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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 临床研究 肿瘤相关巨噬细胞与新疆哈萨克族食管鳞癌的相关性分析 刘 凯 刘记红 江现丽 王雪丽 袁 野 袁伟媛 王利霞 梁伟华 李 锋 胡建明 石河子大学医学院病理系 石河子大学医学院第一附属医院病理科 新疆石河子 首都医科大学朝阳医院病理科 北京 摘要 目的 初步探讨肿瘤相关巨噬细胞与哈萨克族 哈族 食管鳞癌发生和发展的相关性 方法 收集 例食管鳞癌 癌旁正常组织及样本临床病理学资料 以 "#$ 为分子标记物 运用免疫组织化学方法检测哈族食管鳞癌和癌旁正常组织中肿瘤相关巨噬细胞的分布 通过计数肿瘤相关巨噬细胞数目来量化肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤 癌巢和间质部位 以及癌旁正常组织 上皮和间质部位 的分布及密度 同时结合临床病理资料及患者预后情况 分析高密度的肿瘤相关巨噬细胞是否与哈族食管鳞癌发生和发展及不良预后具有相关性 结果 哈族食管组织癌巢及间质中 "#$ 阳性的肿瘤相关巨噬细胞的密度明显高于癌旁正常组织 均 % 哈族食管鳞癌癌巢中的肿瘤相关巨噬细胞密度与哈族食管鳞癌淋巴结转移和临床病理分期 晚期 具有明显的正相关性 % 而这种相关性更明显的体现在哈族食管鳞癌间质中的肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤淋巴结转移和临床病理分期 晚期 之间 通过生存分析发现在哈族食管鳞癌癌巢中高密度 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布与患者的不良预后密切相关 % 结论 高密度肿瘤相关巨噬细胞可促进新疆哈萨克族食管鳞癌的发生发展 且可作为哈萨克族食管鳞癌的不良预后因素 关键词 肿瘤相关巨噬细胞 "#$ 食管鳞状细胞癌 哈萨克族中图分类号 &$ 文献标志码 ' $%!"!#$% "$!!!" "&#'$#$%!!!% ( )(*+!, )'-. /(!*0( 1'-. /*0( '- '- 1(*! 1'-.(*( '-. 1(*!, )(!*(!, #!+2+0+,3(4(!(56(3++0+7((!#!+ 2+0+,(6'(0(+6(03(4(!(56(3++0+7((! 3(4(#!+2+0+,8((!,"+!,+6(0+ "(07(0!(56(8((!,"(! ()*+,(+##"#()!" ###"(*+,(-###&.##"# (-###/$00##"1#0)'"##(#" (#&0$")!,"# 0#""# ")!"- " )!(""&) ###(#""( ( +" " )!"#"###""(*+,/$00"( ((& " )!"# 收稿日期 修回日期 9 基金项目 国家自然科学基金资助 '&9$$%$$9 石河子大学大学生研究训练计划 $'&$$ $((" ''$##"0'&9$$%$"$9"$+ $"#" $1#'&$$ 通信作者 胡建明 副教授 &/ 1&$&# 优先出版 (,&#,&,#"$&&&&$&&!

2 期 刘 凯 刘记红 江现丽 等 肿瘤相关巨噬细胞与新疆哈萨克族食管鳞癌的相关性分析 % 0)'&%& " )!"#(# ( ""##(# "#" *+,/$00 &%"# "" )!" (""##(# "#"&& "" 0$()!## "(#((/$00 &%& " )!# (###""(*+,/$001"#"((## /$00*+,((& -. /,* #"#( )!0$(-###*+, 食管癌是我国最常见的恶性消化道肿瘤之一 位于我国西北部的新疆哈萨克族 哈族 是食管癌的高发民族 由于特殊的地域 民族和经济落后等因素 其食管癌的死亡率高达 $% 万 远远高于全国 均水平的 9% 万 食管癌的发病症状隐匿 病情进展快 预后较差 % 年生存率仅有 :%: 其主要原因与高侵袭性有关 近年来研究发现肿瘤微环境中的巨噬细胞在多 *9 种肿瘤的侵袭和转移中起到重要的作用 巨噬细胞可分为 7 和 7 两种亚型 两者在免疫功能上存 % 在显著差异 7 型巨噬细胞可释放大量的炎性因子如肿瘤坏死因子 *;-* 白介素 *$*$ 白介素 ** 等 具有杀灭微生物 破坏癌细胞的活性 7 型巨噬细胞低表达 * 和 7"* 类分子 高表达 * $ 因具有与肿瘤相关巨噬细胞 ;'7 类似的表型 在抑制炎症 促进肿瘤生长和免 疫抑制中发挥重要的作用 尽管肿瘤相关巨噬细胞在多种肿瘤的研究中已经显示其促癌的作用 但其在哈族食管鳞癌发生和进展中的作用尚未探明 故我们拟通过检测肿瘤相关巨噬细胞在食管鳞癌中的分布 结合临床病理学特征及预后 初步探讨肿瘤相关巨噬细胞在新疆哈族食管鳞癌发生和进展中的作用及其与食管鳞癌患者预后的相关性 0 材料与方法 00 组织来源及处理 收集 年 % 月至 9 年 $ 月份伊犁州友谊医院病理科具有完整临床病理资料的哈族食管癌患者癌及癌旁正常组织石蜡样本各 例 组织相关病理参数信息详见表 患者男性 名 女性 名 年龄分布为 %$ 岁 平均年龄 % 岁 术后病理诊断证实为鳞状细胞癌 所有患者术前均未接受放 化疗等相关治疗 记录患者的临床病理参数 根据 1 "066(((+!;+6+ #(,6(536 食管鳞癌的组织学分级 高分化鳞癌 例 中分化鳞癌 9 例 低分化鳞癌 例 癌组织浸润深度 浸润黏膜 * 肌层 ;;$ 例 浸润外膜及食管周围结构 ;;9$9 例 淋巴结转移情 况 有淋巴结转移 % 例 无淋巴结转移 % 例 临床分期 期 $ 例 期 例 患者临床手术治疗后行预后随访 随访时间 $ 年 随访方式为电话及信件随访 所有病例癌及癌旁组织制成石蜡标本 行 染色 由 名高年资病理科诊断医生进行复诊 并对免疫组化切片进行诊断分析 01 抗体及试剂 小鼠抗人 "#$ 单克隆抗体 北京中杉金桥公司 克隆号 2 免疫组化!5(6(+! 二步法试剂盒 武汉博士德公司 33 #'8 显色试剂盒 #+ 公司 货号 % 0 免疫组化染色 将组织标本 9 连续切片 经脱蜡水化后将组织切片置于枸橼酸微波加热 (! 后将切片放于 溶液中静置 (! 用 283 缓冲液轻微振洗 次后 配置一抗 9 过夜 于第二日将组织切片放置温箱 孵育半小时 283 缓冲液轻微振洗 次后滴加二抗 放入温箱 孵育 (! 后加 #'8 进行显色 显色后用水冲洗 苏木素复染核 (! 用酸乙醇分化 9$6 后放入自来水中蓝化 %(! 后用乙醇梯度脱水 后用中性树胶封片 以扁桃体组织作为 "#$ 分子的阳性对照 283 缓冲溶液代替一抗作为阴性对照 0 肿瘤相关巨噬细胞的计数 "#$ 分子表达位于细胞膜或细胞质 呈棕黄色颗粒 同时 "#$ 可特 * 异性标记肿瘤相关巨噬细胞 计数方法为每例组织切片在显微镜下通过低倍镜 观察 选取 % 个具有代表性的区域 即 热区 同时由 位不同的临床病理医生在高倍镜 9 下确定癌巢及间质部位中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的数目 具体数目判读方法为每张组织切片 癌巢和癌间质部位 在显微镜下选取 % 个 热区 视野 计数阳性细胞的数量 然后取其平均值 0 统计学分析 本研究应用 3233 软件进行数据分析 采用 检验分析癌及癌旁正常组织中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布差异 采用四格表 检验分析肿瘤相关巨噬细胞与临床病理参数的关系 最后应用 0!*7( 生存分析法分析 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的密度与患者临床预!

3 % 西安交通大学学报 医学版 第 卷 后的关系 % 为差异具有统计学意义 1 结 果 10 阳性肿瘤相关巨噬细胞在哈族食管鳞癌患者癌及癌旁正常组织中的分布 本实验中采用 "#$ 分子作为癌及癌旁正常组织中肿瘤相关巨噬 细胞的标记物 "#$ 阳性表达部位在细胞质 呈棕黄色 我们发现 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞主要位于癌组织间质中 少数位于癌巢中 图 同时与癌旁正常组织上皮及间质部位相比 哈族食管鳞癌组织中癌巢和间质部位的肿瘤相关巨噬细胞数目明显增多 图 图 0 哈族食管鳞癌患者癌及癌旁正常组织 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布情况 (,#(6((+!+"#$*+6((5;'76(!46+,06<+6 0(!+!!!!+0(666 ' 癌旁正常组织上皮部位 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布 8 癌旁正常组织间质部位 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布 " 食管鳞癌组织癌巢部位 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布 # 食管鳞癌组织间质部位 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布 图 1 哈族食管鳞癌患者癌和癌旁组织中 阳性肿瘤相关巨噬细胞的差异性分布 (, ;(!(6((+!+"#$*+6((5;'76(! 46+,06<+6 0 (!+!!!!+0(666 ' 食管鳞癌癌巢中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞数目明显多于癌旁正常组织上皮 8 食管鳞癌间质中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞数目明显多于癌旁正常组织间质部位 11 哈族食管鳞癌患者 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布与其临床病理特征的关系 我们分析了 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞与哈族食管鳞癌临床病理参数的相关性 发现癌巢部位中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的数量与食管鳞癌患者淋巴结转移及临床分期 晚期 具有显著的相关性 % 而这种相关性更明显的体现在间质中肿瘤相关巨噬细胞与食管鳞癌淋巴结转移及临床分期 晚期 之间 表 1 阳性肿瘤相关巨噬细胞与哈族食管鳞癌患者预后的关系 为进一步研究高密度 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞是否会对哈族食管鳞患者的临床预后产生不良影响 我们采用 0!*7( 生存曲线分析食管鳞癌组织中不同部位 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞密度与哈族食管鳞癌中预后的相关性 发现 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞密度在瘤间质部位中的高低分布与哈族食管鳞癌不良预后无显著的相关性 % 图 然而在肿瘤癌巢部位可发现 "#$ 阳性 肿瘤相关巨噬细胞密度的高低分布与哈族食管鳞癌不良预后有显著的相关性 图 讨 论肿瘤相关巨噬细胞是一种高度异质性的细胞群体 在体内复杂的微环境中表现出独特的表型和功 能 研究证实肿瘤相关巨噬细胞数量的增加与多 *% 种肿瘤的进展及不良的预后存在明显的相关性 然而 肿瘤相关巨噬细胞在哈族食管鳞癌发生 进展及其与患者预后的相关性尚未阐明清楚 研究证实 "#$ 可作为肿瘤相关巨噬细胞的特异标志物 在食管鳞癌组织中 我们发现 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞主要位于肿瘤间质中 癌巢中也有少许 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞存在 通过分析我们发现食管鳞癌组织中癌巢和间质部位的 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞数目较癌旁正常组织明显增多!

4 期 刘 凯 刘记红 江现丽 等 肿瘤相关巨噬细胞与新疆哈萨克族食管鳞癌的相关性分析 % 表 0 哈族食管鳞癌患者 阳性肿瘤相关巨噬细胞的分布与其临床病理特征的关系 ;"+0(+!=!(6((+!+"#$*+6((5;'76! 0(!(0+0+,+46+,06<+6 0 (!+ 病理参数 病例数 癌巢 > 癌间质 > 年龄 岁 % % > 99> %% % 9 >% 9> 性别 男 9> 9%>9 % 女 >9% 99>% 肿瘤部位 上段 > 9%>$ 中段 9 9> $ 9$>% 下段 9 %>9% > 分化程度 高分化 >$ 9%9>%9 中分化 9 %>% 9 9$>%$$ 低分化 >%9 %%> 浸润深度 ;; $ >%% 9> % ;;9 $9 >9 9%> 淋巴结转移 无转移 % >% >% 有转移 % %$>% %9$>% 临床分期 期 $ >% 9> 期 $> %%> % 图 阳性肿瘤相关巨噬细胞分布与哈族食管鳞癌患者预后的相关性 (,"+0(+!=!(6((+!+"#$*+6((5;'7!+,!+6(6+4(!6=( 6+,06<+6 06 '"#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞密度在癌巢部位中与哈族食管鳞癌不良预后有显著的相关性 8"#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞密度在间质部位中与哈族食管鳞癌预后无显著的相关性 结合临床病理参数进行分析 我们发现癌组织癌巢和间质中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的数量与哈族食管鳞癌患者的淋巴结转移和临床分期具有显著的 $ 正相关性 学者 / 等在其食管鳞癌的研究报道 中也得到相似的结果 在癌间质中 我们还发现 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的数量与肿瘤部位也具有相关性 即食管中段肿瘤中 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞的数量明显多于食管下段 相似的结果在甲!

5 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 * 状腺乳头状癌和黑色素瘤中也可见到 上述结果提示 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞 尤其是位于癌间质部位中的肿瘤相关巨噬细胞与哈族食管鳞癌的发生及发展具有紧密的相关性 研究结果显示 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞数量的增加与哈族食管鳞癌的淋巴结转移及肿瘤的进展密切相关 那么这种相关性是否还预示着患者的不良预后呢 为此我们进一步结合食管鳞癌患者的预后情况 分析发现食管鳞癌癌巢部位中高密度 "#$ 阳性的肿瘤相关巨噬细胞与哈族食管鳞癌患者较差的预后关系密切 相似的结果也出现在舌咽鳞癌和甲 * 状腺乳头状癌的研究报道中 提示肿瘤组织癌巢中浸润的 "#$ 阳性肿瘤相关巨噬细胞数量的不断增加促进了肿瘤的转移和进展 可能可以作为哈族食管鳞癌不良预后的评判指标 食管鳞癌间质中肿瘤相关巨噬细胞密度的增高虽也显示患者不良预后 但无统计学意义 结合临床病理参数分析我们发现食管鳞癌间质较癌巢肿瘤相关巨噬细胞数量的增多 显示与患者的淋巴结转移及临床分期关系更密切 但预后反而癌巢巨噬细胞数量的增加与患者预后关系更密切 提示癌巢与间质中肿瘤相关巨噬细胞可能对肿瘤细胞具有不同程度的免疫作用 其对放化疗产生的敏感性及抵抗作用也不相同 可能是导致不同部位肿瘤相关巨噬细胞对食管鳞癌临床病理特征与预后影响不完全一致的原因 参考文献 王秀梅 李锋 秦江梅 等 & 新疆哈萨克族食管癌危险因素病例对照研究 & 中国公共卫生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编辑 韩维栋!

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