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辰梅
5 years ago
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1 谷胱甘肽 - 过氧化物酶 (GSH-PX) 检测试剂盒产品组成 : 试剂编号名称数量及保存条件 1 贮备液 2ml/1 瓶 ;4 保存 6 个月 2 甲粉 1 瓶乙液 50ml/1 瓶 ;4 保存 6 个月 3 粉剂 1 瓶 4 粉剂 1 瓶 ; 4 避光保存 5 粉剂 4 支 ; 4 避光保存 6 GSH 标准品粉剂 3.07mg;4 支,4 避光保存 7 GSH 标准品溶剂贮备液 10ml,1 瓶 ;4 保存储存条件 : 2-8 避光保存有效期 : 六个月注意事项 : 本试剂盒仅供科学研究使用, 不可用于诊断或治疗螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心, 将盖和管内壁上的液体离心至管底, 避免开盖时试剂损失禁止与其他品牌的试剂混用, 否则会影响使用效果样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果最好使用一次性吸头管瓶或玻璃器皿, 可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂产品简介 : 谷胱甘肽过氧化物酶 (Glutathione peroxidase,gsh-px) 是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶它特异的催化还原型谷胱甘肽 (GSH) 对过氧化氢的还原反应, 可以起到保护细胞膜结构和功能的完整的作用 GSH-PX 的活性中心是硒半胱氨酸, 硒是 GSH-PX 的必须部分, 每克分子酶含 4 克原子硒测定 GSH-PX 的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX) 可以促进过氧化氢还原型谷胱甘肽 (GSH) 反应生成水及氧化型谷胱甘肽 (GSSG), 谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示, 测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗, 则可求出酶的活力 GSH-PX 的活力以催化 GSH 的反应速度来表示, 由于这二个底物在没有酶的条件下, 也能进行氧化还原反应 ( 称非酶促反应 ), 所以最后计算次酶活力时必须扣除非酶促反应所

2 引起的 GSH 减少的部分 GSH 量的测定 :GSH 的二硫代二硝基苯甲酸作用生成 5- 硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色, 在 412nm 处测其吸光度即可计算出 GSH 的量试剂盒以外自备试剂和仪器水移液器及吸头 412nm 的分光光度计 37 恒温水浴锅台式离心机使用方法 : 使用注意事项 : 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心, 将盖内壁上的液体甩至管底, 避免开盖时液体洒落在正式实验前务必做预实验摸索最佳取样浓度溶血液在室温可保存 1 小时, 稀释后不超过 1 小时测试血样要新鲜肝素抗凝后放冰箱不超过 48 小时试剂一的瓶子要洗干净, 应用液现用现配 GSH 标准品要现用现配 37 水浴反应时间 5 分钟要准确试剂的配制和保存试剂编号应用液的配制保存条件 1 使用时取 0.1ml 加蒸馏水至 10ml 即 100 倍稀 4 释配成应用液现用现配 2 甲粉 : 加的热蒸馏水 170ml, 充分完全溶解乙液 :50ml 试剂二应用液的配制 : 将已配好的甲乙两种混 4 或室温保存合此为过饱和溶液, 室温静置冷却后, 如有结晶, 则取上清进行实验 3 加蒸馏水 200ml 溶解 4 加蒸馏水 50ml 溶解 4 避光保存 5 每支加蒸馏水 10ml 溶解 4 避光保存 ; 保存五天 7 标准品溶剂应用液 :GSH 标准品溶剂贮备液 : 双蒸水 =1:9 即 10 倍稀释配成应用液 ; 按所需量现用现配 4 保存 GSH 应用液的配制 : 1mmol/L GSH 溶液 100u mol/l GSH 溶液 GSH 的分子量为 307, 每次测定前将 1 支 3.07mg 的 GSH 标准品粉剂加到 GSH 标准品的溶剂应用液中, 定容至 10ml 即为 1mmol/L 的 GSH 溶液, 现用现配取 1mmol/L GSH 溶液 2ml 加 GSH 标准品溶剂应用液 18ml

3 20umol/L GSH 标准溶液定容至 20ml, 作标准曲线用, 若不做标准曲线可以不配取 1mmol/L GSH 溶液 0.2ml 加 GSH 标准品溶剂应用液定容至 10ml 即为 20umol/L 的 GSH 标准溶液全血 GSH-PX 活力测定使用注意事项 : 空白管标准管一般只需做 1-2 只最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同, 其 GSH-PX 活力不一根据酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 各种测定样品取样量及其取样浓度不一样, 在每次测定一种新的样品前最好选择一个最佳取样量及最佳取样浓度最佳取样浓度的摸索测试前先做预实验以确定最佳取样浓度 : 当第一次使用本试剂盒测定某一新的样品时, 先做三支不同浓度的测试管例如测全血时, 分别取用 1:24 1:49 1:99 稀释的溶血液 200ul 进行预实验, 然后进行计算 : 抑制率 =( 对照管 OD- 测定管 OD)/ 对照管 OD *100%, 结果应该在 15%-55% 之间, 然后取抑制率在 45% 或 50% 左右的一管作为最佳取样浓度酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 若百分抑制率大于 60% 时, 则需要将样品稀释后在测定若百分抑制率小于 20% 时, 则需要浓度更大的样品测定 1 样本处理溶血液配制 : ⑴ 取肝素抗凝全血 20ul, 用蒸馏水稀释至 1ml, 配成 1:49 的溶血液 ; 鼠血 10ul, 用蒸馏水稀释至 1ml, 配成 1:99 的溶血液 ⑵ 充分混匀, 放置 5 分钟直至溶血液呈完全透明状, 方可进行检测 ⑶ 配好的溶血液中 GSH-PX 活力只能保持 45 分钟 -60 分钟, 室温较低时可延长至 120 分钟抗凝全血可在 2-8 保存 2-3 天注 : 测溶血液中 GSH-PX 含量要注意样品测试前红细胞一定要充分溶血 2 GSH-PX 酶活力测定 : ⑴ 酶促反应 : 按下列配方和步骤进行对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) 1mmol/L GSH(ml) 溶血液 (ml) 0.2 试剂一 (ml)(37 预热 ) 试剂二 (ml)

4 溶血液 (ml) 0.2 混匀 4000rpm 离心 10 分钟, 取上清 1ml 做显色反应 ⑵ 显色反应 : 按下列配方和步骤进行 (ml) 空白管标准管对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) GSH 标准品溶剂应用液 1 20umol/L GSH 标准液 1 上清液 1 1 试剂三试剂四试剂五混匀室温静置 15 分钟,412nm 处,1cm 光径比色杯, 蒸馏水调零, 测各 OD 值 3 全血中 GSH-PX 的活力的计算 : ⑴ 定义 : 每 4ul 全血在 37 反应 5 分钟, 扣除非酶促反应的作用, 使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为一个酶活力单位 ⑵ 计算 : 非酶管 OD- 酶管 OD 1+X GSH-PX 酶活力 = * 标准液浓度 (20umol/L) * 稀释倍数 (5* ) 标准管 OD- 空白管 OD 1+49 注 : 从酶促反应表中反应液 0.5ml 加试剂二 2ml, 为 5 倍稀释, 所以乘 5. X 为全血稀释比例, 例如 1:99 稀释,X 为 : 溶血液为 1:49 稀释时, 取 0.2ml 检测即等同于取样量为 4ul 的全血计算举例 : A: 取 1:49 溶血液 0.2ml 进行测定, 测得非酶管 OD 值 0.463, 酶管 OD 值为 0.228, 标准管 OD 值为 0.165, 空白管 OD 值 0.041, 酶活力 =( )/ ( ) X 20 X 5 X 50/50 = 酶活力单位 B: 取 1:149 溶血液 0.2ml 进行测定, 测得非酶管 OD 值 0.451, 酶管 OD 值为 0.205, 标准管 OD 值为 0.165, 空白管 OD 值 0.041, 酶活力 =( )/ ( ) X 20 X 5 X 150/50 = 酶活力单位组织线粒体细胞膜 GSH-PX 活力测定使用注意事项 : 空白管标准管一般只需做 1-2 只最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同, 其 GSH-PX 活力不一根据酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 各种测定样品取样量及其取样浓度不一样, 在每次测定一种新的样品前最好选择一个最佳取样量及最佳取样浓度最佳取样浓度的摸索测试前先做预实验以确定最佳取样浓度 : 当第一次使用本试剂盒测定某一新的样品时, 先做三支不同浓度的测试管例如测组织匀浆时, 分

5 别取用 10% 5% 1% 的匀浆液 200ul 进行预实验, 然后进行计算 : 抑制率 =( 对照管 OD- 测定管 OD)/ 对照管 OD *100%, 结果应该在 15%-55% 之间, 然后取抑制率在 45% 或 50% 左右的一管作为最佳取样浓度酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 若百分抑制率大于 60% 时, 则需要将样品稀释后在测定若百分抑制率小于 20% 时, 则需要浓度更大的样品测定 1 样本处理 10% 组织匀浆的制备 : ⑴ 取组织块 200mg-1g, 用冷生理盐水漂洗, 除去血液, 滤纸拭干, 称重, 放入 5-10ml 的小烧杯内 ⑵ 用加入 9 倍重量的预冷的匀浆介质 (ph7.4,0.01mol/l 蔗糖,0.01mol/L Tris-HCl,0.0001mol/L EDTA 溶液 ) 或生理盐水 ⑶ 用玻璃匀浆管或组织匀浆机匀浆 ⑷ 将制备好的 10% 匀浆 3000rpm 离心 15 分钟, 取上清线粒体的制备 : 取 10% 组织匀浆 5-10ml, 以 rpm 离心 10 分钟, 取上清,10000rpm 离心 15 分钟, 沉淀为线粒体 2 GSH-PX 酶活力测定 : ⑴ 酶促反应 : 按下列配方和步骤进行对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) 1mmol/L GSH(ml) 样本 (ml) 0.2 试剂一 (ml)(37 预热 ) 试剂二 (ml) 2 2 样本 (ml) 0.2 混匀 4000rpm 离心 10 分钟, 取上清 1ml 做显色反应 ⑵ 显色反应 : 按下列配方和步骤进行 (ml) 空白管标准管对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) GSH 标准品溶剂应用液 1 20umol/L GSH 标准液

6 上清液 1 1 试剂三试剂四试剂五混匀室温静置 15 分钟,412nm 处,1cm 光径比色杯, 蒸馏水调零, 测各 OD 值 3 组织中 GSH-PX 的活力的计算 : ⑴ 定义 : 每 mg 蛋白质, 扣除非酶促反应的作用, 使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为一个酶活力单位 ⑵ 计算 : 非酶管 OD- 酶管 OD GSH-PX 酶活力 = * 标准液浓度 (20umol/L)* 稀释倍数 (5) ( 取样量 * 蛋白浓度 ) 标准管 OD- 空白管 OD 注 : 从酶促反应表中反应液 0.5ml 加试剂二 2ml, 为 5 倍稀释, 所以乘 5. 计算举例 : 取 0.25% 小鼠肝组织匀浆 0.2ml 进行测定, 测得非酶管 OD 值 0.480, 酶管 OD 值为 0.172, 标准管 OD 值为 0.163, 空白管 OD 值 0.041,1% 匀浆蛋白浓度 0.910mg/ml, 酶活力 =( )/ ( ) X 20 X 5 ( *0.2)= 酶活力单位测酶活力用 0.25% 匀浆, 蛋白定量用 1% 匀浆, 所以除以 4. 血清血浆 GSH-PX 活力测定使用注意事项 : 空白管标准管一般只需做 1-2 只最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同, 其 GSH-PX 活力不一根据酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 各种测定样品取样量及其取样浓度不一样, 在每次测定一种新的样品前最好选择一个最佳取样量及最佳取样浓度最佳取样浓度的摸索测试前先做预实验以确定最佳取样浓度 : 当第一次使用本试剂盒测定某一新的样品时, 先做三支不同浓度的测试管例如测血清时, 分别取用血清和生理盐水 1:1 1:4 1: 9 1:19 稀释的稀释血清 100ul 进行预实验, 然后进行计算 : 抑制率 =( 对照管 OD- 测定管 OD)/ 对照管 OD *100%, 结果应该在 15%-55% 之间, 然后取抑制率在 45% 或 50% 左右的一管作为最佳取样浓度酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系, 若百分抑制率大于 60% 时, 则需要将样品稀释后在测定若百分抑制率小于 20% 时, 则需要浓度更大的样品测定 1 GSH-PX 酶活力测定 : ⑴ 酶促反应 : 按下列配方和步骤进行对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) 1mmol/L GSH(ml) 血清 (ml)

7 试剂一 (ml)(37 预热 ) 试剂二 (ml) 2 2 血清 (ml) 0.1 混匀 4000rpm 离心 10 分钟, 取上清 1ml 做显色反应 ⑵ 显色反应 : 按下列配方和步骤进行 (ml) 空白管标准管对照管 ( 非酶管 ) 测试管 ( 酶管 ) GSH 标准品溶剂应用液 1 20umol/L GSH 标准液 1 上清液 1 1 试剂三试剂四试剂五混匀室温静置 15 分钟,412nm 处,1cm 光径比色杯, 蒸馏水调零, 测各 OD 值 2 血清中 GSH-PX 的活力的计算 : ⑴ 定义 : 每 0.1ml 血清在 37 反应 5 分钟, 扣除非酶促反应的作用, 使反应体系中 GSH 浓度降低 1umol/L 为一个酶活力单位 ⑵ 计算 : 非酶管 OD- 酶管 OD GSH-PX 酶活力 = * 标准液浓度 (20umol/L)* 稀释倍数 (6)* 测试前稀释倍数标准管 OD- 空白管 OD 注 : 从酶促反应表中反应液 0.4ml 加试剂二 2ml, 为 6 倍稀释, 所以乘 6. 计算举例 : 取生理盐水 1:4 稀释的血清 0.1ml 进行测定, 测得非酶管 OD 值 0.475, 酶管 OD 值为 0.293, 标准管 OD 值为 0.165, 空白管 OD 值 0.041, 酶活力 =( )/ ( ) X 20 X 6 X 5 = 酶活力单位相关产品 : 产品产品号产品产品号 Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒细胞周期检测试剂盒

8 Annexin V-EGFP/PI 凋亡试剂盒线粒体膜电位试剂盒 (JC-1) 细胞增殖及毒性检测试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒细胞存活率检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Hoechst33342/PI 双染试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 AO/EB 双染试剂盒细胞凋亡形态学检测试剂盒 DAPI 染色试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒 MTS 细胞增殖与毒性试剂盒

Annexin V-EGFP凋亡检测试剂盒

Annexin V-EGFP凋亡检测试剂盒凯基谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX) 测试盒说明书修改日期 :207.0.8 Cat number:kgt04 Store at 4 for for 6 months For Research Use Only( 科研专用 ) 一. 试剂盒说明谷胱甘肽过氧化物酶 (Glutathione peroxidase,gsh-px) 是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶它特异的催化还原型谷胱甘肽