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煜跻管
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1 肾虚型类风湿关节炎与 0 淋巴细胞人免疫球蛋白 1 ( 段受体的相关性研究廖黔华郭林凯罗十之赖若谷刘晓玲陈光星摘要目的探索 0 淋巴细胞 0 细胞人免疫球蛋白 1 ( 段受体 () " 的表达与肾虚型类风湿关节炎, ", 的相关性方法患者例其中肾虚型例非肾虚型 ' 例采用流式细胞术检测外周血幼稚 0 细胞记忆 0 细胞和前浆细胞表达的水平分析压痛关节数肿胀关节数血沉类风湿因子和病情活动指数评分 - & 与 0 细胞分布及表达水平的相关性另设健康志愿者对照名结果肾虚型外周血记忆 0 细胞及前浆细胞表达分别为 2 & 2 及 2 '2 比健康对照组 2 2 及 2 &2 显著下调 3 4 非肾虚型记忆 0 细胞表达 '2 2 比健康对照组明显下调 3 4 肾虚型前浆细胞表达明显低于非肾虚组 2 ' 2 差异有统计学意义细胞亚群表达与压痛关节数肿胀关节数和 - & 评分无相关性结论肾虚型患者 0 细胞免疫失耐受可能与记忆 0 细胞及前浆细胞表达下调密切相关肾虚型可能存在基因的异常从而导致自身免疫失耐受关键词类风湿关节炎肾虚型 0 淋巴细胞 ( 段受体 " # "5 (, "5, * "5 "6 "5 0 ## 5, ", 3 5 "6, 5-6 5(7 75 " , 1:. 8 5; 8:.,, 8 ") 8: " # 5) 5 % 1 5)* 5) - 5 "6, "#")7 66 # " # "6 1 5)," :5 7 "6, ),", 5 0. " 7, (" # "5 5, * "5 "6 () " "5 0 ( ## 5, ", 5 "6, 5 6 5(7 75 " - $,", 5 5(# 5) "6-5 ' "6 5"5 - $, * "5 # # "6 "5 5 0 ( ## " 7 0 ( ## 5 # # 5,, # #"" 7 6#" (7 " 7$, 5 "6 5 " 5 5 "6 "## 5 " 5 7, "(7 5 "5, " 6" 5 7 (" - &, (" # "5 5, "5 "6 0 ( ## 5, * "5 # # " #7 $ 0 5",, #,7 "# 5 (, ("5 "# ) " $ #, * "5 # # "6 2 & 2 "5 " 7 0 ( ## 5 2 '2 "5 # # 5 5 "6 - )5 65 #7 " 5 ) #, 5 (",," "6, ("5 "# ) " &2 3 4 $, * "5 # # "6 "5 " 7 0 ( ## "6 5 "6 5"5 - " 5 ) # " " " #7, 5 (",, "6, ("5 "# ) " ' $, * "5 # # "6 "5 # # " " #7 #" 5 5 "6 -, "6 5"5-2 ' 23 4 $, * "5 # # "6 "5 " 7 0 ( ## 5" (" #, 5 "6 5 " 5 5 "6 "## 5 " 5 " - &$ "5(# "5, 6 5"#")# "# 5( "6 0 ( ## 5 5 "6 - ), (#" #7 (" #, 基金项目国家自然科学基金资助项目 %"&' 教育部新世纪优秀人才资助项目 %"$% & 作者单位广州中医药大学第一附属医院风湿病科广州通讯作者陈光星 #' ' ' #()*+," #$(" -. ' /

2 中国中西医结合杂志年月第卷第期!"#$ %" " 5 ) # "5 "6 "5 " 7 0 ( ## 5 # # $, ), * ) 5 ( 5" # 7 "6 ) "6 -, 5 5) #" "6 " 5 7 "# 5( $ < =. -, ",, 5 6 5(7 0 ( ## 类风湿关节炎, ", 是一种原因不明的自身免疫性疾病以慢性对称性进行性多关节炎为主要特点关节滑膜的慢性炎症增生形成血管翳侵犯关节软骨软骨下骨韧带和肌腱等造成关节软骨骨和关节囊破坏最终导致关节畸形和功能丧失是造成人类丧失劳动力和致残的主要疾病之一随着 0 淋巴细胞 0 细胞清除疗法在的治疗中取得成功 0 细胞自身免疫失耐受在的发病机制中的作用越来越受到关注 0 细胞是由骨髓内多能造血干细胞分化而来其分化及发育过程主要在骨髓中完成肾主骨生髓是中医藏象学说的重要理论历代医家认为肾虚是发病的重要原因因此我们推测患者 0 细胞免疫失耐受可能与肾虚相关但其机制仍不清楚人免疫球蛋白 1 ( 段受体是表达于 0 细胞表面的抑制性受体其胞内区免疫受体酪氨酸抑制基序 5" " 7 " 5 5, " 7 " 6 磷酸化可诱导产生 0 细胞活化抑制信号限制 0 细胞的活化及增殖近年来研究表明患者 0 细胞功能障碍与低表达密切相关而且 > 基因的变化是关节破坏重要的因素基于以上背景本研究拟探索 0 细胞的表达与肾虚型的相关性及其可能的机制为进一步阐明肾虚型的免疫学机制提供临床依据资料与方法诊断标准所有患者均符合美国风湿病协会年分类标准肾虚参考全国中西医结合虚证与老年病研究专业委员会 & 年制订的 ' 中医虚证辨证参考标准腰脊酸痛外伤性除外胫酸膝软或足跟痛耳鸣耳聋发脱或齿摇尿后有余沥或失禁性功能减退不孕不育上述项具备项即诊断为肾虚证临床资料例患者来自年 ' 月年月广州中医药大学第一附属医院风湿病科门诊及病房男性 ' 例女性例平均年龄 && 岁名健康对照者来自同期广州中医药大学第一附属医院健康体检志愿者男性名女性名平均年龄 ' 岁纳入研究的例患者中按中医辨证 ' 例为非肾虚组例为肾虚组两组年龄比较差异有统计学意义 3 4 两组在病程压痛关节数肿胀关节数血沉类风湿因子和病情活动指数评分 - & 方面比较差异无统计学意义 3 > 见表表非肾虚组及肾虚组患者临床资料比较 * 项目非肾虚型组 ' 例肾虚型组例年龄岁 & & 病程年 & & 压痛关节数个 ' ' 肿胀关节数个 ' ' ' & /, & :/8 ' & - & 评分分 & & & & 注与非肾虚型组比较 3 4 主要试剂与仪器鼠抗人单克隆抗体美国 0- 公司二抗美国 0 " 5( 公司鼠抗人 -' 美国 0- 公司一抗美国 1 5 * 公司红细胞裂解液美国 0 (; 5 " # 公司 2 多聚甲醛联科生物技术有限公司 # 流式细胞仪美国 0- 公司 8 台式低速离心机湖南湘仪实验室仪器开发有限公司观察指标观察各组外周血 0 细胞亚群比例各亚群 0 细胞表达水平一般资料如性别年龄病程 - & 评分包括压痛关节数 & 肿胀关节数 & 类风湿因子和最近一周患者对疾病活动性的综合评价! 评分流式细胞术检测方法参考文献 & 取 - 抗凝全血 8 分别加入 - 抗体 -' 抗体一抗混匀室温下避光反应 5 加入 8 红细胞裂解液混匀避光反应 5 30 洗涤后加入二抗混匀避光反应 530 洗涤后加入 8 30 上流式细胞仪分析统计学方法采用 3 统计软件包进行数据分析定量资料均数以 * 表示对各组数据进行正态分布检验和方差齐性检验组间的均数差异采用单因素方差分析法进行比较方差齐性检验

3 示数据方差齐性时以 8 - 方法检验方差不齐时以 - 55 方法检验 3 4 为差异有统计学意义频数资料采用非参数检验进行比较 3 4 为差异有统计学意义相关性分析采用线性回归逐步回归法分析以 3 "5 相关系数度量变量之间的相关性当认为两个变量正相关当认为两个变量负相关且 3 4 时值有统计学意义最后以逐步回归法检验自变量对因变量有无显著性影响文中示意图使用 1, 3 3 制作结果组外周血 0 细胞亚群比例及各亚群 0 细胞表达水平比较图肾虚型患者外周血幼稚 0 细胞表达为 & 2 '2 非肾虚型组为 2 2 健康对照组为 &&2 2 组间均数比较差异无统计学意义 3 > 肾虚型患者外周血记忆 0 细胞表达为 2 & 2 非肾虚型组为 '2 2 健康对照组为 2 2 肾虚型组非肾虚型组与健康对照组比较差异均有统计学意义 3? 3? 肾虚型组及非肾虚型组比较差异无统计学意义 3? & 肾虚型患者外周血前浆细胞表达为 2 '2 非肾虚型组为 2 ' 2 健康对照组为 2 &2 肾虚型较健康对照组表达明显减少 3 4 肾虚型组及非肾虚型组比较差异无统计学意义 3? 各组在外周血 0 细胞个亚群表达水平比较图健康对照组及非肾虚型组外周血中 0 细胞亚群的表达水平比较差异无统计学意义 3 > 在肾虚型患者记忆 0 细胞及前浆细胞的表达水平均较幼稚 0 细胞显著下调 3 4 患者外周血 0 细胞亚群比例及其表达水平与临床资料的线性回归分析表压痛关节数肿胀关节数 - & 评分与 0 细胞亚群比例及表达水平之间均无相关性讨论属中医学痹证范畴其临床表现与中医古籍所记载的历节病白虎历节骨痹等相似中医学认为肾为先天之本主骨生髓中医经典理论和历代医家认为肾虚是引起的主要内因金匮要略中风历节病篇曰寸口脉沉而弱沉即主骨弱即主筋沉即为肾弱即为肝明确指出肝肾不足是注点阵中水平线代表平均值为健康对照组为肾虚型组为非肾虚型组图各组 0 细胞亚群的表达水平注点阵中水平线代表平均值为幼稚 0 细胞为记忆 0 细胞为前浆细胞图各组在外周血 0 细胞个亚群表达水平比较

4 中国中西医结合杂志年月第卷第期!"#$ %" 表患者 0 细胞亚群分布及表达水平与临床表现相关性分析临床表现幼稚 0 细胞记忆 0 细胞前浆细胞幼稚 0 细胞的记忆 0 细胞的前浆细胞的压痛关节数 & '' ' ' 3 值 ' ' 肿胀关节数 3 值 ' ' ' 3 值 & ' ' 3 值 & & - & 评分 ' & 3 值 ' ' ' ' 注为 3 "5 相关系数 3 为相关系数单侧检验的 3 值本病发生的主要内因王肯堂曰痹病有风有湿有寒有热皆标也肾虚其本也先天禀赋不足房事过度或产后失血而致肾虚一方面正气不足不能抵御外邪风寒湿邪侵入人体痹阻气血另一方面肾虚可引起主骨生髓功能的失调血损津亏筋骨失养关节结构破坏而致残既然肾虚是发生的主要内因众多研究也表明等自身免疫性疾病的患者中前 0 细胞在骨髓的发育过程中就已经存在大量表达自身抗体的情况那么肾虚与 0 细胞免疫耐受失调是否存在内在联系理论上 0 细胞来源于骨髓的干细胞并在骨髓中发育分化因此与肾的关系密切肾虚会导致 0 细胞的发育异常基于此思路我们对例患者研究发现肾虚型患者 & 例出现抗核抗体 % 阳性和高滴度的风险分别是非肾虚型的倍和 ' 倍数据另文发表提示肾虚与 0 细胞自身免疫耐受缺陷密切相关印证了我们的假设但其发生和发展的确切机制仍不明了有待于进一步研究是 0 细胞表面的抑制性受体可抑制 0 细胞过度活化及增殖该受体在骨髓中即可通过克隆排除 (#"5 # # "5 或克隆无反应性 (#"5 # 5 )7 以及通过受体编辑 " 5) 使自身免疫性 0 细胞恢复正常此外在外周淋巴组织亦可继续通过克隆排除克隆无反应性及克隆忽视 (#"5 # )5" 5( 或滤泡排除 6"### * (# "5 诱导凋亡等途径调节 0 细胞功能近年来多项研究表明在及系统性红斑狼疮等自身免疫疾病表达下调 & #5 - 等观察到患者的外周血中记忆 0 细胞及前浆细胞的表达水平降低而且患者血清中抗环瓜氨酸肽抗体抗 3 滴度低的患者高表达提示外周血 0 细胞表达下调后 0 细胞过度活化分泌大量的自身抗体抗 3 因此作为 0 细胞活化的负向调节分子在自身免疫性疾病中的作用越来越受到重视本研究参考 0",5," 等的方法以 -' 将外周血 0 细胞分为个不同亚群 - ' 为幼稚 0 细胞 - 为记忆 0 细胞 - ', ), 为前浆细胞以流式细胞术分析外周血 0 细胞个亚群的表达水平本研究的结果显示在患者的记忆 0 细胞的表达水平均显著下调该结果与相关文献类似而与以往报道不同的是本研究增加了中医肾虚证型研究的内容在肾虚型记忆 0 细胞的下调更为明显同时肾虚型患者前浆细胞表达明显低于非肾虚型在 0 细胞亚群中肾虚型记忆 0 细胞及前浆细胞表达率比幼稚 0 细胞显著下调由于肾虚型患者出现 % 阳性和高滴度的机率明显增高在诱导 0 细胞免疫耐受方面起着重要作用肾虚型记忆 0 细胞及前浆细胞表达率比幼稚 0 细胞显著下调提示肾虚型 0 细胞免疫失耐受可能与记忆 0 细胞及前浆细胞表达下调密切相关此外本研究还对与病情活动的相关性进行了研究目前国内外对的活动性多采用 - & 进行评价包括 & 个关节压痛及肿胀程度以及患者对自己健康程度的评估可以客观反映患者病情的活动程度研究中未发现外周血 0 细胞的表达水平与压痛关节数肿胀关节数以及 - & 评分等相关提示与病情的近期活动程度无相关性

5 综上所述我们推测肾虚型 0 细胞免疫失耐受可能与记忆 0 细胞及前浆细胞表达下调密切相关肾虚型可能存在基因的异常从而导致自身免疫失耐受本研究结果为进一步深入研究肾虚型发生和发展的免疫学机制提供了新的临床线索参考文献中华医学会风湿病学分会 $ 类风湿关节炎诊断及治疗指南中华风湿病学杂志 5 ; 8 (, 5 ; #$ 66(7 "6 0 ( ## ), 7, * 5 5,, ", % 5)# ' & %,5 (,!$ () " ) # " "6 5 "5 % 5"# & & ' 3 ";" ( <," 5 3$ -" 5 ) # "5 "6 ( 5 (" # 5 " "5 0 ( ## 5, ", # 5 5"# ' ; 5; 0 5 5; #$, 6 5( "5 # 5 "6, 5, " 7 () ( " -0 "(,, "6 "#") ( " 5 ) 5 5 ( ( ## 6 5( "5 5, ",,, && &' % ") #, - # 5 #, 5 "## ) "6, "#")7/ " 5 8 ) ) 5, (# 6 "5 ( 6", ",,," "#")# ",, & ' 沈自尹王文健 $ 中医虚证参考标准中西医结合杂志 & & & #5-5. )" #$ 0 ( ## 6 ", ", 5," " 5 # "5 5, * "5 "6 -& 5, (, " # 7 5 " 5 ( " 6", 7,, & 焦树德 $ 类风湿关节炎从痹论治江苏中医药 & 张浩吕爱平 $ 试论肾虚痹证类风湿性关节炎发育生物学基础中国中医基础医学杂志 & # %) = " ## #$ #7 0 ( ## "# 5( 5 5,, ", * ' "5 0", #(, $, (; " 5 5 #7,"(7 #" 5 5 " 5 % 5"# ; 1 ) #7 3 ; A #$ 3,7 "#") ( # ) # "5 "6 5, " 7 " ( 5 "5 " 7 0 ( ## # (; 5) "# & & 0",5," 0 " ) 5 0," 5 #$ 0 0 (# 6 "5 "6, # #"" 0 ( ## # ( ( # 5) ) 5 # ( 5 6" 5 ( ## 5, #,7 5 # 5 5( 5, 0 ( ## " # "5 5 5, 7 ) 5 75 " 5"# ' ' &$ 收稿 & ' 修回 &

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