西北农林科技大学学报自然科学版第卷 5 " "! # " ;.25 &$ )! "" "!" " "" ## "# &$ ") ; $5 ); 2 # ); $ "= ; " - " )" # ;.25! # # " " ")! # / )" ) ) #! 55 9 ;"# )# ; ;" +

Size: px

Start display at page:

Download "西北农林科技大学学报自然科学版第卷 5 " "! # " ;.25 &$ )! "" "!" " "" ## "# &$ ") ; $5 ); 2 # ); $ "= ; " - " )" # ;.25! # # " " ")! # / )" ) ) #! 55 9 ;"# )# ; ;" +"

于皮
5 years ago
Views:

1 第卷第期年月西北农林科技大学学报自然科学版!"#$%&' " # () * + 网络出版时间,--,.// 01,! 网络出版地址 # " #)".,,./ 秦川肉牛及基因与肉质性状的关联性余横伟桂林生胡言昝林森西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌, 国家肉牛改良中心陕西杨凌, 陕西省肉牛工程技术研究中心陕西杨凌, 摘要目的探索脂肪酸结合蛋白 & ): ) ; " #&$ 及脂肪酸结合蛋白 &$ 基因对秦川牛肉用新品系肉用性状的影响为秦川肉牛的选育提供理论基础方法随机选择月龄健康的秦川肉牛 /, 头尾静脉采血头提取血液 0$ 23 扩增及基因检测其单核苷酸多态性位点并分析位点基因型和单倍型组合对肉牛肉用性状背膘厚眼肌面积肌间脂肪含量的影响结果测序发现在基因第个内含子上检测出个位点 ;.25 在基因第个内含子上检测出个位点 ; $5 和 ; 2 在第外显子上检测出个位点 ; $ 基因 ;.25 位点不同基因型的肌内脂肪含量差异显著 /55 基因型显著高于 25 和 22 基因型对 &$ 基因而言 ; 2 位点上的 22 基因型肉用性状表现较优其眼肌面积极显著高于和 25 基因型肌内脂肪含量显著高于和 2 基因型 /; $ 位点上的 55 基因型的肉用性状较优其背膘厚显著高于 22 和 25 基因型 / 是最优秀的单倍型组合其眼肌面积和肌内脂肪含量分别极显著高于单倍型组合和, 结论及基因与秦川牛肉用新品系肉用性状关联紧密关键词秦川牛肉用新品系基因基因多态性关联分析中图分类号. 文献标志码 $ 文章编号,-.,--,!" # $ ' " ;!" ' #" ; ' 6$ #"! "#$%!&'% $' %"!,! # % % ($ % %$!,! )' $! %$ %* $! "!!,! 1: " " ## ) "" " # );" " # " # < :"" "!" "" ") )": # # : "") ; < :"" " +") $ /,< :"" " " ;" 7 #!" " #" ): )# "#!!" " " ") " " 5 "!""= ")0$ : ) )";" "#!" " "): 23 5 " # );" "#!" " ") )" " # "# ) : ");" "# " #: "## # ) " # " " ) #!" " 9") 3"# 收稿日期,-- 基金项目国家科技支撑计划项目 / $0 国家现代农业产业技术体系建设专项 2$3 - 陕西省科技统筹创新工程计划项目作者简介余横伟..7 男陕西商洛人在读硕士主要从事肉牛养殖与育种研究 (-../,88 通信作者昝林森.7 男陕西扶风人教授博士博士生导师主要从事动物生长发育调控及牛遗传育种与繁殖研究 (- 9 #"

2 西北农林科技大学学报自然科学版第卷 5 " "! # " ;.25 &$ )! "" "!" " "" ## "# &$ ") ; $5 ); 2 # ); $ "= ; " - " )" # ;.25! # # " " ")! # / )" ) ) #! 55 9 ;"# )# ; ;" +& #"! 25;" " )22;" " $; 2 # " ) ) #! 22 9 ;"# ) ;" # ) " # " " )2 ;" "# ; / $; $ - #" ) ) #! 55 9 ;"# ) ;" : "## 22 )25;" "# ; - / $2$-$2$) " ):"" " " $ $-$ $ ' $ ), $ $-5 $ +&! #" ## " : ");" " 2 # # # ;" " ) )# ; # " # < - :"" " < :"" ";" "#;" "# # ## # # 脂肪酸结合蛋白 & ): ) ; " # &$ 又称为心脏型脂肪酸结合蛋白 - &$ 可与血浆长链脂肪酸 ;- ) 2&$ 结合作为机体主要的能量来源 2&$ 维持着心脏的正常功能敲除小鼠的基因会导致其 2&$ 代谢过程发生紊乱在大鼠实验模型中发现血清的水平与大鼠遭电击后的血压显著相关此外在小鼠的心脏舒张过程中基因的缺失能够明显抑制心脏对棕榈酸的吸收和氧化而心肌细胞对葡萄糖的吸收和利用却提高了 > 这说明基因在维持机体内脂肪酸代谢的动态平衡方面发挥着重要的调控作用脂肪酸结合蛋白 &$ 又被称为 $- &$ 同 &$ 一样也是 &$ # 家族的重要成员之一其能够在各种细胞区室如过氧化物酶体线 /- 粒体内质网脂质液滴核内结合脂肪酸和相关化合物基因最早由 ";" 等于. 年在脂肪细胞中检测到与脂肪酸具有高度亲, 和性参与 2&$ 的合成代谢基因在脂肪细胞中的表达受脂肪酸和胰岛素水平的调控以肥胖小鼠为模型敲除基因能导致其胰岛素和血浆葡萄糖水平显著下降且胰岛素. 抗性增强是肥胖相关代谢综合征的关键介质研究表明该蛋白在型糖尿病患者体内的表达水平显著高于正常人导致患者血浆甘油三酯和胆固醇的水平降低这说明胰腺细胞受到保护 - 机体的脂质代谢被改善在 5- 细胞中发现过表达基因可增强线粒体功能进而促进脂肪细胞分化和脂质沉积干扰基因则表现出相反的效果鉴于和基因在机体脂质代谢过程中所发挥的关键作用笔者推测其可以作为候选基因用于畜禽肉用性状的选育研究中因此本研究以和为目标基因检测其单核苷酸多态性分析不同基因型及单倍型组合对秦川牛肉用新品系以下简称秦川肉牛肉用性状的影响以期为秦川肉牛分子育种提供新的理论方法和技术途径材料与方法血样的采集及 0$ 的提取在西北农林科技大学国家肉牛改良中心和陕西省秦川肉牛良繁中心随机选择月龄健康的秦川肉牛 /, 头尾静脉采血头样品采集完毕后置于 7? 保存使用 5 $ ) 0$ 试剂盒北京天根提取血样 0$0$ 质量和浓度分别采用 /> 琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计进行检测和基因的 23 扩增根据 " 公布的牛基因序列基因组 0$ 登录号为 $2 /. 3$ 登录号为 +, 和的基因序列基因组 0$ 登录号为 $2, 3$ 登录号为 +, 利用 " / 软件设计引物表交由上海生工生物工程技术服务有限公司合成 23 反应体系为含有核酸染料的 )5 # +0$ " 的 + =/ )) 1 上游下游引物各模板 0$/ ; 23 反应条件如下./? 预变性 /.? # 退火 # 退火温度见表,?#/ 个循环,? 延

&$52$$22$22$5$$$ $ 3 5$522$ 2$ $$$ 52$ 将扩增的 23 产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行纯化并测序测序结果使用 0$+$ 软件进行对比分析寻找位点秦川肉牛肉用性状指标的测定肉用性状包括背膘厚 & 眼肌面积 ' $ 和肌内脂肪 +& 含量个指标按照桂林生等的检测方法进行测定 / 数据统计与分析根据基因型统计结果计算基因型频率

3 第期余横伟等秦川肉牛及基因与肉质性状的关联性伸? 保存 23 扩增产物用 > 琼脂基因 " " 位点的检测糖凝胶电泳检测表秦川肉牛和基因引物序列信息 5 : " "8 " " " # );" "# < :"" " 引物序列 /AA " #"8 " " &5 52$$ $$225 2$2$5 3$ $ 52$$5 &$$$$55$$2$$ $ $ &$52$$22$22$5$$$ $ 3 5$522$ 2$ $$$ 52$ 将扩增的 23 产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行纯化并测序测序结果使用 0$+$ 软件进行对比分析寻找位点秦川肉牛肉用性状指标的测定肉用性状包括背膘厚 & 眼肌面积 ' $ 和肌内脂肪 +& 含量个指标按照桂林生等的检测方法进行测定 / 数据统计与分析根据基因型统计结果计算基因型频率等位基因频率多态信息含量遗传杂合度, 和有效等位基因数 # 并进行 ) -B" :" ; 平衡适应性检验 B( 同时使用 $ 1*- (B 软件对基因的位点进行连锁不平衡分析及单倍型分析采用软件中的 + 模型分别对和基因突变位点的基因型与秦川肉牛肉用性状背膘厚眼肌面积和肌间脂肪含量进行相关性分析采用邓肯法 0 # 进行均数间的多重比较结果用平均数 C 标准误表示以 / 为差异显著水平进行差异显著性分析 + 模型如下 -. D/ 0 - * -. 其中 -. 为个体表型值 / 为群体均退火温度? $ " ;" " " 扩增区域 ) # / 部分第内含子和部分 A 非翻译区 ) A'53 "; / / 部分第内含子和第外显子 )"= 部分第内含子第外显子和部分 A 非翻译区 "= ) A'53 "; 值 0 为标记基因型效应 - 为年龄效应 * -. 为随机误差结果与分析和基因 23 产物检测图和为本试验对引物的 23 扩增结果目的片段的长度分别为 //. 和 /: 结果显示扩增产物电泳条带清晰特异性较好可以用作后续测序分析 + 0$ + " / 23 产物 + 0$ + " 7/ 23 ) 图秦川肉牛基因部分第内含子和部分 A 非翻译区的 23 扩增 & ; ) A'53 "; ) ) # < :"" " + 0$ + " 23 产物 + 0$ + " 7 23 ) 图秦川肉牛基因部分第内含子和第外显子的 23 扩增 & ; )"= ;" " < :"" " + 0$ + " / 23 产物 + 0$ + " 7/ 23 ) 图秦川肉牛基因部分第内含子第外显子和部分 A 非翻译区的 23 扩增 & ; "= ) A'53 "; ;" " < :"" "

4 ! 西北农林科技大学学报自然科学版第卷和基因的位点分析牛基因位于第号染色体上基因全长 : 含个外显子本研究在基因第内含子上检测出个即 ;.25 图牛基因位于第号染色体上基因全长.: 同样含个外显子本试验在基因第内含子上检测到个分别是 ; $5 图 / 和 ; 2 图在第外显子上检测出个即 ; $ 图, 在检测到的个中 ; $5 只有种基因型分别是 $$ 和 $5 基因型 55 基因型缺失其他个位点均有种基因型图秦川肉牛基因的位点 ;.25 & ; ;.25 ;" " < :"" 图 / 秦川肉牛基因的位点 ; $5 & ; / ; $5 ;" " < :"" 图秦川肉牛基因的位点 ; 2 & ; ; 2 ;" " < :"" " 本研究分析了以上个位点的基因型频率等位基因频率杂合度有效等位基因数和多态信息含量等遗传指标并用卡方检验检测 ) - B" :" ; 平衡状态表显示在基因 ;.25 中 22 为优势基因型 2 是该位点的优势基因在基因 ; $5 和 ; $ 图, 秦川肉牛基因的位点 ; $ & ;, ; $ ;" " < :"" " 中 $$ 为优势基因型 $ 为优势基因在基因 ; 2 中为优势基因型为该位点优势基因卡方检验表表明除 ; $5 位点值, 大于自由度为时 1/ 值 /.. 处于不平衡状态外其余个位点均处于 ) -B" :" ; 平衡状态表秦川肉牛和基因位点的基因型和等位基因分布频率 5 : " " " ) " " "8 " "# );" "# # < :"" " 位点基因型频率 " " "8 " $$ $5 2 $ 等位基因频率 $ " " "8 " $ 5 2 ;.25 /,. / , 7 ; $5 7 7,/ / 7 7 7,/ / 7 7 ; / / ; $ / 7 7,/ 7 7 / 表秦川肉牛和基因个 # 的遗传参数 5 : " " " "" # ; #! );" "# < :"" " 位点杂合度, 有效等位基因数 # 多态信息含量 2 ) -B" :" ; 平衡性检验值 B( " ;.25. ; $5., ; 2 /. /, ; $,/ / / /, 注 ) -B" :" ; 平衡检验当自由度为时 / D /.. D. " ) -B" :" ;) #"8 :! " "") # / D /.. D.

5 第期余横伟等秦川肉牛及基因与肉质性状的关联性 " 和基因位点基因型对秦川肉牛肉用性状的影响将秦川肉牛的个肉用性状分别与基因突变位点的基因型进行关联分析结果表显示 ;.25 位点不同基因型个体的背膘和眼肌面积无显著差异肌内脂肪含量差异显著 / 其中 55 基因型个体显著高于 25 和 22 基因型个体对基因而言 ; 2 位点上的 22 基因型个体肉用性状较优其眼肌面积极显著高于和 2 基因型个体肌内脂肪含量显著高于和 2 基因型个体 / ; $ 位点上的 55 为优良基因型其背膘厚显著高于 22 和 25 基因型 / 表和基因的位点对秦川肉牛肉质性状的影响 5 : "( " # # );" "# " 8 # < :"" " 位点 # 基因型样本数 " "# " 背膘厚 & 眼肌面积 ' $ 肌内脂肪含量 > +& 22.,C / //C /,, C :$ &$ ; /C /,,C., C /:$ 55.C /. C, C / $ &$ ; $5 $$..C / / C,,,C $5..C, / C,,C, 22 C /.,C $,,/C./ $ &$ ; 2 2.,C / C.:, /.C /:$ /.C.,C./:,.C /:$ 22.C :$ / C, /C, &$ ; $ 25../C :$ / /C., /.C 55 /C, $ / C., /C 注同列数据后标不同小写字母表示差异显著 / 标不同大写字母表示差异极显著标相同字母或未标字母者表示差异不显著 / 下表同 "#0 " "!" #" "" ) "# ; ) " " " /) " " " #" "" # ) ""= " " # ; ) " - " "! "# " "" # "" " # ; ) " " " / 5 "! ;:"! 基因位点的单倍型和连锁不平衡分析通过 $ 1* (B 软件对基因上的个位点进行单倍型分析总共检测到种单倍型分别为表 / 表 / 显示单倍型 " 表 / 秦川肉牛基因单倍型分析单倍型的发生频率最高为其次为单倍型和发生频率分别为和由于发生频率低于 / 的单倍型在统计学分析中没有意义故删除单倍型 / 和保留其他单倍型用于后续分析 5 : "/ "# ;" "# )" "8 " "# < :"" " ; $5 ; 2 ; $ 发生频率 & "8 " $ 2 $ $ 2, $ $ $ / 5 2 $ 5 2, 5 $ 5 对基因中的 ; $5 ; 2 ; $ 个位点两两进行连锁不平衡分析结果 $ 值均小于表基于 $ 值大于表明个位点间具有较强的连锁 / 不平衡效应的原则可知以上个位点间不存在强的连锁性 / 基因位点单倍型组合对秦川肉牛肉用性状的影响经分析得出基因中个位点共有. 种单倍型组合将发生频率低于 / > 的不具有统计分析意义的种单倍型组合删除对剩余的, 个单倍型组合进行关联性分析结果见表,

6 # 西北农林科技大学学报自然科学版第卷由表, 可知, 种单倍型组合背膘厚无显著差异单倍型组合个体的眼肌面积极显著高于单倍型组合个体并且显著高于单倍型组合, 和个体 / 肌内脂肪含量方面单倍型组合个体极显著高于单倍型组合, 因此在本试验群体中可被视为一种最为优秀的单倍型组合表秦川肉牛基因位点的连锁不平衡分析 $ 值 5 : "(# ") "# 0 # ;" " < :"" " 位点 # ; $5 ; 2 ; $ ; $5 7 ; ; $ 7 7 表, 基因单倍型组合对秦川肉牛肉质性状的影响 5 : ",( " # 0 " ;" "# " 8 # < :"" " 单倍型组合样本数 0 " " 背膘厚 & 眼肌面积 ' $ 肌内脂肪含量 > +&..C, / /C, $, C $..C /,C :$, C $.C /,.C /:$, /C $,./.C /. C :$, C $.,C. /C //:, /C $...C, /,C,:$, C $,./C / / /,C /.:$, C : 讨论基因在动物的心脏骨骼肌和乳腺组织中呈现高水平表达参与脂肪酸的转运促进脂肪酸的合成对脂肪沉积转运及基因的转录具有重要的调控作用在, 基因中鉴定的新位点与北京油鸡的大腿和胸肌的 +& 含量相, 关 2 等克隆出猪基因的 3$ 并检测出了个位点通过关联性分析发现位于第外显子上编码号位氨基酸的 $ 突变可显著影响背膘厚同样以猪为研究对象. 等在基因的第内含子上发现了个位点其均与背最长肌的嫩度含水量和风味密切相关 " 等在肉牛基因中检测出个位点其中位点 #./. 显著影响牛的眼肌面积本试验对秦川牛基因全长进行了多态性分析结果在其第内含子上发现个位点 ;.25 该位点不同基因型的肌内脂肪含量差异显著 / 基因型 55 个体显著高于基因型 25 和 22 作为膜周边蛋白 &$ 可与长链脂肪酸脂肪氧化产物和环氧化酶等疏水性化合物相结合参与其代谢及信号转导过程在调控糖脂代谢和胰岛素分泌方面发挥着重要作用目前在人和小鼠上对该蛋白研究得比较全面 + # 等在基因的启动子区域发现了个位点分别为 ; 7/.$ 和 ; 7,$ 这个位点均能影响转录因子的结合进而影响日本和牛的大理石花纹等在用 23-2 研究白猪号的过程中发现位点 : 的点突变对肌内脂肪 +& 含量有显著的影响在个中国山羊品种中 E 等通过 2 技术在基因第内含子上检测到个位点该位点与山羊的肌内脂肪含量紧密相 / 关 1 等在韩国牛基因外显子上检测到个位点其均显著影响牛肉脂肪酸组成本试验在秦川肉牛基因上检测到 ; $5 ; 2 和 ; $ 个位点除 ; $5 外其余个位点与秦川肉牛肉用性状紧密关联其中 ; 2 可以显著影响眼肌面积和肌内脂肪含量 ; $ 则可以显著影响背膘厚单倍型组合关联性分析发现单倍型组合个体眼肌面积和肌内脂肪含量显著高于其余单倍型组合值得注意的是本试验检测出的可显著影响秦川肉牛肉用性状的个位点 ;.25 ; $5 和 ; 2 中 ;.25 和 ; 2 分别定位于和基因的内含子上且为同义突变这个位点影响肉用性状的机制可能是内含子位点可能与同一染色体上其他基因上存在的位点呈现完全连锁状态内含子位点可能影响剪接供体位点, 或其附近区域导致翻译过程发生改变

7 第期余横伟等秦川肉牛及基因与肉质性状的关联性 $ 结论本研究发现基因 ;.2 5 和基因 ; 2 ; $ 在秦川肉牛中存在多态性与肉用性状紧密关联基因个位点的优势单倍型组合为 $2$-$2$ 其个体眼肌面积和肌间脂肪含量极显著或显著高于其他单倍型组合故可将和基因作为影响肉用性状的候选基因用于标记辅助选择以加速秦川肉牛定向高效选育和群体遗传改良参考文献姜延志刘晓研李芳琼等猪, 基因多态性及其与肌内脂肪含量的相关研究畜牧兽医学报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谈笑 &$ 对 5- 脂肪细胞中脂肪酸代谢和线粒体功能的影响 0 陕西杨凌西北农林科技大学 5 E 3"; &$ ) " : # ) - ) 5- ) "# 0 ; ; =!"#$%&' " # 桂林生昝林森王洪宝等 ) 和 ) 基因多态性及合并基因型与秦川牛肉用性状的关联分析畜牧兽医学报 /,-,. 6 B ; " ( " # # ; " ) - : ");" "# ) ) ) ;" "# " 8 # < " 2 "#" $ ) *"" " "#/,-,. ) +" )" # =") " "..-/ /& $ " ;") #"8 : # $ 3" //,-, 李娟杜新华陈燕等牛转基因小鼠的遗传及表达特性研究畜牧兽医学报 /,/-,/ 0 E 2 " " ) ;" " " # )"= "## : ";" " #;" " 2 "#" $ ) *"" " "#/,/-,/, "+ 2 " 6 " $## # $-&$ ) -&$ " #! " # " ;- " $ " " " $## ;" " - # ;" "! : - "## ) #- " ; + " ; 3" # -. E 4 B2 " "# ; " ) *) ;" " # # ) 3$"= "#- # # " + " ; 3" #,.-.. " " &&" " $ 3" )" )" # # ) :"" " " " # ) + " 3"#" / /- 6 ; ; ; " ( " # ) " " ) " # ;! " " ) " ) ;"# : " ""#" 2 "#" $ /-/. 下转第 / 页

8 第期胡言等中国荷斯坦牛 # 基因多态性及其与泌乳性状的关联性 '" #" ;" ""= ) # "! ) # 2 "#" #" # " ") # - " + E 3" $# ; ": #"- "- # ") "; $- 3$ # ## ")! "" # + 3 # " " 3" ) " +") ".-/ 徐晨希王梦琦朱小瑞等中国荷斯坦牛基因 A 端突变对乳中脂肪酸组成的影响中国农业科学..- E 2 EB ; + <6 E 3" ;" "A" ) " " # )# # 2 "#" - #" 2 "#"$; " " ; 3" ") # : " ### ;" "# )" ## #! # ) ## # < "'% /$/' + " )2" :"#/.,-, /3" 2 " 6 ; 6" $ ) ;, ;" " # ## ")! :)!" ; ):) " ; : " + 3",,- 上接第, 页 + # ; :55 : : " 5 " # " " "; # ": " );" "# " ## ")! :"" 8 # "# " " - 6 ; 6 ; " $## ;" " #! " 8 # -! "#! " " ",-, E < 5 ; B6 ;< " 5 ";" " - # # ## ")! " " )" "## ""2 "#" "#"" : "")# 29" $ " " /- /1 0 "" +" )" " ; " " )" # ) # ## ")! :"" " ") & $ ) )- ; " 4 " " $ " "/.-. + E E + " ) ;" " - # # " ## ")! ;! # ; " + " )2" :"#,/-,2 &6 ; &" ;" $## # ) "" - # " " # # ") # ).! # 9 " " 2 "#" " "5"#+ " #,,-

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

福建农业学报材料与方法试验菌株引物主要仪器主要试剂细菌培养模板的制备反应条件扩增产物的检测特异性试验敏感性试验分离菌株检测产物的克隆及序列测定结果与分析

西北农林科技大学学报 自然科学版 第 卷 5 " "! # " ;.25 &$ )! "" "!" " "" ## "# &$ ") ; $5 ); 2 # ); $ "= ; " - " )" # ;.25! # # " " ")! # / )" ) ) #! 55 9 ;"# )# ; ;" +

西北农林科技大学学报自然科学版第卷 5 " "! # " ;.25 &$ )! "" "!" " "" ## "# &$ ") ; $5 ); 2 # ); $ "= ; " - " )" # ;.25! # # " " ")! # / )" ) ) #! 55 9 ;"# )# ; ;" +