ALP have significant change during the early period of bone fracture. The calcium supplement raises the content of Ca. Vitamin K 4 supplement influence the change of ALP. Supplement of vitamin K 4, vitamin D and calcium have interaction with P. 2. Different dosages of vitamin K 4 and calcium have significant difference on BGP total, BGP free, BGP bound and BGP bound /BGP total change. And the value of BGPs is raised with the dose increasing. The interaction exist between vitamin K 4, vitamin D II

5 英文摘要 and calcium on BGPs. It suggests vitamin K 4, vitamin D and calcium influence the BGP and the joint action better than the solitude action. 3. When Ca and P at the normal level, vitamin K 4, vitamin D and calcium have not direct influence on PTH secretion. 4. When PT, APTT and TT at the normal level, high dosage of vitamin K 4 have not influence on blood coagulation system. 5. The TT extend when use the high dose of vitamin K 4 and calcium. It suggests the high dose of vitamin K 4 and calcium might produce anticoagulation, not coagulation. Key Words: vitamin K 4 Vitamin D Calcium Bone metabolism Blood coagulation system Written by:cheng Luxi Supervised by:zhu Shengtao III

6 目录 目录 引 言 1 第一部分不同剂量维生素 K4 维生素 D 和钙对绝经期妇女骨折早期血清钙 磷和碱性磷酸酶的影响 3 第二部分不同剂量维生素 K4 维生素 D 和钙对绝经期妇女骨折早期血清骨钙素的影响 9 第三部分不同剂量维生素 K4 维生素 D 和钙对绝经期妇女骨折早期血清甲状旁腺激素和降钙素的影响 15 第四部分不同剂量维生素 K4 维生素 D 和钙对绝经期妇女骨折早期凝血系统的影响 19 结 论 25 参考文献 26 综述 : 维生素 K 与骨质疏松关系研究的新进展 28 攻读学位期间公开发表的论文 35 中英文缩略词对照表 36 致 谢 37 1

7 引言 引言 根据世界卫生组织的公布, 骨质疏松症定义为一种以骨密度降低和骨组织微 1 细结构发生退变为特征, 骨质脆性增加, 并容易导致骨折的一种疾病 骨质疏松症可分为原发性和继发性, 原发性主要是由于年龄增长, 骨形成和骨吸收的比例下降, 同时体内激素水平变化使破骨细胞活性增高, 造成骨密度下降, 骨细微结构改变, 骨脆性增加, 生物力学强度下降 继发性主要见于某些疾病导致骨代谢异常引发的 原发性骨质疏松症已经成为老龄化社会卫生保健的一个突出问题, 但是至今尚未引起足够的重视 之所以要重视骨质疏松症, 是因为它能引起骨折 最严重的是髋部骨折, 因为其发病率高, 死亡率也高, 由此造成的花费也高 1990 年, 全世界髋部骨折的人数估计为 130 万 ~160 万 由于人们的期望寿命在增加, 发病人数还会增加 预计到 2025 年, 髋部骨折的数量全世界每年将增加到 400 万, 而 1 大部分发生在亚洲 在我国, 约有八千八百多万原发性骨质疏松症患者, 每年医疗费用估计需要一百五十亿人民币 五十岁以上的女性每三位中就有一位遭受由骨质疏松引起的骨折痛苦 针对原发性骨质疏松症的治疗有多种方法, 目前主要集中在药物治疗 激素治疗以及运动治疗 补充适量钙剂和维生素 D 已经成为预防和治疗骨质疏松症的一种常用方法 1975 年,Pettifor 等首次提出维生素 K 参与人体骨代谢的假说, 认为补充维生 2~4 素 K 可促进骨形成, 降低骨分解代谢, 对骨质疏松有积极的预防和治疗作用 维生素 K 影响骨代谢的确切机制还不清楚, 目前认为与下面 3 个方面有关 :1 参与维生素 K 依赖性骨蛋白, 主要是骨钙蛋白的羧化 ;2 调节成骨细胞和破骨细胞的功能 ;3 通过抑制骨吸收激活因子来抑制骨吸收 维生素 K 维生素 D 及钙对骨质疏松均有防治作用, 由于它们作用机制不同, 它们的联合作用成为当前研究的热点 国外学者对此也做了一些动物试验和人体研究 举例如下 : Takee 给雌性 SD 大鼠饲料中补充维生素 K 2 钙和维生素 D,16 个月后实验结果 5 提示联合摄取钙 维生素 K 和维生素 D 能更好的预防由于骨质疏松造成的骨折 Ushiroyama 给 172 名绝经期妇女补充维生素 K 2 和维生素 D 组 实验 24 个月后显 1

8 引言 示联合使用维生素 K 2 及维生素 D 3 能刺激骨形成及骨吸收, 有效增加绝经期妇女的 6 椎骨密度, 同时不破坏受试者的凝血功能 Shiraishi 利用双侧卵巢切除术 (OVX) 建立大鼠骨质疏松模型, 研究维生素 D 和维生素 K 预防骨质疏松的作用 结果表明维生素 D 有明显的抑制骨吸收作用, 没有观察到维生素 K 的影响, 但维生素 K 与维生素 D 同样能维持股骨中段骨质强度的正常水 7 平, 提示维生素 K 通过影响骨骼性质来防止由于卵巢切除所造成的骨骼强度降低 我国关于维生素 K 的实验研究主要局限于体外和动物实验, 还没有人体临床研究的报道, 为了更好的研究维生素 K 维生素 D 及钙对骨质疏松症的治疗作用, 本实验通过给予绝经妇女不同剂量的维生素 K 维生素 D 及钙, 观察服药前后血液中骨代谢指标的变化情况, 以期探讨三种药物的联合作用情况 2

9 第一部分 第一部分不同剂量维生素 K 4 维生素 D 和钙对绝经 期妇女骨折早期血清钙 磷和碱性磷酸酶的影响 血清钙 (Ca) 血清磷(P) 和碱性磷酸酶 (ALP) 是反映骨代谢的三项指标 钙和磷是组成人体骨骼的主要成分, 钙磷代谢对于维持正常的骨代谢有着重要的 8 作用 检测人体血清钙和血清磷, 一方面反映骨代谢情况, 另方面反映这两种物质在肠道吸收以及由肾 肠道排泌的情况 在没有肝脏疾病和阻塞性黄疸时, 9 血清碱性磷酸酶是成骨细胞活动的一个指标, 同时也是骨基质形成的一个指标 碱性磷酸酶最主要的来源是骨和肝脏, 随着年龄的增加而增加, 与骨钙素的变化 10 呈正相关, 与骨矿含量变化呈负相关 我们通过测定这三项指标初步了解维生素 K 4 维生素 D 和钙对骨代谢的影响情况 1 资料与方法 1.1 病例 : 选择 2004 年 9 月至 2005 年 4 月苏州市中医院骨伤科骨折住院病人共 59 例, 女性, 已绝经, 平均年龄 71.3±7.39( x ±SD), 分为 7 组 按析因分析试验设计, 给病人口服维生素 K 4 两个剂量, 分别为 4mg 和 36mg; 维生素 AD 丸两个剂量, 分别为 1 粒和 3 粒, 钙尔奇 D 两个剂量, 分别为无或 1 粒 分组情况见表 1 连 续服用 20 天 各组病例年龄及骨折部位情况见表 2 表 1: 病例分组及给药剂量 组别维生素 K 4 (mg) 维生素 AD * ( 粒 ) 钙尔奇 D ** *** * 每粒维生素 AD 胶丸含维生素 A3000 单位,D 单位 ** 每粒钙尔奇 D 含碳酸钙 1.5g( 可提供元素钙 600 mg), 维生素 D 单位 *** 由于第 7 组服药后发生凝血酶时间超出正常值数倍, 故停止对第八组的实验 3

10 第一部分 表 2: 各组病例年龄及骨折部位情况 组别 例数 年龄 ( x ±SD) 股骨颈骨折 ( 人数 ) 股骨粗隆骨折 ( 人数 ) 其他 ( 人数 ) ± ± ± ± ± ± ± 血样收集 : 分别在开始给药前一天和给药结束当天, 抽取空腹静脉血 1.3 测定指标及方法 : 血清钙 (Ca):RXL 型全自动生化仪, 美国杜邦 血清磷 (P) :RXL 型全自动生化仪, 美国杜邦 碱性磷酸酶 (ALP):RXL 型全自动生化仪, 美国杜邦 1.4 统计方法 : 用 SPSS 统计软件进行给药前后的配对 T 检验,α=0.05; 不同剂量组之间的 T 检验,α=0.05 和 析因分析, α= 结果 2.1 服药前后血清钙 磷和碱性磷酸酶值比较 比较服药前后血清钙 (Ca) 血清磷 (P) 碱性磷酸酶 (ALP) 测定结果可见各组各 项生化指标服药后较服药前差异均有显著性 ( 表 3, 图 1-3) 4

11 第一部分 表 3: 服药前后血生化指标的变化 ( x ±SD) 组别 Ca(mmol/L) P(mmol/L) ALP(u/L) 总 服药前 2.19± ± ±25.93 服药后 2.30±0.07 * 0.99±0.08 * ±24.01 * 服药前 2.14± ± ±24.79 服药后 2.26±0.08 * 1.00±0.10 * ±17.86 * 服药前 2.17± ± ±13.68 服药后 2.28±0.12 * 1.07±0.13 * ±6.89 * 服药前 2.14± ± ±21.28 服药后 2.25±0.06 * 0.94±0.19 * ±21.07 * 服药前 2.27± ± ±17.25 服药后 2.39±0.19 * 1.16±0.16 * ±15.53 * 服药前 2.18± ± ±21.31 服药后 2.34±0.07 * 1.29±0.17 * ±25.10 * 服药前 2.12± ± ±23.87 服药后 2.31±0.09 * 1.25±0.11 * ±29.69 * 服药前 2.19± ± ±19.57 服药后 2.31±0.12 * 1.09±0.18 * ±20.10 * * 与服药前比较,P< 服药前 服药后 2.4 mmol/l 组别 服药前后血清钙 图 1 5

12 第一部分 服药前 服药后 mmol/l 组别 服药前后血清磷 图 服药前 服药后 120 u/l 组别 服药前后碱性磷酸酶 图 服药前后血清钙 磷和碱性磷酸酶差值分析比较各组生化指标的差值, 第七组的 Ca 和第三组比较有显著性差异, 比第三组明显提高 ; 第三组和第五组的 P 和分别与第一组比较有显著性差异, 其中, 第三组的 P 比第一组降低, 第五组的 P 比第一组升高 ; 第六组的 P 和第二组 第五组比较有显著性差异, 第六组的 P 比第二组和第五组均升高 ; 第七组的 P 和第三组比较显著提高, 差异有显著性 ; 第三组的 ALP 和第一组比较显著提高, 差异有 6

13 第一部分 显著性 对各组间治疗前后血生化指标变化的差值进行析因分析, 不同剂量的维 生素 K 4 对 ALP 的变化差异有显著性 (P<0.05), 不同剂量钙对 Ca 的变化差异有显 著性 (P<0.05) 且维生素 K 4 和维生素 D 维生素 K 4 与钙 维生素 D 与钙对 Ca P ALP 的影响未发现存在交互作用, 但维生素 K 4 维生素 D 和钙对 P 的影响存 在交互作用 ( 表 4) 表 4. 服药前后血生化指标变化差值 ( d ±SD) 及 析因试验分析 P 值 组别 Ca(mmol/L) P(mmol/L) ALP(u/L) ± ± ± ± ± ± ± ±0.01 a 22.16±9.15 a ± ± ± ± ±0.15 a 13.44± ± ±0.20 b,d 29.16± ±0.03 c 0.22±0.02 c 22.13±6.98 P vitk * P vitd P Ca * P vitk&vitd P vitk&ca P vitd&ca P vitk&vitd&ca * * 析因分析,P<0.05; ** 析因分析,P<0.001; a 和第一组比较,P<0.05; b 和第二组比较,P<0.05; c 和第三组比较,P<0.05; d 和第五组比较,P< 讨论 正常人血清钙的正常值范为 mmol/L, 血清磷的正常值范围为 mmol/L, 血清碱性磷酸酶的正常值范围为 U/L 8, 本次实验测出血清钙的平均值实验前为 2.19mmol/l, 实验后为 2.31mmol/l, 血清磷实验前为 1.04mmol/l, 实验后为 1.09mmol/l, 血清碱性磷酸酶实验前为 97.51U/L, 实验后为 U/L, 均在正常值范围之内 由表 3 结果显示, 各组内服药后血清 Ca 血清 P 血清 ALP 与服药前相比差异有显著性 早先的动物实验结果也显示, 实验组大鼠 7

14 第一部分 的血清 Ca 血清 P 及血清 ALP 较空白对照组有显著性差异, 其差异结果与本实验 7,11 相一致 骨折后, 由于应激反应, 骨重建速度加快, 导致体内血清钙 血清磷及碱性磷酸酶含量均明显提高, 但还处于正常值范围之内, 并不发生高血钙, 高血磷等情况 析因分析发现 ( 见表 4), 不同剂量的钙对血清钙的变化有显著性影响, 不同剂量维生素 K 4 及维生素 D 对血清钙无显著性变化, 但对血清 ALP 的变化差异有显著性, 同时, 维生素 K 4 和维生素 D 维生素 K 4 与钙 维生素 D 与钙对 Ca P ALP 的影响未发现存在交互作用, 但维生素 K 4 维生素 D 和钙对 P 的影响存在交互作用 钙可促进骨骼的新陈代谢, 促进骨骼的钙化和新骨的形成 当人体缺乏钙元素时, 一方面由于缺少构成骨的原材料而导致骨代谢的骨形成 - 骨溶解平衡向负方向移动 ; 另一方面血清钙浓度降低至阈值将导致甲状旁腺分泌亢进, 增加骨吸收, 使钙由骨组织游离出来进入血液 郭春英等 31 例门诊原发性骨质疏松症和骨量减少患者每日服用 1 片钙尔奇 D 复合剂, 连服 6 个月, 发现治疗后血清磷 碱性磷酸酶和骨钙素都明显高于治疗前, 并能明显提高血清 25 羟基维生素 D 和血清 12 BGP, 血清 Ca 与治疗前无明显改变 但王学迁等的研究显示, 补充钙剂后血 13~14 清 Ca 升高而血清 ALP 明显下降, 血清磷用药前后无变化 林华等的研究则 15 显示血清钙 磷及 ALP 在补充钙剂前后无明显改变 本实验结果显示, 摄入钙剂后, 血清钙含量比未摄入钙剂的显著提高, 可见钙剂能提高血清钙, 导致骨代谢的骨形成 - 骨溶解平衡向正方向移动, 并使甲状旁腺激素分泌减少, 钙由血液向骨组织沉积 有研究表明, 给绝经后骨质疏松患者每日注射 1mg 维生素 K 2, 周发现血中钙磷低值得到改善, 骨量有所增加 不同剂量水平的维生素 K 4 及维生素 D 对机体血清钙含量变化影响不大, 其原因可能为实验时间较短造成的 血清 ALP 变化受维生素 K 4 的影响要大于维生素 D 体外细胞实验也表明, 对 17 加入维生素 K 4 的骨细胞进行培养, 其 ALP 含量显著增加 在本次实验中, 维生素 D 对血清钙 血清磷和碱性磷酸酶无显著性影响, 这与赵淑惠等临床观察结 18 果相同 8

15 第二部分 第二部分不同剂量维生素 K 4 维生素 D 和钙对绝经 期妇女骨折早期血清骨钙素的影响 骨钙素 (BGP) 又称骨钙蛋白 (OC), 主要由成熟的成骨细胞 成牙质细胞和肥大 16 软骨细胞合成分泌的 目前认为骨钙素主要生理功能是维持骨的正常矿化速率, 抑制异常的羟磷灰石结晶形成, 抑制生长软骨的矿化速度 当骨形成和骨吸收耦连时, 骨钙素是反应骨形成的特异指标 通过骨钙素, 能反映成骨细胞的活性和 19 骨的转换水平, 并能反映患者对治疗的反应 一些研究结果发现血清游离型骨钙素是反映机体维生素 K 营养状态的敏感指标, 其变化比总骨钙素变化敏感, 且 20 与骨转换有关 21 骨质疏松及绝经后妇女血浆骨钙素水平多降低 但有报道 22 称绝经后 10 年, 骨钙素水平又升高 我们通过测定不同类型的骨钙素, 了解维生素 K 维生素 D 和钙对骨形成的影响情况 1 资料与方法 1.1 病例 : 同第一部分 1.2 血样收集 : 分别在开始给药前一天和给药结束当天, 抽取空腹静脉血 1.3 测定指标及方法 : 血清骨钙素 (BGP): 放免分析法 (RIA), 试剂盒由中国原子能科学研究院同位素研究所提供, 批内变异 CV% 5.0%, 批间变异 CV% 10.0% 总骨钙素 (BGP total ): 直接测定 游离型骨钙素 (BGP free ): 根据骨钙素与羟基磷灰石结合的性质, 血清中加入羟基磷灰石 (100mg/ml), 进行羟基磷灰石吸附实验, 离心 (2550r/min,10min) 后取上清液,RIA 法测定, 即为游离型骨钙素含量 结合型骨钙素 (BGP bound ):BGP total 与 BGP free 的差值 骨钙素结合率 (%):BGP bound /BGP total 9

16 第二部分 1.4 统计方法 : 用 SPSS 统计软件进行给药前后的配对 T 检验,α=0.05; 不同剂量组之间的 T 检验,α=0.05 和 析因分析, α= 结果 2.1 服药前后血清三种骨钙素水平及骨钙素结合率比较比较服药前后血清三种骨钙素 (BGP) 及骨钙素结合率的测定结果, 第一组的总骨钙素 游离性骨钙素及结合性骨钙素在实验后较实验前有显著性下降 第二组各项指标实验前后无显著性差异 第三组 第四组及第七组各项指标实验后均较实验前有显著性提高 第五组的结合性骨钙素和骨钙素结合率实验前后有显著性差异 ; 第六组总骨钙素和游离性骨钙素在实验前后有显著性差异 ( 表 5, 图 4-7) 表 5 服药前后三种骨钙素的变化 ( x ±SD) 组别总骨钙素 (ng/ml) 游离型骨钙素 (ng/ml) 结合型骨钙素 (ng/ml) 骨钙素结合率 (%) 总 服药前 15.43± ± ± ±3.65 服药后 13.14±2.59 * 9.44±1.84 * 3.71±1.07 * 28.04±4.56 服药前 15.02± ± ± ±4.20 服药后 13.90± ± ± ±4.96 服药前 13.75± ± ± ±4.36 服药后 15.74±2.75 * 10.74±1.21 * 4.99±1.20 * 31.40±3.94 * 服药前 14.06± ± ± ±3.24 服药后 17.51±1.84 * 12.19±1.30 * 5.32±0.97 * 30.30±3.73 * 服药前 15.64± ± ± ±3.88 服药后 16.64± ± ±1.31 * 33.75±8.95 * 服药前 14.66± ± ± ±7.44 服药后 17.33±1.51 * 10.86±1.67 * 6.48±1.71 * 37.25±8.95 服药前 13.00± ± ± ±7.94 服药后 16.35±0.73 * 10.32±0.67 * 6.03±1.25 * 36.69±6.26 * 服药前 14.60± ± ± ±9.51 服药后 15.81±2.66 * 10.68± ±1.47 * 32.34±9.25 * * 与服药前比较,P<

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