2010 年 6 月第 17 卷第 3 期 175 定性强, 检测灵敏度能达到 10 5 CFU/mL 与传统细菌培养方法相比, 胶体金免疫层析法的相对灵敏度和特异性分别是 80% 和 90.6%, 两种方法的总符合率为 86% 结论 : 利用抗铜绿假单胞菌单克隆抗体建立的胶体金免疫层析法, 适合现

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1 174 实验操作中, 本文通过再次变性产物或重复稀释模板来取得正确的实验结果, 使得 HPV 分型点显色正常, 分型结果是不受影响的, 双重保证了实验结果的准确性 本文对 例宫颈癌筛查者进行 TCT 检查, 对 TCT 阳性者采用导流杂交技术检测 HPV 病毒并分型,TCT 检测上皮细胞不正常 ASC US 以上病变及 HPV 阳性者作为观察对象, 对其进行阴道镜下宫颈活组织病理学检查 例行 TCT 检查者,ASC US 以上病变 659 例, 其阳性检出率为 3.56% 对其中 257 例进行 HPV 检测, 阳性 108 例, 阳性检出率为 42.02% 且 HPV 阳性率随宫颈上皮内病变程度增加逐渐增高,ASC 组 HPV 感染阳性率与更高级别病变之间差异有显著性 对 TCT 及 HPV 双阳性者 108 例阴道镜活检结果显示, 随着宫颈病变严重程度的增加,HPV 感染患者高危型组阳性率也显著高于低危型组 验证了 HPV 感染与宫颈病变的相关性, 也显示 TCT 和 HPV 联合检测提高了诊断的准确性 综上所述, 本文认为在妇科宫颈疾病, 尤其是宫 颈癌的早期诊治中, 宜采用 TCT 技术与 PCR 检测 HPV 病毒技术联合应用的方法, 二者结合对高度病变的敏感性和阴性预测值可以达到 100% [12],TCT 技术提高了诊断的准确性, 而 PCR 检测技术特异性 强, 敏感度高, 对宫颈病变的早期诊断 早期干预和 治疗具有指导意义 两者协同检测, 对判断宫颈病变发展趋势 积极处理癌前病变 阻断病程 预防宫颈癌的发生, 有较高的临床使用价值和推广前景 参考文献 : [1]PetryK,MentonM,MentonS,etal.IndusionofHPVtestingin routinecervicalcancerscreeningforwomenabove29yearsinger many:resultsfor8866patients[j].brjcancer,2003,88:1570. [2] 毕晓芳, 陈利萍. 免疫组化和原位杂交联合应用在尖锐湿疣临床诊断中的价值 [J]. 宁夏医学杂志,2008,6(30): [3] 郎景和. 人乳头状瘤病毒感染的处理. 妇科学新进展 [M]. 中华医学电子音像出版社,2005, [4] 陶萍萍, 卞美璐, 欧华, 等. 导流杂交基因芯片技术在人乳头状瘤病毒检测中应用的研究 [J]. 中华妇产科杂志,2006,41(1): [5] 刘淑范. 浅析巴氏五级分类法与 TBS 描述诊断报告方式 [J]. 中国实用妇科与产科杂志,2003,19(3):135. [6]ZhuJ,NormanI,ElfgrenKetalA.Comparisonofliquid basecytol ogyandpapsmearasscreeningmethodforcervicalcancer[j].on colrep,2007,18(1):157. [7]WalboomersJM,JacobsM V,ManoM M,etal.Humanpapilo mavirusisanecesarycauseofinvasivecervicalcancerworldwide [J].JPathol,1999,189(1): [8]BoschF,MunozN,ChichareonS,etal.Thecausalrelationbetween humanpapilom avirusandcervicalcancer[j].jclinpatho, 2002,55: [9] 赵敏. 宫颈细胞学 HPV 检测配合阴道镜对宫颈病变筛查的结 果分析 [J]. 中国基层医药,2005,12(4): [10] 张燕玲.HPV 检测与细胞学检查在宫颈癌前病变诊断中的比较 [J]. 现代肿瘤医学,2006,1(9): [11] 郑洪, 李德祥, 胡琼.HPV 免疫组化和原位核酸杂交技术在女 阴尖锐湿疣和假性湿疣诊断中的价值 [J]. 贵州医药,2002,2 (2): [12] 赵昀, 崔淑慧, 任丽华, 等. 细胞学 HPV 高危型检测在宫颈病变筛查中的应用 [J]. 中国妇产科临床杂志,2006,7(2):89. ( 陈泮藻编辑 ) 铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法的研制和应用 王燕 1, 窦恒利 2 1, 胡成进 (1. 济南军区总医院实验诊断科, 山东济南 ;2. 济南市立四院, 山东济南 ) 摘要 : 为建立一种简单 快速 准确的铜绿假单胞菌检测方法, 结合抗重组铜绿假单胞菌外膜蛋白单克隆抗体 (mab) 胶体 金标记技术, 采用双抗体夹心法, 建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析法, 并对该方法的特异性 灵敏度和稳定性 进行了评价, 对临床痰标本进行了检测 结果显示, 该胶体金免疫层析法能在 3~15min 内完成检测, 方法的特异性高 稳 收稿日期 : ; 修回日期 : 作者简介 : 王燕 (1973 ), 女, 山东省济南市人, 主管技师, 博士, 研究方向为细菌快速检测方法学 E 通讯作者 : 胡成进 E mail:hcj6289@163.com

2 2010 年 6 月第 17 卷第 3 期 175 定性强, 检测灵敏度能达到 10 5 CFU/mL 与传统细菌培养方法相比, 胶体金免疫层析法的相对灵敏度和特异性分别是 80% 和 90.6%, 两种方法的总符合率为 86% 结论 : 利用抗铜绿假单胞菌单克隆抗体建立的胶体金免疫层析法, 适合现 场快速 特异检测铜绿假单胞菌 关键词 : 铜绿假单胞菌 ; 单克隆抗体 ; 胶体金 ; 免疫层析法中图分类号 :R 文献标识码 :A 文章编号 : (2010) DevelopmentandApplicationofColoidalGold based ImmunochromatographicAsayforPseudomonasAeruginosa WANGYan,DOUHeng li,hucheng jin (DepartmentofLaboratoryMedicine,GeneralHospitalofJinanMilitaryArea,Jinan250031,China) Abstract:Todevelopasimple,rapidandaccurateimmunochromatographicasay(ICA)todetectpseudomonas aeruginosainfectioninclinicalsamples,thecoloidalgoldimmunochromatographyasaywasestablishedbyu singmonoclonalantibody(mab)andcoloidalgoldlabelingtechniquebasedondoubleantibodysandwichim munoasay.thesensitivity,specificityandstabilityoftheimmunochromatographicasaywereevaluated.the detectionresultswithicawerecomparedwithbacterialculture basedmethod.theresultsshowedthatthep seudomonasaeruginosa containingsamplewasdetectedbythecoloidalgold basedimmunochromatographicas saywithin3 15min,theasaysensitivitywas105CFU/mL.Comparedwiththeculture basedmethod,therela tivesensitiveandspecificityoftheicastripwas80% and90.6% respectively,andtheoveralagreementbe tweentwotestswas86%.arapid,singlestepandhighlysensitiveicahasbeendevelopedtodetectpseudo monasaeruginosainfectioninclinicalsamples.itissuitableforoutpatientclinics,physicalexaminationinvesti gationandepidemiologicalinvestigation. Keywords:Pseudomonasaeruginosa; Monoclonalantibody; Goldencoloid; Immunochromatographyas say 铜绿假单胞菌 (pseudomonasaeruginosa) 在自然 子标本, 来自 ICU 和呼吸科病房患者 界和人体广泛存在, 其传播途径以间接接触为主, 能 1.2 菌株和试剂 铜绿假单胞菌 P.aeruginosa 导致各种感染 它是一种条件致病菌, 常继发于肿瘤 大面积创伤 烧伤及使用免疫抑制剂等机体免疫力低下患者, 感染类型多样, 可侵害呼吸道 消化道 泌尿系统 骨髓和皮肤等部位 [1 4] 另外, 在公共卫生方面, 铜绿假单胞菌对饮用矿泉水 游泳池水污染以及对水疗设备和医疗设备的污染情况都有报道 [5 7] 因此, 对铜绿假单胞菌进行快速检测, 将有助于及时 有效地进行临床干预, 从而控制铜绿假单胞菌感染, 降低死亡率 我们利用快速免疫层析测 (ATCC27853) 由本科微生物室提供 标准菌株荧光假单胞菌 P.fluorescens(ATCC13525) 恶臭假单胞菌 P.putida(ATCC12633) 产碱假单胞菌 P.aci dovorans(atcc9355) 大肠杆菌 E.coli(ATCC 25922) 肺炎克雷伯杆菌 K.aerogenes(ATCC9621) 和金黄色葡萄球菌 StaphylococcusaureusATCC25923 由军事医学科学院微生物流行病研究所提供 铜绿假单胞菌重组外膜蛋白 OprF 及其 mab 细胞株 (6D8F7 和 7B5D9) 由本室提供 鼠抗 his 抗体 HRP 羊抗鼠 IgG 购自天根生物公司 氯金酸定原理, 采用双抗体夹心法, 将硝酸纤维素膜作为包 (AuCl 被载体, 胶体金作为标记载体, 在试纸条上进行抗原 3 HCl.4H 2 O) 购自 Sigma 公司 硝酸纤维素膜和玻璃纤维购自美国 Milipore 公司 滤纸 塑料卡和抗体反应, 建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫色卡由杭州艾康公司提供 层析法 用该方法检测铜绿假单胞菌抗原具有简 2 方法便 特异 快速等特点, 不需任何精密仪器和高技术 2.1 抗铜绿假单胞菌单克隆抗体的制备经水平操作人员, 能在实验室和现场实施检测 过筛选配对的 mab 杂交瘤细胞株 6D8F7 和 7B5D9 材料和方法为本室制备, 杂交瘤细胞按常规方法培养并接种于 1 材料 BALB/c 小鼠腹腔, 制备含 mab 腹水, 收集后用 pro 1.1 标本来源 57 份临床标本为痰液及咽拭

3 176 teinaagarose 亲和层析柱纯化 收集, 合并洗脱液中含蛋白部分, 浓缩后贮存备用 纸条的稳定性, 将试纸条放置于 60 保存 天, 再分别用保存后的试纸条检测铜绿假单胞菌 2.2 制备胶体金及标记单克隆抗体 应用柠 样本, 待检菌液浓度分别为 CFU/mL, 比 檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒, 将纯化后的抗铜绿假单胞菌外膜蛋白 OprF 的特异性 mab6d8f7 进 较最终检测结果 2.9 临床标本检测 以细菌传统培养鉴定法 行胶体金标记, 操作方法见文献 [8] 的报道 稳定胶体金最适抗体量采用试管观察法进行检测 [9] 将标记好的抗体吸附于结合垫上 为参照, 用细菌传统培养法和胶体金免疫层析法同时检测 57 份痰及咽拭子标本 ( 将痰液或咽拭子标本与样品缓冲液按 1:1 体积进行混合处理后用胶体金 2.3 捕获抗体最佳包被浓度和封闭浓度 用 免疫层析试纸条进行检测 ) 中是否有铜绿假单胞菌 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液 (PBS)(pH7.2) 分别把 mab7b5d9 稀释为 mg/mL, 感染, 计算其相对灵敏度 特异性和两种方法的总符合率 且每个浓度的抗体溶液含封闭液牛血清白蛋白 结 果 (BSA) 的浓度分别为 2.0% 1.5% 1.0% 0.5% 0.25% 将配制好的 mab( 检测带 ) 和羊抗鼠抗体 ( 质控带 ) 包被于硝酸纤维素膜 (NC) 上, 放置于 37 干燥 2h 后, 进行检测 1 最佳胶体金标记抗体量用试管观察法检测能使试管内含胶体金颗粒和还原剂柠檬酸三钠的混合液体呈现红色, 且长时间内保持不变, 这时所需最低标记抗体含量则为抗体 2.4 免疫层析试纸条的组装 胶体金试纸条 的最适胶体金标记抗体量, 在此基础上增加 20% 的 由样品垫 结合垫 NC 膜和吸收垫组成 将这四种组分依次贴上带有粘合剂的底衬卡, 切成 0.4cm 的检测条, 干燥后室温贮存备用 抗体量能稳定胶体金, 则为最佳胶体金标记抗体量 本试验中,mAb6D8F7 的最佳胶体金标记抗体量为 45μg/mL 2.5 操作方法将待检样本 ( 铜绿假单胞菌 标准菌株 )0.1mL 加入 0.1mL 样品缓冲液 (30mmol/LTris 336mmol/LNaCl 9mmol/LEDTA 应的全部过程仅需 3~15min, 并通过肉眼直观判断 结果 检测带和质控带均出现红色为铜绿假单胞菌 阳性 ; 只有质控带出现红色为阴性 ; 检测带和对照带 均不显色或只有检测带显色, 则为试剂失效, 需换新的试纸条重测 2.6 特异性试验将铜绿假单胞菌 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 产碱假单胞菌 大肠杆菌 肺炎克雷伯杆菌和金黄色葡萄球菌用肉汤 (LB) 培养基培养,10000rpm 离心 10min 后, 去上清, 将细菌沉淀用样品缓冲液稀释成 CFU/mL 细菌悬液, 进行检测, 同时设立不含任何菌种的样品缓冲液为空白对照 2.7 灵敏度试验将铜绿假单胞菌 标准菌株, 用样品缓冲液稀释成不同数量级的菌悬液, 空白对照为不含任何菌种的样品缓冲液, 用胶体金试纸条进行检测 2.8 稳定性试验为检测胶体金免疫层析试 2 捕获抗体的最佳包被浓度和封闭液的最佳 浓度分别用系列稀释的捕获抗体 7B5D9 包被和用不 1% Tritonx 100,pH9.3) 进行处理, 混合振荡 10min, 同浓度的 BSA 封闭制备的胶体金试纸条, 检测不同将试纸条浸入待检标本中, 标本通过层析作用向前浓度的铜绿假单胞菌悬液 结果显示, 当铜绿假单移动, 在此过程中先与胶体金标记抗体结合, 再与包胞菌浓度为 CFU/mL 时, 能检出铜绿假单胞被在硝酸纤维素膜上的抗体反应, 进行抗原抗体反菌的胶体金试纸条的最低包被浓度为 0.5mg/mL, BSA 的最高封闭浓度为 2.0% 铜绿假单胞菌浓度低于 CFU/mL 时, 检测结果为阴性 3 特异性试验结果用样品缓冲液分别处理铜绿假单胞菌 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 产碱假单胞菌 大肠杆菌 肺炎克雷伯杆菌和金黄色葡萄球菌至 CFU/mL, 用制备好的胶体金免疫层析试纸条进行检测, 空白对照为不含任何菌种的样品缓冲液, 结果可见图 1 图 1 显示, 胶体金试纸条只对铜绿假单胞菌检测呈现阳性, 其余均无交叉免疫反应, 说明该检测条对于铜绿假单胞菌的检测特异性高 4 灵敏度试验对定值为 CFU/mL 铜绿假单胞菌, 用样品缓冲液系列稀释成 CFU/ ml 进行测定, 以不含铜绿假单胞菌的样品缓冲液为空白对照, 检测结果见图 2 图 2 显示, 免疫层析条检测灵敏度为 CFU/mL

4 2010 年 6 月第 17 卷第 3 期 177 图 1 胶体金免疫层析法特异性实验结果 1. 铜绿假单胞菌 ;2. 荧光假单胞菌 ;3. 恶臭假单胞菌 ;4. 产碱假单胞菌 ;5. 大肠杆菌 ;6. 肺炎克雷伯杆菌 ;7. 金黄色葡 萄球菌 ;8. 空白对照图 图 2 胶体金免疫层析法灵敏度性试验结果 1~6: 为铜绿假单胞菌, 其中 CFU/mL; CFU/mL; CFU/mL; CFU/mL; CFU/mL; CFU/mL;7. 空 白对照 5 稳定性试验 用保存于 60 0~30 天的胶体金免疫层析试纸 条进行检测, 当铜绿假单胞菌浓度为 CFU/ ml 时, 试纸条检测线显色强度没有区别, 同样当菌 体浓度为 CFU/mL 时, 随着保存时间的延长, 检测结果的显色强度未见区别 但是在检测菌体浓度为 10 5 CFU/mL 时, 保存 30 天的试纸条检测线的显色强度低于保存 天的试纸条检测结果, 见图 3 该检测结果证实, 胶体金试纸条在室温下能稳定保存 2 年左右 [10] 6 对临床标本的检测分别用传统细菌培养鉴定方法和胶体金方法对 53 例临床样本进行检测 以传统细菌培养和鉴定方法为参照, 用胶体金免疫层析试纸条检测的敏感度为 80.0%(20/25), 特异性为 90.6%(29/32), 总符合率为 86%( 见表 ), 说明胶体金免疫层析试纸条法与经典的细菌分离鉴定法有较好的一致性 图 3 胶体金免疫层析法稳定性试验结果 A 铜绿假单胞菌 CFU/mL;B 铜绿假单胞菌 CFU/mL;C 铜绿假单胞菌 CFU/mL 表 胶体金免疫层析试纸条 + - 合计 胶体金免疫层析试纸条与经典细菌分离 鉴定法的平行试验结果 讨 经典细菌分离鉴定法 + - 合计 论 在机体抵抗力低下的时候, 铜绿假单胞菌可引 起全身各部位感染, 是医院内感染的常见致病菌之一 近年来, 随着临床治疗中抗生素的广泛使用以及免疫抑制剂的应用, 该菌引起的医院感染也在逐渐增多 传统细菌培养鉴定方法检测和鉴定铜绿假单胞菌, 在大部分情况下已能满足临床需要 但传统方法耗时长 (2~3 天 ), 结果易受抗生素治疗和样本收集不当的影响, 方法的敏感性较低 在某些特殊情况下, 如医疗条件贫乏或在野外作业, 无特殊设备和高技术水平的操作人员, 如果能有新的方法可对感染危重患者实施快速诊断及时治疗, 可有助于控制其感染 最近, 在欧洲一种能检测铜绿假单胞菌三种抗原 ( 弹性蛋白酶 外毒素 A 和碱性蛋白酶 ) 的 ELISA 试剂盒已经商品化并广泛应用于常规检测 [11] 铜绿假单胞菌的 PCR 检测方法, 检测低限能达到 10 2 cels/ml, 特异性接近 100% [12], 但该法尚停留在实验室研究阶段 这些方法虽然灵敏度和特异性高 结果可靠, 但是操作繁琐耗时 (>2h), 需要精密仪器和技术人员, 检测价格昂贵, 因此在野外和实施现场检测时有一定的局限性 而免疫胶体金层析法检测铜绿假单胞菌具有快速 便捷的优点 [13], 可广泛应用于医院 质检 卫生 边检, 也可应用于家庭进行简易的检测 因其有较高的特异性 灵敏度和稳定性, 为铜绿假单胞菌的快速检测提供了一个新的思路 胶体金免疫层析技术是上世纪 90 年代发展起来的以抗原抗体反应为基础的免疫技术, 它将层析

5 178 法和免疫胶体金技术相结合, 具有快速 简便等特点, 目前已广泛应用于各种样本的检测 本研究采用胶体金免疫层析技术, 对铜绿假单胞菌进行检测, 与传统细菌培养鉴定方法相比, 耗时短, 特异性强, 不需特殊设备和专业技术人员进行操作 ; 与酶免方法相比也有着许多优越性, 可免去繁琐的操作步骤, 如加样 洗涤 孵育 终止等, 操作更为简单 胶体金免疫层析法无污染性, 不会危害操作者和周围环境, 还具有检测灵敏 迅速 产品永不褪色等优点 本课题研究表明, 在用胶体金技术检测铜绿假单胞菌的过程中, 标本处理过程简单, 可在 15min 内肉眼直观判断结果, 检测低限为 10 5 CFU/mL, 特异性高, 与非铜绿假单胞菌无交叉免疫反应 表中资料显示, 用细菌培养鉴定方法和胶体金免疫层析法检测临床标本中的铜绿假单胞菌, 胶体金免疫层析法的相对灵敏度为 80.0%, 相对特异性为 90.6%, 两种方法的总符合率为 86%, 说明两种方法有着较好的一致性 另外, 对 25 例细菌培养方法鉴定为铜绿假单胞菌阳性的临床标本, 用胶体金免疫层析法 法检测,20 例为阳性而 5 例为阴性, 这可能与胶体金 试纸条检测灵敏度较低有关, 低于其检测低限的临床标本将被判断为铜绿假单胞菌为阴性 另一方面, 对于细菌培养鉴定为阴性的 32 例临床样本, 胶 体金试纸条检测为 29 例阴性而 3 例阳性, 原因可能 是这 3 例样本中存在铜绿假单胞菌, 但细菌产生突变, 成为营养缺乏型菌株, 不能在分离培养基中生长, 或者因为采样不当, 使得细菌缺乏生长活力或死 亡等 当然明确两种方法检测结果不一致性的产生 原因, 还需结合临床样本进一步进行大样本和高通 量的分析 总之, 本研究中制备的胶体金试纸条检测铜绿假单胞菌具有快速 简便 准确等特点, 结果判断无需高水平技术人员和高精密仪器, 特别适合突发事件及在现场或野外环境中对铜绿假单胞菌感染实施检测, 对铜绿假单胞菌的污染能起到早发现 早预防 早诊断和早控制的作用 参考文献 : [1]Garcia VidalC,AlmagroP,RomaníV,etal.Pseudomonasaerugi nosainpatientshospitalisedforcopdexacerbation:aprospective study[j].eurrespirj,2009,34: [2]SpilkerT,CoenyeT,VandammeP,etal.PCR basedasayfordif ferentiationofpseudomonasaeruginosafromotherpseudomonasspe ciesrecoveredfrom cysticfibrosispatients[j].jclinmicrobiol, 2004,42: [3]LamiaT,BouselmiK,SaidaBR,etal.Epidemiologicalprofile andantibioticsusceptibilityofpseudomonasaeruginosaisolateswith intheburnedpatienthospitalizedintheintensivecareburnunit [J].TunisMed,2007,85(2): [4]StratevaT,YordanovD.Pseudomonasaeruginosa aphenomenonof bacterialresistance[j].jmedmicrobiol,2009,58: [5]MaQ,LinJ,ChenM,etal.Investigationoncontaminationof pseudomonasaeruginosainnaturalmineralwatersourcesfordrink ing[j].jenvironhealth,2001,18(3): [6]ZhangM,LiaoGX,LiJ,etal.Detectionthepseudomonasaerugi nosafromtheswimmingpoolwatercausinghumaninfection[j]. ChinJHealthLabTechnol,2005,15(3): [7]Gras LeGuenC,LepeletierD,DebilonT,etal.Contamination ofamilkbankpasteurisercausingapseudomonasaeruginosaout breakinaneonatalintensivecareunit[j].fetalneonataled, 2003,88: [8]ShimW B,YangZY,KimJY,etal.Immunochromatographyu singcoloidalgold antibodyprobeforthedetectionofatrazineinwa tersamples[j].jagricfoodchem,2006,54(26): [9] 严杰, 罗海波, 陆德源. 现代微生物学实验技术及其应用 [M]. 北京 : 人民卫生出版社,1997: [10]PaekSH,LeeSH,ChoJH,etal.Developmentofrapidone step immunochromatographicasay[j]. Methods, 2000, 22(1): [11]Tramper StrandersGA,vanderEntCK,SliekerMG,etal.Di agnosticvalueofserologicaltestsagainstpseudomonasaeruginosain alargecysticfibrosispopulation[j].thorax,2006,61(8): [12]XiaoX,ZhangJ,GongJ,etal.Rapiddetectionofpseudomonas aernginosabythefluorescencequantitativetaqmanpcrasaytar getingetagene[j].chinjbiotechnol,2008,24(4): [13] 罗立新, 缪珑, 潘力, 等. 快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究 [J]. 中国卫生检验杂志,2006,16(2): ( 张增武编辑 )

材料 方法

材料 方法 生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人

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