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1 微生物学通报 Microbiology China 历史回顾与进展 Mar. 20, 2014, 41(3): by Institute of Microbiology, CAS DOI: /j.microbiol.china 国内酿酒酵母分子遗传与育种研究 40 年 何秀萍 ( ) 摘要 酿酒酵母作为最简单的真核生物, 是研究真核生物基本生命规律的重要模式系统, 也是生物产业领域非常重要的微生物细胞工厂 在 微生物学通报 创刊 40 周年之际, 本文综述了国内 40 年来在酿酒酵母分子遗传学与育种研究的重要进展, 如分子遗传学研究手段的建立 重要功能基因的分析 重要生命过程的遗传基础和调控机制, 以及酵母菌育种技术的建立与应用等 关键词 酿酒酵母, 分子遗传, 育种技术 Research progress of molecular genetics and breeding of Saccharomyces cerevisiae in China in the past 40 years HE Xiu-Ping (CAS Key Laboratory of Microbial Physiological and Metabolic Engineering, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing , China) Abstract: As a unicellular organism, Saccharomyces cerevisiae is an ideal model system for illumination of substantial cellular functions of eukaryotes. Meanwhile, this organism is also an important microbial cell factory in biotechnology. On the occasion of the 40 th anniversary of the magazine Microbiology China, the research advances of molecular genetics and breeding of S. cerevisiae in china in the past 40 years, such as tools for genetic manipulation, functional analysis of specific genes, the genetic basis and regulatory mechanism underlying the important biological processes, development and application of breeding approaches, were reviewed here. Keywords: Saccharomyces cerevisiae, Molecular genetics, Breeding technology (Saccharomyces cerevisiae) * 通讯作者 :Tel: ; : hexp@im.ac.cn 收稿日期 : 接受日期 : 优先数字出版日期 (

2 : (Yeast genome project) 40 1 酿酒酵母分子遗传学研究 1953 (Watson) (Crick) DNA Sinclair 1972 Clark-Walker 2 [1] 1978 Hinnen [2] (1982 ) 2 [3] (1983 ) 2 DNA psc1 psc2 [4] (1986 ) - pcn60 [5] (1992 ) 2 - phc11 [6] (1993 ) [7] (1998 ) 2 FLP-FRT DNA [8] (1990 ) ( / g DNA) 1.5 h [9] (1998 ) 10 6 / g DNA [10] (2005 ) [11] (1989 ) pcn60 [12] (1989 ) pcn60 [13] (1995 ) [14] (1998 ) PHO80 PAP1 [15] (2002 ) [16] [17-22] (2007 ) [23] ( )

3 452 微生物学通报 Microbiol. China 2014, Vol.41, No.3 DNA [24-30] (2013 ) Rho GTP [31-32] (2013 ) Sic1 Cln1/2-Cdk1 Sic1 Clb5/6-Cdk1 Sic1 G1 S G1/S [33] 2 酿酒酵母育种技术的发展 2.1 传统育种技术 40 [34-35] ( ) (1962 ) - [36] (1984 ) [37] N- -N - -N- [38] [39-42] (1993 ) [43] (1998 ) 55%-60% [44] [45] [46] (2008 ) [47] (a ) [48-49]

4 : [50-56] 1959 Eddy [57] 1974 Kao Michayluk PEG [58] 1977 PEG ( ) [59] (1983 ) [60] [61] (1985 ) [62] (1986 ) [63-64] [65-69] 2002 Maxygen (Genome shuffling) [70] (2007 ) [71] [72-74] 2.2 育种新技术 PGK1 [75] 1985 DNA DNA [76] - [5] (1989 ) TRP5 trp5 TRP5 2 [12] (1995 ) YIp5 rdna -1,3-1,4- [77] [78-81] (2005 ) [82] (2013 )

5 454 微生物学通报 Microbiol. China 2014, Vol.41, No.3 [83] 2003 DNA [84] (2005 ) GSH1 - ILV2 CUP1 DNA GSH1 ILV2 - [85] [86-90] 1991 Bailey Stephanopoulos Vallino [91-92] 1996 [93] (1997 ) (Pichia stipitis) [94] [95-99] 査 (2013 ) (Neurospora crassa) cdt-1 gh1-1 (Scheffersomyces stipites) XYL1 cdt-1 XYL1 [100] [101] [102] [103] [104] [105] (2013 )

6 : [106] (2013 ) [107] (2013 ) (Xanthophyllomyces dendrorhous) crtyb crt1 - (Staphylococcus aureus) HMG-CoA - 200% [108] 3 结束语 40 致谢 : 感谢中国科学院微生物研究所酵母菌分子遗传与育种研究组张博润研究员 王肇悦副研究员 郭雪娜博士 程艳飞博士和白雪晶博士在资料查询 和整理过程中给予的帮助 参考文献 [1] Clark-Walker GD. Isolation of circular DNA from yeast[j]. Proceeding of National Academy Sciences USA, 1972, 69(2): [2] Hinnen A, Hicks JB, Fink GR. Transformation of yeast[j]. Proceeding of National Academy Sciences USA, 1978, 75(4): [3], 雰,,., : I A (Saccharomyces cerevisiae) [J]., 1982, 15(1): [4],,. DNA psc1 psc2 [J]., 1983, 23(40): [5],,. pcn [J]., 1986, 26(2): [6],,,. - A [J]. B, 1992, 22(9): [7],. [J]., 1993, 9(1): [8],. DNA [J]., 1998, 30(5): [9],. [J]., 1990, 6(2): [10],,,. PEG/LiAc [J]., 1998, 8(5): [11] Zheng HZ, Liu HH, Chen SX, et al. Yeast transformation process studied by fluorescence labeling technique[j]. Bioconjugate Chemistry, 2005, 16(2): [12],,. [J]., 1989, 29(3): [13],,,. (PGK1) [J]., 1989, 5(4): [14],,,. (SOD) [J]., 1995, 11(1): [15],,,. PAP1 PHO85 PHO4 [J]., 1998, 30(1): [16],,,. [J]., 2002, 42(1): [17],,. (FLO1G)

7 456 微生物学通报 Microbiol. China 2014, Vol.41, No.3 [J]., 2002, 42(2): [18] Liu N, Wang DL, Wang ZY, et al. Genetic basis of flocculation phenotype conversion in Saccharomyces cerevisiae[j]. FEMS Yeast Research, 2007(7): [19] Liu N, Wang DL, Wang ZY, et al. Deletion of tandem repeats causes flocculation phenotype conversion from Flo1 to newflo in Saccharomyces cerevisiae[j]. Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology, 2009(16): [20],,,. [J]., 2012, 52(1): [21],,,. FLO1 [J]., 2012, 52(11): [22] Li EE, Yue F, Chang Q, et al. Deletion of intragenic tandem repeats in unit C of FLO1 of Saccharomyces cerevisiae increases the conformational stability of flocculin under acidic and alkaline conditions[j]. PLoS One, 2013, 8(1): e [23] Wang JX, Wang XX, Fang Y, et al. Genome-wide screening of yeast metal homeostasis genes involved in mitochondrial functions[j]. Molecular Genetics and Genomics, 2007, 277(6): [24] Chen YB, Yang CP, Li RX, et al. Def1p is involved in telomere maintenance in budding yeast[j]. Journal of Biology Chemistry, 2005, 280(26): [25] Yang CP, Chen YB, Meng FL, et al. Saccharomyces cerevisiae Est3p dimerizes in vitro and dimerization contributes to efficient telomere replication in vivo[j]. Nucleic Acids Research. 2006, 34(2): [26] Meng FL, Hu Y, Shen N, et al. Sua5p a single-stranded telomeric DNA-binding protein facilitates telomere replication[j]. EMBO Journal, 2009, 28(10): [27] Qian W, Wang J, Jin NN, et al. Ten1p promotes the telomeric DNA-binding activity of Cdc13p: implication for its function in telomere length regulation[j]. Cell Research, 2009, 19(7): [28] Chen XF, Meng FL, Zhou JQ. Telomere recombination accelerates cellular aging in Saccharomyces cerevisiae[j]. PLoS Genetics, 2009, 5(6): e [29] Zhang ML, Tong XJ, Fu XH, et al. Yeast telomerase subunit Est1p has guanine quadruplex-promoting activity that is required for telomere elongation[j]. Nature Structure Molecular Biology, 2010, 17(2): [30] Peng J, Zhou JQ. The tail-module of yeast mediator complex is required for telomere heterochromatin maintenance[j]. Nucleic Acids Research, 2012, 40(2): [31] Liao Y, He F, Gong T, et al. Msb1 interacts with Cdc42, Boi1 and Boi2 and may coordinate Cdc42 and Rho1 fuctions during early stage of bud development in budding yeast[j]. PLoS One, 2013, 8(6): e [32] Gong T, Liao Y, He F, et al. Control of polarized growth by the Rho family GTPase Rho4 in budding yeast: requirement of the N-terminal extension of Rho4 and regulation by the Rho GTPase-activating protein Bem2[J]. Eukaryot Cell, 2013, 12(2): [33] Yang X, Lau KY, Sevim V, et al. Design principals of the yeast G1/S switch[j]. PLoS Biology, 2013, 11(10): e [34],. [J]., 1983, 2(4): [35],,,. [J]., 1987(1): [36],. - Saccharomyces cerevisiae [J]., 1962, 8(4): [37],. [J]., 1983, 3(2): [38],,,. [J]., 1985, 7(5): [39],. [J]., 1987, 9(5): [40],,,. [J]., 1989, 9(3): [41],. [J]., 1989, 16(5): [42],. [J]., 2002, 23(5): 3-5. [43],,,. Ar+ [J]., 1993, 2(4): [44],,. [J]., 1998, 8(4): [45]. [J]., 2004(6): [46],. [J]., 2008(11): [47],. [J]., 2008(11): [48],,. : [J]., 1978, 5(1): [49],,. : [J]., 1978, 5(2): [50],,. IV: [J]., 1982, 22(1): [51],,. V: [J]., 1985, 25(2): [52],,,. [J]., 1994, 34(4): [53] He XP, Huai WH, Tie CJ, et al. Breeding of high ergosterol-producing yeast strains[j]. Journal of Industrial

8 : Microbiology and Biotechnology, 2000, 25(1): [54],,,. [J]., 2004, 44(2): [55],,,. [J]., 2009, 35(7): [56],,,. [J]., 2008, 35(4): [57] Eddy AA, Williamson DH. Formation of aberrant cell walls and of spores by the growing yeast protoplast[j]. Nature, 1959, 183(4668): [58] Kao KN, Michayluk MR. A method for high-frequency intergeneric fusion of plant protoplasts[j]. Planta, 1974, 115(4): [59] Ferenczy L, Maráz A. Transfer of mitochondria by protoplast fusion in Saccharomyces cerevisiae[j]. Nature, 1977, 268(5620): [60],,,. (1) [J]., 1983(2): [61],. [J]., 1983, 2(2): [62],,,. [J]., 1984, 4(2): [63],,,. [J]., 1986, 2(3): [64],,,. [J]., 1986, 2(4): [65],. [J]., 1990, 30(3): [66],,,. [J]., 1990, 6(3): [67],,,. [J]., 1992, 2(5): [68],,,. [J]., 1999, 15(1): [69],,,. [J]., 2003, 19(6): [70] Zhang YX, Perry K, Vinci VA, et al. Genome shuffling leads to rapid phenotypic improvement in bacteria[j]. Nature, 2002, 415(6872): [71],,,. [J]., 2007, 34(4): [72] Gong GL, Wang CL, Chen MH, et al. Genome shuffling to improve the ethanol production of Saccharomyces cerevisiae[j]. Journal of Biotechnology, 2008, 136S: S [73] Shi DJ, Wang CL, Wang KM. Genome shuffling to improve thermotolerance, ethanol tolerance and ethanol productivity of Saccharomyces cerevisiae[j]. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 2009, 36(1): [74] Lu Y, Cheng YF, He XP, et al. Improvement of robustness and ethanol production of ethanologenic Saccharomyces cerevisiae under co-stress of heat and inhibitors[j]. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 2012, 39(1): [75],,,. [J]., 1983, 6(11): [76],,. [J]., 1985, 1(3): [77],,,. bgls [J]., 1995, 11(3): [78],,. - [J]., 1995, 35(6): [79] He XP, Zhang BR, Tan HR. Overexpression of a sterol C-24(28) reductase increases ergosterol production in Saccharomyces cerevisiae[j]. Biotechnology Letters, 2003, 25(10): [80] Fan XY, He XP, Guo XN, et al. Increasing glutathione formation by functional expression of the gamma-glutamylcysteine synthetase gene in Saccharomyces cerevisiae[j]. Biotechnology Letters, 2004, 26(5): [81] Ding WT, Zhang GC, Liu JJ. 3 truncation of the GPD1 promoter in Saccharomyces cerevisiae for improved ethanol yield and productivity[j]. Applied and Environmental Microbiology, 2013, 79(10): [82] Li L, Shen S, Jiang P, et al. Usage of an intronic promoter for stable gene expression in Saccharomyces cerevisiae[j]. Letters in Applied Microbiology, 2005, 40(5): [83] Hou LH, Li XY, Wang C, et al. Construction of ploidy series of Saccharomyces cerevisiae by the plasmid YCplac33-GHK[J]. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 2013, 40(3): [84],,,. [J]., 2003, 23(10): [85],,,. [J]., 2005, 21(6): [86] Wang ZY, He XP, Zhang BR. Over-expression of GSH1 gene and disruption of PEP4 gene in self-cloning industrial brewer s yeast[j]. International Journal of Food Microbiology, 2007, 119(3): [87] Wang DL, Wang ZY, Liu N, et al. Genetic modification of industrial yeast strains to obtain controllable NewFlo

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