西安交通大学学报医学版第卷胃癌是一种临床常见的消化道肿瘤尽管近年来发病率有下降趋势但发病率及致死率在世界范围内仍分别占全身恶性肿瘤的及且绝大多数新发及死亡病例集中于东亚及发展中国家在中国胃癌发病率位居男性全身恶性肿瘤第二位女性第四位年有近万人因胃癌死亡胃癌的早期诊断是

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簪潭袁
5 years ago
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熟悉消化内镜下的各种诊疗操作技术研究方向为慢性肝病消化道肿瘤的基础与临床现为中华消化内镜学分会委员中国医师协会消化医师分会委员中国中西医结合学会循证医学专业委员会常委中华胃肠内镜电子杂志

王宽诚育才奖教学卓越奖和教学名师称号胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展和水祥张丹禄韶英西安交通大学第一附属医院消化内科血管外科陕西西安摘要

/0,/1$ 白介素家族等炎症相关因子他们参与了胃癌细胞凋亡抑制增殖促进周期调控以及胃癌侵袭迁移血管生成等过程这些因子在胃癌中特异性表达可以作为肿瘤标记物用于胃癌的靶向治疗

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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&'& & 专家述评和水祥西安交通大学第一附属医院主任医师教授医学博士博士生导师任消化内科主任擅长各种肝病及肝癌的内科综合治疗对食管胃肠疾病及消化系统其他疑难重症诊治经验丰富熟悉消化内镜下的各种诊疗操作技术研究方向为慢性肝病消化道肿瘤的基础与临床现为中华消化内镜学分会委员中国医师协会消化医师分会委员中国中西医结合学会循证医学专业委员会常委中华胃肠内镜电子杂志西安交通大学学报医学版等杂志编委先后主持国家自然科学基金国家科技支撑计划等余项课题主编参编教材专著部发表科研论文余篇其中 $%& 论文余篇获得省级科研成果奖 ' 项获得王宽诚育才奖教学卓越奖和教学名师称号胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展和水祥张丹禄韶英西安交通大学第一附属医院消化内科血管外科陕西西安摘要胃癌的发生发展涉及多个分子信号通路和许多细胞因子其中比较重要的包括 & 通路 ()*(+,*(+,)( 等生长因子及受体家族 %-./0,/1$ 白介素家族等炎症相关因子他们参与了胃癌细胞凋亡抑制增殖促进周期调控以及胃癌侵袭迁移血管生成等过程这些因子在胃癌中特异性表达可以作为肿瘤标记物用于胃癌的靶向治疗相应药物多已进入临床试验阶段在上述理论基础上胃癌靶向诊断也有了新的进展闪烁扫描法内镜等手段逐渐趋于成熟但特异性探针的研究多处于临床前期阶段仍有待进一步的发展关键词胃癌分子机制靶向治疗靶向诊断中图分类号 )' 文献标志码 '!"!"#"! ($"/! 0+! 2$3/! #45#!36+743#!#4383#45#!36*7"84$"4#4 #,4768# !:33!2!;#47.9!%! $%&'&!##" ##" ( )(*!)( #"#+,-. %-/0%-/0. "!-*1"#+ 1'01$*)*"+"###""### # + "###### #"# # &* " ####" # #"##"+ ##&"#"# # "###"&"#" &, ##1###""& '% ### ## " 收稿日期 // 修回日期 // 基金项目国家自然科学基金资助项目 03' $"34##03!80"48$#!#,3"!3!36%!03'! 通讯作者和水祥 (/58#735 优先出版!!# 57#8)''58//!"#"!

2 西安交通大学学报医学版第卷胃癌是一种临床常见的消化道肿瘤尽管近年来发病率有下降趋势但发病率及致死率在世界范围内仍分别占全身恶性肿瘤的及且绝大多数新发及死亡病例集中于东亚及发展中国家在中国胃癌发病率位居男性全身恶性肿瘤第二位女性第四位年有近万人因胃癌死亡胃癌的早期诊断是提高胃癌治疗效果改善患者预后的重要手段统计显示如果在病变局限于黏膜层及黏膜下层的早期胃癌阶段实施治疗患者 ' 年生存率可达到以上但实际上即便是在发达国家 ' 以上的确诊患者已进入疾病进展期可以通过手术完全切除病灶及转移灶的几率不足 ' 究其原因胃癌早期症状隐匿且目前缺乏有效的筛查及治疗方法胃镜作为最重要的胃癌诊断方法却很难实现大规模的筛查而且对癌前病变及早癌的诊断也存在局限性因此胃癌的早期诊断成为临床难点之一尽管胃癌的发病机制尚不完全清楚但其发生发展过程并非无迹可寻这涉及了一系列的分子水平变化包括数条主要信号通路的激活相关基因的突变异常表达以及 543)0 的异常调控等这其中就产生了胃癌相关的分子靶点随着相关分子机制研究的深入及靶向药物的开发胃癌的靶向治疗已经在临床上取得了一定的效果而相关的胃癌靶向诊断作为新兴技术虽然尚未真正进入临床但也有了一定的理论基础及前期研究在分子水平检测胃癌的发生发展将为其早期诊断提供重要的帮助胃癌的分子机制 ()*& 通路磷脂酰肌醇 // 激酶 37/ 8!3738//!7#& 蛋白激酶 143/ #!!7#1 通路是重要的胞内信号转导通路参与细胞增殖转化凋亡及肿瘤发生发展的一系列过程是经典的多种肿瘤相关信号通路之一 & 结构包括一个催化亚基以及一个调节亚基具备激酶活性其底物由于两个亚基的不同而有所差异由激酶区调节区及尾端三部分构成其中激酶区可结合于三磷酸腺苷 #!37!#437# 调节区则发挥了丝苏氨酸磷酸化的功能 & 通路的激活方式主要有两种一种是与生长因子受体或其他包括有磷酸化酪氨酸残基的连接蛋白结合引发构象改变而激活另一种是由 ' 47 直接结合 & 的催化亚基使其激活活化后的 & 催化产生第二信使 '/ 三磷酸磷脂酰肌醇 378!3738/'/4737#& 可以对包含有普列克底物蛋白同源结构域 8#74!3/ 53835! 的蛋白进行直接的磷酸化除直接磷酸化的作用 & 还可激活同样具备结构域的磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 373!37# ##!#!!7# 其中可以磷酸化位的苏氨酸则磷酸化位的丝氨酸只有两个位点均被磷酸化后的活性可以得到充分的释放活化的可经由多种下游因子的磷酸化发挥调节细胞功能促进胃癌细胞增殖抑制其凋亡促进肿瘤血管生成促进胃癌对放化疗耐药性活化的通过下游多种途径产生了一系列的肿瘤相关效应在促进肿瘤细胞增殖抑制凋亡方面主要包含下列机制抑制凋亡相关蛋白 77# 家族中重要因子 77#/ 及 77#/ 通过磷酸化其位丝氨酸位点阻止其活化并产生细胞凋亡级联反应抑制凋亡相关基因 18/ 通过磷酸化 18/ 家族成员 1 使其与 // 结合而阻止其与 18/. 结合致起始凋亡还可以磷酸化 ' 结合蛋白 53"7#3"8#5!"#35383 影响 ' 的活性磷酸化的转位到细胞核与 ' 结合通过增加 ' 蛋白的降解而影响细胞存活还可通过磷酸化结节性硬化复合物 "#43"778#/ #$% 解除 $% 对富集于脑 )7 同系物 )735383#!4#!4!)# 的负调控进而使得 )# 富集哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 5558!4#3645!5-) 激活 5-) 可磷酸化,34# 家族基因,-.- 抑制其核转位而阻止其转录激活作用在肿瘤的侵袭转移方面则包含有以下机制可以激活核转录因子 /1!"8#4634/1 0,/1 相关途径通过激活可以降解 0,/1 抑制剂!34360,/1&1 的 &1 激酶 &1!7# & 造成了 &1 的降解从而使 0,/1 从细胞质中释放出来进行核转位激活靶基因增加肿瘤细胞的运动能力 5-) 下游蛋白也有促进细胞侵袭转移能力的作用 & 还参与了基质金属蛋白酶 545#8343#!7# 的激活使细胞外基质降解促进肿瘤细胞的转移和侵袭 & 途径可以上调低氧诱导因子 3!"8# 634/&,/ 表达进而启动血管内皮生长因子 ;7"84#!3# *(+, 的表达促进肿瘤新生血管的形成 & 途径参与了包括胃癌在内的多种肿瘤的发生发展过程 &% 是编码 & 催化亚基的基因在多项针对胃癌的外显子测序研究中发!"#"!

3 期和水祥张丹禄韶英胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展现该基因的突变率达到 ' 以上这种突变可以导致 & 甚至在没有生长因子受体参与的情况下被激活并可产生致胃癌活性这项结果在体内及体外实验中均得到了验证在进展期胃癌中 &% 的表达明显升高而且通常预示较差的预后基于 & 通路在胃癌发生发展中起到的重要作用针对该通路中重要核心因子的靶向治疗研究目前也获得了一定的成果其中有一些已经进入了临床试验阶段以为靶点的胃癌治疗中已经进入期临床试验服药患者中位无进展生存期为月中位生存时间为 ' 个月副作用发生率小于考虑到 & 通路是造成曲妥珠单抗耐药的重要机制因此与曲妥珠单抗的联合应用以降低耐药率的研究也进入临床试验结果显示联合用药可以被患者耐受胃癌患者可以获得最长 ' 个月的稳定期除了对靶向治疗药的增敏作用外还可以增加传统化疗药物的作用紫杉醇或铂类药物在联合应用后磷酸化明显减少而多种胃癌细胞的增殖也明显受到更强的抑制作用是最早发现的 & 抑制剂其对胃癌的治疗作用也有大量的报道已明确具备促胃癌细胞凋亡的作用可能机制为抑制凋亡分子 18/ 家族成员 8/ 以及 1 蛋白的磷酸化通过,7 介导途径引发凋亡上调 ' 的表达引发线粒体膜的崩解从 ' 而达到促进凋亡作用激活死亡受体途径通过肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 "534!# / 4#8#3377/!"!8!)& 引发凋亡同时线粒体途径及 77# 途径也参与了诱导的凋亡过程还有研究者发现 &1& 途径也参与到了这一过程中 0,/1 的激活因对 & 通路的抑制而降低引发了细胞凋亡除诱导凋亡作用外还有抑制肿瘤转移及血管生成的作用实验证明给予后 &,/ 被灭活 *(+, 的产生相应减少相应的血管生成作用也受到抑制综上可以看出作为胃癌发病分子机制中的重要通路 & 参与了胃癌发生发展中的多种事件也是整个信号转导途径中的核心部分之一以该途径重要因子作为胃癌诊断与治疗的靶点有着理想的前景 (+,) 通路丝裂原活化蛋白激酶 53#!/ ;#43#!!7#7 是一种胞内的丝苏氨酸蛋白激酶激活途径非常保守在受到胞内胞外刺激之后通过三级激酶级联方式激活依照激酶激酶!7#7/ /!7#7/ 的顺序连续磷酸化苏氨酸以及酪氨酸位点均被磷酸化的是具备活性的形式可以从胞质内进入细胞核激活下游靶基因产生各种肿瘤生物学功能苏氨酸以及酪氨酸位点一旦去磷酸化也会失活为非活化形式失去其活性均由多个并行亚族构成亚族主要包括有个 46 亚族研究最为透彻包括有 /461/4646 () 激酶激酶 ()!7#/!7#/ ( 亚族包括 ((( ((' 凋亡信号调控蛋白 !8/4#"8!!7#$ 及肿瘤进程基因座 /"534434#773!83"78/ 与前个有所不同主要包括有哺乳动物不育系样激酶 5558!7#48#/8#!7#$ 小脯氨酸富集激酶 !#/4!7# 上游激酶 "74#5!7#2+,/ 活化激酶 +,/#;#!7# 等亚族相对简单有两大类丝裂原活化蛋白激酶激酶!7#!7# 亚族及 () 激酶 ()!7#( 亚族前者包括后者包括 ( ((' 亚族与通路功能密切相关包括细胞外信号调节激酶 #4#8"847!8/ 4#"8#!7()/:"! 氨基末端激酶 /:"!0/ #45!8!7#:0 等亚族其中 ()' 与 ()()()() 不同本身单独构成一个亚族 () 调节细胞增殖分化和减数分裂这两种形式的完全符合的完整激活过程即上游因子通过细胞表面酪氨酸激酶或 + 蛋白偶联受体激活 )7 进而募集 )6 至细胞膜引发 ( 的磷酸化进而激活 () 活化的 () 进而可以激活靶基因的转录可通过多种引发 :0 的活化继而导致特定基因转录活性的增强可被多种激活或调节这种多因素参与模式使线性激活模型中变量增多为靶向治疗带来难度通路介导了一系列的肿瘤生物学功能包括细胞增殖分化凋亡抑制血管生成肿瘤侵袭转移等通路中的多种激酶的表达异常在胃癌中都可以被检测到包括 )7)6#)7 基因隶属于一个常见的癌基因家族可以激活包括经典通路在内多条信号途径分为 //0/ 个!"#"!

4 西安交通大学学报医学版第卷亚型其中 )$ 及下游 1), 在绝大多数的胃癌发生突变而作为重要亚型的 () 充当了途径中重要的最终效应因子之一也在胃癌中出现更多的活化形式分子而作为途径下调因子 )7 相关结构域家族 47/7/ 733!35!658)$$, 成员 )$$, )$$, 其基因表达在包括胃癌的多种肿瘤中为沉默状态这是由该基因启动子的过甲基化介导的 )$$, 成员尤其 )$$, 具有 )7 相关区域可以因启动子的甲基化而失活进而激活途径并因此阻止胃癌细胞凋亡诱导胃癌发生具有调节细胞生长生存分化的生物学活性亦参与了细胞周期的调控实验证实抑制该通路可以减少细胞增殖并使细胞周期停滞于 + 期而不进入 $ 期同时抑制 %8! 的表达相反该通路的过度活化可以导致细胞有丝分裂加速细胞增殖作为该通路靶基因的 0,/1 以及进一步诱导产生的 18/18/ 它们均具有抗凋亡特性成为癌基因因此 )7() 在被诱导激活后具有抑制 ' 细胞凋亡的作用该通路促进肿瘤侵袭转移的作用主要通过以下两方面实现激活 0,/1 以及最终激活 // 引发细胞外基质的降解下调转移抑制分子或增加肌球蛋白轻链激酶活性来加强细胞的运动能力及粘附功能促进细胞本身的迁 / 移尽管也是胃癌发生发展中的重要通路之一但由于通路的复杂性针对该通路的靶向药物没能像 & 通路药物那样获得较大的进展真正进入临床试验的药物也相对少见索拉菲尼是一种广谱的小分子酪氨酸激酶抑制剂可以抑制包括 )6 在内的多种酪氨酸激酶活性因子抑制通路与 *(+,) 功能是其主要作用机制目前该药已成功应用于肝癌肾癌甲状腺癌的临床治疗中对胃癌也进入了临床试验阶段使用索拉菲尼联合奥沙利铂治疗进展期胃癌的试验中有 ' 的患者获得了完全缓解进入疾病稳定期中位无进展生存时间个月总生存时间 ' 个月 * 表皮生长因子受体家族人表皮生长因子受体 "5!## ##34() 家族也称 (41 家族属于酪氨酸激酶 & 型受体家族成员包括 ()()()() 四种同源受体其中 () 又称表皮生长因子受体 ## ##34(+,)(41 基因定位于号染色体全长包括个外显子编码蛋白为跨膜蛋白含有胞外段跨膜段与胞内段个区域目前研究最多应用最为广泛的是 ()(+,) 以及 ()(41 *()(+,)(+,) 广泛分布于各种上皮细胞的细胞膜上目前发现的 (+,) 配体有表皮生长因子 ## ##34(+, 转化生长因子 /+,/ 双调蛋白结合肝素的 (+, /#8"8! 等 (+,) 活化过程依次为配体与 (+,) 结合形成二聚体酪氨酸激酶区激活结合分子使受体酪氨酸残基磷酸化识别 $ 蛋白的底物酶将信号传入细胞内其激活的下游通路主要有通路 & 通路磷脂酶 %/373/ 87#%/%/ 通路 :!"7 激酶 :!"7!7# : 信号传导及转录活化因子 $!84!7"#4! ;34364!743!$ 通路 (+,) 不仅表达于表皮细胞也表达于部分基质细胞及神经胶质细胞平滑肌细胞通过其激活的多条下游通路在调节细胞生长和组织修复中起十分重要的作用引发的细胞效应包括细胞增殖迁移粘附等多个环节机体肿瘤的发生发展过程多与 (+,) 介导的功能相关而且 (+,) 也被发现高表达于肿瘤组织细胞促进了肿瘤细胞的增殖肿瘤的侵袭转移及血管形成 (+,) 在胃癌组织中高表达而在非癌的胃黏膜组织中几乎检测不到 (+,) 表达与胃癌患者的预后以及部分临床病理特征相关有报道称 (+,) 高表达与年龄分化程度分级相关其表达水平可能是独立的预后不良因素也有研究支持 (+,) 表达与肿瘤分化程度浸润深度淋巴结转移远处转移及临床 0 分期相关并可能通过 *(+, 促进肿瘤的血管生成一项 (+,) 与多肿瘤相关关系的研究提出 (+,) 表达水平与肿瘤患者预后相关尤其是在头颈部卵巢膀胱以及食管肿瘤中对于胃癌乳腺癌子宫内膜癌及结直肠癌 (+,) 的高表达往往提示疾病的不良预后但对于非小细胞肺癌 (+,) 表达与预后相关性不明显尽管并非所有的研究都能达到一致的观点但绝大多数研究者都支持 (+,) 是明确的胃癌标记物并有评估胃癌预后的作用 (+,) 是多条肿瘤通路的共有上游结点因子其在胃癌组织中也有着明确的高表达现象因此有大量研究者投入针对 (+,) 的靶向药物开发 (+,) 抑制剂主要分为两类一类是 (+,) 胞外区竞争性抑制剂代表药物为抗 (+,) 单克隆抗体一类是小分子的激酶活性抑制剂被摄入细胞内后针对 (+,) 胞内段的酪氨酸激酶区抑制 (+,) 的活化第一类药物中的代表是西妥昔单抗为人源化鼠抗 (+,) 单克隆抗体通过与 (+,) 胞外段的亲和作用竞争性抑制 (+,) 天然配体与其的结合抑制下游通路的激活达到诱导肿瘤细胞凋亡控制肿瘤的浸润转!"#"!

5 期和水祥张丹禄韶英胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展 ' 移进程的作用该药目前已获准上市用于结直肠癌鼻咽癌及非小细胞的治疗对于胃癌的治疗目前也已进入临床试验阶段并在期临床试验中获得了良好的疗效使用奥沙利铂联合西妥昔单抗治疗胃癌过程中例患者中有 ' 获得了部分缓解疾病进展时间为 '' 个月总生存期为个月尼妥珠单抗是我国第一个用于治疗恶性肿瘤的功能性单抗药物临床用于 (+,) 阳性的晚期鼻咽癌治疗在诊断胃癌治疗的期临床试验中的进展期胃癌患者获得部分缓解中位无进展生存期为中位总生存时间为 ' 较无治疗组有所 ' 延长马妥珠单抗也是人源化抗 (+,) 抗体获批用于晚期结直肠癌治疗对于胃癌治疗也进入了期临床试验阶段帕尼单抗作为结直肠癌获批药物目前已进入针对胃癌的期临床实验在抗体类药物的开发获得进展的同时小分子酪氨酸激酶抑制剂也在临床中得到了较为成熟的研究该类药物不具备抗体类药物特殊的靶向性因此可针对包括 (+,)() 在内的多种表皮生长因子受体通过抑制其活化区域阻断下游通路的转导拉帕替尼是 (+,) 与 () 的共同不可逆性抑制剂是该类药物中相对获批较早用于临床晚期乳腺癌治疗的药物在胃癌的临床前期试验中可以与传统化疗药起到协同作用目前已进入期临床试验但有一项试验提供的客观缓解率仅阿法替尼是 () 家族共同抑制剂年获批用于晚期肺癌的治疗但对胃癌的临床疗效尚待评估还有另一种全 () 家族抑制剂 33! 目前在胃癌中的研究也进入期临床试验阶段尽管目前针对 (+,) 的靶向药物种类繁多临床应用也比较成熟但真正获批用于胃癌临床治疗的仍然空缺还有待进一步探索 *+()(41() 基因定位于号染色体其编码蛋白位于细胞膜上结构与 (+,) 相似其胞内段同样具有酪氨酸激酶蛋白活性但与 () 家族其他成员不同 () 目前尚未发现天然配体因此是该家族唯一的孤儿受体 () 在正常情况下处于非激活状态但在受到体内外某些因素刺激的情况下可以通过胞外段进行自身或与其他 () 家族成员的异源性二聚体化使酪氨酸激酶区激活将信号传入细胞内 () 激活后参与了多条信号通路的激活促进肿瘤形成主要包括 & 通路还可以激活 0,/17 *(+, 等达到抑制细胞凋亡及加速细胞周期进程降低宿主对肿瘤细胞免疫力诱导肿瘤血管形成和生长改变组织结构使肿瘤细胞发生移位促进肿瘤细胞浸润和或转移的作用目前大量的研究发现在多种恶性肿瘤中存在 () 的过度表达并且与不良的预后相关 () 基因扩增和蛋白过表达最早在乳腺癌中发现这部分患者病理组织分化差病情进展迅速预后差因此作为乳腺癌不良预后的标志之一除乳腺癌之外 () 在卵巢癌结直肠癌肺癌胃癌等肿瘤中也均有不同程度的表达胃癌中 () 蛋白的过表达率为通过,&$ 检测 () 基因扩增率则大约为一项比较早的研究发现在胃癌标本中例可检测出 () 的高表达这种表达与淋巴结转移淋巴管浸润和肿瘤侵犯深度有关而且 () 阳性是胃癌预后的独立因素近年来的 () 研究多采用免疫组化与,&$ 法从蛋白及基因扩增两个方面进行评估阳性率一般在有研究者使用这两种方法检测 ' 例肿瘤标本中 () 的表达阳性率为其中肠型胃癌的过表达率明显高于弥散型胃癌同 (+,) 一致针对 () 的靶向治疗同样分为单克隆抗体及小分子的激酶活性抑制剂因 () 酪氨酸激酶活性区域与 (+,) 相似因此小分子的激酶活性抑制剂多为针对多种 () 分子的广谱药物进入临床试验的 () 激酶活性抑制剂在 (+,) 部分大多也已介绍抗体类药物中研究最为充分的应属曲妥珠单抗曲妥珠单抗是抗 () 人源化单克隆抗体主要通过与 () 的结合抑制其二聚体的形成从而拮抗 () 下游信号转导通路以达到抑制肿瘤的作用目前广泛用于 () 阳性乳腺癌的治疗在针对胃癌治疗的临床前期试验中该药能明显抑制 () 高表达胃癌细胞在裸鼠移植瘤模型体内的生长也能改善 () 中等表达胃癌细胞构建模型中腹膜转移裸鼠的生存率但却不能抑制 () 低表达胃癌细胞在裸鼠体内的生长及转移在最早的期临床试验中曲妥珠单抗联合化疗可改善 () 阳性晚期胃癌患者的生存使患者的总生存时间达到个月其中 () 高水平表达者更能得到明显获益生存期达到个月疾病缓解率从 ' 提高至而且相对于对照组曲妥珠单抗应用组并未出现明显的不良反应升高的趋势也未出现预期外的不良事件证明了该药的临床应用前景但真正实现这一目的还需更多的临床试验及循证医学依据此外 /,/ 等单克隆抗体药物已进入期临床试验阶段但不同于曲妥珠单抗其余的抗体类药物也多具备 () 家族广谱作用还可靶向作用于 ()!"#"!

6 西安交通大学学报医学版第卷 () 等 - 肿瘤新生血管相关因子有人提出一种假说肿瘤的生长大致可分为血管前期和血管形成期两个阶段如果没有新生血管提供肿瘤细胞代谢所需的营养物质通过弥散作用供给肿瘤细胞的营养成分不足以满足肿瘤细胞的基本代谢要求肿瘤生长的体积不会超过 55 新生血管的形成使肿瘤的血供由弥散获取的方式转为灌注获取肿瘤细胞的生长也呈指数方式进行并最终达到难以控制的体积除了对肿瘤本身的营养作用新生血管也是肿瘤细胞侵袭转移的重要途径肿瘤的血行转移往往与新生血管数量呈正性关系微血管密度 543/;#77#8#!7 * 是常用肿瘤新生血管评价的指标在胃癌发生发展过程中新生血管的形成同样起到重要的作用其水平也与疾病的预后密切相关 *(+, 家族有个成员分别为 *(+,/*(+,/1 *(+,/%*(+,/*(+,/( 胎盘生长因子 8#! , 由不同基因编码 *(+,) 家族有 ' 种分别为 *(+,)*(+/,)*(+,) 神经纤毛蛋白!#"438! 0 配体和受体并不存在严格的一一对应关系一个配体可以与多个受体结合一个受体也可以接纳不同种的配体 *(+, 是已知细胞因子中对肿瘤血管生成影响最强者其中又以 *(+,/ 为最主要的血管生成因子其与 *(+,) 结合后作用主要归纳为增加血管通透性促进血管内皮细胞分裂增殖抑制凋亡诱导蛋白酶降解细胞外基质改变细胞骨架和胞间连接促进细胞迁移但与 *(+,) 结合时促进血管生成作用明显减弱 0 则只起到辅助受体的作用用于增加受体配体亲和力 *(+,/1 主要与 *(+,) 结合功能目前尚无定论 *(+,/ % 与 *(+,/ 受体主要为 *(+,) 参与淋巴管的形成及肿瘤的淋巴转移其余的 *(+, 分子可能也参与到了不同部位的血管形成 *(+, 还可以动员 *(+,) 阳性细胞从骨髓中转移至肿瘤部位通过分泌多种细胞因子调节血管生成和基质重建在对早癌及进展期胃癌患者的研究发现 *(+, 阳性者肿瘤体积较阴性者大浸润程度深转移程度高临床分期晚生存期短而且 *(+, 表达水平是 ' 胃癌患者预后及肝转移的独立危险因素还有人指出 *(+, 不仅在肿瘤局部在外周血中也有高表达现象并与胃癌组织中血管生成水平淋巴结转移水平密切相关是评估胃癌患者肿瘤分期的敏感指 / 标 *(+, 血管生成作用的主要介导受体 *(+,) 与胃癌进展程度远处转移及新生血管数量相关淋巴转移是胃癌转移的重要途径目前认为 *(+,/% 是最重要的促淋巴管形成因子由 *(+,/% 与 *(+,) 结合所诱导的淋巴管形成对胃癌细胞的淋巴转移起着直接的促进作用研究发现 *(+,/% 主要在胃癌细胞表达 *(+,) 则在淋巴管内皮细胞表达两者的表达有显著的相关性肿瘤组织基质中 *(+,) 表达阳性的淋巴管数目直接与胃癌的淋巴转移程度相关同 () 家族靶向药物相似 *(+,*(+,) 家族成员靶向药物也分为单克隆抗体及酪氨酸激酶抑制剂单克隆抗体中贝伐单抗是第一个获批的用于抑制肿瘤血管形成的药物用于治疗转移性结直肠癌对于胃癌的治疗也进入期临床试验另外一个合成的 &+ 分子 68#4# 也可通过与 *(+, 的结合阻断 *(+, 下游功能该类药物中最值得说明的是雷莫芦单抗这是针对 *(+,) 的人源性单克隆抗体该药从众多仍停留于临床试验的药物中脱颖而出在年获批上市治疗胃及胃食管连接部腺癌为目前尚属贫乏的胃癌靶向治疗市场做出了贡献酪氨酸激酶性药物种类相对繁多且多为多受体广谱药物除之前提到的索拉菲尼之外还有 3;!"!! 等进入临床试验它们不仅可以针对 *(+,) 还可以靶向抑制成纤维细胞生长因子受体 ##34,+,) 和或血小板衍生生长因子受体 8#8##/ 4;#436344##34+,) 同时也有仅针对 *(+,) 的酪氨酸激酶抑制剂如 14;! 3!! 进入不同阶段的临床研究这种针对血管生成的靶向治疗可以延缓胃癌晚期患者疾病进程获得更多的生存时间 (.,& 通路间质表皮转化因子 5#7#!58 3##884!73!634( 癌基因编码大小约 " 前体蛋白翻译后经修饰成为分子质量约 " 成熟受体型蛋白位于细胞膜上包括细胞外信号区域跨膜区域以及细胞内功能区域个部分蛋白含有与 $4 酪氨酸激酶家族高度相似的功能结构可能与其他受体型蛋白酪氨酸激酶有着类似的信号传导通路肝细胞生长因子 #3# , 可与其特异性结合促使受体蛋白酪氨酸残基磷酸化激活细胞 +,# 信号通路因此 ( 也称肝细胞生长因子受体 +,# 信号激活后可以产生多种生物学效应如细胞增殖转化凋亡抑制移动及转移血管生成等这可以通过途径或其他因子间接激活效应因子实现文献报道胃腺癌中 ( 阳性率为!"#"!

7 期和水祥张丹禄韶英胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展在消化道肿瘤中 ( 基因扩增多见于胃 ' 癌这种扩增及蛋白的高表达与胃癌的浸润深度 ' 淋巴结转移以及 0 分期相关此外 ( 在, 阳性的胃癌患者中表达水平高于, 阴性者 ' 提示 ( 也与胃癌肝转移相关因此 ( 的表达不仅可以作为胃癌的肿瘤标记物还可以评估胃癌患者的预后情况 ( 的靶向药物同样分为单克隆抗体及小分子抑制剂两大类前者包括已进入期临床试验的 )83"5"5-!4""5 但由于试验中未发现明显的患者获益临床试验目前已经终止另外还有 '' 等抗体类药物但不可否认的是由于 )83"5"5 及 -!4""5 在期临床试验中不理想有人对该类药物的应用提出了疑问小分子抑制剂目前多处于期或期临床试验中包括,34#! ( 及 *(+,) 抑制剂 + 及 &0% 等就目前研究成果来看该类药物依然有一定的前景 ( 靶向药物与其他靶点药物不同的是该类药物多以胃及胃食管交界实体肿瘤为首选研究对象证明了 ( 对于胃癌仍然有较高的研究价值 / 其他相关因子除上述经典通路及靶向药物研究较多的细胞因子外还有许多其他的细胞因子也参与了胃癌的发生发展过程如一些炎症相关因子在其中也起到了重要的作用环氧合酶 /833#!/ 7#%-./ 可通过 0,/1*(+,' (/#4! 等途径抑制胃癌细胞凋亡促进胃癌细胞增殖促进血管及淋巴管的形成并增强肿瘤侵袭转移能力白介素!#48#"!& 家族中 &/&/ &/&/ 等都在胃癌中表达明显升高 &/ 的基因多态性与胃癌易感性相关 &/&/ 同属于 &/ 家族可以激活以 :$ 通路为主的多条信号通路包括 & 通路借以调控细胞增殖凋亡分化促进肿瘤迁徙转移及新生血管的形 '/' 成 &/ 则可以通过 *(+, 途径促进胃癌的转移及血管形成 $ 磷酸化后可以形成其活性形式在胃癌中的表达量是正常黏膜的倍以 '' 上其表达水平在不同肿瘤分期中有区别证明与局部浸润淋巴结转移与远处转移相关影响预后情 ' 况 $ 通过 7"4;;! 及 & 途径改 ' 变细胞凋亡水平还可以通过 *(+, 促进血管生 ' 成 0,/1 通常与 &1 结合为无活性形式经 & 等途径刺激激活后可进入细胞核内影响下游癌基因的表达包括通过 18/. 77# 改变胃癌细胞凋亡情况也可激活 (/#4! 促进胃癌的转移还可通过激活 &,/ 上调 *(+, 促进血管形成此外还可以上调其他胃癌相关因子如 &/ 肿瘤坏死因子 /"534!#43/ ,/ 目前也有报道用这些炎症相关因子进行胃癌的靶向治疗塞来昔布是选择性 %-./ 抑制剂是临床应用成熟的止痛抗炎药物在期临床试验中使用该药物合并化疗治疗胃食管交 ' 界肿瘤患者获益明显硼替佐米作为首批上市的蛋白酶体抑制剂以阻断 0,/1 通路为主目前用于多发性骨髓瘤的治疗但在针对转移性胃癌的期临床试验中例无法经手术治疗的胃癌患者经单药治疗后仅有例病情趋于稳定 $ 抑制剂 -1/ 对胃癌及结肠癌的治疗目前也处于期临床试验中例胃肠道恶性肿瘤患者中例获得了疾病稳定状态细胞粘附分子参与细胞 / 细胞及细胞 / 基质相互作用在肿瘤中表达与正常组织区别较大可能是肿瘤发生浸润转移的基础许多粘附分子如整合素 % 等都高表达于胃癌细胞并参与了胃癌侵袭转移血管生成过程以及细胞凋亡和增殖等但目前针对粘附分子的胃癌靶向治疗多局限于临床前期试验尚未获得更深入的进展 (0'1 值得提出的是近年来非编码 )0 与肿瘤的关系成为了研究的热点其中 543)0 与非编码长链 )0 都参与了胃癌的发生发展过程其中又以前者的研究更为充分 543)0 简称 5)0 是高度保守的小分子单链 )0 通过和靶基因 5)/ 0 的碱基配对引导其降解或阻碍其翻译来调控靶基因的表达目前发现与胃癌相关的 5)0 包括有 5)/5)/5)/5)/5)/8# 5)/5)/ 等通过 5)0 芯片在胃癌中检测上调及下调的 5)0 更是种类繁多有的被验证可作为评估胃癌预后的肿瘤标志物如 5)/ 5)/5)/5)/5)/8# 等有的可作为淋巴结转移的评价指标如 5)/5)/ ' 一些验证性的研究为部分 5)0 提供了可能的机制如 5)/ 可通过抑制生长抑制因子!/ #5#4&0+ 消除其对细胞生长的抑制作用促进肿瘤发生 5)0/ 则通过调节蛋白交互网络降低肿瘤细胞的增殖及转位上调 5)0/ 可降低肿瘤细胞生长粘附侵袭及迁 ' 移 5)/8# 家族可抑制高迁移率蛋白 53843"43#! 增加胃癌的侵袭转移能力 5)/ 家族中 5)//' 可通过抑制促进肿瘤形成还可以通过 +,/ 干扰正常的细胞周!"#"!

8 西安交通大学学报医学版第卷期阻滞及细胞凋亡导致肿瘤细胞的形成本课题组曾就 5)/ 与胃癌的关系作以研究发现其表达与胃癌的侵袭转移密切相关抑制 5)/ 可以降低胃癌细胞的增殖侵袭及迁移能力这个过程可能是由基质金属蛋白酶组织抑制剂! #8343#!7#7& 介导的与蛋白 / 蛋白相互作用的复杂情况不同核酸之间的相互作用更为直接和直观易于设计使用人工设计 5)0 实现目的基因的沉默是实验中的常用技术再结合 5)0 在胃癌中的研究基础针对 5)0 的靶向治疗也有了相应的进展但目前仍多停留在临床前期试验应用人工设计的 5)0 使胃癌细胞中的 ) 基因沉默后其蛋白表达显著减少借此胃癌细胞的侵袭转移能力也相应降低改善了移植瘤模型中胃癌的转移情况尽管基因的沉默已经是成熟技术但目前核酸类药物在临床中仍不如蛋白及其他小分子药物成熟还需要更好的设计及更多的实践基础 + 胃癌的分子靶向诊断胃癌的发病机制目前已经有了广泛系统深入的研究也出现了大量的肿瘤标志物也有部分已经成功运用于靶向治疗这就为胃癌的靶向诊断提供了理论基础胃癌的发生发展是一个慢性长期的过程从癌前疾病包括慢性萎缩性胃炎发展成为病理性癌前改变包括肠型化生不典型增生最后演化为胃癌需要数年甚至数十年的过程但即有如此漫长的过程真正能实现早期诊断的患者仍只是少部分为实现这一目的临床医生亟需有效的筛查方法现在胃癌的诊断主要依靠内镜消化道造影以及一些血清标记物检测然而目前仍缺乏具备高灵敏度及高特异性的胃癌血清标记物而消化道造影不能实现实时病理定位对早期肿瘤诊断价值有限内镜以其直视特点及实时活检可行性成为最重要的检查手段特别是近年来迅速发展起来的放大色素与电子染色技术极大地提高了早期胃癌的诊断率但其关键仍然依靠检查者以肉眼初步判断这就要求检查者在对相关的癌前病变及早期癌灶的形态学观察方面有大量的经验基础而且活检组织形态的多样性以及活检部位随机性可能造成一定的漏检错检现如今随着疾病相关分子机制研究的成熟以及各种影像技术的发展出现了基于疾病特异性分子水平的显像技术所谓分子影像学是运用影像学相关手段显示组织乃至细胞及亚细胞水平的特定分子反映分子水平的变化在影像方面对相关分子的生物学行为进行定性和定量研究其实现手段主要是通过寻找疾病特异性分子的配体耦联各种检测基团包括同位素荧光素顺磁性物质和声学对比剂等形成分子探针应用核医学光学磁共振超声等显像手段诊断疾病 + 分子诊断技术 + 闪烁扫描法现有的闪烁扫描法主要包括正电子发射体层摄影 373!#5773!3534 ( 以及单光子发生体层摄影 7!8#33! #5773! 35"#3534$(% 以同位素作为显像剂该方法具有很高的敏感性可检测到皮摩尔甚至以下级别的探针浓聚也可以实现大范围三维扫描因而成为临床使用最为广泛的分子影像技术方法之一闪烁扫描成像应用包括示踪药物生物学分布监测治疗反应及评估生理上的应答使用此类扫描方式仅使用痕量显影剂可行全身显像使用 ( 显像可以检测细胞摄糖水平判断高代谢细胞进而推测肿瘤的代谢活性良恶定性以及 ' 转移灶的判断这种方法已应用于胃癌的诊断其敏感性远远高于传统形态学检查而且在判断淋巴及远处转移的方面具备明显的优势尽管不能实现内镜的实时活检功能达到确诊但可以实现肿瘤分期以及预后推测为治疗方案的制定提供证据 ++ 光学显像光学显像中内镜作为最常用的胃癌传统筛查手法有着自身独有的优势近年来随着内镜技术的长足发展使用内镜进行分子影像诊断也已经成为可能内镜为实时动态显像因而相较其他影像技术具备更高的时间分辨力其放大特性则提供了更好空间分辨力甚至可以实现亚细胞水平成像内镜使用造影剂多为荧光素其敏感波长范围广泛可以使用多种探针行多光谱成像相对闪烁扫描法内镜检查更加便携经济最重要的是避免了辐射因而可以使用合适剂量达到最理想的信噪比同时实现重复检查扩大了被检查者范围荧光标记的探针特异性结合于病变组织之后病变的区域可以直接被显影进而为活检部位提供了指导提高了活检的成功率甚至可以协助判断疾病的分期预后以及治疗方案的选择这项技术虽尚未广泛应用于临床但在活体动物内镜模拟实验中甚至对病人 / 的临床试验中取得了成功除内镜之外生物发光共聚焦显微镜检双光子显微术以及荧光分子体层摄影也可以用于分子光学成像技术 +* 磁共振磁共振在消化道肿瘤诊断中并不是首选检查但其相对闪烁扫描成像磁共振没有放射性损害其微米级别的空间分辨力可以更精细的反映解剖结构及分子生物学行为相对内镜检查磁共振在!"#"!

9 期和水祥张丹禄韶英胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展消化道局部无法提供更细致的影像呈现以及实时活检功能但其不受组织深度的限制在判断局部肿瘤浸润深度肿瘤淋巴结及全身转移情况有着明显的优势超磁性造影剂因体积微小可以通过血流灌注分布到全身各个级别血管中并分布至网状内皮系统从而达到全身所有的组织间隙里这种探针高效的血管引流以及低效的淋巴引流可以定位量化肿瘤大小这种途径为原发肿瘤的诊断转移灶的判断以及监测肿瘤治疗的应答提供了一种简单可行的方法 <0+ 等使用超磁性纳米粒结合抗 % 单克隆抗体作为靶向分子探针使用磁共振检测成功实现了动物体内人胃癌移植瘤的成像 +- 超声超声不像上述三种分子影像检查方法一样具备高度精细的空间分辨率也没有闪烁扫描法及磁共振法的组织深度穿透力及三维重建能力在消化道疾病的诊断中更缺乏内镜直观的成像功能及活检功能而且所用造影剂灵敏度也相对较低因而很少用于胃癌的分子影像诊断尽管如此超声却是最经济简便且能兼顾时间分辨率和组织穿透力的检查它具备内镜一样的实时成像功能同时有一定的深部组织检查能力并且在血管的检查上有其特有的优势因而也在胃癌的多平台诊断中占有一席之地有研究者使用 *(+,) 或整合素靶向微泡可以靶向 /' 检测肿瘤新生血管从而对肿瘤进行诊断 ++ 分子探针分子影像的核心是能针对肿瘤标记物的各种分子探针临床上可供使用的分子探针一般包括个要素可以产生信号被分子影像设备所检测到的基团可以优化整个分子药代动力学的载体以及可以靶向结合检测目标的亲和配体其中信号基团以及靶向配体又是整个分子探针的核心关键一个可用于临床的探针特征应该包括以下几个方面首先病变组织特异性的摄取以及靶向的保留探针分子同时对背景有很低的结合效应实现高度的信噪比使影像对比度尽可能最大化此外探针分子还需要在体内有高稳定性及完整性同时还需要合适的清除时间和药代动力学特征因而探针可以快速到达病变部位稳定成像并维持足够时间供仪器检测之后快速排出减少毒副反应最后探针应当低毒性低免疫原性易于制备造价低廉且应用安全随着分子影像技术的发展显像基团中已有趋于应用成熟的因此寻找研制针对各种疾病的特异性配体就更成为分子影像技术发展的关键现在已开发的配体主要包括抗体改良抗体多肽适体以及一些其他小分子此外一些新技术探针例如基于纳米级别材料包括量子点碳纳米管多聚纳米粒等的特殊改造探针以及一些体内激活探针等都已被开发研究并已经展现出一定的应用前景在配体的开发过程中选择合适的肿瘤标记物也决定了该探针在临床中的应用价值因为靶向诊断提出的较靶向治疗晚因此尽管各种靶向治疗药物如抗体小分子靶向药物已获得了一定临床上的成功但实际中真正用于临床的靶向分子探针仍属稀缺目前临床上成功应用的分子探针应属,/ 脱氧葡萄糖,/68"#38"37#,/,+ 及,/ 氟脱氧胸苷,/68"3435!#,/, 分别可以显示细胞的糖代谢及 0 合成水平在胃癌的诊断中均可以发挥作用但实际上这还并非严格意义中的靶向探针无法像靶向治疗药物那样具有某种标志物或信号通路的特异性因此目前的诊断还面临着高灵敏低特异的特点在诊断性肿瘤标记物的选择上以癌组织与正常组织间的表达差异为首选原则而非治疗性靶点需要考虑该标记物在胃癌发生发展机制中的作用是否处于关键点位置膜蛋白作为受体较分泌蛋白更具优势使探针更易结合于癌细胞本身而不会更多进入间质或循环系统造成高的显像背景值目前探针配体的获取分为天然存在及人工获取前者多指各种受体的天然生物小分子肽类或核酸配体后者指利用不同的方式筛选设计而获得的抗体改良抗体多肽或核酸配体前者由于受肿瘤标记物受体种类限制多不能使肿瘤敏感性及特异性发挥至比较高的位置而后者因其高通量筛选及设计的特性可以自由选择受体但配体与受体的亲和力及特异性却有待后期大量的验证还有研究以各种高通量筛选法为主要方式如噬菌体展示技术指数式富集的配体系统进化技术等筛选对象可以为蛋白细胞组织甚至活体使用细胞组织或活体筛选可以更好的模拟实际检测环境但多无法明确受体需要后期复杂的验证一步步确认使用蛋白核酸筛选可以具体选择标志物但在实际中对肿瘤组织细胞的检测能力还需进一步验证本课题组曾使用粘附分子及胃癌干细胞相关标记物 % 及其可变型外显子编码区进行噬菌体展示肽的筛选得到两个多肽配体经荧光或生物素标记后发现可以在体外检测 / % 或 %; 阳性的胃癌细胞及组织实践中针对胃癌的靶向诊断研究目前相对其发病机制及靶向治疗的研究仍然比较少相对其他消化道肿瘤如结肠癌食管癌研究也较薄弱曾有研究团队使用 (+,) 抗体实现了内镜下靶向诊断结肠癌而另一项针对 14# 食管的内镜下靶向诊断研究目!"#"!

10 西安交通大学学报医学版第卷前已经进入临床试验阶段因此胃癌的靶向诊断还有待今后更加深入的研究 * 结语及前景胃癌的发病是一个相当复杂的病理过程其中涉及了非常多的基因及分子信号通路而随着相关研究的不断深入可作为胃癌肿瘤标记物的分子也逐渐被人们所发现尽管与胃癌相关的因子非常多但真正在胃癌靶向治疗中发挥决定性作用的并不多目前应用于临床比较多的包括多种生长因子受体家族 & 通路以及一些炎症相关因子等这些靶点一般都是一条或数条通路中的关键点所在同时表达位置易于实现靶向治疗有了病因学及靶向治疗的研究基础胃癌的靶向诊断也逐渐被提出临床中内镜闪烁扫描法磁共振超声均可用做诊断仪器其相应显像剂的开发也趋于成熟但与胃癌病因学及靶向治疗研究不匹配的是用于胃癌靶向诊断的配体开发或应用现有配体做分子显像的研究仍然较少这也为后续的研究者提供比较大的空间为胃癌的分子特异性早期筛查做出贡献参考文献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

11 期和水祥张丹禄韶英胃癌的分子机制及靶向诊断研究进展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

12 西安交通大学学报医学版第卷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编辑邱芬!"#"!

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人