Microsoft Word tb 陆春雪
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- 肉 禾
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1 微 生 物 学 通 报 Microbiology China 研 究 报 告 FEB 20, 2012, 39(2): by Institute of Microbiology, CAS 沙 眼 衣 原 体 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 滴 鼻 免 疫 增 强 小 鼠 对 衣 原 体 生 殖 道 感 染 的 保 护 作 用 陆 春 雪 1 吴 移 谋 1* 彭 波 2 李 忠 玉 1 胡 四 海 1 钟 光 明 (1. 南 华 大 学 微 生 物 与 免 疫 学 教 研 室 湖 南 衡 阳 ) (2. 南 华 大 学 肿 瘤 研 究 所 湖 南 衡 阳 ) (3. Department of Microbiology and Immunology, University of Texas Health Science Center at San Antonio, 7703 Floyd Curl Drive, San Antonio, Texas 78229, USA) 3 摘 要 : 目 的 探 讨 不 同 免 疫 途 径 沙 眼 衣 原 体 (Chlamydia trachomatis, Ct) 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 的 免 疫 保 护 效 果, 分 析 其 可 能 的 保 护 机 制, 以 确 定 Pgp3 蛋 白 疫 苗 在 Ct 疫 苗 研 制 中 的 应 用 价 值 方 法 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 经 滴 鼻 或 肌 注 途 径 免 疫 雌 性 Balb/c 小 鼠, 免 疫 60 d 后, 阴 道 接 种 鼠 沙 眼 衣 原 体 (Chlamydia muridarum, Cm) 建 立 生 殖 道 感 染 动 物 模 型, 在 该 模 型 中 评 价 Pgp3 蛋 白 疫 苗 抗 Cm 感 染 的 保 护 效 果, 并 探 讨 其 机 制 结 果 滴 鼻 或 肌 注 免 疫 后, 小 鼠 血 清 及 生 殖 道 中 检 测 到 了 特 异 性 抗 体 ; 小 鼠 脾 淋 巴 细 胞 产 生 IFN-γ IL-17 及 IL-5 水 平 均 明 显 高 于 对 照 组, 且 滴 鼻 免 疫 组 IFN-γ 水 平 升 高 较 肌 注 组 更 显 著 (P<0.05); Pgp3 蛋 白 滴 鼻 免 疫 组 小 鼠 经 Cm 生 殖 道 感 染 后, 阴 道 带 菌 时 间 明 显 缩 短, 输 卵 管 病 理 改 变 轻 而 肌 注 免 疫 组 其 保 护 作 用 不 明 显 结 论 Pgp3 蛋 白 经 滴 鼻 免 疫 可 有 效 诱 导 小 鼠 产 生 明 显 的 抗 Cm 保 护 效 应 其 可 能 的 免 疫 保 护 机 制 与 诱 导 Th1 型 为 主 的 细 胞 免 疫 应 答 及 高 效 价 的 特 异 性 抗 体 有 关, 提 示 Pgp3 蛋 白 疫 苗 具 有 潜 在 的 疫 苗 研 究 与 开 发 价 值 关 键 词 : 沙 眼 衣 原 体, Pgp3, 蛋 白 疫 苗, 免 疫 保 护, Th1 型 免 疫 反 应 Intranasal immunization with secretion protein Pgp3 enhances protective immunity against mice genital Chlamydia muridarum infection LU Chun-Xue 1 WU Yi-Mou 1* PENG Bo 2 LI Zhong-Yu 1 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No ); 湖 南 省 高 校 科 技 创 新 团 队 ( 湘 教 通 [2010]53 号 ) * 通 讯 作 者 :Tel: ; : yimouwu@sina.com 收 稿 日 期 : ; 接 受 日 期 :
2 陆 春 雪 等 : 沙 眼 衣 原 体 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 滴 鼻 免 疫 增 强 小 鼠 对 衣 原 体 生 殖 道 感 染 的 保 护 作 用 227 HU Si-Hai 1 ZHONG Guang-Ming 3 (1. Department of Microbiology and Immunology, University of South China, Hengyang, Hunan , China) (2. Cancer Research Institute, Medical College, University of South China, Hengyang, Hunan , China) (3. Department of Microbiology and Immunology, University of Texas Health Science Center at San Anto-nio, 7703 Floyd Curl Drive, San Antonio, Texas 78229, USA) Abstract: [Objective] To validate the immune protective efficacy of Chlamydia secretion protein Pgp3 and to analyze the potential immune mechanisms related to this protection. [Methods] The prokaryotic recombinant protein Pgp3 was purified and evaluated for its protective efficacy in a genital tract infected mouse model. Groups of BALB/c mice were immunized intranasally or intramuscularly with adjuvants plus Pgp3 protein or PBS and GST control. Humoral and cellular immune responses were evaluated. After Chlamydia muridarum intravaginal challenge, the chlamydia shedding from the lower genital tract and the chlamydia-induced upper genital tract gross pathology and histopathological characterization were also detected. [Results] Adjuvant plus Pgp3 immunization can induce high level of Pgp3 specific antibody as well as IFN-γ, IL-17 and IL-5 cytokine production. More importantly, intranasal immunization compare with intramuscular route induced more Th1-dominant immunity that significantly reduced the shedding of live organisms from the lower genital tract and attenuated inflammatory pathologies in the oviduct tissues. [Conculsion] These observations have demonstrated that secretion protein Pgp3 intranasal immunization can induce protective immunity against chlamydial infection and pathology in mice. Keywords: Chlamydial trachomatis, Pgp3, Protein vaccine, Immune protection, Th1 immune response 衣 原 体 是 专 性 胞 内 寄 生 的 革 兰 阴 性 菌, 根 据 传 染 途 径 和 症 状 不 同 分 为 沙 眼 衣 原 体 鹦 鹉 热 衣 原 体 肺 炎 衣 原 体 等, 其 中 沙 眼 衣 原 体 (Chlamydia trachomatis, Ct) 与 人 类 疾 病 关 系 最 为 密 切 Ct 可 分 为 19 个 血 清 型 及 两 种 传 染 类 型, A B Ba 及 C 型 主 要 侵 入 人 体 眼 结 膜 和 角 膜 引 起 沙 眼 和 包 涵 体 结 膜 炎, 甚 至 致 盲 ; D-K 型 以 及 L1 至 L3 血 清 型 主 要 通 过 性 接 触 传 播, 是 性 病 最 常 见 的 病 原 体 之 一 世 界 卫 生 组 织 (WHO) 最 近 的 一 份 报 告 指 出, 在 全 球 每 年 新 增 的 5 亿 例 性 传 播 疾 病 (STD) 中, 多 万 例 为 Ct 感 染 [1] 流 行 病 学 调 查 结 果 显 示, 由 于 Ct 感 染 存 在 大 量 的 无 症 状 或 微 症 状 患 者, 通 常 不 被 发 现 和 治 疗, 可 持 续 存 在 数 月 至 数 年, 最 终 引 起 盆 腔 炎 不 孕 不 育 等 严 重 并 发 症 [2], 构 成 了 衣 原 体 感 染 的 高 发 病 率 和 沉 重 的 社 会 经 济 负 担, 因 此 对 Ct 感 染 的 预 防 研 究 已 成 为 当 今 国 内 外 研 究 的 热 点 之 一, 其 中 Ct 疫 苗 的 开 发 研 究 便 是 预 防 措 施 中 的 重 点, 遗 憾 的 是 到 目 前 为 止 仍 然 没 有 成 功 的 疫 苗 问 世 Ct 质 粒 编 码 蛋 Pgp3 是 一 种 能 分 泌 到 宿 主 细 胞 胞 浆 的 分 泌 性 蛋 白, 由 264 个 氨 基 酸 编 码, 生 物 信 息 学 分 析 发 现 该 蛋 白 缺 乏 信 号 肽 序 列, 具 有 多 个 亲 水 性 区 域, 提 示 可 能 存 在 多 个 抗 原 表 位 [3] 我 们 的 前 期 研 究 已 证 实 Ct STD 感 染 患 者 的 血 清 中 存 在 高 滴 度 的 抗 分 泌 性 蛋 白 CPAF ( 衣 原
3 228 微 生 物 学 通 报 2012, Vol.39, No.2 体 蛋 白 酶 样 活 性 分 子 ) 和 Pgp3 的 特 异 性 抗 体, 其 血 清 反 应 阳 性 率 分 别 为 94% 和 96% [4] 众 所 周 知, CPAF 已 被 人 们 广 泛 应 用 于 疫 苗 的 研 究, 并 能 诱 导 机 体 产 生 一 定 的 免 疫 保 护 作 用, 而 同 为 分 泌 性 蛋 白 且 具 有 强 免 疫 原 性 的 Pgp3 疫 苗 研 究 较 少, 仅 有 相 关 核 酸 疫 苗 研 究 显 示 Pgp3 DNA 具 有 一 定 的 保 护 作 用 [5], 因 此 本 研 究 采 用 重 组 Pgp3 蛋 白 与 新 型 免 疫 佐 剂 -CpG 寡 脱 氧 核 苷 酸 联 合, 经 滴 鼻 或 肌 注 途 径 免 疫 小 鼠 后, 通 过 建 立 鼠 沙 眼 衣 原 体 (Chlamydia muridarum, Cm) 生 殖 道 感 染 模 型 [6], 检 测 经 Pgp3 蛋 白 免 疫 的 小 鼠 在 受 到 生 殖 道 衣 原 体 感 染 攻 击 后, 其 下 生 殖 道 衣 原 体 清 除 情 况 及 上 生 殖 道 组 织 病 理 学 变 化, 探 讨 Pgp3 蛋 白 亚 单 位 疫 苗 免 疫 保 护 效 果 并 分 析 其 可 能 的 免 疫 保 护 机 制 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 实 验 动 物 : 4 5 周 龄 雌 性 Balb/c 小 鼠 由 美 国 得 克 萨 斯 大 学 圣 安 东 尼 奥 健 康 科 学 中 心 (UTHSCSA) 动 物 部 提 供 和 饲 养 菌 株 及 试 剂 : Ct D 菌 株 基 因 组 DNA 模 板 Cm Nigg 株 及 纯 化 的 Cm EB, 由 UTHSCSA 钟 光 明 实 验 室 保 存 HeLa 细 胞, 购 自 美 国 标 准 菌 株 保 存 中 心 (ATCC, cat#ccl2) HRP 标 记 的 羊 抗 鼠 IgG (H+L) IgG1 IgG2a IgG2b 和 IgG3 均 购 自 JacksonImmuno Research 公 司 ; IFN-γ IL-17 IL-5 等 细 胞 因 子 检 测 试 剂 盒 购 自 R&D 公 司 1.2 方 法 Pgp3 蛋 白 抗 原 的 制 备 : 从 GenBank ( 获 取 D 型 Ct Pgp3 基 因 全 长 序 列, 设 计 引 物, 以 Ct D 型 菌 株 基 因 组 DNA 为 模 板, PCR 法 扩 增 其 全 长 并 克 隆 入 pgex-6p-2 载 体, 转 化 E. coli BL21, IPTG 诱 导 表 达 GST-Pgp3 融 合 蛋 白, 经 凝 血 酶 酶 切 后 进 行 目 的 蛋 白 的 纯 化 浓 缩 和 定 量 检 测 动 物 免 疫 : 雌 性 Balb/c 小 鼠 共 90 只, 随 机 分 为 滴 鼻 组 和 肌 注 组, 每 组 又 再 分 3 小 组, 每 小 组 15 只 将 30 μg 纯 化 的 Pgp3 蛋 白 或 相 同 剂 量 纯 化 的 GST 蛋 白 分 别 与 10 μg CpG 混 匀 后, 经 滴 鼻 免 疫 Balb/c 小 鼠 ; 肌 肉 免 疫 组 剂 量 与 滴 鼻 免 疫 组 一 致, 但 加 用 等 量 油 性 弗 氏 不 完 全 佐 剂 (IFA), 超 声 乳 化 后, 注 射 于 小 鼠 两 侧 臀 部 同 时 滴 鼻 组 和 肌 注 组 均 设 立 PBS 及 GST 对 照 每 只 小 鼠 于 第 0 天 14 天 28 天 各 免 疫 一 次, 共 免 疫 3 次 细 胞 因 子 检 测 : 末 次 免 疫 2 周 后, 每 组 各 取 小 鼠 5 只, 无 菌 条 件 下 分 离 其 脾 淋 巴 细 胞, 用 含 10% FCS 的 RPMI 1640 培 养 液 调 整 细 胞 数 为 个 /ml, 加 置 24 孔 细 胞 培 养 板 中, 每 孔 1 ml, 每 只 小 鼠 的 脾 淋 巴 细 胞 悬 液 设 3 个 组, 每 组 设 2 个 复 孔 ; 其 中 第 一 组 加 入 10 μg Pgp3 抗 原, 第 二 组 加 入 10 μg GST 抗 原, 第 三 组 加 入 PBS 对 照, 37 C 5% CO 2 的 培 养 箱 中 培 养 72 h 后 收 集 上 清, 酶 联 免 疫 吸 附 实 验 (ELISA) 法 定 量 检 测 细 胞 因 子 IFN-γ IL-5 IL-17 的 产 生 水 平 小 鼠 抗 原 特 异 性 抗 体 检 测 : 末 次 免 疫 2 周 后, 每 组 各 取 小 鼠 5 只, 分 别 从 小 鼠 的 尾 静 脉 采 血, ELISA 测 定 Pgp3 免 疫 组 GST 免 疫 组 及 PBS 对 照 组 血 清 总 抗 体 IgG 亚 类 及 生 殖 道 局 部 分 泌 性 IgA 抗 体 水 平 Pgp3 抗 原 以 10 mg/l 包 被 酶 标 板, 4 C 过 夜, 1% BSA 室 温 封 闭 1 h, 加 入 稀 释 好 的 血 清 或 阴 道 稀 释 物, 37 C 孵 育 1 h, 0.05% PBST 洗 涤 3 次 后 分 别 加 入 羊 抗 鼠 总 抗 体 或 IgG1, IgG2a IgG2b IgG3 抗 体 孵 育 1 h, 加 入 底 物 ABTS, 37 C 避 光 反 应 15 min 后, 酶 标 仪 读 取 405 nm 波 长 的 吸 光 值 抗 感 染 实 验 : 小 鼠 末 次 免 疫 一 个 月 后, 于 阴 道 后 穹 窿 处 接 种 IFU 的 Cm, 感 染 后 每 间 隔 3 5 d 用 阴 道 拭 子 取 宫 颈 分 泌 物 于 500 μl SPG
![研 究 较 少, 仅 有 相 关 核 酸 疫 苗 研 究 显 示 Pgp3 DNA 具 有 一 定 的 保 护 作 用 [5], 因 此 本 研 究 采 用 重 组 Pgp3 蛋 白 与 新 型 免 疫 佐 剂 -CpG 寡 脱 氧 核 苷 酸 联 合, 经 滴 鼻 或 肌 注 途 径 免 疫 小 鼠 后, 通 过 建 立 鼠 沙 眼 衣 原 体 (Chlamydia muridarum,](/docs-images/43/23162710/images/page_3.jpg "Cm) 生 殖 道 感 染 模 型 [6], 检 测 经 Pgp3 蛋 白 免 疫 的 小 鼠 在 受 到 生 殖 道 衣 原 体 感 染 攻 击 后, 其 下 生 殖 道 衣 原 体 清 除 情 况 及 上 生 殖 道 组 织 病 理 学 变 化, 探 讨 Pgp3 蛋 白 亚 单 位 疫 苗 免 疫 保 护 效 果 并 分 析 其 可 能 的 免 疫 保 护 机 制 1 材 料 与 方 法")
4 陆 春 雪 等 : 沙 眼 衣 原 体 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 滴 鼻 免 疫 增 强 小 鼠 对 衣 原 体 生 殖 道 感 染 的 保 护 作 用 229 缓 冲 液 中, 然 后 以 1:5 进 行 梯 度 稀 释, 将 稀 释 的 棉 签 拭 子 标 本 接 种 到 培 养 于 24 孔 培 养 板 盖 玻 片 上 的 HeLa 单 层 细 胞, 37 C 继 续 培 养 24 h; 然 后 用 2% 多 聚 甲 醛 固 定 30 min, 2% 皂 苷 处 理 1 h 使 其 通 透 性 增 加, 洗 涤 和 封 闭 后, 用 赫 斯 特 ( 蓝 色 ) 标 记 DNA, 兔 抗 Cm 一 抗 及 带 Cy2 标 记 的 羊 抗 兔 IgG 二 抗 ( 绿 色 ) 进 行 免 疫 荧 光 检 测 在 荧 光 显 微 镜 下 计 数 获 得 的 Cm 包 涵 体 (IFU) 数 目, 每 个 盖 玻 片 随 机 选 取 5 个 视 野 计 数 平 均 值 由 棉 签 拭 子 标 本 不 同 的 稀 释 浓 度 和 重 复 数 计 算 获 得 每 个 棉 签 标 本 的 总 IFUs 数 值, 先 进 行 以 10 为 底 的 对 数 (Log10) 转 换, 再 计 算 每 个 组 在 每 个 时 间 点 的 Log10 IFUs 的 均 值 和 标 准 差 感 染 60 d 后 处 死 小 鼠, 分 离 生 殖 道 组 织 10% 的 中 性 甲 醛 固 定, 石 蜡 包 埋 后 纵 向 切 片 (5 μm/ 张 ) H&E 染 色, 双 盲 法 给 子 宫 角 及 输 卵 管 的 炎 症 反 应 和 水 肿 程 度 评 分 [6,14] 子 宫 角 和 输 卵 管 水 肿 的 评 分 标 准 是 : 0, 无 明 显 水 肿 ; 1, 有 1 处 轻 微 水 肿 ; 2, 有 2 3 处 水 肿 ; 3, 有 3 处 以 上 水 肿 ; 4, 显 著 的 成 片 的 水 肿 炎 性 细 胞 浸 润 的 评 分 标 准 是 ( 慢 性 感 染 阶 段, 主 要 观 察 单 核 细 胞 浸 润 ): 0, 无 明 显 浸 润 ; 1, 有 1 处 浸 润 ; 2, 有 2 4 处 浸 润 ; 3, 有 4 处 以 上 浸 润 ; 4, 显 著 的 成 片 的 浸 润 依 此 标 准 分 别 对 每 只 小 鼠 进 行 评 分, 再 计 算 每 个 组 的 均 值 和 标 准 差 统 计 学 分 析 : 用 方 差 分 析 比 较 各 组 间 IFU 和 细 胞 因 子 水 平 的 差 异, 用 t 检 验 (Two-tailed Student s t test) 做 两 两 比 较 病 理 评 分 结 果 及 IgG2a/IgG1 比 值 分 析, 用 Fisher s 精 确 概 率 法 比 较 两 组 间 的 疾 病 发 生 率 P<0.05 为 差 异 有 显 著 性 2 结 果 2.1 Ppg3 蛋 白 免 疫 可 提 高 机 体 特 异 性 细 胞 免 疫 应 答 反 应 滴 鼻 或 肌 注 免 疫 小 鼠 3 次 后, 取 各 组 小 鼠 脾 细 胞, 体 外 用 Pgp3 蛋 白 刺 激, 测 定 脾 细 胞 上 清 细 胞 因 子 水 平 结 果 显 示 ( 图 1), 不 论 是 滴 鼻 还 是 肌 注 免 疫 Pgp3, 小 鼠 脾 细 胞 产 生 的 IFN-γ (Th1 型 CD4 + T 细 胞 产 生 ) IL-5 (Th2 型 T 细 胞 产 生 ) 和 IL-17 (Th17 型 T 细 胞 产 生 ) 水 平 均 明 显 高 于 相 应 的 PBS 和 GST 对 照 组 但 用 无 关 蛋 白 GST 刺 激 时, 各 免 疫 组 细 胞 因 子 水 平 与 对 照 组 无 明 显 变 化 进 一 步 分 析 发 现 Pgp3 滴 鼻 免 疫 组 ( ±516.2 ng/l) 较 肌 注 免 疫 组 其 IFN-γ ( ±750.3 ng/l) 水 平 明 显 升 高, 而 IL-17 水 平 无 明 显 差 异, IL-5 (210.7 ±79.7 ng/l) 水 平 则 较 肌 注 免 疫 组 (510.7±65.6 ng/l) 明 显 降 低, 以 上 结 果 表 明 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 诱 导 更 强 的 特 异 性 Th1 型 细 胞 免 疫 应 答 2.2 Pgp3 蛋 白 免 疫 可 提 高 机 体 特 异 性 体 液 免 疫 应 答 反 应 滴 鼻 或 肌 注 免 疫 小 鼠 3 次 后, 取 小 鼠 尾 静 脉 血, ELISA 法 检 测 小 鼠 血 清 中 特 异 性 抗 体 的 滴 度 和 IgG 抗 体 亚 型 结 果 显 示 ( 图 2A B C), Pgp3 蛋 白 免 疫 组 血 清 各 类 抗 体 水 平 均 明 显 高 于 对 照 组 (P<0.01), 其 中 滴 鼻 免 疫 IgG2a/IgG1 比 值 大 于 1 (3.43±0.32), 肌 注 免 疫 比 值 小 于 1 (0.71±0.26), 两 组 比 值 间 有 显 著 差 异 (P<0.01) 该 比 值 进 一 步 说 明 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 诱 导 Th1 型 而 肌 注 主 要 诱 导 Th2 型 免 疫 反 应 各 接 种 组 生 殖 道 冲 洗 液 分 泌 型 IgA 检 测 结 果 见 图 2D E, Pgp3 蛋 白 免 疫 组 IgA 抗 体 水 平 均 高 于 对 照 组 (P<0.05), 且 滴 鼻 免 疫 (0.48±0.03) 较 肌 注 (0.17±0.04) 升 高 更 为 显 著, 表 明 Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 有 效 诱 导 局 部 特 异 性 体 液 免 疫 应 答 2.3 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 加 快 机 体 对 鼠 沙 眼 衣 原 体 下 生 殖 道 感 染 的 清 除 各 组 小 鼠 免 疫 30 d 后, 通 过 生 殖 道 感 染 Cm 建 立 鼠 沙 眼 衣 原 体 感 染 模 型 并 监 测 机 体 内 衣 原
5 230 微 生 物 学 通 报 2012, Vol.39, No.2 体 的 清 除 情 况 结 果 显 示 Pgp3 滴 鼻 免 疫 组 ( 图 3A C), 感 染 15 d 后, 生 殖 道 带 菌 量 仅 为 1.14±0.51, 感 染 率 为 40%, 而 同 期 PBS 及 GST 滴 鼻 对 照 组 生 殖 道 带 菌 量 大 于 4.23±0.68, 感 染 率 为 100%, 其 差 异 有 显 著 性 (P<0.05); 滴 鼻 组 所 有 小 鼠 于 感 染 后 21 d 再 无 衣 原 体 检 出, 而 对 照 组 推 迟 到 感 染 后 30 d Pgp3 肌 注 免 疫 组 虽 于 感 染 后 d 衣 原 体 检 出 量 和 检 出 率 较 对 照 组 明 显 减 少, 但 完 全 清 除 时 间 推 迟 到 感 染 后 27 d, 与 对 照 组 无 明 显 差 异 ( 图 3B D), 这 表 明 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 较 肌 肉 免 疫 能 更 好 地 加 快 机 体 对 Cm 下 生 殖 道 感 染 的 清 除 图 1 Pgp3 蛋 白 免 疫 对 细 胞 因 子 产 生 的 影 响 Fig. 1 Pgp3 protein vaccination induces robust cytokine production 注 : *: Pgp3 滴 鼻 或 肌 注 免 疫 诱 导 产 生 的 细 胞 因 子 水 平 与 对 照 组 比 较 有 显 著 性 差 异 (P<0.05), 且 Pgp3 滴 鼻 免 疫 IFN-γ 产 生 显 著 高 于 肌 注 组, IL-5 产 生 则 显 著 低 于 肌 注 组 (P<0.05). Note: *: Significant differences in cytokine secretion between Pgp3 immunization and PBS or GST control immunization (P<0.05, student s t test). In addition, i.n. Pgp3 immunization can induce significantly high IFN-γ but low IL-5 product than i.m. immunization (P<0.05, student s t test).
6 陆 春 雪 等 : 沙 眼 衣 原 体 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 滴 鼻 免 疫 增 强 小 鼠 对 衣 原 体 生 殖 道 感 染 的 保 护 作 用 231 图 2 Pgp3 蛋 白 免 疫 对 体 液 免 疫 的 影 响 Fig. 2 Pgp3 protein vaccination induces robust humoral immune responses 注 : A B: 血 清 中 抗 -Pgp3 IgG 总 抗 体 及 各 亚 型 的 检 测 ; C: Pgp3 滴 鼻 和 肌 注 组 IgG2a/IgG1 的 比 值 比 较, **: P<0.01; D E: 黏 膜 局 部 分 泌 型 IgA 的 检 测. Note: A, B: Systemic anti-pgp3 Ab responses after immunization. C: The ratio of Pgp3-specific IgG2a/IgG1. **: P < 0.1, compared with i.n. versus i.m. Pgp3 vaccinated mice. D, E: Mucosal anti-pgp3 IgA responses after immunization. 2.4 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 减 轻 衣 原 体 感 染 引 起 的 生 殖 道 病 理 反 应 小 鼠 Cm 生 殖 道 感 染 后 第 60 天 处 死, 分 离 生 殖 道 进 行 肉 眼 观 察 及 病 理 学 检 测 肉 眼 观 察 可 见, CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 组 小 鼠 输 卵 管 积 水 (Hydrosalpinx) 的 发 生 率 为 20%, 且 仅 见 于 单 侧 发 病 ; 而 其 它 各 组 感 染 小 鼠 均 出 现 明 显 的 单 侧 或 双 侧 输 卵 管 水 肿, 发 生 率 在 70% 以 上 ( 图 4A, 表 1) 病 理 学 检 测 ( 图 4B C) 证 实 各 组 小 鼠 子 宫 角 (Uterine Horn) 局 部 水 肿 及 炎 症 反 应 均 不 典 型, 且 各 组 间 无 显 著 性 差 异 ; 但 输 卵 管 (Oviduct) 的 病 变 程 度 不 一, 对 照 组 可 见 输 卵 管 管 腔 扩 大, 大 量 淋 巴 细 胞 浆 细 胞 浸 润, CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 组 小 鼠 输 卵 管 病 变 轻, 水 肿 及 炎 性 细 胞 浸 润 较 对 照 组 有 显 著 差 异 (P<0.05), 说 明 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 减 轻 Cm 感 染 引 起 的 上 生 殖 道 并 发 症
7 232 微 生 物 学 通 报 2012, Vol.39, No.2 图 3 Pgp3 蛋 白 免 疫 对 衣 原 体 清 除 率 的 影 响 Fig. 3 Intranasal CpG+Pgp3 vaccination enhances the resolution of a genital challenge 注 : 小 鼠 阴 道 脱 落 上 皮 细 胞 衣 原 体 包 涵 体 形 成 单 位 均 转 换 为 Log10. A B: 脱 落 细 胞 中 衣 原 体 量 的 比 较 ; C D: 脱 落 细 胞 衣 原 体 检 出 阳 性 的 小 鼠 的 比 率. Note: The IFU (Chlamydial inclusion forming units) from each swab was converted into Log 10. A, B: Numbers of Log10 IFUs recovered from vaginal swabs at the indicated days as shown along the X-axis. C, D: Percentage of animals shedding Chlamydia after genital challenge. 免 疫 途 径 Route 滴 鼻 免 疫 I.N. 肌 肉 免 疫 I.M. 表 1 肉 眼 观 察 小 鼠 输 卵 管 积 水 的 发 生 率 Table 1 Incidence of oviduct hydrosalpinx 小 鼠 组 别 小 鼠 数 量 双 侧 发 病 率 单 侧 发 病 率 总 发 病 率 Group No. Bilateral Unilateral Total PBS 10 4/10 (40%) 4/10 (40%) 8/10 (80%) CpG+GST 10 5/10 (50%) 4/10 (40%) 9/10 (90%) CpG+ Pgp3 10 0/10 (0%)* 2/10 (20%) 2/10 (20%)* PBS 10 5/10 (50%) 4/10 (40%) 9/10 (90%) CpG+IFA+GST 10 5/10 (50%) 4/10 (40%) 9/10 (90%) CpG+IFA+Pgp3 10 4/10 (40%) 3/10 (30%) 7/10 (70%) 注 : *: Pgp3 蛋 白 滴 鼻 免 疫 组 小 鼠 阴 道 感 染 后, 输 卵 管 积 水 的 总 发 病 率 和 双 侧 发 病 率 较 对 照 组 明 显 降 低 (P<0.05), 但 肌 肉 免 疫 组 与 对 照 组 比 较 无 差 异. Note: *: When the incidence of oviduct hydrosalpinx was compared between Pgp3 immunized group and control group (Using Fisher s Exact Test), the i.n. Pgp3 vaccinated mice had a statistically significantly lower probability of developing hydrosalpinx follow C. muridium infection (P<0.05).
8 陆春雪等: 沙眼衣原体分泌性蛋白 Pgp3 滴鼻免疫增强小鼠对衣原体生殖道感染的保护作用 233
9 234 微 生 物 学 通 报 2012, Vol.39, No.2 图 4 Pgp3 蛋 白 免 疫 对 生 殖 道 病 理 反 应 的 影 响 Fig. 4 Intranasal CpG+Pgp3 vaccination reduces the development of oviduct pathology 注 : A: 6 组 小 鼠 生 殖 道 标 本 的 肉 眼 观 察 ; B: 病 理 学 检 测 : a f 示 子 宫 颈, g l 示 输 卵 管, DI 表 示 水 肿, IN 表 示 炎 症 ; C: 各 组 小 鼠 子 宫 颈 和 输 卵 管 炎 症 水 肿 病 理 评 分 的 比 较. Note: A: Representative images of the gross appearance of genital tract tissues from each of the 6 groups of mice as listed on the left of the figure. B: The genial tract tissues were examined under microscope after H&E staining, a f show uterine horns, g l show oviducts. DI-Dilation, IN-Inflamation. C: Inflammation and dilation of both uterine horns and oviduct were semiquantitatively scored under microscope and the scores were used to calculate the means and standard errors for each group as shown along the Y-axis. 3 讨 论 Ct 感 染 目 前 仍 缺 乏 有 效 疫 苗 Ct 主 要 外 膜 蛋 白 (MOMP) 是 衣 原 体 外 膜 的 主 要 成 分, 占 整 个 外 膜 成 分 的 50% 60%, 从 20 世 纪 80 年 代 以 来, MOMP 被 认 为 是 最 有 潜 力 的 Ct 疫 苗 候 选 者, 广 泛 用 于 疫 苗 研 究 但 重 组 MOMP MOMP 合 成 肽 MOMP DNA 疫 苗 以 及 被 动 免 疫 MOMP 单 克 隆 抗 体 等 均 仅 能 提 供 部 分 保 护 作 用, 其 原 因 与 衣 原 体 血 清 型 多 抗 原 构 象 复 杂 且 易 变 异 等 因 素 有 关 [7], Batteiger 等 研 究 证 实 MOMP 上 的 B 细 胞 表 位 能 刺 激 机 体 产 生 中 和 抗 体, 但 针 对 这 些 表 位 的 中 和 抗 体 不 能 有 效 中 和 其 它 型 别 的 Ct 感 染, 且 同 一 型 别 的 B 表 位, 由 于 大 多 存 在 于 可 变 区, 在 免 疫 选 择 的 压 力 下, 可 变 区 常 发 生 突 变 导 致 Ct 对 体 液 免 疫 的 逃 逸 [8] 其 它 衣 原 体 膜 结 构 蛋 白 如 : 热 休 克 蛋 白 (HSP60) 富 含 半 胱 氨 酸 特 异 性 膜 蛋 白 (OmcB) 多 形 态 性 外 膜 蛋 白 (pmpd) 包 涵 体 膜 蛋 白 A(IncA) 等 由 于 各 种 原 因, 其 保 护 作 用 也 都 不 尽 人 意 [9 11] 因 此 发 现 新 的 有 效 抗 Ct 的 疫 苗 分 子 和 发 展 新 的 疫 苗 策 略 是 必 要 的 Ct 分 泌 性 蛋 白 是 由 Ct 基 因 编 码 并 分 泌 到 宿 主 细 胞 胞 浆 中 的 活 性 蛋 白, 在 衣 原 体 的 致 病 过 程 中 发 挥 重 要 作 用, 如 分 泌 性 蛋 白 CPAF 能 降 解 MHC 转 录 因 子 RFX25 和 USF21 而 逃 避 免 疫 系 统 ; CPAF 亦 能 降 解 角 蛋 白 -8, 与 包 涵 体 在 细 胞 内 扩
10 陆 春 雪 等 : 沙 眼 衣 原 体 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 滴 鼻 免 疫 增 强 小 鼠 对 衣 原 体 生 殖 道 感 染 的 保 护 作 用 235 展 及 细 菌 胞 外 基 质 中 传 播 有 关 [12 13] Murthy 等 尝 试 用 分 泌 性 蛋 白 CPAF 作 为 疫 苗 候 选 抗 原, 惊 喜 的 发 现 CPAF 可 诱 导 较 强 的 保 护 性 免 疫 应 答, 这 可 能 与 分 泌 性 蛋 白 更 易 被 抗 原 提 呈 细 胞 摄 取 加 工 提 呈 有 关, CPAF 在 Ct 各 型 间 有 较 高 同 源 性 且 不 易 变 异 [14] 尽 管 CPAF 免 疫 仍 不 能 从 根 本 上 清 除 衣 原 体 感 染, 但 提 示 人 们 不 再 把 眼 光 局 限 于 含 量 丰 富 的 膜 蛋 白 Pgp3 是 继 CPAF 之 后 发 现 并 鉴 定 的 第 二 种 衣 原 体 分 泌 蛋 白 [3], 本 课 题 组 前 期 研 究 发 现 Ct 患 者 血 清 中 存 在 高 滴 度 特 异 性 Pgp3 抗 体 [4], 其 反 应 率 和 反 应 强 度 均 高 于 经 典 的 免 疫 优 势 抗 原 MOMP 和 HSP60, 与 CPAF 基 本 相 似, 提 示 Pgp3 可 能 为 衣 原 体 感 染 提 供 新 的 潜 在 的 靶 抗 原 免 疫 途 径 是 影 响 蛋 白 疫 苗 免 疫 效 果 的 重 要 因 素 基 于 黏 膜 淋 巴 归 巢 的 理 论, 机 体 各 部 分 的 黏 膜 组 织 可 作 为 一 个 完 整 的 免 疫 系 统, 即 当 局 部 黏 膜 受 到 抗 原 刺 激 时, 其 刺 激 作 用 可 引 起 机 体 整 个 黏 膜 系 统 的 免 疫 应 答 效 应 沙 眼 衣 原 体 主 要 通 过 泌 尿 生 殖 道 黏 膜 感 染 人 而 致 病, 因 此 黏 膜 免 疫 是 研 究 沙 眼 衣 原 体 各 种 蛋 白 疫 苗 免 疫 接 种 的 重 要 途 径 [15] 另 外 肌 肉 免 疫 因 其 临 床 依 从 性 好, 对 疫 苗 的 摄 取 率 高, 且 蛋 白 抗 原 经 与 油 性 佐 剂 乳 化 后, 在 局 部 持 续 缓 慢 释 放, 能 延 长 抗 原 与 免 疫 细 胞 的 接 触 时 间, 增 强 抗 原 的 免 疫 原 性, 但 蛋 白 抗 原 与 油 性 佐 剂 乳 化 后 不 能 再 用 于 滴 鼻 免 疫 因 此, 为 增 强 衣 原 体 蛋 白 疫 苗 免 疫 原 性, 充 分 激 活 泌 尿 生 殖 道 黏 膜 免 疫 系 统, 本 研 究 采 用 滴 鼻 和 肌 注 两 种 途 径 进 行 Pgp3 蛋 白 的 免 疫 接 种, 为 全 面 评 估 Pgp3 作 为 Ct 候 选 疫 苗 提 供 实 验 依 据 抗 Ct 感 染 的 细 胞 免 疫 主 要 依 赖 于 CD4 + Th1 型 细 胞 反 应, 由 CD4 + Th1 细 胞 及 Th1 型 细 胞 因 子 IFN-γ 等 在 清 除 衣 原 体 感 染 中 起 着 极 其 重 要 的 作 用 [16 17] 本 实 验 采 用 ELISA 法 检 测 实 验 组 与 对 照 组 的 细 胞 因 子 水 平, 结 果 发 现 末 次 免 疫 后 2 周, 两 种 途 径 免 疫 的 小 鼠 脾 细 胞 在 体 外 再 次 受 Pgp3 抗 原 刺 激 时 均 能 产 生 显 著 高 于 对 照 组 的 IFN-γ (Th1 型 ) IL-5 (Th2 型 ) 和 IL-17 (Th17 型 ) 细 胞 因 子 水 平 滴 鼻 组 相 对 于 肌 注 组 而 言 产 生 更 高 水 平 IFN-γ 和 较 低 水 平 的 IL-5, 说 明 CpG+Pgp3 滴 鼻 免 疫 可 优 势 诱 导 产 生 CD4 + Th1 型 细 胞 免 疫 反 应, 血 清 IgG 抗 体 亚 型 分 析 显 示 滴 鼻 免 疫 IgG2a/IgG1 比 值 明 显 高 于 对 照 组, 进 一 步 说 明 Pgp3 滴 鼻 免 疫 能 增 强 Th1 型 细 胞 免 疫 应 答 Ct 泌 尿 生 殖 道 感 染 未 经 及 时 治 疗 可 并 发 输 卵 管 炎 和 输 卵 管 积 水, 导 致 输 卵 管 阻 塞 和 随 后 的 不 孕 症 [18], 因 此 是 否 能 预 防 衣 原 体 感 染 后 输 卵 管 的 病 变 是 判 断 疫 苗 是 否 有 效 的 重 要 指 标 本 研 究 中, Pgp3 滴 鼻 免 疫 能 有 效 降 低 Cm 阴 道 接 种 后 在 下 生 殖 道 的 定 殖 量, 缩 短 Cm 感 染 的 自 然 排 菌 时 间 ; 同 时 使 Cm 上 行 感 染 受 限, 输 卵 管 水 肿 减 轻, 炎 性 细 胞 浸 润 减 少, 输 卵 管 积 水 发 生 率 降 低 但 Pgp3 肌 肉 免 疫 的 保 护 效 果 却 不 理 想, 仅 在 感 染 后 期 下 生 殖 道 的 定 殖 量 有 减 少, 输 卵 管 炎 症 及 积 水 程 度 与 对 照 组 无 差 异 因 此 选 择 有 效 的 佐 剂 优 化 免 疫 方 案 并 加 以 组 合 以 期 获 得 更 高 水 平 的 免 疫 保 护 作 用 是 必 要 的 综 上 所 述, 本 研 究 用 Ct 分 泌 性 蛋 白 Pgp3 经 滴 鼻 或 肌 注 免 疫 小 鼠 后 可 成 功 诱 导 小 鼠 产 生 强 烈 的 体 液 及 细 胞 免 疫 应 答, 其 中 滴 鼻 免 疫 可 优 势 诱 导 Th1 型 免 疫 反 应, 并 在 小 鼠 生 殖 道 感 染 模 型 中 获 得 了 高 效 的 免 疫 保 护 作 用, 这 为 对 Pgp3 蛋 白 疫 苗 做 更 深 入 的 实 验 研 究 及 其 临 床 应 用 奠 定 了 基 础 致 谢 : 本 工 作 在 美 国 得 克 萨 斯 大 学 圣 安 东 尼 奥 健 康 科 学 中 心 微 生 物 学 和 免 疫 学 系 Dr. Zhong 实 验 室 完 成, 特 此 感 谢 参 考 文 献 [1] Brunham RC, Rey-Ladino J. Immunology of
![CPAF 之 后 发 现 并 鉴 定 的 第 二 种 衣 原 体 分 泌 蛋 白 [3], 本 课 题 组 前 期 研 究 发 现 Ct 患 者 血 清 中 存 在 高 滴 度 特 异 性 Pgp3 抗 体 [4], 其 反 应 率 和 反 应 强 度 均 高 于 经 典 的 免 疫 优 势 抗 原 MOMP 和 HSP60, 与 CPAF 基 本 相 似, 提 示 Pgp3 可 能 为 衣 原](/docs-images/43/23162710/images/page_10.jpg "体 感 染 提 供 新 的 潜 在 的 靶 抗 原 免 疫 途 径 是 影 响 蛋 白 疫 苗 免 疫 效 果 的 重 要 因 素 基 于 黏 膜 淋 巴 归 巢 的 理 论, 机 体 各 部 分 的 黏 膜 组 织 可 作 为 一 个 完 整 的 免 疫 系 统, 即 当 局 部 黏 膜 受 到 抗 原 刺 激 时, 其 刺 激 作 用 可 引 起 机 体 整 个 黏 膜 系 统 的 免 疫")
11 236 微 生 物 学 通 报 2012, Vol.39, No.2 Chlamydia infection: implications for a Chlamydia trachomatis vaccine[j]. Nature Reviews Immunology, 2005, 5(2): [2] Smith J S, Muñoz N, Herrero R, et al. Evidence for Chlamydia trachomatis as a human papillomavirus cofactor in the etiology of invasive cervical cancer in Brazil and the Philippines[J]. Journal of Infectious Diseases, 2002, 185(3): [3] Li ZY, Chen D, Zhong YM, et al. The chlamydial plasmid-encoded protein pgp3 is secreted into the cytosol of Chlamydia-infected cells[j]. Infection and Immunity, 2008, 76(8): [4] Wang J, Zhang YQ, Lu CX, et al. A genome-wide profiling of the humoral immune response to Chlamydia trachomatis infection reveals vaccine candidate antigens expressed in humans[j]. The Journal of Immunology, 2010, 185(3): [5] Donati M, Sambri V, Comanducci M, et al. DNA immunization with pgp3 gene of Chlamydia trachomatis inhibits the spread of chlamydial infection from the lower to the upper genital tract in C3H/HeN mice[j]. Vaccine, 2003, 21(11/12): [6] 陈 丽 丽, 吴 移 谋, 周 洲, 等. MyD88 在 鼠 衣 原 体 生 殖 道 感 染 过 程 中 的 作 用 [J]. 微 生 物 学 通 报, 2010, 37(6): [7] Kari L, Whitmire WM, Crane DD, et al. Chlamydia trachomatis native major outer membrane protein induces partial protection in nonhuman primates: implication for a trachoma transmission-blocking vaccine[j]. The Journal of Immunology, 2009, 182(12): [8] 王 乐 丹. 沙 眼 衣 原 体 主 要 外 膜 蛋 白 抗 原 表 位 的 研 究 进 展 [J]. 国 外 医 学 预 防 诊 断 治 疗 用 生 物 制 品 分 册, 2005, 28(5): [9] 王 洁, 张 颖 骞, 钟 光 明, 等. 沙 眼 衣 原 体 OmcBc 基 因 的 克 隆 表 达 与 抗 原 性 研 究 [J]. 南 方 医 科 大 学 学 报, 2010, 30(7): [10] Gomes JP, Nunes A, Bruno WJ, et al. Polymorphisms in the nine polymorphic membrane proteins of Chlamydia trachomatis across all serovars: evi- dence for serovar Da recombination and correlation with tissue tropism[j]. Journal of Bacteriology, 2006, 188(1): [11] Suchland RJ, Jeffrey BM, Xia MS, et al. Identification of concomitant infection with Chlamydia trachomatis IncA-negative mutant and wild-type strains by genomic, transcriptional, and biological characterizations[j]. Infection and Immunity, 2008, 76(12): [12] Zhong GM, Fan PY, Ji HZ, et al. Identification of a chlamydial protease-like activity factor responsible for the degradation of host transcription factors[j]. Journal of Experimental Medicine, 2001, 193(8): [13] Dong F, Su H, Huang YQ, et al. Cleavage of host keratin 8 by a Chlamydia-secreted protease[j]. Infection and Immunity, 2004, 72(7): [14] Murthy AK, Li WD, Guentzel MN, et al. Vaccination with the defined chlamydial secreted protein CPAF induces robust protection against female infertility following repeated genital chlamydial challenge[j]. Vaccine, 2011, 29(14): [15] Ralli-Jain P, Tifrea D, Cheng CM, et al. Enhancement of the protective efficacy of a Chlamydia trachomatis recombinant vaccine by combining systemic and mucosal routes for immunization[j]. Vaccine, 2010, 28(48): [16] Cunningham KA, Carey AJ, Timms P, et al. CD4 + T cells reduce the tissue burden of Chlamydia muridarum in male BALB/c mice[j]. Vaccine, 2010, 28(31): [17] Yu H, Jiang XZ, Shen CX, et al. Chlamydia muridarum T-cell antigens formulated with the adjuvant DDA/TDB induce immunity against infection that correlates with a high frequency of gamma interferon (IFN-γ)/tumor necrosis factor alpha and IFN-γ/interleukin-17 double-positive CD4+ T cells[j]. Infection and Immunity, 2010, 78(5): [18] Sharma M, Sethi S, Daftari S, et al. Evidence of chlamydial infection in infertile women with fallopian tube obstruction[j]. Indian Journal of Pathology and Microbiology, 2003, 46(4):
![Journal of Infectious Diseases, 2002, 185(3): 324 331. [3] Li ZY, Chen D, Zhong YM, et al. The chlamydial plasmid-encoded protein pgp3 is secreted into the cytosol of Chlamydia-infected cells[j].](/docs-images/43/23162710/images/page_11.jpg "Infection and Immunity, 2008, 76(8): 3415 3428. [4] Wang J, Zhang YQ, Lu CX, et al.")
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EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
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210 毛 果 芸 香 碱 联 合 拉 坦 前 列 素 治 疗 原 发 性 急 性 闭 角 型 青 光 眼 的 疗 效 观 察 符 元 党 1, 郑 振 优 2, 林 再 雄 2, 周 吉 良 1. 昌 江 黎 族 自 治 县 中 西 医 结 合 医 院, 海 南 昌 江 572700 2. 海 南 医 学 院 附 属 医 院 眼 科, 海 南 海 口 570100 1 摘 要 : 目 的 探 讨
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370 临 床 与 病 理 杂 志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊 酸 雌 二 醇 片 联
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第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
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2014年1月A 1期 排版.FIT)
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2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
: 307, [], [2],,,, [3] (Response Surface Methodology, RSA),,, [4,5] Design-Expert 6.0,,,, [6] VPJ33 ph 3,, ph, OD, Design-Expert 6.0 Box-Behnken, VPJ3
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![240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通](/thumbs/42/22943812.jpg "240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通")
2011 年 Journal of Capital Medical University 4月 第2 期 Apr 2011 Vol 32 No 2 基础研究 doi: 10 3969 / j issn 1006-7795 2011 02 015 人脑识别不同性别名字反应时的差异研究 高迎霄 陈昭燃 * 张明霞 ( 首都医科大学神经生物系高级脑功能中心) 摘要 目的 探讨男女对不同性别名字认知加工速度是否存在差异
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* 35 4 2011 7 Vol. 35 No. 4 July 2011 3 Population Research 1950 ~ 1981 The Estimation Method and Its Application of Cohort Age - specific Fertility Rates Wang Gongzhou Hu Yaoling Abstract Based on the
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绎 1. 110032 2. 100029 3. 100045 4. 300193 5. 116023 6. 510120 7. 110004 8. 250011 9. 210029 10. 200032 11. 510405 12. 210008 13. 201102 14. 300074 13 3 1~2 doi: 10.11842/wst.2013.05.039 R725.6 A World
instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世 界 华 人 消 化 杂 志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079
第二部分
中 国 农 通 报 0,7(04):478-48 Chinese Agricultural Science Bulletin 基 于 网 络 平 台 的 生 物 统 计 改 革 及 实 践 效 果 分 析 袁 文, 彭 惠 茹, 张 洪 亮, 刘 文 欣, 华 金 平, 苏 胜 宝, 孔 繁 玲 ( 中 国 农 大 科 技 术 发 展 研 究 院, 北 京 0093; 中 国 农 大 农 与 生 物
<46495420446F63756D656E7428442D2D796E2DD6D0D2BDD2A92DB5DA3132C6DA2DB7E2C3E6CDC6BDE9A3A8323031342D3132A3A9CCE6BBBB2E6D6469>
2014 第十六卷 第十二期 绎Vol.16 No.12 清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎 湿热瘀结证临床研究 周 萍 1 曾志华 1元元 向阳红 2 1. 重庆医科大学中医药学院 摘 重庆 401331 2. 重庆市中医研究院 重庆 400020 要 目的 观察清热利湿化瘀汤联合针灸治疗慢性盆腔炎湿热瘀结证的临床疗效 方法 将 120 例病例随机分为 每组各 40 例 给予口服清热利湿化瘀汤
泌尿生殖道不同部位沙眼衣原体感染的诊断和治疗评估
1 2 3 1 2 3 1 : Reiter 9-1-1 Annal of internal medicine 5PMN/1000 (+) (+) NGU DFA 10PMN/1000 DFA(+) + GS=Gram Stain PMN=polymorphonuclear leukocytes DFA=direct fulorescent antibody (Annal internal medicine)
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P 研 发 前 沿, 相 关 报 道, Key Words: Laparoscopy; Early enteral nutrition; Colorectal cancer surgery Niu WB, Li ZY, Zhou CX, Wang GY, Yu YM. Clinical effects
: http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i5.857 2015 2 18 ; 23(5): 857-861 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 2219-2859 (online) 2015. CLINICAL
21 13 D / 2 10 ig ig 10 d 1. 0 g kg /2 2 β- 5 g kg g kg mg kg - 1 ig ig 24 h 5% 1 2% CMC-Na 2. 5 ml 30
21 13 1 2 1* 2 1. 430065 2. 445000 20 10 5 g kg - 1 5 mg kg - 1 ig 10 d ig HE 1 TFF1 TFF1 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 05 R285. 5 doi 10. 13422 /j. cnki. syfjx. 2015130100 A 1005-9903 2015 13-0100-05
43 14. 45 3 7 220 1 2 cm /s 2 1. 5 3 1 4 c d 1 /40 1 /4 1 /9 600 0. 129 6 7 1 /6 400 1 /256 000 1. 5 2 2 2. 1 /m /Hz /kn / kn m 6 6 0. 1 ~ 50 600 1 80
43 14 2013 7 Building Structure Vol. 43 No. 14 Jul. 2013 * 1 1 1 2 3 3 3 2 2 1 100013 2 430022 3 200002 1 40 ETABS ABAQUS TU355 TU317 +. 1 A 1002-848X 2013 14-0044-04 Compairion study between the shaking
SO 2 g/kg 2.0 ppm 2
ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 273 92 9 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 SO 2 g/kg 2.0 ppm 2 (Center of Biological Evaluation and Research, FDA) 30 1991 FDA 91 10 30 Trend of Vaccine Development
Microsoft Word - 793-797 tb20150504赵宏宇s-高校教改纵横.doc
微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2016, 43(4): 793 797 http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150504 高 校 教 改 纵 横 生 物 工 程 专 业 发 酵 课 程 群 建 设 探 索 * 赵 宏 宇
Leisure Participation Type Differences And Leisure Satisfaction Differences Between Various Body Mass Indices: A Correlation Study To Taiwan s College
/ / 40 3500 3064 1 Leisure Participation Type Differences And Leisure Satisfaction Differences Between Various Body Mass Indices: A Correlation Study To Taiwan s College Student Lien-Chung Lee / Chia-Te
依据为各成员国提供卫生政策方面指导意见这一职责，世界卫生组织（WHO）就预防具有全球公共卫生影响的疾病的疫苗及联合疫苗问题，发布一系列定期更新的立场文件
伤 寒 疫 苗 : WHO 立 场 文 件 依 据 为 各 成 员 国 提 供 卫 生 政 策 方 面 指 导 意 见 这 一 职 责, 世 界 卫 生 组 织 (WHO) 就 预 防 具 有 全 球 公 共 卫 生 影 响 的 疾 病 的 疫 苗 及 联 合 疫 苗 问 题, 发 布 一 系 列 定 期 更 新 的 立 场 文 件 这 些 文 件 着 重 关 注 疫 苗 在 大 规 模 免 疫 规
相 关 报 道 近 年 来 临 床 上 运 用 多 种 针 灸 疗 法 治 疗 肥 胖 及 其 引 起 的 并 发 症, 如 高 脂 血 症 糖 尿 病 高 血 压 及 痛 经 等, 均 获 得 满 意 疗 效. caused by sedentary lifestyle and genetic f
在 线 投 稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮 助 平 台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v24.i5.815 世 界 华 人 消 化 杂 志 2016 年 2 月 18 日 ; 24(5): 815-820 ISSN 1009-3079 (print)
357 P <. 5. TCD findings revealed that the contralateral vertebral artery systolic blood flow velocities in patients with phase Ⅰ Ⅱ and Ⅲ steal groups
356 TCD 212 3 215 4 TCD 45 TCD 8 Ⅰ 21 Ⅱ 11 Ⅲ 5 4 45 6 2 Ⅰ 12 9 Ⅱ 3 7 1 Ⅲ 3 2 r =. 78 P
2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来
![2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来](/thumbs/42/22962570.jpg "2 JCAM. June,2012,Vol. 28,NO. 6 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 是 急 性 创 伤 或 慢 性 劳 损 所 致 的 关 节 滑 膜 的 无 菌 性 炎 症, 发 病 率 达 2% ~ 3% [1], 为 骨 伤 科 临 床 的 常 见 病 多 发 病 近 年 来")
针 灸 临 床 杂 志 2012 年 第 28 卷 第 6 期 1 临 床 研 究 针 刀 治 疗 膝 关 节 创 伤 性 滑 膜 炎 的 临 床 研 究 向 伟 明 1, 丁 思 明 1, 张 秀 芬 2, 权 五 成 2, 唐 吉 莲 1, 杨 友 金 1, 黄 涣 强 1, 颜 勋 1, 曾 晓 宇 1, 朱 传 芳 1 1, 张 雄 ( 1. 重 庆 市 梁 平 县 第 二 人 民 医 院,
标题
摇 1524 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 中 医 证 型 研 究 进 展 综 述 扶 伟 摇 徐 立 然 摇 马 秀 霞 摇 孟 鹏 飞 摇 宋 夕 元 摇 李 亮 平 摇 李 正 摇 丁 雪 摇 邱 荃 摇 杨 超 华 揖 摘 要 铱 摇 艾 滋 病 合 并 肺 部 感 染 的 治 疗 过 程 中 因 其 病 因 复 杂, 临 床 症 状 多 样, 辨 证 分 型 及 临 床 疗 效 评
壹 緒 論 由 於 作 者 任 教 於 大 專 軍 事 校 院, 依 校 規 規 定 學 生 於 第 八 學 期 必 須 通 過 3000 公 尺 跑 步 測 驗 限 定 14 分 鐘 的 及 格 標 準 始 得 畢 業 ; 因 此 探 討 提 升 中 長 距 離 與 長 距 離 跑 步 能 力 的
四 週 800 公 尺 間 歇 跑 步 訓 練 教 學 方 案 對 不 同 跑 步 能 力 者 的 訓 練 成 效 蔡 玉 敏 1 陳 智 仁 2, 3 * 陳 明 坤 1 中 華 民 國 空 軍 官 校 總 教 官 室 2 桃 園 創 新 技 術 學 院 體 育 保 健 室 3 國 立 中 興 大 學 體 育 室 摘 要 目 的 : 探 討 800 公 尺 間 歇 跑 步 訓 練 教 學 對 不
United Nations ~ ~ % 2010
42 3 2018 5 Vol. 42 No. 3 May 2018 38 Population Research 2014 60 3% ~ 4% 10% 60 +
H 2 SO ml ml 1. 0 ml C 4. 0 ml - 30 min 490 nm 0 ~ 100 μg /ml Zhao = VρN 100% 1 m V ml ρ g
16 6 2018 11 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Vol. 16 No. 6 Nov. 2018 doi 10. 3969 /j. issn. 1672-3678. 2018. 06. 004 1 2 1 1 1. 330200 2. 330006 4 Box-Behnken 1 25 g /ml 121 92 min 2 6. 284%
405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊
![405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊](/thumbs/42/23094402.jpg "405 急 性 心 肌 梗 死 是 临 床 较 为 常 见 的 心 血 管 疾 病, 病 情 危 急, 病 死 率 高 [1] 随 着 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (percutaneous coronary intervention,pci) 技 术 在 急 性 心 肌 梗 死 急 诊")
404 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 PCI 术 后 再 狭 窄 的 临 床 研 究 李 静, 王 建 榜, 王 西 辉 西 安 医 学 院 第 二 附 属 医 院 心 内 科, 陕 西 西 安 710038 摘 要 : 目 的 研 究 冠 心 舒 通 胶 囊 预 防 急 性 心 肌 梗 死 经 皮 冠 状 动 脉 介 入 治 疗 (PCI) 术 后 再 狭 窄 的 临 床
不明原因发热病人钩端螺旋体和巴尔通体混合感染调查
不 明 原 因 发 热 病 人 钩 端 螺 旋 体 和 巴 尔 通 体 感 染 调 查 王 跃 兵, 向 东, 杨 发 莲, 彭 海 燕, 于 彬 彬, 杨 慧 云 南 省 地 方 病 防 治 所, 云 南 大 理 671000 摘 要 : 目 的 了 解 不 明 原 因 发 热 病 人 钩 端 螺 旋 体 和 巴 尔 通 体 的 感 染 状 况 方 法 用 显 微 镜 凝 集 实 验 方 法 检
by mild (22.7%). Inhaled corticosteroids, systemic corticosteroids, and antibiotics were applied to 94.8% (292 cases), 74.7% (230 cases), and 90.9% (2
论 著 临 床 研 究 doi: 0.7499/j.issn.008-8830.204.2.007 郑 州 市 城 区 儿 童 哮 喘 的 流 行 病 学 调 查 及 发 病 相 关 因 素 分 析 赵 坤 宋 桂 华 古 华 倩 2 刘 爽 3 张 岩 郭 彦 荣 (. 河 南 中 医 学 院 第 一 附 属 医 院 儿 科 医 院, 河 南 郑 州 450000; 2. 杭 州 市 余 杭 区
JOURNAL OF EARTHQUAKE ENGINEERING AND ENGINEERING VIBRATION Vol. 31 No. 5 Oct /35 TU3521 P315.
31 5 2011 10 JOURNAL OF EARTHQUAKE ENGINEERING AND ENGINEERING VIBRATION Vol. 31 No. 5 Oct. 2011 1000-1301 2011 05-0075 - 09 510405 1 /35 TU3521 P315. 8 A Earthquake simulation shaking table test and analysis
NONE
中 国 农 业 大 学 学 报 1999, 4(3): 109~113 Journal of China Agricultural University 小 鼠 桑 棍 胚 玻 璃 化 冷 冻 前 后 生 物 频 谱 处 理 对 体 外 发 青 的 影 晌 1 朱 士 恩 2 王 海 彦 曾 申 明 王 永 胜 张 忠 诚 ( 中 国 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院 ) 周 林 陈 银 (
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
1269 malondialdehyde (MDA) were significantly decreased, while oxygen partial pressure (PaO 2 ), ph value, superoxide dismutase (SOD) and glutathione
1268 维 生 素 A 联 合 牛 肺 表 面 活 性 物 质 治 疗 新 生 儿 呼 吸 窘 迫 综 合 征 的 临 床 研 究 朱 琼 1, 陈 小 利 2, 叶 华 2 1. 重 庆 市 合 川 区 妇 幼 保 健 计 划 生 育 服 务 中 心 儿 科, 重 庆 401520 2. 重 庆 市 合 川 区 妇 幼 保 健 计 划 生 育 服 务 中 心 内 儿 科, 重 庆 401520
4期
中 国 农 学 通 报 2013,29(04):39-43 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 药 荆 芥 最 新 研 究 进 展 1,2 1,2 赵 立 子, 魏 建 和 ( 1 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 北 京 100193; 2 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京
甘蔗糖业2011年电子合订本
甘 蔗 糖 业 2011 年 第 6 期,2011 年 12 月 Sugarcane and Canesugar No. 6, Dec. 2011 低 钾 胁 迫 对 甘 蔗 不 同 品 系 生 长 和 光 合 特 性 的 影 响 李 奇 伟, 卢 颖 林, 周 文 灵, 陈 迪 文, 敖 俊 华, 黄 莹, 黄 振 瑞, 江 永 ( 广 州 甘 蔗 糖 业 研 究 所 广 东 省 甘 蔗 改 良
综合报道
55 doi:10.3969j.issn.1000-3606.2014.01.01 论 著 不 同 围 生 因 素 对 妊 娠 的 影 响 赵 玉 祥 岳 虹 霓 杨 占 华 江 苏 省 淮 安 市 保 健 院 新 生 儿 科 ( 江 苏 淮 安 223002) 摘 要 : 目 的 探 讨 妊 娠 期 高 血 压 疾 病 胎 膜 早 破 等 围 生 因 素 对 妊 娠 的 影 响 方 法 回 顾 性
2月5期aa
中 国 农 学 通 报 212,28():2-27 Chinese Agricultural cience Bulletin 血 清 11 型 鸭 疫 里 默 氏 菌 的 分 离 鉴 定 1,2 2, 2, 2, 2, 2, 2, 杨 晓 辉, 程 龙 飞, 陈 红 梅, 施 少 华, 傅 光 华, 万 春 和, 黄 瑜 ( 1 福 建 省 农 业 科 学 院 畜 牧 兽 医 研 究 所, 福 州
<453A5CCAB3C6B7BFC6D1A73131C4EA3134C6DA5C3134C6DA5C3032B7D6CEF6>
227 ELISA 刘 沙 洲 1,2, 桑 小 雪 1, 欧 阳 华 学 3, 雷 绍 荣 3, 白 林 含 1, * (1. 四 川 大 学 生 命 科 学 学 院, 四 川 成 都 610065;2. 成 都 市 食 品 药 品 检 测 中 心, 四 川 成 都 610045; 3. 四 川 省 农 业 科 学 院 分 析 测 试 中 心, 四 川 成 都 610066) 目 的 : 比 较
学校代号 10199 学 号20092209134
学 校 代 号 10199 学 号 20092209134 硕 士 学 位 论 文 中 药 塌 渍 护 理 干 预 联 合 超 声 雾 化 对 小 儿 肺 炎 喘 嗽 的 临 床 观 察 研 究 Traditional Chinese medicine collapse stains nursing intervention to joint of ultrasonic atomizer infantile
03 年 8 月 Vol.5 No.8 支 气 管 哮 喘 ( 简 称 哮 喘 ) 是 儿 童 时 期 最 常 见 的 慢 性 呼 吸 道 疾 病 之 一 近 年 来, 随 着 人 类 文 明 的 发 展 社 会 化 进 程 的 加 快 经 济 水 平 的 提 高 和 科 技 的 进 步, 环 境
03 年 8 月 Vol.5 No.8 DOI:0.7499/j.issn.008-8830.03.08.003 论 著 临 床 研 究 成 都 地 区 0~4 岁 城 乡 儿 童 哮 喘 流 行 病 学 调 查 对 比 分 析 李 敏 张 琼 时 维 娟 李 兰 李 艳 庞 英 姚 兵 蒋 虹 (. 四 川 省 医 学 科 学 院 / 四 川 省 人 民 医 院 儿 科, 四 川 成 都 6007;.
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLance
SARS SARS SARS SARS NatureScience 2018 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS 8 NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 940
32期
中 国 农 学 通 报 2014,30(32):38-42 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 草 药 饲 料 添 加 剂 对 黄 鳝 性 激 素 含 量 的 影 响 1,2 1,2 1,2 2 赵 庆 凯, 丁 炜 东, 邴 旭 文, 王 建 新 ( 1 南 京 农 业 大 学 无 锡 渔 业 学 院, 江 苏 无 锡 214081; 2 中 国 水 产
<46495420446F63756D656E7428452D2D796E2D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D32303134C4EA2DB5DA34C6DA2DC4BFC2BC2D34C6DA2E6D6469>
绎 1 援 401331 2. 400030 3. 400020 4. 400080 5. 400012 88 44 44 猿 孕 约 0.05 ESR 悦 CRP RF 孕 约 0.05 doi: 10.11842/wst.2014.04.018 R593.22 A Rheumatoid Arthritis RA 44 19 25 32 耀 75 47.71 依 8.53 5 耀 28 4.39
1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology NatureScienceLa
SARS SARS SARS SARS NatureScience 1 SARS SARS SARS SARS SARS SARS S SARS SARS SARS 2 3 DNA SARS NatureScienceEmerging Infectious DiseasesJournal of Virology 32 8 13.066 NatureScienceLancetPNAS SCI 905
( s y s t e m ) ( s t r e s s ) (stress model) ( s y s t e m ) [ ] [ 5 ] C o x [ 3 ] 1 [ 1, 2 ] [ 6-8 ] [ 9 ] Tw Fam Med Res 2003 Vol.1 No.1 23
![( s y s t e m ) ( s t r e s s ) (stress model) ( s y s t e m ) [ ] [ 5 ] C o x [ 3 ] 1 [ 1, 2 ] [ 6-8 ] [ 9 ] Tw Fam Med Res 2003 Vol.1 No.1 23](/thumbs/88/115745072.jpg "( s y s t e m ) ( s t r e s s ) (stress model) ( s y s t e m ) [ ] [ 5 ] C o x [ 3 ] 1 [ 1, 2 ] [ 6-8 ] [ 9 ] Tw Fam Med Res 2003 Vol.1 No.1 23")
1, 4 1, 2 3 1 4 1, 2 1977 E n g e l 1999 5 1 ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 ) ( 5 ) 2003 1 2 2-32 stress model, stress analysis [ 1 ] ( p s y c h o g e n e s i s ) (holism) (biomedical model) ( r e d u c t i o
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
2 1: 1 7-27 ( 2001) Formosa n Entomol. 2 1 : 1 7-27 (2001) (Orgyia posticus) ( ) * (Orgyia posticus (Walker)) 10 15 20 25 30 35 12L : 12D 25 5 10-35 64.1 40.0 26.2 16.2 16.2 21.1 19.6 16.0 8.2 6.9 6.0
~ ~
* 40 4 2016 7 Vol. 40 No. 4 July 2016 35 Population Research 2014 1 2016 2016 9101. 0 40 49. 6% 2017 ~ 2021 1719. 5 160 ~ 470 100872 Accumulated Couples and Extra Births under the Universal Tw o-child
untitled
R2 10315 20042008 2004 CLINICAL RESEARCH OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE THEORY & TREATMENT TO RELIEVE PAIN OF BREAST CANCER PATIENTS 2007 5 -----------------------------------------------------------------------------------------------
... (1)....(3)..(5)... (22) (22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62)
97017608 OO ... (1)....(3)..(5)... (22).......(22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62) C 2002 2 2003 12 146 64.27 110 36 Logistic 2003 12 2004
学校代号 10199 学 号 20093506035
学 校 代 号 10199 学 号 20093506035 蠲 饮 止 哮 汤 治 疗 热 哮 ( 饮 郁 化 热 证 ) 的 临 床 观 察 Juanyinzhixiao Decoction in treating Heat Asthma (drink pathogenic heat syndrome) clinical observation 学 位 申 请 人 导 师 姓 名 职 称 专 业
< F63756D656E D2D796E2DB9A4D7F72D31C6DABFAF2D31D6D0D2BDD2A9CFD6B4FABBAF2D C4EA2DB5DA34C6DAB8BDBCD32D30302DB7E2C3E6CDC6BDE941A3A D34A3A92E6D6469>
2013 绎 Vol.15 No.4 阴 元元 450002 Ki-6772 Wistar 6 5 mg kg -1 30 0.8 mg kg -1 7.5 15.0 22.5 g kg -1 1 30 Ki-67 TUNEL Ki-67 P
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一 黃 春 滿 董 道 興 * 師 慧 娟 ** 中 文 摘 要 本 篇 個 案 報 告 是 探 討 一 術 後 病 的, 期 間 為 94 年 4 月 28 日 至 5 月 13 日 筆 藉 由 Gordon 十 一 項 健 康 功 能 評 估 為 工 具, 運 用 身 體 評 估 觀 察 及 會 談 的 方 式 收 集 資 料, 在 期 間 發 現 個 案 出 現 體 溫 過 高 焦 慮 疼 痛
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