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1 4 4 Vol. 4 No Journal of Food Safety and Quality Aug., 13-9 李 学 民 *, 曹 彦 忠, 张 进 杰, 母 健, 王 蕾, 王 贺 琴 (, ) 摘 要 : 目 的 - (HPLC-MS-MS) 9 方 法 -, C 18, -, - 结 果 1.0~ μg/kg(loq~10loq),, LOQ 2 LOQ 4 LOQ 10 LOQ 81.4%~109.7%, 2.81%~7.12%, : G V 1.0 μg/kg; 2.0 μg/kg 结 论,, 关 键 词 : - ; ; ; Determination of 9 penicillins in Fugu and eel by high pressure liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry LI Xue-Min *, CAO Yan-Zhong, ZHANG Jin-Jie, MU Jian, WANG Lei, WANG He-Qin (Qinhuangdao Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qinhuangdao , China) ABSTRACT: Objective A sensitive method was developed for the determination of 9 penicillins in Fugu and eel by high pressure liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Methods Samples were extracted with acetonitrile-ammonia water, separated on a C 18 column by gradient elution with acetonitrile and 0.3% acetic acid solution as mobile phase. Identification was achieved by electrospray ionization(esi) in positive mode. Results The method showed a good linearity over the range of 1.0~ μg/kg for 9 compounds of penicillins with r Recoveries of 9 penicillins were between 81.4% and 109.7% (n=6) at spiked levels of LOQ, 2LOQ, 4LOQ and 10LOQ with relative standard deviations (RSD of 2.81% 7.12%). The limit of quantitation(loq) for nafcillin, penicillin G, piperacillin, penicillin V and oxacillin were 1.0 μg/kg and the LOQ for amoxicillin, ampicillin, cloxacillin and dicloxacillin were 2.0 μg/kg. Conclusion This method is sensitive and accurate, and it is suitable for the analysis of 9 penicillins in aquatic products. KEY WORDS: high pressure liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry (HPLC-MS-MS); penicillins; Fugu; eel * 通 讯 作 者 :,, ciqlixm@163.com *Corresponding author: LI Xue-Min, Senior Engineer, Qinhuangdao Entry-Exit Inspection and Quarntine Bureau of P.R.China Inspection and Quarntine Technique Centre, No.1, Liupanshan Road, Qinhuangdao , China. ciqlixm@163.com

2 1166 4,,, [1],,,,, [2,3], FDA : (MRL) 10 μg/kg, G (MRL) 0, (MRL) 10 μg/kg, (MRL) 4~30 μg/kg,, [4], ; [5],, ; [6],,, ; [7], ; [8],,, ; - [9],, ; [10-11],, ; - [12-14],, (0.4~5 μg/kg),,, - 1 材 料 与 方 法 1.1 试 剂 与 材 料 ( ); ( ); ( ); ( ); ( ); (CAS ) (CAS ) (CAS ) G(CAS ) V(CAS ) (CAS ) (CAS ) (CAS ) (CAS ) Sigma 9 :, 1.0 mg/ml, 25 9 :, 1.2 仪 器 与 设 备 - (API 3000, ); (Angilent 1100); ; ; ; ; ; ph, ±0.02( Precisa ph 900 ) 1.3 测 定 条 件 : ZORBAX SB-C μm, 150 mm 2.1 mm ( ); 0 μl/min; : 30 ; : μl: (A) (B), 5 A 3 min, 10 min A 50%, 5 min 75%, 7 min A 5% : : (ESI); : ; : (MRM); (IS): 5500 V; (NEB): MPa; (CUR): MPa; (AUIX): 6 L/min; 400 (DP) (FP) (CE) (CXP) 操 作 步 骤 5 g 50 ml, 2 g, 25 ml 0.15 ml 1 min, 1000 r/min 10 min,,,, 10 ml, 1 min, 100 ml, 40, 2 ml,,, -

3 4, : Table 1 表 1 质 谱 参 数 Parameters of mass spectrometry (m/z) (m/z) (ev) (V) (V) (V) 阿 莫 西 林 366/ /8 336/ 氨 苄 西 林 350/ / / 哌 拉 西 林 518/ / / 青 霉 素 G 335/ / / V 351/ / / / / / / / / / / / / / / 结 果 与 分 析 2.1 提 取 溶 液 的 选 择,, [8],, 9 9, 2 3, [8], ph,, 10.3%~35.5%, %~98.4%;, - 9, %, %~102.5%,,, + 0.6% 2.2 液 相 色 谱 分 析 柱 的 选 择 μbondapak C mm 4.0 mm ZORBAX SB-C 18 (150 mm 2.1 mm, 3.5 μm) 9,, μbondapak C ml/min,, 9, ZORBAX SB-C 18, μbondapak C 18,, ZORBAX SB-C 质 谱 条 件 的 确 定, 5 μl/min G V, 9 (Q1 ), , ( ), (DP), (CE),,,,, 9, 线 性 范 围 和 方 法 检 出 限 G V

4 ~100 ng/ml(0.5 LOQ~40 LOQ); 2.5~0 ng/ml(0.5 LOQ~40 LOQ),, μl,, G V 0.025~2 ng ; 0.05~4 ng,, 4, 9 1.0~ μg/kg(loq~10 LOQ),, G V 1.0 μg/kg; 2.0 μg/kg, 10,, G V 1.0 μg/kg; 2.0 μg/kg Table 2 表 2 不 同 浓 度 乙 腈 - 氨 水 对 河 豚 鱼 样 品 中 9 种 青 霉 素 回 收 率 的 影 响 Effects of different extracts of acetonitrile and ammonia solution on the recoveries(%) of 9 penicillins in Fugu + 0.2% + 0.4% + 0.6% + 0.8% 阿 莫 西 林 氨 苄 西 林 哌 拉 西 林 青 霉 素 G V Table 3 表 3 不 同 浓 度 乙 腈 - 氨 水 对 鳗 鱼 样 品 中 9 种 青 霉 素 回 收 率 的 影 响 Effects of concentration of acetonitrile and ammonia solution on the recoveries(%) of 9 penicillins in eel + 0.2% + 0.4% + 0.6% + 0.8% 阿 莫 西 林 氨 苄 西 林 哌 拉 西 林 青 霉 素 G V

5 4, : 方 法 的 回 收 率 和 精 密 度, 2~100 μg/kg(loq~10 LOQ),,,, -, 5 5, 81.4%~109.7%, 2.81%~7.12% LC-MS 1 Table 4 表 4 9 种 青 霉 素 线 性 方 程 和 相 关 系 数 Linear equation and correction coefficient of 9 penicillins (ng) (R) 阿 莫 西 林 0.05~4 Y=6670X 氨 苄 西 林 0.05~4 Y=13800X 哌 拉 西 林 0.025~2 Y=4450X 青 霉 素 G 0.025~2 Y=10500X V 0.025~2 Y=14400X ~2 Y=16600X ~4 Y=10000X ~2 Y=30800X ~4 Y=6410X 表 5 Table 5 河 豚 鱼 和 鳗 鱼 中 九 种 青 霉 素 添 加 回 收 率 (n=6) Recoveries of 9 penicillins in Fugu and eel (n=6) LOQ 2LOQ 4LOQ 10LOQ LOQ 2LOQ 4LOQ 10LOQ 阿 莫 西 林 (%) 氨 苄 西 林 (%) 哌 拉 西 林 (%) 青 霉 素 G(%) V(%) (%) (%) (%) (%) (%) SD RSD(%)

6 : (a)(b)(c) 1 Fig. 1 MRM of 9 penicillins in Fugu

7 4, : Fig. 1 MRM of 9 penicillins in Fugu 3 结 论 9 -,,,,,,,,, 参 考 文 献 [1]. [M]. :, Yan JY. Edited by Animal Drug Handbook [M]. Beijing: The Golden Shield Press, [2] Boison JO, Keny LJY. Multiresidue liquid chromatographic method for determining residues of mono- and dibasic penicillins in bovine muscle tissues [J]. J AOAC, 1998, 81: [3] Riediker S, Diserens JM, Stadler RH. Analysis of beta-lactam antibiotics in incurred raw milk by rapid test methods and liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry [J]. J Agr Food Chem, 01, 49: [4] GB/T [S]. GB/T /T Penicillin residues in honey-determination Method of cup plate method 9 [S]. [5] Mitchell JM, Yee AJ, McNab WB, et al. Validation of the LacTek test applied to spiked extracts of tissue samples: determination of performance characteristics [J]. J AOAC Int, 1999, 82: [6] Moats WA. Detection and Semiquantitative Estimation of Penicillin G and Cloxacillin in Milk by Thin-Layer chromatography [J]. J Agr Food Chem, 1983, 31: [7] Schroeder B, Voigt R, Patsch R, et al. Pulse-polarographic determination of beta-lactam antibiotica and its clinical applications [J]. Anal Chem, 1988, 331: [8],,. [M]. :, 00. Li JS, Qiu YM, Wang C. Editor of veterinary drug residue analysis [M]. Shanghai: Shanghai Science and Technology Publishing Press, 00. [9] Hessels J, Kingma AW, Sturkenboom MCJM, et al. Gas chromatographic determination of N-acetylisoputreanine -γ-lactam, a

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