方法模型制备 40 只雄性 Wistar 大鼠适应性喂养 1 周后, 从中随机选出 10 只作为空白组, 其余作为糖尿病模型组隔夜禁食不禁水 12 h, 模型组一次性腹腔注射 1% STZ 溶液 60 mg/kg 体质量, 对照组则给予等体积柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液

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1 836 DOI: /j.issn 黄芪注射液抑制糖尿病大鼠海马神经元凋亡的机制研究 * 李虎虎 1, 魏冰 1, 曾文赟 2, 索艳荣 2, 高青 1, 王一婧 1, 孙英新 1, 张云莎 1, 范英昌 1, 杨 1 琳 (1. 大学, 天津 ;2. 赣州市人民医院, 赣州 ) 摘要 :[ 目的 ] 探讨黄芪注射液对糖尿病模型大鼠认知功能的影响及其作用机制 [ 方法 ] 40 只雄性 SD 大鼠, 除空白组 (n=10) 外腹腔注射链脲佐菌素 (60 mg/kg) 复制 Ⅰ 型糖尿病大鼠模型, 随机分为模型组和黄芪注射液组 (1.6 mg/kg), 给药 10 周以 Morris 水迷宫法进行学习记忆功能测试, 随即处死大鼠分离血清及脑组织, 分别测定空腹血糖空腹胰岛素水平和乙酰胆碱酯酶含量,RT-PCR 法测定海马 Bcl-2 及 Bax mrna 表达情况, 免疫蛋白印迹法 (Western blot) 测定海马乙酰胆碱酯酶和 Caspase-3 的蛋白表达及免疫组化法观察海马各区 Caspase-3 蛋白的阳性表达情况 [ 结果 ] 黄芪注射液能显著提高糖尿病脑病大鼠学习记忆能力, 降低糖尿病大鼠空腹血糖水平及 AchE 含量, 升高血清胰岛素水平, 减少海马 AchE 及 Caspase-3 蛋白的表达, 升高海马抗凋亡基因 Bcl-2 的表达, 降低促凋亡基因 Bax 的表达 [ 结论 ] 黄芪注射液能够显著改善糖尿病大鼠学习记忆功能, 其作用机制可能与减少 AchE 含量抑制神经细胞凋亡有关关键词 : 黄芪注射液 ; 糖尿病 ; 认知功能障碍 ; 神经细胞凋亡中图分类号 :R255.4 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) 糖尿病是一种以血糖升高为主要特征的代谢 [1] 障碍综合征越来越多的研究显示长期慢性高血糖状态可对中枢神经系统 (CNS) 造成损害, 进而发展为糖尿病脑病, 主要临床表现以认知障碍学习 [2-3] 和记忆能力下降为主最近研究表明, 神经细胞凋亡和海马组织细胞的增殖迁移分化紊乱在糖尿病的发生中起到了重要作用, 其中胆碱能神经元的退化被认为是造成糖尿病认知障碍的重要病理因素本课题组前期工作证实黄芪注射液可以抑制链脲佐菌素 (STZ) 诱导的 Ⅰ 型糖尿病大鼠海马神经元的凋亡故本实验基于前期研究, 进一步探讨黄芪注射液是否通过抑制海马神经元的凋亡以改善糖尿病大鼠的认知功能 1 材料与方法 1.1 材料实验动物 SPF 级 Wistar 大鼠 40 只, 雄性, 体质量 (220±20)g, 购自北京华阜康生物科技股 * 基金项目 : 天津市自然科学基金项目 (08JCYBJC10800); 高等学校博士点基金项目 ( ) 作者简介 : 李虎虎 (1986-), 男, 博士研究生, 主要研究方向为中医药防治糖尿病脑病的机制研究通讯作者 : 杨琳, yanglin7809@sina.com 份有限公司, 动物许可证号 :SCXK( 京 ) 全程普通饲料喂养, 自由摄食饮水动物房室温 20~25, 相对湿度 50%~70%,12 h 光照维持, 昼夜循环实验试剂与药品黄芪注射液 (Huangqi Injection, HI), 河北神威药业 ( 国药准字 :Z ); 链脲佐菌素 (STZ), 美国 Sigma-Aldrich 公司 (Cat#: S0130); 葡萄糖测定试剂盒, 上海荣盛生物技术有限公司 (Cat#:CAT361500); 胰岛素 ELISA 检测试剂盒, 美国 Cloud-Clone Corp(Cat#:CEA448Ra); 乙酰胆碱酯酶 (AchE), 南京建成生物工程研究所 (Cat#: A024);SYBR Green 试剂盒, 北京天根生化科技有限公司 (Cat#:FP205-02);AchE 兔抗大鼠多克隆抗体, 武汉博士德生物工程有限公司 (Cat#:PB0382); Caspase-3 兔抗大鼠多克隆抗体, 武汉博士德生物工程有限公司 (Cat#:PB0183); 羊抗兔 IgG-Biotin, 武汉博士德生物工程有限公司 (Cat#:BA1003) 实验仪器 Morris 水迷宫及水迷宫记录分析系统 ( 安徽正华生物仪器设备有限公司 ); 实时荧光定量 PCR 仪, 美国 ABI 公司 (7500fast);PowerPacBasic 基础电泳仪, 美国 Bio-Rad 公司 ( ); 凝胶成像系统, 美国 Bio-Rad 公司 (ChemiDoc XRS)

2 方法模型制备 40 只雄性 Wistar 大鼠适应性喂养 1 周后, 从中随机选出 10 只作为空白组, 其余作为糖尿病模型组隔夜禁食不禁水 12 h, 模型组一次性腹腔注射 1% STZ 溶液 60 mg/kg 体质量, 对照组则给予等体积柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液 72 h 后观察大鼠一般状态 ( 饮食饮水排泄毛色及精神状态等 ), 经目内眦取血, 离心取血清测空腹血糖 (FBG) 含量大鼠 FBG 大于 16.7 mmol/l 为造模成功, 未成模大鼠则淘汰出组实验分组将存活的 20 只模型组大鼠再随机分为 2 组 : 模型组, 黄芪注射液组 (1.6 ml/kg) 在 STZ 干预后 2 周开始给药, 给药组每日上午按剂量腹腔注射黄芪注射液, 空白组和模型组则给予等体积生理盐水, 连续给药 10 周血糖和体质量测定分别于造模后第周末测定大鼠 FBG 值每周测定体质量变化 Morris 水迷宫实验建模干预第 10 周后, 所有大鼠在 Morris 水迷宫中进行 4 d 训练, 考察逃避潜伏期大鼠学习能力, 第 5 天撤去平台, 系统自动记录 90 s 内各组大鼠在目标象限的平均时间及穿越跳台的次数, 以此测试大鼠空间记忆能力样本制备行为学实验结束后, 水合氯醛麻醉大鼠, 打开腹腔, 腹主动脉取血, 分离血清保存, 待检备用然后断头取海马细胞血清乙酰胆碱酯酶检测乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸, 胆碱可以与巯基显色剂反应生成三硝基苯黄色化合物, 根据颜色深浅在波长 412 nm 处进行比色定量, 从而反映胆碱酯酶的活力 Real-time PCR 检测大鼠海马中 Bcl -2 和 Bax 的 mrna 表达 RNA 提取 : 新鲜海马组织称质量后使用 Trizol Reagent 试剂盒提取总 RNA, 超微量紫外分光光度计测定 A 260 /A 280 的比值及 RNA 浓度 ;cdna 合成 : 按照反转录试剂盒说明冰上操作, 合成 cdna 于 -80 保存备用 ; 荧光定量 PCR 实验 : 引物设计与合成引物序列检索自 Primer-Bank, 引物序列见表 1, 按照实时荧光定量 PCR 试剂盒说明冰上操作, 进行基因的扩增实验重复 3 次以确保结果可靠性 Western blot 检测大鼠海马组织中 Ache 和 Caspase-3 的表达新鲜海马称质量, 加入装有适表 1 引物序列表 Tab.1 Primer rank 名称引物序列 (5 -to-3 ) 引物 Bcl-2 forward, 5 -GAGCGTCAACAGGGAGATGT bp reverse, 5 -CAGCCAGGAGAAATCAAACAG-3 Bax forward, 5 -ACGCATCCACCAAGAAGC bp reverse, 5 -GCCACACGGAAGAAGACCT-3 GAPDH forward, 5 -GTTACCAGGGCTGCCTTCTC bp reverse, 5 -GATGGTGATGGGTTTCCCGT-3 量裂解液的匀浆管中, 组织经匀浆破碎后, 用 BCA 法进行蛋白定量根据目的蛋白分子量配制 SDS- PAGE 分离胶, 蛋白上样后电泳, 恒流湿转, 免疫印迹, 蛋白免疫印迹 (Western blot) 条带经凝胶成像分析系统扫描处理, 用 FUSION 软件分析各组与内参 (β-actin) 条带灰度值, 计算相对表达量免疫组织化学法检测海马 Caspase-3 的表达采用抗生物素蛋白 - 生物素 - 过氧化物酶复合物法进行免疫组织化学染色, 对糖尿病大鼠凋亡相关蛋白 Caspase -3 表达进行测定脑片用兔抗 Caspase-3(1 100 稀释 )4 孵育 24 h 后用生物素化的抗兔 IgG 孵育 1 h, 再用辣根酶标记的链霉卵白素室温孵育 2 h, 最后 DAB 显色, 光镜下观察, 自来水冲洗终止, 苏木素复染核, 中性树脂胶封片采用 Image-Proplus 软件, 在倍光镜下计数每张切片海马 CA1 CA3 及 DG 区 5 个视野细胞数并进行统计统计分析所有实验数据用均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 对于正态分布且方差齐的计量资料的组间差异比较使用单因素方差分析法, 非正态分布或方差不齐的计量资料的组间差异比较使用非参数检验法, 用 SPSS 18.0 软件进行统计分析 2 结果 2.1 黄芪注射液对糖尿病大鼠体质量血糖和胰岛素的影响体质量造模干预前, 各组间大鼠体质量无明显差异 (P>0.05) 干预后, 对照组大鼠体质量升高, 毛色光亮, 摄食, 饮水尿量正常, 而模型组和黄芪注射液组体质量随病程延长均有所降低, 出现明显的三多一少症状, 与空白组比较均有统计学差异 (P<0.01) 黄芪注射液组与模型病组比较, 体质量虽有所改善, 但差异无统计学意义 (P>0.05) 见表 2

3 838 Tab.2 表 2 黄芪注射液对糖尿病大鼠体质量血糖和胰岛素水平测试结果 (x±s) Results of weight, blood glucose and insulin level in diabetic rats interfered by Huangqi injection(x±s) 组别体质量 (g) 血糖 (mg/dl) 胰岛素 (pg/ml) 实验前实验后实验前实验后实验前实验后空白组 ± ± ± ± ± ± 模型组 ± ±24.44 ## 6.29± ±2.51 ## ±53.65 ## ± ## 黄芪注射液组 ± ± ± ±1.31** ± ± 86.75** 注 : 与正常组比较, ## P<0.01; 与模型组比较,**P< 血糖造模干预前, 大鼠的 FBG 在 (6.4± 0.8)mmol/L, 无自发性高血糖表现, 各组间比较无差异 (P>0.05) 在 STZ 干预后, 可见空白组大鼠较之初始血糖无变化, 而模型组和黄芪注射液组血糖均显著升高, 与空白组比较均有统计学差异 (P<0.01); 黄芪注射液干预后, 血糖水平明显降低, 较之模型组有明显差异 (P<0.01) 见表胰岛素造模干预前, 大鼠空腹胰岛素水平在 (891 ±71)pg/mL, 各组间比较无统计学差异 (P>0.05) 在 STZ 干预后, 空白组大鼠胰岛素水平较实验前无统计学差异 (P>0.05), 而模型组和黄芪注射液组均显著下调, 与空白组比较均有统计学差异 (P<0.01) 在黄芪注射液干预后, 其胰岛素水平显著升高, 较模型组有统计学差异 (P<0.01) 见表 2 以上结果表明黄芪注射液有降低糖尿病大鼠的 FBG, 并升高胰岛素水平的作用 2.2 Morris 水迷宫测试结果与空白组进行比较, 模型组大鼠穿越平台的位置次数及在目标象限的平均时间百分比均明显下降, 具有统计学差异 (P< 0.01); 黄芪注射液干预后, 黄芪注射液组与模型组大鼠相比较, 穿越平台的位置次数及在目标象限的平均时间百分比均明显升高, 具有统计学差异 (P< 0.01) 见表 3 表 3 黄芪注射液对糖尿病大鼠穿越平台的次数及在目标象限的平均时间百分比的影响 (x±s) Tab.3 Effect of cross platform frequency and aim quadrant average time percentage of diabetic rats interfered by Huangqi injection(x±s) 穿越平台的在目标象限的组别次数平均时间百分比 (%) 空白组 2.81± ±4.17 模型组 0.75±0.08 ## 22.37±0.76 # 黄芪注射液组 2.16±0.47** 37.23±3.65** 注 : 与空白组比较, # P<0.05, ## P<0.01; 与模型组比较,**P< 黄芪注射液对糖尿病大鼠血清乙酰胆碱酯酶活力的影响与空白组进行比较, 模型组大鼠血清 AchE 活力明显升高, 具有统计学差异 (P<0.01); 黄芪注射液干预后, 黄芪注射液组与模型组大鼠相比较,AchE 活力明显下降, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.4 黄芪注射液对糖尿病大鼠海马区域 Bax 和 Bcl-2 mrna 表达情况的影响与空白组相比, 模型组大鼠海马 Bax mrna 的表达明显升高 (P<0.01), 而 Bcl-2 mrna 的表达明显降低 (P<0.01); 黄芪注射液干预后, 黄芪注射液组与模型组大鼠相比较,Bax mrna 的表达明显下降, 差异有统计学意义 (P<0.05), 而且 Bcl-2 mrna 的表达明显升高, 差异有统计学意义 (P<0.05) 见表 4 表 4 黄芪注射液对糖尿病大鼠海马区域 Bax 和 Bcl-2 mrna 的表达情况 (x±s) Tab.4 Expression of Bax and Bcl-2 mrna in hippocampal area of diabetic rats interfered by Huangqi injection(x±s) 组别 Bax Bcl-2 空白组 1.01± ±0.16 模型组 2.29±0.46 ## 0.52±0.19 ## 黄芪注射液组 1.84±0.17** 0.81±0.19** 注 : 与空白组比较, ## P<0.01; 与模型组比较,**P< 黄芪注射液对糖尿病大鼠海马 Ache 及 Caspase-3 的蛋白表达情况 Western blot 结果与空白组比较, 模型组大鼠海马 Ache 及 Caspase-3 的蛋白表达均明显升高, 差异具有统计学意义 (P<0.05); 黄芪注射液组与模型组相比较,Ache 及 Caspase-3 的表达均明显下降, 差异具有统计学意义 (P<0.05), 其中,Caspase-3 蛋白的下降趋势更为明显见图海马区免疫组化染色结果光镜下观察, Caspase-3 免疫组化阳性细胞表现为大量神经细胞胞浆和细胞膜内表达棕黄色颗粒, 阳性神经细胞胞体大, 可见较长突起, 着色深浅不一与空白组比较, 模型大鼠海马 CA1 CA3 及 DG 区 Caspase-3 的蛋白表达均明显升高, 差异具有统计学意义 (P<0.05),

839 A 空白组模型组黄芪注射液组空白组 B 蛋白表达水平 (%) 空白组模型组黄芪注射液组与空白组比较, # P<0.05, ## P<0.01; 与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01 图 1 各组大鼠海马 Ache 及 Caspase-3 的蛋白表达情况 Fig.

01); 黄芪注射液干预后, 黄芪注射液组与模型组相比较,CA1 及 CA3 区的 Caspase-3 蛋白表达明显下降, 差异具有统计学意义 (P<0.05), 而 DG 区无差异 (P>0.05), 但是具有下降趋势见表 5 图 2 表 5 黄芪注射液对糖尿病大鼠海马各区域的 Caspase-3 蛋白表达情况 (x±s) Tab.

24±0.04 ## 黄芪注射液 0.16±0.02* 0.16±0.02* 0.19±0.03 注 : 与空白组比较, # P<0.05, ## P<0.01; 与模型组比较,*P<0.

4 839 A 空白组模型组黄芪注射液组空白组 B 蛋白表达水平 (%) 空白组模型组黄芪注射液组与空白组比较, # P<0.05, ## P<0.01; 与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01 图 1 各组大鼠海马 Ache 及 Caspase-3 的蛋白表达情况 Fig.1 Expression of the protein of Ache and Caspase-3 in hippocampal area of rats in each group 其中以 CA3 及 DG 区 Caspase-3 蛋白表达的升高趋势更为明显 (P<0.01); 黄芪注射液干预后, 黄芪注射液组与模型组相比较,CA1 及 CA3 区的 Caspase-3 蛋白表达明显下降, 差异具有统计学意义 (P<0.05), 而 DG 区无差异 (P>0.05), 但是具有下降趋势见表 5 图 2 表 5 黄芪注射液对糖尿病大鼠海马各区域的 Caspase-3 蛋白表达情况 (x±s) Tab.5 Expression of the protein of Caspase-3 in each hippocampal area of diabetic rats interfered by Huangqi injection(x±s) 组别 CA1 CA3 DG 正常组 0.15± ± ±0.04 模型组 0.19±0.02 # 0.21±0.05 ## 0.24±0.04 ## 黄芪注射液 0.16±0.02* 0.16±0.02* 0.19±0.03 注 : 与空白组比较, # P<0.05, ## P<0.01; 与模型组比较,*P< 讨论目前的研究证实由 STZ 诱导的 Ⅰ 型糖尿病大鼠存在明显的认知功能障碍, 海马神经元凋亡被认 [4] 为是糖尿病出现脑功能异常的主要原因临床观察发现黄芪注射液的主要有效成分黄芪甲苷可改善糖尿病认知功能障碍, 本实验进一步证实了其作用机制与抑制海马胆碱能神经元的凋亡有关本研究采用经典的腹腔注射 STZ 诱导 Ⅰ 型糖尿病大鼠模型, 造模后大鼠呈现持续的高血糖低胰岛素状态,10 周后行 Morris 水迷宫实验, 发现糖尿模型组黄芪注射液组图 2 各组大鼠海马各区域的 Caspase-3 阳性细胞表达情况 ( 200) Fig.2 Expression of nerve cells of Caspase-3 in each hippocampal area of rats in each group( 200) 病大鼠存在明显学习与记忆功能障碍大量研究已经明确人和大鼠的学习记忆功能与脑组织中的海 [5] 马结构与功能的正常密切相关细胞凋亡的发生主要受凋亡相关基因和酶的调控, 这些基因和酶包括起诱导作用的如 Caspase [6] 家族和 Bax 及起抑制作用的如 Bcl-2 等, 其中 Caspase-3 为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族成员, 被认为是凋亡的总开关, 活化的 Caspase-3 作用于一些其他 Caspase 成员而产生瀑布式级联反 [7] 应, 使凋亡最终得以完成 Bcl-2 和 Bax 是一对正负调节凋亡的基因,Bax 基因具有促进细胞凋亡的作用,Bcl-2 基因则能阻遏损伤引起的细胞凋亡 Bcl-2 蛋白和 Bax 蛋白通常形成异源二聚体, 导致 Bcl-2 蛋白失活, 降低 Bcl-2 蛋白对凋亡的抑制作 [8] 用, 从而促进凋亡的发生因此,Bcl-2 和 Bax 两者表达的相对水平是影响细胞凋亡的重要因素 AchE 的经典功能是水解神经递质乙酰胆碱, 从而终止神经冲动此外,AchE 还存在与水解乙酰胆碱无关的非经典功能, 如参与神经元的凋亡研 [9] 究显示 AchE 的活性与神经元凋亡呈明显的正相关, 而 AchE 反义核酸则可以部分抑制细胞神经元凋亡, 提示 AchE 参与神经元凋亡的发生研究发现 AchE 的促凋亡效应可能与激活 Caspase 家族有 [10] 关, 其深入机制尚待进一步研究, 而下调 AchE 活性为抗凋亡提供了新思路黄芪具有益气养元扶正祛邪等作用, 现代临 [11] 床常将黄芪做成黄芪注射液用于治疗糖尿病脑 [12] [13] 血管等疾病万明等研究显示黄芪可以通过影

5 840 响阿尔茨海默病大鼠海马组织中的胆碱酯酶含量而改善其学习记忆能力近来越来越多的研究证 [14-17] 实黄芪注射液通过抑制缺氧缺糖 / 复氧复糖诱导的大鼠海马神经元凋亡, 从而抗神经元的损伤本实验通过干预 STZ 诱导的 Ⅰ 型糖尿病大鼠发现, 黄芪注射液可有效增加其穿越平台位置的次数及在目标象限的平均时间百分比, 降低其血清和海马组织中 AchE 的活力, 升高抗凋亡基因 Bcl-2 水平而降低促凋亡基因 Bax 水平, 且能显著减少糖尿病大鼠海马区 Caspase-3 蛋白的表达因而从本实验结果可以证实, 黄芪注射液能够改善糖尿病大鼠的学习记忆功能, 其作用机制可能与抑制海马区神经细胞的凋亡有关, 而下调 Bax 及 Caspase-3 水平抑制 AchE 活性上调 Bcl-2 水平可能是黄芪注射液抗凋亡的潜在机制, 为黄芪注射液临床防治糖尿病脑病提供了实验依据参考文献 : [1] Cukierman T, Gerstein HC, Williamson JD, et al. Cognitive decline and dementia in diabetes -systematic overview of prospective observational studies[j]. Diabetologia,2005,48(12): [2] Rawal N, Corti O, Sacchetti P, et al. Parkin protects dopaminergic neurons from excessive Wnt/β-catenin signaling[j]. Biochem Biophys Res Commun, 2009,23,388(3): [3] Caricasole A, Copani A, Caraci F, et al. Induction of Dickkopf-1, a negative modulator of the wnt pathway, is Associated with neuronal degeneration in alzheimer s brain[j]. J Neurosci, 2004,24(26): [4] Sadeghi A, Hami J, Razavi S, et al. The effect of diabetes mellitus on apoptosis in hippocampus: cellular and molecular aspects[j]. Int J Prev Med, 2016,7:57. [5] 罗焕敏. 海马结构从形态功能到可塑性衰老性变化 [J]. 神经解剖学杂志,1996,12(2): [6] Zhan Y, van de Water B, Wang Y, et al. The roles of caspase-3 and bcl -2 in chemically -induced apoptosis but not necrosis of renal epithelial cells[j]. Oncogene,1999,11,18(47): [7] Venero JL, Burguillos MA, Joseph B, et al. Caspases Playing in the Field of Neuroinflammation: Old and New Players[J]. Dev Neurosci, 2013,35(2-3): [8] Dorszewska J.Cell biology of normal brain aging: synaptic plasticitycell death[j]. Aging Clin Exp Res,2013,25(1): [9] 杨磊. 乙酰胆碱酯酶与细胞凋亡的相关性的研究 [D]. 上海 : 中国科学院研究生院 ( 上海生命科学研究院 ),2003. [10] 胡涛, 刘希伟. 脑缺血对免疫系统乙酰胆碱酯酶及 Caspase-3 表达的影响 [J]. 中国免疫学杂志,2008,24(5): [11] 王晓华, 何杏容, 华红艳, 等. 丹参联合黄芪对糖尿病肾病大鼠肾脏线粒体呼吸及能量代谢的影响 [J]. 临床与病理杂志,2015,35(2): [12] 赵胜利, 高建玲, 翟丽娜. 丹参及黄芪注射液对心脑血管病患者血液流变学的影响 [J]. 实用中医药杂志,2002,18(6):5. [13] 万朋, 王师, 郎茂林, 等. 黄芪对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响 [J]. 吉林医药学院学报,2011,32(2): [14] 张雅丽, 高维娟, 闫凤霞, 等. 黄芪注射液抑制缺氧缺糖后复氧复糖大鼠海马神经细胞凋亡的研究 [J]. 中国老年学杂志,2009,29(7): [15] 闫凤霞, 高维娟, 钱涛, 等. 黄芪注射液对缺氧缺糖 / 复氧复糖大鼠海马神经元 caspase-3 表达的作用 [J]. 中国药理学通报,2011, 27(1): [16] 焦俊霞, 高维娟, 钱涛, 等. 黄芪注射液对缺氧缺糖 / 复氧复糖大鼠海马神经元 bcl-2 bax 及 cyt-c 蛋白形态学表达的影响 [J]. 中国老年学杂志,2011,31(3): [17] 闫凤霞, 高维娟, 钱涛, 等. 黄芪注射液抑制缺氧缺糖 / 复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的自由基机制 [J]. 中国老年学杂志,2011, 31(8): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 马英, 于春泉 ) Study on the mechanism of the inhibitory action of Huangqi injection on apoptosis of hippocampal neurons in diabetic encephalopathy rats LI Hu 鄄 hu 1, WEI Bing 1, ZENG Wen 鄄 yun 2, SUO Yan 鄄 rong 2, GAO Qing 1, WANG Yi 鄄 jing 1, SUN Ying 鄄 xin 1, ZHANG Yun 鄄 sha 1, FAN Ying 鄄 chang 1, YANG Lin 1 (1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin , China; 2.Ganzhou People s Hospital, Ganzhou , China) Abstract: [Objective] To explore the effects of Huangqi injection on learning and memory abilities in diabetic rats and its mechanism research. [Methods] Forty male SD rats, except the blank group (n =10),were intraperitoneal injected Streptozotocin (60 mg/kg) to establish type 1 diabetic rats, the modeled rats were equally and randomly divided into the model group and Huangqi injection group. All drugs were administrated for 10 weeks. The behavior test were performed on the Morris water maze method, and then the rats were executed for blood and brain sampling. Blood glucose, insulin and acetylcholinesterase level were detected. The expression of Bcl 鄄 2 and Bax in the hippocampus was examined by quantitative real 鄄 time PCR. The method of Western blotting was used to measure the expression of AchE. The expression of Caspase 鄄 3 in the hippocampus nerve cells was examined immunohistochemistry. [Results] Huangqi injection obviously improved the learning and memory abilities of diabetic encephalopathy rats, reduced blood glucose and AchE level and incresed the insulin level. The expression of AchE and Caspase 鄄 3 protein were obviously reduced in the hippocampus of rats. The anti 鄄 apoptosis gene Bcl 鄄 2 mrna epression was increased while the apoptosis Bax mrna expression was decreased in hippocampal area in Huangqi injection group. [Conclusion] Huangqi Injection obviously improved the learning and memory abilities of diabetic rats, its mechanism may be related to reduce AchE level, inhibit neuronal apoptosis. Key words: Huangqi injection; diabetic; cognition dyfuction; neuronal apoptosis

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中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (

方法 模型制备 40 只雄性 Wistar 大鼠适应性喂养 1 周后, 从中随机选出 10 只作为空白组, 其余作为糖尿病模型组 隔夜禁食不禁水 12 h, 模型组一次性腹腔注射 1% STZ 溶液 60 mg/kg 体质量, 对照组则给予等体积柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液

方法模型制备 40 只雄性 Wistar 大鼠适应性喂养 1 周后, 从中随机选出 10 只作为空白组, 其余作为糖尿病模型组隔夜禁食不禁水 12 h, 模型组一次性腹腔注射 1% STZ 溶液 60 mg/kg 体质量, 对照组则给予等体积柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲液