(OEM)KGT006 GSH测试盒_谷胱甘肽测试盒__比色法_,修订日期: doc

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1 凯基谷胱甘肽 (GSH)( 除蛋白 ) 测定试剂盒 Cat number:kgt006 Store at 4 for for 6 months For Research Use Only( 科研专用 ) 说明书修改日期 : 一. 试剂盒说明 O, H O 2 谷胱甘肽 (GSH) 是一种低分子清除剂, 它可清除 2 2,LOOH 谷胱甘肽是谷氨酸 甘氨酸和 半胱氨酸组成的一种三肽, 是组织中主要的非蛋白的巯基化合物, 并且是 GSH-PX 和 GST 两种酶类的底物, 为这二种酶分解氢过氧化物所必需, 它并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤, 最近还证明 GSH 也参与使维生素 E 恢复到还原态的作用, 缺乏或耗竭 GSH 会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用, 这可能与增加氧化损伤有关, 因而 GSH 的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素 二硫代二硝基甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物, 可进行比色定量测定 二. 试剂盒组份 组份 KGT006 保存条件 100 assays 试剂 A 粉末 1 瓶 室温,6 个月效期 试剂 B 1 瓶 室温,6 个月效期 试剂 C 粉末 1 瓶 室温 试剂 D 粉末 1 支 室温, 避光 试剂 E 粉末 4 支 室温, 避光 GSH 标准品 3.07mg*3 支 4,6 个月效期 GSH 标准品储备液 10ml 4,6 个月效期 配制方法 : 试剂 A 粉末 : 加 的热蒸馏水 170ml, 充分完全溶解 ; 试剂一的配置 : 将已配好的试剂 A 和试剂 B 溶液混合 此为过饱和溶液, 室温静置冷却后, 如有结晶, 则取上清进行实验, 室温保存 6 个月 试剂二 : 试剂 C 粉末用时加双蒸水 100ml 溶解, 室温保存 6 个月 试剂三 : 试剂 D 粉末用时加双蒸水 25ml 溶解, 避光 4 保存 6 个月 试剂四 : 试剂 E 粉末用时每支加双蒸水 10ml 溶解, 避光冷藏可保存 5 天 储备液 : 双蒸水 =1:9 稀释, 即为 GSH 标准溶剂应用液, 现用现配 1mmol/LGSH 标准溶液的配制 :GSH 分子量为 307, 每次测定前将 3.07 mg 的 GSH 标准品加到 10mlGSH 的溶剂应用液中, 混匀, 现用现配 20μmol/LGSH 标准溶液的配制 : 取 1mmol/LGSH 标准溶液 0.2ml 加 GSH 标准溶剂应用液 9.8ml, 现用现配

2 三. 操作步骤 1. 上清液制备 : 取待测样本 0.5ml, 加试剂一应用液 2ml 混匀, 转 / 分离心 10 分钟, 取上清液 1ml 进行显色反应 2. 显色反应 : 20u mol/l GSH 标准 (ml) 计算与举例: (1) 按标准管计算 : 1 计算公式 : 测定管吸光度 空白管吸光度 GSH 含量 ( ggsh/l) = 标准管浓度 ( 20µ GSH分子量 ( 307) 稀释倍数标准管吸光度 空白管吸光度 (2) 按标准曲线法查表 : 标准曲线的制作 : 取 1mmol/L GSH 标准溶液 0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml 分别置于 10ml 容量瓶中, 各加 入 GSH 标准溶剂应用液至 10ml, 即得到 0,20,40,60,80,100u mol/l 的 GSH 标准液系列, 按操作表 操作, 空白管调零,420nm 处,1cm 光径显色, 以浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标, 做标准曲线, 将测定管 的吸光度查曲线上相对应的浓度 四. 注意事项 1 血液中的 GSH 几乎全部存在于红细胞内, 可以用每升全血中 GSH 的克数来表示, 也可用每克 Hb 中 GSH 的含量来表示 ; 2 计算时应用消光系数, 故比色计要校正波长 用标准管计算较方便 准确 ; 3 吸取上清时, 最好用带刻度的 5ml 滴管, 或者用移液器, 避开表面的一层薄膜, 插到上清液中吸取 2ml 做显色反应 ; 4 最好每批试验做 2 个标准管 空白管, 以减少操作误差

3 样本前处理 : 附录 I 全血中 GSH 的测定 1:9 溶血液的制备 : 取 0.1ml 肝素抗凝全血加蒸馏水 0.9ml, 充分混匀, 直至透亮为止 操作步骤 : 上清液制备 : 取 1:9 的溶血液 0.5ml, 加试剂一 2ml 混匀, 转 / 分离心 10 分钟, 取上清液 1ml 进行显色反应 显色反应 : 20u mol/l GSH 标准 (ml) 1.0 计算公式及举例 : 1 计算公式 : 测定管吸光度 空白管吸光度全血中 GSH 含量 ( ggsh/l) = 标准管浓度 ( 20µ GSH分子量 ( 307) 稀释倍数标准管吸光度 空白管吸光度 计算举例 : 取某人 0.1ml 抗凝血全血按操作步骤进行 GSH 含量检测, 测得测定管吸光度为 0.149, 标准管吸光度为 0.116, 空白管吸光度为 0.011, 同时测得全血血红蛋白为 132Hb/L, 则计算结果为 : 全血中 GSH 含量 ( ggsh/l )= =0.403gGSH/L( 每升全血中含 GSH0.403 克 ) 全血中 GSH 含量 ( ggsh/ghb)= =3.057mgGSH/gHb( 每克血红蛋白中含 GSH3.057 毫克 )

4 附录 Ⅱ 血浆中 GSH 的测定 样本前处理 : 直接取原液检测 操作步骤 : 上清液制备 : 取血清 0.5ml, 加试剂一应用液 2ml 混匀, 转 / 分离心 10 分钟, 取 上清液 1ml 进行显色反应 显色反应 : 20u mol/l GSH 标准 1.0 (ml) 计算公式及举例 : 1 计算公式 : 测定管吸光度 空白管吸光度血清 ( 浆 ) 中 GSH 含量 ( mggsh/l) = 标准管浓度 ( 20µ GSH分子量 ( 307) 样本测试前稀释倍数标准管吸光度 空白管吸光度 2 计算公式 : 取某抗凝血浆 0.5ml 按操作步骤进行 GSH 含量检测, 测得测定管吸光度为 0.027, 标准管吸光度为 0.117, 空白管吸光度为 0.016, 则计算结果为 : 全血中 GSH含量 ( ggsh/l )= =3.343mgGSH/L

5 附录 Ⅲ 组织中 GSH 的测定 样本前处理 : 组织制备匀浆请参照实验方法学 操作步骤 : 上清液制备 : 取 10% 匀浆上清 0.5ml, 加试剂一应用液 2ml 混匀, 转 / 分离心 10 分钟, 取上清液 1ml 进行显色反应 显色反应 : 20u mol/l GSH 标准 (ml) 1.0 计算公式及举例 : 测定管吸光度 空白管吸光度组织中 GSH 含量 ( mggsh/gprot ) = 标准管浓度 ( 20µ GSH分子量 ( 307) 待测样品匀浆蛋白含量标准管吸光度 空白管吸光度 2 计算公式 : 取 10% 小鼠肝匀浆 0.5ml 按操作步骤进行 GSH 含量检测, 测得测定管吸光度为 0.123, 标准管吸光度为 0.117, 空白管吸光度为 0.016, 同时测得 10% 小鼠肝匀浆蛋白含量为 gprot/L 则计算结果 组织中 GSH 含量 ( mggsh/gprot)= =2.889mgGSH/prot

6 凯基相关产品 ( 详见凯基网站 细胞株 细胞提取物及细胞培养产品 人类肿瘤细胞株 动物肿瘤细胞株正常细胞株肿瘤耐药细胞株 细胞提取物 (RNA/DNA/ 蛋白 ) 细胞培养相关产品 细胞凋亡 一 细胞凋亡研究试剂盒 Annexin V-FITC/ EGFP/PE 细胞凋亡检测试剂盒 TUNEL 凋亡原位检测系列试剂盒 Caspase( ) 系列细胞凋亡检测试剂盒 线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1) TRAP-PCR 端粒酶活性检测试剂盒 DNA Ladder 检测试剂盒 二 细胞凋亡相关抗体 三 凋亡诱导剂 抑制剂 四 氧化应激损伤检测试剂盒 五 细胞凋亡研究辅助试剂 细胞增殖 / 毒性 / 活力与细胞周期 凯基细胞周期检测试剂盒 MTT XTT WST-1 CCK-8 等系列细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 细胞染色产品 活细胞 / 凋亡细胞 / 坏死细胞鉴别试剂盒 (AO/EB 法. 荧光显微镜 ) 凯基细胞凋亡形态学检测试剂盒 罗丹明 123 DAPI PI 7-AAD Hoechst EB 吖啶橙染色试剂盒 亚细胞组分制备 细胞核 线粒体制备试剂盒 细胞悬液制备试剂盒 ( 组织消化试剂盒 )

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