2016 Vol.18 No 方法 动物分组 造模及给药 g ml -1 PD 2 g kg -1 D % 40 k

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1 镇肝熄风汤对帕金森病肝阳上亢证大鼠 * 旋转行为的影响 (1. 齐齐哈尔医学院医药科学研究所齐齐哈尔 ;2. 齐齐哈尔医学院卫生所齐齐哈尔 ) 摘 要 Parkinson s Disease PD 6-OHDA PD 28 PCR E2 2 Transcription Factor NF-E2-Related Factor 2 Nrf2 Nfe2l2-1 Heme Oxygenase 1 HO-1 Hmox-1 Western blot Keap1 PD Nfe2l2 Hmox-1 mrna Keap1 Nfe2l2 Hmox-1 mrna Keap1 PD Nfe2l2 Hmox-1 mrna Keap1 PD 关键词 E2 2 doi /wst R2-031 A PD PD PD 1 材料和方法 Dopamine DA [1] 1.1 材料 实验动物 Wistar g PD [2] PD SCXK 药物 6-Hydroxydopamine 6-OHDA PD PI3K/Akt/GSK-3β World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica 2137

2 2016 Vol.18 No 方法 动物分组 造模及给药 g ml -1 PD 2 g kg -1 D % 40 kg -1 mg Paxions OHDA Santa Cruz 5.2 mm 1.8 D2312 Apomorphine Cayman 7.6 mm 6-OHDA 2 μl 试剂 PrimeScript RT Reagent kit TaKaRa 8 g kg -1 BK4001 SYBR Premix 16 g kg -1 Ex Taq TakaRa 32 g kg -1 AK2603 TRIzol Reagent Ambion Nfe2l 大鼠平衡能力检测 5'-CCCAGCACATCCAGACAGAC-3' 5'-TATCCAGGGCAAGCGACTC-3' Hmox-1 5'-TGCTCGCATGAACACTCTG-3' 阿朴吗啡诱导的旋转行为评价 5'-TCCTCTGTCAGCAGTGCCT-3' Gapdh 0.5 mg kg min 5'-GACAACTTTGGCATCGTGGA-3' R5'- ATGCAGGGATGATGTTCTGG-3' P min Thermo PH GAPDH Cell signaling 8 Keap1 表达 Santa Cruz F2615 TRIzol Reagent RNA cdna PrimeScript RT 仪器 Stratagene Mx3005P PCR Ct 2-ΔΔ Ct Nfe2l2 Hmox- Agilent Mx3005P S1000 Thermal Cycler BIO-RAD S Western blot 法检测核 Keap1 蛋白表达 C I C XPE504 SDS-PAGE METTLER TOLEDO 5% Keap1 4 XPE504 ELX800 BioTek TBST ELX800 DXP-2 ECL Smart Chemi Image DXP-2 Analysis System JY-ZY2 JY-CZ1 Smart Chemi Image Analysis System SPSS 13.0 SmartChemi μg μl mg kg Real-time PCR 检测 Nfe2l2 和 Hmox-1 mrna SYBR Premix Ex Taq 1 mrna 统计学方法 - x s 2138 World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica

3 SNK P<0.05 P< 结果 2.1 镇肝熄风汤改善 PD 肝阳上亢证模型大鼠运 动行为损伤 Hmox-1 mrna 2 PD 2.4 镇肝熄风汤抑制了 PD 肝阳上亢证模型大鼠 30 min 中脑黑质 Keap1 蛋白表达 P<0.05 Western blot PD 30 Keap1 min P<0.05 P>0.05 Keap1 P>0.05 PD P<0.05 PD 1 Keap1 P> 镇肝熄风汤上调了 PD 肝阳上亢证模型大鼠 中脑黑质 Nfe2l2 mrna 表达 PCR PD 3 讨论 Nfe2l2 mrna P<0.05 Nfe2l2 mrna P<0.05 PD 6-OHDA PD Nfe2l2 mrna P>0.05 PD 2.3 镇肝熄风汤诱导了 PD 肝阳上亢证模型大鼠 中脑黑质 Hmox-1 mrna 表达 Hmox-1 mrna P<0.05 PD Hmox-1 mrna P>0.05 PD PD Keap1 3 Nfe2l2 mrna 2 6-OHDA PCR PD PD Hmox-1 mrna PD 图 1 各组大鼠运动行为损伤的比较 A. B. * P<0.05 # P<0.05 P<0.05 World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica 2139

4 2016 Vol.18 No.12 图 2 各组大鼠中脑黑质 Nfe2l2 和 Hmox-1 mrna 表达的差异 * P<0.05 # PD 6-OHDA PD [3] DA PD [4] PD [5] PD 4 PD DA HO-1 MPP + 6-OHDA HO-1 [6,7] HO-1 [8] PD PD PD [9] HO-1 [10] 6-OHDA DNA [11] DA [12] 6-OHDA PD Hmox-1 mrna Hmox-1 mrna PD [13] Nrf2 图 3 各组大鼠中脑黑质 Keap1 蛋白表达的变化 A.Keap1 B.Keap1 [14] Nrf2 HO-1 # P<0.05 [15] Nrf2 MPTP [16] Nrf2 6-OHDA 6-OHDA MPP + MPTP PD [17-19] PD DA Nrf2 6-OHDA DA [20] PD DA Nfe2l2 mrna 2140 World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica

5 Nfe2l2 mrna Nfe2l2 Keap1 Keap1 Hmox-1 PD Nfe2l2 PD 参考文献 1 Bolner A, Micciolo R, Bosello O, et al. A panel of oxidative stress markers in Parkinson s disease. Clin Lab, 2016, 62(1-2): 谭文澜, 张永全, 陆晖. 镇肝熄风汤治疗肝肾阴虚型帕金森病的临床研究. 湖北中医药大学学报,2012,14(3): Penttinen A M, Suleymanova I, Albert K, et al. Characterization of a new low-dose 6-hydroxydopamine model of Parkinson s disease in rat. J Neurosci Res, 2016, 94(4): Gong L, Zhang Q L, Zhang N, et al. Neuroprotection by urate on 6-OHDA-lesioned rat model of Parkinson s disease: linking to Akt/ GSK3β signaling pathway. J Neurochem, 2012, 123(5): Suzuki S, Kawamata J, Iwahara N, et al. Intravenous mesenchymal stem cell administration exhibits therapeutic effects against 6-hydroxydopamine-induced dopaminergic neurodegeneration and glial activation in rats. Neurosci Lett, 2015, 584(1): Yang C, Zhao J, Cheng Y, et al. N-propargyl caffeate amide (PACA) potentiates nerve growth factor (NGF)-induced neurite outgrowth and attenuates 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced toxicity by activating the Nrf2/HO-1 Pathway. ACS Chem Neurosci, 2015, 6(9): Chuang J I, Huang J Y, Tsai S J, et al. FGF9-induced changes in cellular redox status and HO-1 upregulation are FGFR-dependent and proceed through both ERK and AKT to induce CREB and Nrf2 activation. Free Radic Biol Med, 2015, 89(1): Li X, Ye F, Li L, et al. The role of HO-1 in protection against leadinduced neurotoxicity. Neurotoxicology, 2016, 52(1): Ganesan P, Ko H M, Kim I S, et al. Recent trends in the development of nanophytobioactive compounds and delivery systems for their possible role in reducing oxidative stress in Parkinson s disease models. Int J Nanomedicine, 2015, 10(1): Mackern-Oberti J P, Riquelme S A, Llanos C, et al. Heme oxygenase-1 as a target for the design of gene and pharmaceutical therapies for autoimmune diseases. Curr Gene Ther, 2014, 14(3): Liu H, Mao P, Wang J, et al. Allicin protects PC12 cells against 6-OHDA-induced oxidative stress and mitochondrial dysfunction via regulating mitochondrial dynamics. Cell Physiol Biochem, 2015, 36(3): Buendia I, Michalska P, Navarro E, et al. Nrf2-ARE pathway: an emerging target against oxidative stress and neuroinflammation in neurodegenerative diseases. Pharmacol Ther, 2016, 157(1): Mutter F E, Park B K, Copple I M. Value of monitoring Nrf2 activity for the detection of chemical and oxidative stress. Biochem Soc Trans, 2015, 43(4): Johnson D A, Johnson J A. Nrf2 a therapeutic target for the treatment of neurodegenerative diseases. Free Radic Biol Med, 2015, 88(1): Lv E, Deng J, Yu Y, et al. Nrf2-ARE signals mediated the antioxidative action of electroacupuncture in an MPTP mouse model of Parkinson s disease. Free Radic Res, 2015, 49(11): Kaidery N A, Banerjee R, Yang L, et al. Targeting Nrf2-mediated gene transcription by extremely potent synthetic triterpenoids attenuate dopaminergic neurotoxicity in the MPTP mouse model of Parkinson s disease. Antioxid Redox Signal, 2013, 18(2): Cuadrado A, Moreno-Murciano P, Pedraza-Chaverri J. The transcription factor Nrf2 as a new therapeutic target in Parkinson s disease. Expert Opin Ther Targets, 2009, 13(3): Zou Y, Wang R, Guo H, et al. Phytoestrogen β-ecdysterone protects PC12 cells against MPP + -induced neurotoxicity in vitro: involvement of PI3K-Nrf2-regulated pathway. Toxicol Sci, 2015, 147(1): Wang X L, Xing G H, Hong B, et al. Gastrodin prevents motor deficits and oxidative stress in the MPTP mouse model of Parkinson's disease: involvement of ERK1/2-Nrf2 signaling pathway. Life Sci, 2014, 114(2): Aguiar A S Jr, Duzzioni M, Remor A P, et al. Moderate-intensity physical exercise protects against experimental 6-hydroxydopamineinduced hemiparkinsonism through Nrf2-antioxidant response element pathway. Neurochem Res, 2016, 41(1-2): Effects of Zhen Gan Xi Feng (ZGXF) Decoction on Amphetamine-Induced Rotation in Rats with Parkinson s Disease (PD) with the Syndrome of Liver-Yang Hyperactivity Li Xiaoming 1, Zhang Lihua 2, Qi Yanqiu 2, Sun Ying 2, Zhu Lanqin 2, Dong Miaoxian 2 (1. The Institute of Medicine, Qiqihar Medical Univeristy, Qiqihar , China; World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica 2141

6 2016 Vol.18 No Health Center, Qiqihar Medical Univeristy, Qiqihar , China) Abstract: The aim of this study was to explore the effects of ZGXF decoction on amphetamine-induced rotation in PD rats with syndrome of liver-yang hyperactivity, and its mechanism involved. Rats received 6-OHDA administration via intra-substantia nigra injection and were intragastrically treated by Fu Zi decoction to establish the PD model with the syndrome of liver-yang hyperactivity. Three doses of ZGXF decoction or selegiline were given by a 28-day intragastric administration. The rats were tested for amphetamine-induced rotation asymmetry. In addition, real-time PCR were adopted to analyze the expressions of Nfe2l2 and Hmox- 1 mrnas, while western blot to analyze the expression of Keap1 protein. As a result, it was found that ZGXF decoction dose-dependently attenuated amphetamine-induced rotation, up-regulated the expressions of Nfe2l2 and Hmox-1 mrnas, and down-regulated the expression of Keap1 protein in the substantia nigra in PD rats with syndrome of liver-yang hyperactivity. It was suggested that anti-pd effects of ZGXF decoction be attributed to the up-regulation of Nfe2l2 and Hmox-1 mrnas and the down-regulation of Keap1 protein, being associated with oxidative stress, in the substantia nigra of PD rats with syndrome of liver- yang hyperactivity. Keywords: Zhen Gan Xi Feng decoction, rotation behavior, transcription factor NF-e2-related factor 2, syndrome of liver-yang hyperactivity, Parkinson's disease 2142 World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica

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