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1 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 319 萘敏维滴眼液抑菌效力评价及抑菌剂最适浓度考察 毛腾霄 1, 程龙 1, 张聪聪 1, 袁涛 1, 汪洋 1, 杨梅 1, 秦玉花 (1. 成都市食品药品检验研究院, 成都 ;2. 成都中医药大学基础医学院, 成都 ) 2* 摘要目的 : 测定市售萘敏维滴眼液 14 批样品的抑菌效力, 并探索抑菌剂苯扎溴铵 三氯叔丁醇的合理添加量 方法 : 按中国药典 2015 年版, 以金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 白色念珠菌和黑曲霉为试验菌株, 进行菌落计数方法适用性试验 根据试验结果进行样品微生物挑战试验, 测定样品中不同时间存活试验菌数 lg 值, 并与初始接种 lg 值比较, 判断抑菌效力 根据抑菌剂抑菌效力结果设计浓度梯度, 对最适抑菌浓度进行考察 结果 : 添加苯扎溴铵的样品均符合抑菌效力 A 级要求, 最适抑菌浓度为 0.01~0.03 mg ml -1 ; 添加的样品符合抑菌效力 B 级要求, 最适抑菌浓度为 0.6~0.8 mg ml -1 ; 添加三氯叔丁醇的样品达不到抑菌效力 B 级要求, 最适抑菌浓度为 6.0~8.0 mg ml -1 结论: 市售萘敏维滴眼液苯扎溴铵添加过量, 三氯叔丁醇添加不足, 添加较为合理 建议厂家合理使用抑菌剂, 以确保用药安全 关键词 : 萘敏维滴眼液 (NCVE); 盐酸萘甲唑林 ; 马来酸氯苯那敏 ; 维生素 B 12 ; 抑菌效力 ; 最适抑菌浓度 ; 抑菌剂 ; 苯扎溴铵 ; ; 三氯叔丁醇中图分类号 :R 917 文献标识码 :A 文章编号 : (2018) doi: /j Study on the antimicrobial preservatives of NCVE and the optimal bacteriostatic concentration of bacteriostats MAO Teng-xiao 1,CHENG Long 1,ZHANG Cong-cong 1,YUAN Tao 1, WANG Yang 1,YANG Mei 1,QIN Yu-hua 2* (1.Chengdu Institute for Food and Drug Control,Chengdu ,China; 2.Basic Medical College,Chengdu University of TCM,Chengdu ,China) Abstract Objective:To evaluate the bacteriostatic efficacy of naphazoline hydrochloride,chlorphenamine maleate and vitamin B 12 eye drops(ncve)from 14 batches of the samples and to explore the reasonable dose of benzalkonium bromide,ethylparaben and chlorbutanol in NCVE.Methods:Staphylococcus aureus,pesudomonas aeruginosa,escherichia coli,candida albicans and Aspergillus were used as test strains,the colony-count method validation was studied following the ChP 2015.According to the verified method,the microbiological method and * 通信作者 Tel:( 028) ; sinesister0328@163.com 第一作者 Tel:( 028) ; pzh_maotx@126.com

2 320 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) various time-gap colony counting lg,compared with original value,were applied to evaluate bacteriostatic efficacy of NCVE for bacteria and fungus.according to the bacteriostatic efficacy of different bacteriostatic agents, the concentration gradient was designed to investigate the optimum bacteriostatic concentration.results:the bacteriostatic efficacy of benzalkonium bromide in sample meet the A level requirements.the optimum inhibitive concentration was mg ml -1.The bacteriostatic efficacy of ethylparaben meet the B level requirements. The optimum inhibitive concentration was mg ml -1.The bacteriostatic efficacy of chlorbutanol doesn t meet the B level requirements.the optimum inhibitive concentration was mg ml -1.Conclusion: Excessive amount of benzalkonium bromide was to the NCVE for sale,insufficient amount of chlorbutanol was added and reasonable amount of ethylparaben was added.it is recommended that manufacturers to rational use of antimicrobial preservatives to ensure drug safety. Keywords:naphazoline hydrochloride,chlorphenamine maleate and vitamin B 12 eye drops(ncve);naphazoline hydrochloride;chlorphenamine maleate;vitamin B 12 ;bacteriostatic efficacy;optimal bacteriostatic concentration; bacteriostatic agent;benzalkonium bromide;ethylparaben;chlorbutanol 萘敏维滴眼液用于缓解眼睛疲劳 结膜充血以及眼睛发痒等症状, 是含盐酸萘甲唑林 (C 14 H 14 N 2 HCl) 马来酸氯苯那敏 (C 16 H 19 ClN 2 C 4 H 4 O 4 ) 和维生素 B 12 (C 63 H 88 CoN 14 O 14 P) 的复方眼药水, 英文名为 naphazoline hydrochloride,chlorphenamine maleate and vitamin B 12 eye drops, 缩写为 NCVE) [1] 按照中国药典 2015 年版制剂通则规定 [1], 眼用制剂应符合无菌要求 由于多剂量包装的滴眼液打开后反复使用存在微生物污染的可能 [2], 因此, 生产厂家通常会加入抑菌剂来抑制微生物的生长, 以保证用药安全 萘敏维滴眼液常见使用的抑菌剂有苯扎溴铵 [3] [4] 和三氯叔 [5] 丁醇等 但是, 药品中加入的抑菌剂是否能有效抑制外来微生物的生长, 这在一般的药品质量标准中未能体现 如果抑菌剂添加量不足, 会增加微生物污染的风险 [6], 如果添加量过多, 会产生眼表毒性 [7] 此外, 抑菌剂使用量是否合理, 需在具体品种处方中进行测定才有实际意义 [8] 由于萘敏维滴眼液是常用药, 且使用广泛, 因此, 对抑菌剂抑菌效力和合理添加量的研究显得十分重要 本试验根据中国药典 2015 年版 抑菌效力检查法 中的相关规定, 对含上述抑菌剂的 12 个厂家 14 批萘敏维滴眼液进行了抑菌效力测定, 并对抑菌剂的最适抑菌浓度进行了考察 1 仪器与材料 1.1 仪器生物安全柜 (BHC-1 000ΙΙA/B 3, 苏净集团安泰公司 ); 三用恒温水箱 (DK-600S 型, 上海精宏实验设备有限公司 ); 数显恒温培养箱 (LRH- 250); 高压灭菌锅 (HVA-110,HIRAYAMA); 微量移液枪 (ECOPIPETTE,0~200 μl); 一次性无菌刻度吸管 (1 ml,10 ml); 一次性无菌培养皿 ; 试管等 1.2 试验菌金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[ CMCC (B)26003] 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B)10104] 大肠埃希菌 (Escherichia coli)[ CMCC (B)44102] 白色念珠菌 (Candida albicans)[ CMCC(F) 98001] 黑曲霉 ( Aspergillus niger)[ CMCC(F)98003], 均由中国食品药品检定研究院提供 1.3 培养基胰酪大豆胨琼脂培养基 ( 批号 :150916) 胰酪大豆胨液体培养基 ( 批号 :140113) 沙氏葡萄糖琼脂培养基 ( 批号 :150815) 沙氏葡萄糖液体培养基 ( 批号 :150914), 均由北京三药科技有限公司提供 1.4 试药氯化钠 ( 批号 : , 天津科密欧试剂有限公司 ); 苯扎溴铵 ( 批号 : , 成都西亚化工股分有限公司 ) ( 批号 : , 天津市科密欧化学试剂开发中心 ) 三氯叔丁醇 ( 批号 : , 国药集团化学试剂有限公司 ); 盐酸萘甲唑啉 ( 批号 :140501) 马来酸氯苯那敏 ( 批号 : ) 维生素 B 12 ( 批号 :141001) 玻璃酸钠 ( 批号 : ) 和依地酸二钠 ( 批号 : ) 由沈阳兴齐眼药股份有限公司提供 1.5 样品样品的选取主要考虑 2 个方面, 一是添加的抑菌剂具有代表性 ; 二是尽量覆盖不同厂家 本试验

3 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 321 选取添加苯扎溴铵的样品作为阳离子表面活性剂类抑菌剂的代表, 选取添加的样品作为酯类抑菌剂的代表, 选取添加三氯叔丁醇的样品作为醇类抑菌剂的代表 [9] 本实验抽取样品共 14 批次, 涉及 12 家生产企业,12 个批准文号,4 种规格, 其中生产单位抽样 3 批, 经营单位抽样 8 批, 市场抽样 3 批 最终得到含苯扎溴铵的共 10 个厂家 10 批样品 ( 规格 7~15 ml), 含的 1 个厂家 2 批样品 ( 规格 10 ml) 和三氯叔丁醇 1 个厂家 2 批样品 ( 规格 1 ml 10 支 ), 每批样品抽样数量均为 20 份 萘敏维滴眼液配方主药是盐酸萘甲唑啉 马来酸氯苯那敏和维生素 B 12, 辅料各厂家略有不同, 一般为依地酸二钠 玻璃酸钠和氯化钠等 2 方法与结果 2.1 抑菌剂含量测定采用高效液相色谱 参照中国药典 2015 年版阿昔洛韦滴眼液 检查 项下测定 样品信息和测定结果见表 1 表 1 试验样品情况 Tab. 1 Test samples 规格序号批号 ( batch 厂家 ( manufacturer) (specification)/ (No.) No.) ml 抑菌剂 (bacteriostatic agent) 标示含量 (mark 实测含量 (real content)/ content)/ (mg ml -1 ) (mg ml -1 ) 百分比 (percentage)/% 1 安徽艾珂尔 (Aikeer,Anhui) 苯扎溴铵 山东博士伦 (Boshilun,Shandong) (benzalkonium 黑龙江天龙 (Tianlong,Heilongjiang) bromide) 沈阳圣元 (Shenyuan,Shenyang) 湖北远大 (Yuanda,Hubei) 成都恒瑞 (Hengrui,Chengdu) 武汉五景 (Wujing,Wuhan) 云南傣药 (Daiyao,Yunnan) 石家庄格瑞 (Gerui,Shijiazhuang) 邯郸康业 (Kangye,Handan) 江苏远恒 (Yuanheng,Jiangsu) 江苏远恒 (Yuanheng,Jiangsu) 沈阳兴齐 (Xingqi,Shenyang) 支 三氯叔丁醇 沈阳兴齐 (Xingqi,Shenyang) 支 (chlorbutanol) [1] 2.2 菌液的制备取金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 白色念珠菌的新鲜培养物, 用 0.9% 无菌氯化钠溶液稀释 取黑曲霉的新鲜培养物加入 0.9% 无菌氯化钠溶液 3~5 ml, 将孢子洗脱, 并用适量 0.9% 无菌氯化钠溶液稀释 各试验菌制成接种菌液, 每 1 ml 含菌数 ( 孢子数 ) 约为 10 7 ~10 8 CFU, 并采用梯度稀释进行计数 2.3 供试品接种规格大于 7 ml 的样品, 每个厂家取包装完整的样品 10 份, 分别采用无菌操作打开内盖, 直接用移液枪接种 5 种试验菌液 (10 μl ml -1 ), 使每 1 ml 样品中菌量 ( 孢子 ) 约为 10 5 ~10 6 CFU, 每种试验菌接种 2 份 规格为 1 ml 的样品, 分别取样转移至 5 支无 菌试管中, 每支试管装 15 ml, 试验菌接种方法同上 接种完成后, 置 25 培养箱中避光贮存 2.4 抑菌效力测定细菌计数采用胰酪大豆胨琼脂培养基, 真菌计数采用沙氏葡萄糖琼脂培养基, 培养基在使用前按照药典方法进行适用性检查 [1], 符合药典要求 接种试验菌后, 在第 6 24 h, 以后在第 d 取样, 测定每 1 ml 供试品中细菌数 ; 在第 d 取样测定每 1 ml 供试品中真菌数 计数时分别从接种不同试验菌的供试品中取样 1 ml, 采用梯度稀释法测定 根据存活菌数测定结果来计算各间隔时间菌数 lg 值与 1 ml 供试品中接种的菌数 lg 值的相差值, 按照表 3 标准进行判断 部分样品测定结果见表 2

4 322 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 表 2 抑菌效力测定结果 ( 中国药典 2015 年版 ) 抑菌剂 (bacteriost atic agent) 苯扎溴铵 (benzalkonium bromide) 三氯叔丁醇 (chlorbutanol) 实际含量 (real content)/ (mg ml -1 ) 厂家 / 批号 (manufacturer batch No.) 安徽艾珂尔 (Aikeer, Anhui)/ 邯郸康业 (Kangye, Handan)/ 江苏远恒 (Yuanheng, Jiangsu)/ 江苏远恒 (Yuanheng, Jiangsu)/ 沈阳兴齐 (Xingqi, Shenyang)/ 沈阳兴齐 (Xingqi, Shenyang)/ Tab. 2 Results of antimicrobial effectiveness testing(chp 2015) 试验菌 (test organism) 菌量初始值 (initial value of bacteria)/lg 减少的 lg 值 (reduced lg value) 6 h 24 h 7 d 14 d 28 d 比较 14 d(28 d compared with14 d) 试验菌级别 (test bacteria level) 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A. niger) 5.36 / / 未生长 (no growth) A 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 未生长 (no growth) A 金黄色葡萄球 (S.aureus) * 2.58* 6.15 / 未生长 (no growth) B B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * / 未生长 (no growth) B 大肠埃希菌 (E.coli) * 1.86* 5.69 / 未生长 (no growth) B 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 1.06* 1.86 未增加 (did not increase) B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 未生长 (no growth) A 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) * / 未生长 (no growth) B B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * / 未生长 (no growth) B 大肠埃希菌 (E.coli) * 1.44* 6.11 / 未生长 (no growth) B 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 0.97* 1.68 未增加 (did not increase) B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 未生长 (no growth) A 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) * / 未生长 (no growth) B <B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希菌 (E.coli) * 1.14* 6.11 / 未生长 (no growth) B 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 0.50* 0.59 未生长 (no growth) <B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 0.34* 0.09* 未生长 (no growth) <B 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) * / 未生长 (no growth) B <B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希菌 (E.coli) * 1.57* 6.11 / 未生长 (no growth) B 白色念珠菌 (C.albicans) 5.23 / / 0.17* 0.43 未生长 (no growth) <B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 0.09* 0.14 未生长 (no growth) <B 样品级别 (sample level) 注 (note): 带 * 的数值表示抑菌效力未达到 A 级要求 ; 带 的数值表示 lg 值为增加值 (The symbol * showed that the bacteriostatic efficacy did not meet the level A requirement. The symbol showed as an added value)

5 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 323 中国药典 2015 年版对眼用制剂抑菌效力的规定为 : 一般要求达到 A 级, 特殊情况下至少达到 B 级 抑菌效力达到某级是指 5 种试验菌的抑菌效力均达到该级, 从表 2 来看, 苯扎溴铵含量最高和最低的 2 个厂家 ( 邯郸康业和安徽艾珂尔 ) 样品对细菌和真菌的抑菌效力均能达到 A 级, 其余 8 个厂家的样品抑菌效力均达到 A 级 ( 表中未列出 ); 添加的江苏远恒 2 批样品对黑曲霉能达到 A 级, 对其余 4 种试验菌能达到 B 级, 因此总体为 B 级 ; 添加三氯叔丁醇的沈阳兴齐 2 批样品对细菌的抑菌效力能达到 B 级, 对真菌的抑菌效力达不到 B 级, 总体 <B 级 对照表 3 抑菌效力标准来看, 含苯扎溴铵的样品菌量减少的 lg 值远高于标准规定值, 说明可能存在添加过量的情况, 而含三氯叔丁醇的样品则可能存在添加不足的情况 表 3 眼用制剂抑菌效力判断标准 ( 中国药典 2015 年版 ) Tab. 3 Criterion of inhibitory effectiveness for ophthalmic preparations(chp 2015) 达到 减少的 lg 值 ( reduced lg value) 类别 级别 (category) (reach the level) 6 h 24 h 7 d 14 d 28 d 细菌 A 2 3 / / NR (bacteria) B / 1 3 / NI 真菌 A / / 2 / NI (fungus) B / / / 1 NI 注 (note):nr. 试验菌未恢复生长 ;NI. 未增加, 是指对前一个测定时 间, 试验菌增加的数量不超过 0.5 个 lg(nr.test organisms unrecovered, NI:did not increase. The number of test bacteria increased by no more than 0.5 lg) 2.5 抑菌剂最适抑菌浓度考察 空白对照接种为了解试验菌在不含抑菌剂的配方中的生长情况, 制备了空白对照 按厂家提供的配方, 称取盐酸萘甲唑啉 0.03 g, 马来酸氯苯那敏 0.3 g, 维生素 B g, 以及适量辅料, 加 1.5 L 灭菌水溶解并混匀, 调节 ph 至 4.7, 后通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌, 取适量滤液分装至无菌试管中, 每管 15 ml, 按供试品接种方法接种试验菌,25 避光贮存, 测定时间和结果计算方法同样品抑菌效力测定 最适浓度考察按空白对照制备方法, 配制溶液, 过滤除菌后, 滤液分装至无菌试管中, 每管 15 ml 试验设置 3 种抑菌剂处理, 每种处理设置 5 个浓度梯度, 分别是 : 苯扎溴铵 mg ml -1 ; mg ml -1 ; 三氯叔丁醇 mg ml -1 按供试品方法接种试验菌,25 避光贮存, 测定时间和结果计算方法同样品抑菌效力测定 从表 4 可以看出, 在未添加抑菌剂的空白对照中, 各时间点测定的抑菌效力均达不到 B 级要求, 其中白色念珠菌和黑曲霉在一定时间内还有增加趋势 从抑菌剂最适抑菌浓度来看, 苯扎溴铵的浓度在 0.01 mg ml -1 时, 抑菌效力能达到 B 级, 在 0.03 mg ml -1 时, 抑菌效力能达到 A 级, 说明 0.01~0.03 mg ml -1 是上述 2 种抑菌剂能满足药典要求的抑菌浓度, 同样的最适抑菌深度是 0.6~0.8 mg ml -1, 而三氯叔丁醇的最适抑菌浓度是 6.0~8.0 mg ml -1 3 讨论 3.1 含苯扎溴铵的样品抑菌效力较好, 但大部分样品过量添加苯扎溴铵属于含阳离子表面活性剂类抑菌剂, 在萘敏维滴眼液中被广泛使用, 本次调查中占到厂家总数的 83%,10 批样品实测含量在 0.024~0.156 mg ml -1 之间, 与标示量有一定差异, 实测最高与最低相差 6.5 倍, 即便是最低含量的样品, 抑菌效力测定也表明, 接种细菌 6 h 后菌数已降至 0, 接种真菌 7 d 后菌数已降至 0, 细菌和真菌数量下降的 lg 值均远高于 A 级标准 2 lg 最适抑菌浓度考察表明, 苯扎溴铵的浓度在 0.01~ 0.03 mg ml -1 时, 抑菌效力介于 A 级和 B 级之间, 符合药典要求 若参照最适浓度,10 批测定样品有 80% 过量添加, 且添加量是 A 级标准的 2.6~ 5.2 倍, 是 B 级标准的 7.7~15.6 倍 季铵盐类抑菌剂是目前应用广泛的眼用制剂抑菌剂, 其安全性和有效性得到认可, 据报道常用浓度为 0.04~0.2 mg ml -1[10], 但是, 合理的抑菌剂含量应该是最低有效含量 建议厂家对苯扎溴铵用量进行优化 3.2 含样品的抑菌效力符合 B 级要求属于酯类抑菌剂, 在萘敏维滴眼液中使用较少, 本次只抽到一个厂家, 仅占调查厂家的 8.3%,2 批样品实际含量与标示含量一致, 为 0.6 mg ml -1 抑菌效力测定表明, 对黑曲霉能达到 A 级, 对其余试验菌能达到 B 级, 总体符合抑菌效力 B 级要求, 这与最适抑菌浓度筛选试验结果一致 当的浓度为 0.8 mg ml -1 时, 对试验菌均能达到 A 级效力, 因此 0.6~0.8 mg ml -1 是该抑菌剂的最适浓度范围 由于在水中溶解度极低,

6 324 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 表 4 抑菌剂最适剂量筛选结果 抑菌剂 (bacteriostatic agent) 空白对照 (blank control) 苯扎溴铵 (benzalkonium bromide) 三氯叔丁醇 (chlorbutanol) 三氯叔丁醇 (chlorbutanol) 质量浓度 (concentration)/ (mg ml -1 ) Tab. 4 The result of optimum inhibitive concentration for Bacteriostats 试验菌 (test organism) 菌量初始值 (Initial value of bacteria)lg 减少的 lg 值 (reduced lg value) 6 h 24 h 7 d 14 d 28 d 比较 14 d (28 d compared with14 d) 达到级别 (reach the level) 0 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) * 0.53* 2.36 / 未生长 (no growth) <B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * 0.15* 0.98 / 3.64 <B 大肠埃希氏菌 (E.coli) * 0.08* 4.65 / 未生长 (no growth) <B 白色念珠菌 (C.albicans) 5.95 / / 0.37* 0.65 未增加 (did not increase) <B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 0.14* 0.16 未增加 (did not increase) <B 0.01 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * 2.67* 3.05 / 未增加 (did not increase) B 大肠埃希氏菌 (E.coli) * 4.62 / 未增加 (did not increase) B 白色念珠菌 C.albicans) 5.95 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 0.36* 1.77 未增加 (did not increase) B 0.03 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希氏菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.95 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 未增加 (Did not increase) A 0.6 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) * / 未生长 (no growth) B 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * / 未生长 (no growth) B 大肠埃希氏菌 (E.coli) * 2.78* 5.91 / 未生长 (no growth) B 0.6 白色念珠菌 (C.albicans) 5.08 / / 1.44* 2.08 未生长 (no growth) B 黑曲霉 (A.niger) 5.15 / / 未生长 (no growth) A 0.8 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希氏菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.08 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A.niger) 5.15 / / 未生长 (no growth) A 6.0 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) * 6.08 / 未生长 (no growth) B 大肠埃希氏菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.95 / / 0.84* 1.86 未增加 (did not increase) B 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 0.00* 1.05 未增加 (did not increase) B 8.0 金黄色葡萄球菌 (S.aureus) / 未生长 (no growth) A 铜绿假单胞菌 (P.aeruginosa) / 未生长 (no growth) A 大肠埃希氏菌 (E.coli) / 未生长 (no growth) A 白色念珠菌 (C.albicans) 5.95 / / 未生长 (no growth) A 黑曲霉 (A.niger) 5.36 / / 未增加 (did not increase) A 注 (note): 带 * 的数值表示抑菌效力未达到 A 级要求 ; 带 的数值表示 lg 值为增加值 (The symbol - showed that the bacteriostatic efficacy did not meet the level A requirement. The symbol showed as an added value)

7 Chin J Pharm Anal 2018,38(2) 325 中国医院制剂规范 指出的抑菌浓度为 0.02%~0.08%( 即 0.2~0.8 mg ml -1 ) [11], 本研究的最 适抑菌浓度符合上述要求 3.3 含三氯叔丁醇样品的抑菌效力较差, 应对其适用性作进一步探讨三氯叔丁醇属于醇类抑菌剂, 本次只抽到一个厂家, 占调查厂家的 8.3% 样品的标示量为 3.0 mg ml -1,2 批样品实测含量不到 60%, 标示量与实测量有较大差异 抑菌效力测定表明, 对细菌的抑菌效力能达到 B 级, 但对真菌几乎没有抑制作用, 与不添加抑菌剂的处理相一致, 达不到 B 级 从最适抑菌浓度筛选试验来看, 在 6.0~8.0 mg ml -1 时, 抑菌效力介于 A 级和 B 级之间, 符合药典要求 若参照最适浓度,2 批样品的添加量仅为 A 级标准的 21.9%,B 级标准的 29.2% 有文献报道, 三氯叔丁醇在 ph 高于 5.0 时不稳定, 抑菌活性也会降低 [12] 而萘敏维滴眼液的标准规定 ph 为 4.5~6.0, 所以, 如果选三氯叔丁醇为抑菌剂, 则对滴眼液的 ph 应严格加以控制, 如果 ph 高于 5.5, 建议不用 此外, 三氯叔丁醇眼用 [13] 可引起眼部刺激 梁光江报道其浓度在 0.5% (5 mg ml -1 ) 时单次给药对兔眼无刺激性, 长期使用时具有轻度刺激性 此外, 已有报道滴眼液中抑菌剂联合使用可以达到减量增效的作用 [14] 因此, 建议对其适用性作进一步探讨, 添加时也不建议单一使用, 可考虑与其他抑菌剂一起复合使用, 以降低安全风险 参考文献 [1] 中国药典 2015 年版. 四部 [S].2015:151 ChP 2015.Vol Ⅳ[S].2015:151 [2] 宁黎丽, 赵德恒. 对多剂量眼用制剂不添加抑菌剂的思考 [J]. 中国新药杂志,2009,18(7):589 NING LL,ZHAO DH.Consideration of preservative-free eye drops for multiple administrations[j].chin New Drugs J,2009,18(7):589 [3] 刘荷英, 周敏, 程奇珍, 等. 马来酸噻吗洛尔滴眼液中抑菌剂的质量控制 [J]. 中国药房,2016,26(7):995 LIU HY,ZHOU M,CHENG QZ,et al.quality control of bacterial inhibitor in timolol maleate eye drops[j].j China Pharm,2015,26 (7):995 [4] 李珏, 王知坚, 相露婷. 苄达赖氨酸滴眼液中抑菌剂的检测与评价 [ J].,2015,35(5):884 LI J,WANG ZJ,XIANG LT.Evaluation and testing of antimicrobial preservatives in bendazac lysine eye drops[j].chin J Pharm Anal, 2015,35(5):884 [5] 江志杰, 李玉立, 刘文杰, 等. 吡诺克辛滴眼液的抑菌效力评价 [J]. 中国现代应用药学,2015,32(6):704 JIANG ZJ,LI YL,LIU WJ,et al.study on the preservativeseffectiveness of pirenoxine ophthalmic solution[j].chin J Mod Appl Pharm,2015,32(6):704 [6] 杨晓莉, 贺聪莹, 绳金房. 硫酸软骨素滴眼液抑菌剂筛选与抑菌效力研究 [J].,2016,36(4):678 YANG XL,HE CY,SHENG JF.Studies on antimicrobial preservatives screening and antimicrobial efficacy of chondroitin sulfate eye drops[j].chin J Pharm Anal,2016,36(4):678 [7] PISELLA PJ,POULIQUEN P,BAUDOUIN C.Prevalence of ocular symptoms and signs with preserved and preservative free glaucoma medication[j].br J Ophthalmol,2002,86(4):418 [8] 朱荣峰, 陈伟盛, 简敏骞, 等. 阿昔洛韦滴眼液中苯扎溴铵含量的合理性探讨 [J]. 中国药品标准,2015,16(6):420 ZHU RF,CHEN WS,JIAN MQ,et al.exploration of rational benzalkonium bromide contents in acyclovir eye drops[j].drug Stand China,2015,16(6):420 [9] 张璐, 涂家生. 注射剂和滴眼剂中抑菌剂和抗氧剂的添加及检测 [J]. 药学与临床研究,2012,20(2):137 ZHANG L,TU JS.Addition and detection of preservatives and antioxidants in injections and ophthalmic solutions[j].pharm Clin Res,2012,20(2):137 [10] FREEMAN PD,KAHOOK MY.Preservatives in topical ophthalmic medications:historical and clinical perspectives[j].expert Rev Ophthalmol,2009,4(1):59 [11] 潘学田. 中国医院制剂规范 [M]. 第 2 版. 北京 : 中国医药科技出版社,1995:26 PAN XT.Pharmaceutics Regulates of Hospitals in China[M].2nd ed.beijing:china Medical Science and Technology Press,1995:26 [12] 张世磊, 贺艳丽. 眼用制剂中抑菌剂的应用 [J]. 食品与药品, 2010,12(9):343 ZHANG SL,HE YL.Preservative for ophthalmic preparation[j]. Food Drug,2010,12(9):343 [13] 梁光江, 王延东, 叶成添, 等. 滴眼剂中几种常用抑菌剂的兔眼刺激性实验 [J]. 中国药房,2010,21(21):1964 LIANG GJ,WANG YD,YE CT,et al.stimulation effect of several bacterial inhibitors of eye drops on rabbits eyes[j].j China Pharm, 20`10,21(21):1964 [14] 孟蕾蕾. 拉坦前列素滴眼液抑菌剂抑菌效力研究 [J]. 中国现代应用药学,2017,34(5):715 MENG LL.Study on antimicrobial effectiveness of latanoprost eye drops[j].chin J Mod Appl Pharm,2017,34(5):715 ( 本文于 2017 年 4 月 14 日收到 )

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