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2 DNA DNA DNA DNA

3 7 A B C D E F

4 7 A Yeast

5 7 A FDA Generally Recognized As Safe GRAS

6 7 B

7 Saccharomyces cerevisiae Kluyveromyces lactis Pichia pastoris Schizosaccharomyces pombe Hansenula polymorpha

8 ssc1 ATP ssc2 rgr1 ose1 ssc11 Y rho -

9 mnn alg och

10 Lys HOOC Ubiquitin 76 aa ubiquitin ligase E3 Lys ubiquitin ligase E3 Lys

11 UBI 1-52 CEP52 UBI 2-52 CEP52 UBI 3-76 CEP76 UBI 4 UBC 1 UBC 2 UBC 3 UBC 4 UBC 5 UBC 6 UBC 7

12 UBI 4 UBI 4 UBI 4 - UBI 4 UBA 1 UBA1 E1 UBA1 Ubc4 - ubc5

13 7 C

14 2µ 2µ IRs 600 bp FLP IRs REP STB REP RAF STB REP1 A ori IR IR FLP REP2 psr1 psb1 pkd1 2µ B

15 pgkl1 pgkl1 DNA αβ γ K1 K2 pgkl1 8.9 kb α β γ

16 ARS YRp ARS kb 30-40kb ARS DNA ARS YRp 2µ YEp %-70%

17 CEN YCp CEN DNA CEN DNA ARS YCp YCp 1-5 TEL YAC

18 DNA YIp DNA Yip DNA DNA

19 7 D

20 Ca 2+ PEG 1-2% 25-33%

21 Li + PEG DNA DNA DNA 80

22 DNA PEG 10 5 / µg DNA

23 DNA YIp DNA 50-80%

24 LEU TRP HIS LYS URA ADE

25 aph G418 cat dhfr cup1 suc2 ilv2

26 7 E

27 pho4 TS -PHO5 PHO5 PHO4 PHO5 PHO4 pho4 TS 35 pho4 TS -PHO

28 a α a α 25 Sir3-8 TS a1 a MATa MATα hmlα2-102 MATa α α1α α2a a1-a2 α 35 Sir3-8 TS α2 a1 a α2 hmlα2-102 α2 a1 a hmlα2-102 MATa α1 α

29 GAL1 GAL1 GAL7 GAL7 GAL10 GAL10 UAS UAS GAL4 GAL4 GAL80 GAL80 GAL1 GAL1 GAL7 GAL7 GAL10 GAL10 UAS UAS GAL4 GAL4 GAL80 GAL80 GAL4 GAL1 GAL1 GAL10 GAL4 GAL1 GAL1 GAL10 GAL10 GAL10 Promoter Promoter GAL1 GAL1 GAL7 GAL7 GAL10 GAL10

30 mrna mrna -3- GAPDH PKG ADH 96% 25

31 -3- GAPDH PKG ADH

32 pkd1 40

33 AOX1 DNA 20

34 HARS HARS DNA 100

35 7 F HBV 2003HBV

36 7 F

37 DNA 42 nm 3.2 kb HBsAg S HBcAg 22 nm 1000S M L

38 108 aa 55 aa 226 aa ATG ATG ATG TAA pres1 pres2 S 226 aa S 281 aa M 399 aa L

39

40 20 80 HBsAg S ADH1 22 nm HBsAg 1%-2% M L S S

41 PARS2 Bgl II 5 AOX1 HBsAg pbsag kb Bgl II 3 AOX1 Bgl II his - PHIS4 DNA his + 5 AOX1 HBsAg PHIS4 3 AOX1

42 DNA AOX2 HBsAg S 3% 240L 90 22nm HBsAg 900

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