第 期 宋 运 贤 等 : 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 的 诱 导 7 临 床 上 出 现 的 马 兜 铃 酸 肾 毒 性 现 象 和 潜 在 的 致 癌 作 用 引 起 了 国 际 医 药 界 的 高 度 重 视, 因 此, 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 于 年

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1 热带亚热带植物学报 1 () ~ 1 Journal of Tropical and Subtropical Botany 马兜铃不含腋芽茎段不定芽的诱导 宋运贤1,,3, 张强1,, 杜雪玲1,, 彭贺1, 唐润1, 张园园1, 陈耀锋3* (1. 淮北师范大学生命科学学院 安徽 淮北 35. 资源植物生物学安徽省重点实验室 安徽 淮北 西北农林科技大学农学院 陕西 杨凌 7) 摘要 为建立马兜铃(Aristolochia debilis Sieb. et Zucc)不含腋芽茎段的不定芽诱导体系 采用正交设计方法研究植物生长调节 剂 预培养方式和 AgNO3 对不定芽诱导的影响 结果表明 植物生长调节物质对不定芽诱导的影响以 TDZ > -BA > IAA 其 中 TDZ 的影响极显著(P<.1) -BA 的影响显著(P<.5) 不定芽诱导的最适培养基为 MS +.5 mg L 1 TDZ +.1 mg L 1 IAA +.5 mg L 1 -BA + mg L 1 AgNO3 + 3% 蔗糖 +.% 琼脂(pH 5.) 预培养方式为在 MS +.1 mg L 1,-D + 3% 蔗糖 +.% 琼脂培养基上暗培养 d 马兜铃不含腋芽茎段的不定芽诱导率最高可达 37.5% 关键词 马兜铃 茎段 TDZ 不定芽诱导 AgNO3 doi: 1.399/j.issn Induction of Adventitious Buds from Stems without Axillary Bud of Aristolochia debilis Sieb. et Zucc SONG Yun-xian1,,3, ZHANG Qiang1,, DU Xue-ling1,, PENG He1, TANG Run1, ZHANG Yuan-yuan1, CHEN Yao-feng3* (1. College of Life Science, Huaibei Normal University, Huaibei 35, China;. Anhui Key Laboratory of Plant Resources and Biology, Huaibei 35, China; 3. College of Agronomy, Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 7, China) Abstract: In order to establish adventitious bud induction system from stem segments without axillary bud of Aristolochia debilis Sieb. et Zucc, the effects of plant growth regulators, pre-culture pattern and AgNO3 on the induction rate were studied by using orthogonal design method. The results showed that the effects of plant growth regulators on adventitious bud reduction from stems were in the order of TDZ > -BA > IAA, in which TDZ and -BA had significant influence at.1 and.5 levels, respectively. The optimum medium for adventitious bud induction was MS +.5 mg L 1 TDZ +.1 mg L 1 IAA +.5 mg L 1 -BA +. mg L 1 AgNO3 + 3% sucrose +.% agar (ph 5.). After the explants were pre-cultured on MS +.1 mg L 1,-D + 3% sucrose +.% agar (ph 5.) in dark for days, and then transferred on adventitious bud induction medium, the rate of adventitious bud induction could reach to 37.5%. Key words: Aristolochia debillis; Stem; TDZ; Adventitious bud induction; AgNO3 马 兜 铃(Aristolochia debilis Sieb. et Zucc)为 马 兜铃科(Aristolochiaceae)马兜铃属植物 其果实和 清肺镇咳化痰药 茎的药材名为天仙藤 能祛风活 根有重要的药用价值 果实的药材名是马兜铃 为 的功效 故马兜铃又名青木香 天仙藤等[1] 然而 血 根的药材名为青木香 有解毒 利尿 理气止痛 收稿日期 13 1 接受日期 基金项目 国家转基因生物新品种培育项目(9ZXB) 安徽省教育厅重点项目(KJ13A3) 资源植物生物学安徽省重点实验室项 目(ZYZWSW19, ZYZWSW1)资助 作者简介 宋运贤(197~ ) 男 硕士 副教授, 研究方向为农业生物技术 songyunxian@aliyun.com * 通讯作者 Corresponding author. chenyf3@1.com

2 第 期 宋 运 贤 等 : 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 的 诱 导 7 临 床 上 出 现 的 马 兜 铃 酸 肾 毒 性 现 象 和 潜 在 的 致 癌 作 用 引 起 了 国 际 医 药 界 的 高 度 重 视, 因 此, 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 于 年 月 取 消 了 青 木 香 药 用 标 准, 凡 国 家 药 品 标 准 处 方 中 含 有 青 木 香 的 中 成 药 品 种 应 替 换 为 土 木 香 [ 3] 但 是, 有 研 究 表 明, 土 木 香 在 植 物 来 源 亲 缘 关 系 功 效 主 治 化 学 成 分 药 理 作 用 和 临 床 应 用 等 方 面 与 青 木 香 有 很 大 差 异, 因 此, 二 者 不 应 相 互 替 代 [] 在 明 确 马 兜 铃 酸 药 效 和 作 用 机 理 的 基 础 上 运 用 现 代 基 因 工 程 手 段 对 其 进 行 定 点 改 造, 以 消 除 其 肾 毒 性 是 解 决 这 一 问 题 的 有 效 途 径 而 建 立 高 频 率 的 离 体 再 生 体 系 是 遗 传 转 化 获 得 成 功 的 前 提 和 基 础 目 前, 国 内 外 对 马 兜 铃 的 研 究 主 要 集 中 于 成 分 分 析 药 理 作 用 肾 毒 性 作 用 栽 培 措 施 快 速 繁 殖 等 方 面 [3 1], 对 再 生 体 系 的 研 究 报 道 主 要 涉 及 通 过 愈 伤 组 织 阶 段 的 再 生 [ 1], 而 无 腋 芽 茎 段 直 接 诱 导 不 定 芽 再 生 植 株 还 未 见 报 道 本 文 以 马 兜 铃 不 含 腋 芽 的 茎 段 为 材 料, 通 过 研 究 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 的 配 比 和 不 同 预 处 理 方 式 对 不 定 芽 诱 导 的 影 响, 以 期 建 立 高 效 的 马 兜 铃 茎 段 再 生 体 系, 为 开 展 马 兜 铃 遗 传 转 化 的 研 究 奠 定 技 术 基 础 1 材 料 和 方 法 1.1 材 料 马 兜 铃 无 菌 组 培 苗 经 西 北 农 林 科 技 大 学 农 学 院 陈 耀 锋 教 授 鉴 定 为 马 兜 铃 科 马 兜 铃 属 马 兜 铃 (Aristolochia debilis Sieb. et Zucc) 选 取 大 小 基 本 一 致 的 马 兜 铃 组 培 苗, 切 取 两 腋 芽 之 间 的 无 腋 芽 茎 段, 修 剪 成 1 cm 左 右 的 长 度, 横 放 接 种 于 培 养 基 中 1. 植 物 生 长 调 节 剂 的 影 响 采 用 L 9 (3 ) 正 交 设 计, 研 究 -BA IAA 和 TDZ 对 马 兜 铃 茎 段 不 定 芽 诱 导 的 影 响 ( 表 1) 以 MS 为 基 本 培 养 基, 所 有 培 养 基 均 含 3 g L 1 蔗 糖 和 g L 1 琼 脂,pH 调 至 AgNO 3 的 影 响 以 MS +.5 mg L 1 -BA +.1 mg L 1 IAA +.5 mg L 1 TDZ + 3% 蔗 糖 +.% 琼 脂 为 不 定 芽 诱 导 培 养 基, 分 别 添 加 和. mg L 1 的 AgNO 3 1. 预 培 养 方 式 的 影 响 采 用 双 因 素 设 计 研 究,-D 和 黑 暗 预 培 养 时 间 对 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 诱 导 的 影 响 茎 段 预 培 养 以 MS 为 基 本 培 养 基,,-D 设 置 和. mg L 1 共 5 个 水 平 ; 黑 暗 预 培 养 时 间 设 置 和 d 诱 导 培 养 基 为 MS +.5 mg L 1 -BA +.1 mg L 1 IAA +.5 mg L 1 TDZ + 3% 蔗 糖 +.% 琼 脂,pH 5. 表 1 植 物 生 长 调 节 剂 对 不 定 芽 诱 导 的 影 响 Table 1 Effects of plant growth regulators on adventitious bud induction -BA IAA TDZ 外 植 体 数 Number of explants 诱 导 不 定 芽 数 Number of adventitious buds induced 不 定 芽 诱 导 率 Rate of adventitious bud (%) ± ± ± ± ± ± ± ± ±.93 K 1.1a 9.3a 1.7a K.3a.9a 3.13b K 3.b 9.35a 3.b R

3 热 带 亚 热 带 植 物 学 报 第 卷 以 上 各 种 处 理 均 重 复 3 次, 培 养 温 度 为 (5±), 光 照 强 度 为 5 μmol m s 1, 光 照 时 间 1 h d 数 据 处 理 和 统 计 培 养 35 d 后 统 计 不 定 芽 诱 导 率 不 定 芽 诱 导 率 = 诱 导 不 定 芽 的 茎 段 数 / 接 种 的 茎 段 数 1% 运 用 SPSS 对 试 验 数 据 进 行 方 差 分 析, 多 重 比 较 采 用 LSD 法 结 果 和 分 析.1 植 物 生 长 调 节 剂 的 影 响 将 马 兜 铃 不 带 腋 芽 的 茎 段 接 种 在 诱 导 培 养 基 上, 培 养 5 d 后 茎 段 的 两 端 开 始 膨 大,9 d 后 在 茎 段 伤 口 处 开 始 有 愈 伤 组 织 长 出,15 d 时 愈 伤 组 织 继 续 长 大 并 开 始 变 绿,5 d 后 茎 段 上 开 始 分 化 出 不 定 芽 由 表 1 可 知, 植 物 生 长 调 节 剂 对 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 的 不 定 芽 诱 导 率 的 影 响 以 TDZ > -BA > IAA; 且 在 -BA (.5 mg L 1 ) IAA (.1 mg L 1 ) TDZ (.5 mg L 1 ) 的 配 比 下, 不 定 芽 的 诱 导 率 达.% 方 差 分 析 ( 表 ) 表 明 :TDZ 对 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 的 不 定 芽 诱 导 率 有 极 显 著 影 响 (P<.1),-BA 有 显 著 影 响 (P<.5), 而 IAA 无 显 著 影 响 (P>.5) 综 上 分 析, 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 的 不 定 芽 诱 导 的 最 适 培 养 基 为 MS +.5 mg L 1 -BA +.1 mg L 1 IAA +.5 mg L 1 TDZ,pH 调 至 5.. AgNO 3 的 影 响 由 表 3 可 知, 在 培 养 基 中 添 加 不 同 浓 度 的 AgNO 3, 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 的 不 定 芽 诱 导 率 不 同 添 加. mg L 1 AgNO 3 的 不 定 芽 诱 导 率 达 到 最 大, 为.7%, 而 不 添 加 AgNO 3 的 不 定 芽 诱 导 率 仅 为 1.9%, 两 者 之 间 的 差 异 显 著 随 着 AgNO 3 浓 度 的 增 加, 马 兜 铃 茎 段 诱 导 的 愈 伤 组 织 也 逐 渐 减 少, 在 添 加. mg L 1 AgNO 3 培 养 基 中, 马 兜 铃 茎 段 几 乎 不 能 诱 导 出 愈 伤 组 织, 也 几 乎 不 能 诱 导 出 不 定 芽.3 预 培 养 的 影 响 将 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 先 接 种 在 含 不 同 浓 度 的,-D 培 养 基 上, 并 在 黑 暗 下 预 培 养 一 定 时 间 结 果 表 明, 预 培 养 基 中 添 加.1 mg L 1,-D 有 表 植 物 生 长 调 节 剂 对 不 定 芽 诱 导 的 方 差 分 析 Table Variance analysis of plant growth regulators on adventitious bud induction 因 素 Factor 自 由 度 Degree of freedom 平 方 和 Sum of squares 均 方 Mean squares F P -BA * IAA TDZ ** 误 差 Error 合 计 Total. 表 3 AgNO 3 对 马 兜 铃 不 定 芽 诱 导 的 影 响 Table 3 Effect of AgNO 3 on adventitious bud induction of Aristolochia debilis AgNO 3 接 种 外 植 体 数 Number of explants 诱 导 的 不 定 芽 数 Number of adventitious bud induced 不 定 芽 诱 导 率 (%) ±.C ±.39B ±.77A 5. 1.±.D 1. 9.±.E ±.7F 数 据 后 不 同 大 写 字 母 表 示 差 异 极 显 著 ( 采 用 LSD 法, α =.1) Data followed different capital letters indicate significant differences at.1 level by LSD test.

4 第期 9 宋运贤等 马兜铃不含腋芽茎段不定芽的诱导 利于不定芽的诱导(表 图 1) 较高浓度的,-D 1 培养时间以 d 为宜 时间延长使不定芽诱导率呈 (1~ mg L )会抑制不定芽的诱导 与对照差异显 下降趋势 马兜铃不含腋芽茎段在添加.1 mg L 1 著 甚至部分茎段还分化出不定根(图 1) 黑暗预,-D 培养基上黑暗预培养 d 不定芽诱导率可达 图 1 预培养对不定芽诱导的影响 A:,-D.1 mg L 1 预培养 d B:,-D 1 mg L 1 预培养 d Fig. 1 Effect of pre-culture on adventitious bud induction. A: Pre-cultured for days with.1 mg L 1,-D; B: Pre-cultured for days with 1 mg L 1,-D. 表,-D 和黑暗预培养时间对马兜铃不定芽诱导的影响 Table Effects of,-d and pre-culture in dark on adventitious bud induction of Aristolochia debilis,-d 黑暗预培养时间 Pre-culture 接种外植体数 诱导的不定芽数 不定芽诱导率 (%) (mg L 1) days in dark Number of explants Number of adventitious buds induced 17 1.± ± ± ± ± ± ± ± ± ±.1 1.9± ± ± ±.35 5.± ± ± ±1. 7.1±1.5 1.± ±1. 1.± ± ±.5.±.

5 1 热 带 亚 热 带 植 物 学 报 第 卷 表 5,-D 和 黑 暗 预 培 养 时 间 对 马 兜 铃 不 定 芽 诱 导 的 多 重 比 较 Table 5 Multiple comparison of,-d and pre-culture in dark on adventitious bud induction of Aristolochia debilis,-d 不 定 芽 诱 导 率 (%) 黑 暗 预 培 养 时 间 Pre-culture days in dark 不 定 芽 诱 导 率 (%) 13.3±.b 1.13±1.7b ±1.a.9±9.9a.5.7±5.35b 1.±.73b 1. 7.±5.c 1.9±5.9b. 5.57±.71c.±.7c 同 列 数 据 后 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著 ( 采 用 LSD 法,α=.5) Data followed different small letters within column indicate significant differences at.5 level by LSD test. 37.5% 方 差 分 析 结 果 表 明,,-D 和 黑 暗 预 培 养 时 间 对 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 诱 导 率 有 极 显 著 影 响 (P<.1) 多 重 比 较 ( 表 5) 的 结 果 表 明, 预 培 养 基 中 添 加.1 mg L 1,-D 与 对 照 的 差 异 显 著, 黑 暗 预 培 养 d 与 对 照 的 差 异 显 著 3 讨 论 建 立 高 效 的 组 织 培 养 再 生 体 系 是 利 用 遗 传 转 化 技 术 获 得 转 基 因 植 株 的 重 要 前 提 之 一 近 年 来, 有 关 植 物 遗 传 转 化 的 研 究 报 道 所 采 用 的 再 生 体 系 主 要 有 原 生 质 体 再 生 [13] 体 细 胞 胚 发 生 [1] 愈 [1 1] 伤 组 织 再 生 和 再 生 苗 茎 段 叶 的 器 官 直 接 发 生 等 [15 1], 其 中 通 过 植 株 的 器 官 直 接 发 生 的 途 径, 较 前 几 种 再 生 系 统 具 有 周 期 短 操 作 简 便 培 养 过 程 中 发 生 的 变 异 少 的 特 点, 是 采 用 最 多 的 再 生 系 统 迄 今 为 止, 建 立 的 马 兜 铃 再 生 体 系 多 以 愈 伤 组 织 为 主 [1 1], 由 愈 伤 组 织 再 生 植 株 过 程 中 发 生 无 性 系 变 异 的 可 能 性 较 大, 转 化 的 外 源 基 因 稳 定 性 较 差 另 外 由 于 马 兜 铃 叶 片 较 小, 取 出 培 养 瓶 后 易 脱 水 卷 曲, 不 易 切 割 培 养 本 试 验 以 不 含 腋 芽 的 茎 段 为 材 料 建 立 再 生 体 系, 具 有 操 作 简 便 周 期 短 嵌 合 体 相 对 较 低 遗 传 稳 定 性 高 等 优 点 通 过 初 步 探 索, 目 前 已 初 步 建 立 了 较 为 高 效 的 再 生 体 系, 为 后 续 进 一 步 优 化 建 立 转 基 因 受 体 系 统 打 下 了 良 好 的 基 础 TDZ 是 一 种 新 型 的 植 物 生 长 调 节 剂, 具 有 很 强 的 细 胞 分 裂 素 活 性, 可 以 促 进 植 物 不 定 芽 的 再 生 和 繁 殖 打 破 芽 的 休 眠 延 缓 植 物 衰 老 等 [17] TDZ 可 通 过 抑 制 叶 片 的 脂 质 过 氧 化 作 用 来 保 护 细 胞 膜 结 构 的 完 整 性 阻 止 叶 片 叶 绿 素 的 降 解 延 缓 离 体 叶 片 和 茎 段 的 衰 老 抑 制 POD 活 性, 从 而 提 高 再 生 效 率 [1] 但 高 浓 度 的 TDZ 容 易 导 致 试 管 苗 的 变 形 坏 死 褐 变, 从 而 不 利 于 芽 或 根 的 发 生 [19] [15] 崔 波 等 的 研 究 表 明,TDZ 在 火 龙 果 (Hylocereus undulatus) 茎 段 再 生 过 程 中 起 着 重 要 的 作 用,. mg L 1 TDZ 有 利 于 植 株 的 再 生 黄 芩 (Scutellaria baicalensis) 茎 段 的 诱 导 研 究 也 表 明,TDZ 诱 导 不 定 芽 的 能 力 优 于 其 它 植 物 生 长 调 节 剂 本 研 究 结 果 也 表 明, TDZ 是 促 进 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 诱 导 的 主 要 因 子, 较 低 浓 度 对 不 定 芽 的 诱 导 有 很 好 的 促 进 作 用, 随 着 浓 度 的 升 高, 不 定 芽 诱 导 率 迅 速 下 降 [] Heutteman 等 的 研 究 表 明, 高 浓 度 的 TDZ 促 进 了 木 本 植 物 愈 伤 组 织 的 形 成 本 研 究 结 果 也 表 明, 高 浓 度 的 TDZ 会 导 致 茎 段 切 口 边 缘 部 位 产 生 较 多 的 愈 伤 组 织, 进 而 降 低 了 不 定 芽 的 诱 导 率 外 植 体 切 口 部 位 的 细 胞 会 产 生 大 量 自 身 保 护 物 质 乙 烯 有 研 究 指 出, 在 组 织 培 养 中 外 植 体 产 生 的 高 含 量 乙 烯 会 引 起 外 植 体 褐 化 死 亡 和 植 株 畸 形 发 育 ;Beyer 认 为 Ag + 是 一 种 较 好 的 乙 烯 活 性 抑 制 剂 [1], 对 许 多 单 子 叶 和 双 子 叶 植 物 离 体 形 态 发 生 有 促 进 作 用, 可 以 使 植 株 再 生 率 显 著 提 高 Radke [] 等 报 道, 分 化 培 养 基 中 添 加 AgNO 3, 可 以 促 进 芽 原 [3] 基 的 产 生 和 伸 长 但 Neidz 等 认 为 AgNO 3 在 子 叶 植 株 再 生 中 并 无 促 进 作 用 Laurie [] 等 在 研 究 芜 青 子 叶 再 生 中 认 为 低 浓 度 AgNO 3 (5.9~9. μmol L 1 ) 利 于 子 叶 再 生, 高 浓 度 (>7.7 μmol L 1 ) 起 到 明 显 的 抑 制 作 用 [] 本 研 究 结 果 也 表 明 : 适 宜 浓 度 的 AgNO 3 对 马 兜 铃 茎 段 不 定 芽 诱 导 有 促 进 作 用, 与 对 照 相 比, 外 植 体 褐 化 现 象 减 轻, 当 添 加 mg L 1 AgNO 3 时, 不 定 芽 诱 导 率 达 到 最 大, 而 AgNO 3 浓 度 高 于 5 mg L 1 对 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 诱 导 有 抑 制 作 用 [5] 牛 建 新 等 指 出, 组 织 培 养 过 程 中 暗 培 养 可 以 促 进 不 定 芽 的 高 效 诱 导, 这 可 能 是 由 于 IAA 在 光 下

6 第 期 宋 运 贤 等 : 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 不 定 芽 的 诱 导 的 分 解 减 少, 从 而 相 对 提 高 了 IAA 浓 度, 进 而 刺 激 了 不 定 芽 的 产 生 有 学 者 认 为 葡 萄 再 生 需 要 一 个 暗 处 理 过 程, 时 间 为 1~ 周 [] 本 试 验 结 果 也 表 明, 适 当 的 暗 培 养 有 助 于 诱 导 不 定 芽 形 成, 最 佳 暗 培 养 时 间 为 d, 这 比 其 他 的 研 究 结 果 偏 短, 可 能 是 由 于 物 种 的 差 异 造 成 的 至 于 暗 培 养 促 进 不 定 芽 诱 导 的 机 理 还 有 待 进 一 步 研 究 已 有 研 究 表 明,,-D 预 培 养 可 以 显 著 提 高 不 定 芽 的 诱 导 率, 白 菜 型 油 菜 (Brassica campestris) 在 添 加 1 mg L 1,-D 培 养 基 上 预 培 养 3 d, 再 生 率 由 3.5% 提 高 到 9.% [7] 芜 菁 (Brassica rapa ssp. rapifera) 在 1 mg L 1,-D 的 分 化 培 养 基 上 预 培 养 d, 可 将 不 定 芽 再 生 率 由 1.% 提 高 到 9.% [] [9] 但 李 文 静 等 指 出, 较 高 的,-D 浓 度 会 抑 制 植 株 再 生 能 力 本 研 究 结 果 表 明, 预 培 养 基 中 添 加.1 mg L 1,-D 可 以 促 进 马 兜 铃 不 含 腋 芽 茎 段 诱 导 不 定 芽, 但,-D 浓 度 达 1~ mg L 1 时, 不 定 芽 诱 导 率 明 显 降 低, 同 时 生 根 明 显 增 加, 这 与 前 人 的 研 究 结 果 一 致 研 究 结 果 还 表 明, 在 高 浓 度,-D 和 短 时 间 黑 暗 预 培 养, 容 易 诱 导 出 不 定 芽 ; 相 同 条 件 下 预 培 养 时 间 长 则 容 易 诱 导 出 不 定 根 ( 图 1), 这 为 我 们 后 继 试 验 中 利 用 差 异 克 隆 方 法 去 克 隆 芽 根 诱 导 相 关 基 因 打 下 了 基 础, 这 也 是 我 们 下 一 步 研 究 的 方 向 参 考 文 献 [1] Zhao G P, Dai S, Chen R S. Dictionary of Chinese Material Medicine [M]. Shanghai: Shanghai Science & Technology Press, : 赵 国 平, 戴 慎, 陈 仁 寿. 中 药 大 辞 典 [M]. 上 海 : 上 海 科 学 技 术 出 版 社, : [] Cen X N. Disscussion on medicinal standards of containing aristolochic acid medicine canceled [J]. Liuzhou Med,, 1(): 1 3. 岑 显 娜. 对 含 马 兜 铃 酸 类 中 药 被 取 消 药 用 标 准 的 讨 论 [J]. 柳 州 医 学,, 1(): 1 3. [3] Qiao H X, Liu Y Y, Wu L M, et al. Nephrotoxicity of Radix Aristolochice and its substitution material Radix Inulae in rats [J]. Chin J Chin Mat Med, 7, 3(19): 51. 乔 洪 翔, 刘 永 晔, 吴 理 茂, 等. 青 木 香 与 其 替 代 药 材 土 木 香 对 大 鼠 肾 毒 性 的 研 究 [J]. 中 国 中 药 杂 志, 7, 3(19): 51. [] Gao W D, Li W M, Gao Y, et al. Can radix inulae replace radix Aristolochiae as medicinal material? [J] China Pharm,, 17(7): 高 卫 东, 李 卫 民, 高 英, 等. 土 木 香 能 否 代 替 青 木 香 用 药 的 探 讨? [J]. 中 国 药 房,, 17(7): [5] Sun R, Zhang L L, Luo Z W, et al. Overview of utilization value and cultivation technique of the medicinal plants Aristolochia contorta Bunge [J]. J Anhui Agri Sci,, 39(): 1. 孙 睿, 张 丽 丽, 罗 志 文, 等. 药 用 植 物 北 马 兜 铃 的 开 发 利 用 价 值 与 栽 培 技 术 概 述 [J]. 安 徽 农 业 科 学,, 39(): 1. [] Shao H, Sun R, Zhang L M, et al. Study on the technique of tissue culture and rapid propagation of Aristolochia contorta Bunge [J]. North Hort, 1, 1(1): 邵 红, 孙 睿, 张 丽 敏, 等. 北 马 兜 铃 组 培 快 繁 技 术 [J]. 北 方 园 艺, 1, 1(1): [7] Gu D Z, Cong X L, Song L L, et al. Tissue culture and rapid propagation of Aristolochia manshuriensis Kom [J]. Plant Physiol Commun,, (1): 13. 顾 地 周, 丛 小 力, 宋 丽 利, 等. 木 通 马 兜 铃 的 组 织 培 养 和 快 速 繁 殖 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯,, (1): 13. [] Su W P, Zhang M H, Li P. Tissue culture and rapid propagation of Aristolochia elegans Mast. [J]. Guangxi Trop Agri,, (1): 苏 文 潘, 张 美 华, 黎 萍. 美 丽 马 兜 铃 的 组 织 培 养 和 快 速 繁 殖 [J]. 广 西 热 带 农 业,, (1): [9] He W J, He J W, Li Y, et al. Tissue culture and rapid propagation of Aristolochia delavayi Franch [J]. Plant Physiol Commun, 1, (1): 和 文 佳, 和 加 卫, 李 燕, 等. 贯 叶 马 兜 铃 的 组 织 培 养 与 快 速 繁 殖 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯, 1, (1): [1] He C X, Ma G H, Jian S G, et al. Tissue culture and plant regeneration of Aristolochia labiata Willd [J]. Plant Physiol Commun,, (3): 何 长 信, 马 国 华, 简 曙 光, 等. 公 鸡 花 的 组 织 培 养 与 植 株 再 生 [J]. 植 物 生 理 学 通 讯,, (3): [] Yang X Q, Zeng Q P. Tissue culture and plant regeneration of Aristolochia contorta Bunge [J]. J Guangzhou Univ Trad Chin Med,, 3(1): 5. 杨 雪 芹, 曾 庆 平. 马 兜 铃 的 组 织 培 养 与 植 株 再 生 [J]. 广 州 中 医 药 大 学 学 报,, 3(1): 5. [1] Zan Q, Yang Z F, Jiang L, et al. Establishment of regeneration system of Aristolochia contorta [J]. Agri Techn, 9, 9(): 5. 昝 琦, 杨 兆 菲, 姜 璐, 等. 北 马 兜 铃 再 生 系 建 立 的 研 究 [J]. 农 业 与 技 术, 9, 9(): 5. [13] Zhang Q. Establishment of Citrus protoplast transient expression systems and creation of GFP transgenic Murcott Tangor germplasm [D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 9: 1. 张 倩. 柑 橘 原 生 质 体 瞬 时 表 达 体 系 的 建 立 及 默 科 特 橘 橙 转 GFP 种 质 的 创 造 [D]. 武 汉 : 华 中 农 业 大 学, 9: 1. [1] Zeng Y L, Zhang L, Tan Y D, et al. Somatic embryogenesis of Caesalpinia decapetala leaves and regeneration [J]. J CS Univ

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