药物评价研究2010-3

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第 33 卷第 3 期 2010 年 6 月 - 201 - 平贝雪梨保健饮料的研制及其清咽作用研究黄丽晶 1,2 1,2, 高文远 *, 李霞 1, 张艳军 1 天津大学药物科学与技术学院, 天津 300072; 2 天津中医药大学中药学院, 天津 300193 2 摘要目的 : 研制含平贝母与雪花梨的保健饮料并评价其清咽功能方法 : 以平贝母提取物与雪花梨汁为主要原料,

1 第 33 卷第 3 期 2010 年 6 月平贝雪梨保健饮料的研制及其清咽作用研究黄丽晶 1,2 1,2, 高文远 *, 李霞 1, 张艳军 1 天津大学药物科学与技术学院, 天津 ; 2 天津中医药大学中药学院, 天津摘要目的 : 研制含平贝母与雪花梨的保健饮料并评价其清咽功能方法 : 以平贝母提取物与雪花梨汁为主要原料, 通过工艺设计确定配方用功能成分含量不同的饮料分别喂饮 SD 大鼠 30 d, 以急性炎症模型大鼠足趾肿胀实验对产品的清咽功效进行评价结果 : 所得保健饮料各项指标均符合相关规定, 饮料中高剂量组能够明显抑制鸡蛋清引起的大鼠足趾肿胀结论 : 所研制的保健饮料工艺稳定, 具有良好的清咽作用, 可用于咽喉类疾病的辅助治疗关键词平贝母 ; 雪花梨 ; 保健饮料 ; 清咽中图分类号 :TQ461 TS275.4 文献标志码 :A 文章编号 : (2010) Preparation of Pingbeixueli health drink and evaluation of their antiinflammatory effect HUANG Li-jing 1,2, GAO Wen-yuan 1,2, LI Xia 1, ZHANG Yan-jun 2 1 School of Pharmaceutical Science and Technology, Tianjin University, Tianjin , China; 2 School of Chinese Medicine, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin , China Abstract Objective: To develop a health drink composed of Bulbus Fritillariae Ussuriensis and Pyrus bretschneideri Rehd, and to evaluate its anti-inflammatory effect. Methods: Pingbeixueli health food was prepared with the aqueous extract of Bulbus Fritillariae Ussuriensis and the juice of Pyrus bretschneideri Rehd, and the formula was determined according to the design of the technology. SD rats were treated with different dosage of the health drink for 30 days, and the anti-inflammatory effect of the health drink was evaluated with the model of albumen-induced paw edema in rats. Results: The indexes of the health drink were all in line with the relevant rules, the middle and high treated group could significantly inhibit the paw edema induced by albumen. Conclusion: Our product was a controllable health drink, with a stable technology and good anti-inflammatory effect, which could be used as a pharmaceutical supplement to treat with the respiratory diseases. Keywords Bulbus Fritillariae Ussuriensis; Pyrus bretschneideri Rehd; Health drink; Anti-inflammatory effect 近年来由于空气质量下降, 再加上辛辣食品及烟酒等的刺激, 咽喉疾病发病率明显增高, 成为危害人体健康的一大因素因而贝母炖梨贝母蒸梨鲜梨贝母汤等民间食用方也逐渐受到人们的欢迎, 并取得了良好的功效为使人们应用更加便捷, 并拓宽平贝母的销售市场, 我们以平贝母及雪花梨为主要原料, 研制了平贝雪梨保健饮料, 并对其进行清咽功能的研究 1 材料与仪器 1.1 试药平贝母, 采自黑龙江林区, 经高文远教授鉴定为百合科植物平贝母 Fritillaria ussuriensis Maxim. 的干燥鳞茎贝母素乙 ( 批号 : , 中国固体制剂制造技术国家工程研究中心 ) 雪花梨( 购自山东烟台 ), 异 Vc 钠, 食盐, 柠檬酸, 明胶, 单宁蜂蜜, 纯净水二甲苯 ( 天津市赢达稀贵化学试剂厂, 批号 : ), 醋酸地塞米松片 ( 天津力生制药股份有限公司, 批号 :H ), 试剂均为分析纯 1.2 动物 SD 大鼠 ( 雄性,24 只,180~220 g) 1.3 仪器收稿日期 : *通讯作者高文远,Tel:(022) , pharmgao@tju.edu.cn

2 Drug Evaluation Research Vol.33 No.6 June 2010 LDZ5-2 离心机 ( 北京雷勃尔离心机厂 ),754 紫外 - 可见分光光度计 ( 天津市普瑞斯仪器有限公司 ),CP225D 型电子天平 ( 北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) 2 方法与结果 2.1 平贝母提取工艺考察提取工艺设计选用 L 9 (3 4 ) 正交表进行实验, 以加水量提取时间及提取次数为考察因素, 以浸膏得率总生物碱量为考察指标优选平贝母水提最佳工艺, 因素水平设计见表 1 水平表 1 因素水平表 Table 1 Factor-level table 因素加水倍数 (A) 提取时间 (B) 提取次数 (C) 6 倍 9 倍 12 倍 1 h 1.5 h 2 h 1 次 2 次 3 次总生物碱和干浸膏的提取精密称取 15 g 平贝母药材, 按表 1 设计 9 组实验, 对平贝母进行加热提取合并提取液, 过滤并浓缩至 100 ml, 分别测定提取液中生物碱的量及干浸膏的得率, 并将生物碱的量折算成平贝母药材质量分数, 即生物碱转移率 (Y 1 %), 将干浸膏得率折算成平贝母药材质量分数 (Y 2 %) [1] 总生物碱的定量测定精密称取贝母素乙对照品 6.2 mg, 置 100 ml 量瓶中, 加三氯甲烷溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即制成对照品溶液分别精密吸取对照品溶液 ml 置于 25 ml 量瓶中, 精密加入 ph 4.2 的氢氧化钠 - 邻苯二甲酸氢钾缓冲液 5 ml 及其配制的 0.05% 溴麝香草酚蓝溶液 2 ml, 加三氯甲烷至刻度, 剧烈振摇 3 次, 移入分液漏斗中, 静置 30 min, 分取三氯甲烷层置预先放有 0.2 g 无水硫酸钠 ( 预先于 105 加热 1 h) 的具塞锥形瓶中, 密闭摇匀, 取上清液, 在 413 nm 处测定吸光度同法制成空白对照, 测定吸收度, 以吸光度为纵坐标, 浓度为横坐标, 绘制标准曲线 ( 图 1 ), 所得贝母素乙回归方程为 :Y = X (r =0.998) 试验表明贝母素乙在 1.72~27.5 μg/ml 呈良好的线性关系吸光度 / A 质量浓度 / (mg L -1 ) 图 1 贝母素乙标准曲线 Fig.1 Standard curve of peiminine 精密吸取贝母水煎液 (15 g/100 ml)30 ml, 水浴挥干后, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入浓氨试液 4 ml, 静置, 浸润 1 h, 精密加入三氯甲烷 - 甲醇 (4.. 1) 的混合溶液 100 ml, 称定质量, 加热回流 3 h, 放冷, 再称定重量, 加上述混合溶液补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 20 ml, 蒸干, 残渣加三氯甲烷分次溶解定量移入 10 ml 量瓶中, 定容精密吸取样品溶液 5 ml, 置 25 ml 量瓶中, 按贝母素乙标准曲线同法操作, 取样品溶液的上清液, 以相应试剂为空白, 在 413 nm 处测定吸光度, 并将测得样品吸收度代入回归方程计算含量干浸膏得率的测定精密量取水煎浓缩液 (15 g/100 ml)10 ml, 按中国药典 (2005 年版一部附录 XA) 浸出物测定法项下的方法测定, 即得结果根据表 1, 选择 L 9 (3 4 ) 正交试验表进行试验把总生物碱转移率 (Y 1 %) 干浸膏得率(Y 2 %) 作为筛选指标其结果见表 2, 方差分析见表 3 由直观分析可知, 影响提取效果的因素顺序为 : 提取次数 > 加水倍数 > 提取时间, 以提取次数影响最大由方差分析可知, 提取次数对提取效果有显著性差异, 由此可推断出最佳提取工艺为 A 2 B 3 C 3, 即 : 以 9 倍量的水加热提取 3 次, 每次 2 h 2.2 雪花梨汁的制备工艺流程雪花梨预处理护色榨汁灭酶澄清浓缩技术要点

3 第 33 卷第 3 期 2010 年 6 月表 2 水煎提取正交试验结果 Table 2 Orthogonal test results 编号 A B C D 生物碱转移率 /% 浸膏得率 /% 生物碱转移率 /% K K K R 出膏率 /% K K K Q 表 3 生物碱转移率方差分析表 Table 3 Variance analysis of alkaloids transfer rate 误差来源离均差平方和自由度方差 F 值 P A P >0.05 B P >0.05 C P <0.05 D( 误差 ) 预处理 : 选取新鲜雪花梨, 浸泡后用流动水洗净, 切瓣去果心护色 : 将切好的梨块以异 Vc 钠 - 食盐 - 柠檬酸按一定比例 (0.3%:0.2%:0.1%) 配制的水溶液浸泡榨汁 : 采用喷洒方式加入配制好的异 Vc 钠 - 食盐 - 柠檬酸的水溶液, 将梨块用榨汁机榨汁, 并用 2 层纱布粗滤灭酶 : 滤液立即用夹层锅或管式消毒器加热灭酶, 煮沸约 1 min, 骤冷澄清 : 采用明胶 - 单宁法澄清, 用 0.5% 的明胶水溶液 7.5% 和 1% 的单宁水溶液 7% 混合液加入上述灭酶后的梨汁中, 静置 2 h, 以 r/min 的转速离心 15 min, 取上清液即得澄清梨汁浓缩 : 所得梨汁工艺稳定, 肉眼观察澄清无杂质, 密度约为 1.05 加入产品前将其浓缩 10 倍存放 2.3 平贝雪梨保健饮料的制备产品配方表 4 平贝雪梨保健饮料配方表 Table 4 Formula table of Pingbeixueli health drink 原辅料用量 /% 原辅料用量 /% 平贝母 2( 相当于生药材 ) 浓缩梨汁 6 蜂蜜 0.67 柠檬酸 0.011

4 Drug Evaluation Research Vol.33 No.6 June 工艺流程平贝母预处理浸泡提取粗滤冷却灭菌灌装精滤调配成品浓缩梨汁, 蜂蜜, 柠檬酸等技术要点预处理 : 将平贝母进行除杂后粉碎, 去除杂质提取 : 将粉碎后的平贝母以 9 倍量的水加热提取 3 次, 每次 2 h 调配 : 按配方比例将平贝母提取物浓缩梨汁蜂蜜柠檬酸等一起加入调配灌, 用搅拌器充分搅拌并加热 30 min, 使各种物质充分混匀, 过滤精滤 : 为除去饮料中的细微颗粒及沉淀, 使之澄清透明, 再进行 2 次过滤灭菌 : 将成品放于恒温水浴锅中进行灭菌, 条件为 80,30 min, 然后冷却至 40 左右 2.4 平贝雪梨饮质量标准研究理化指标测定本品为浅棕黄色澄清液体, 无肉眼可见的外来杂质, 久置有微量沉淀物各项理化指标均按照相关标准进行测定, 结果见表 5 表 5 理化指标检测结果 Table 5 Physical and chemical indicators of test results 指标单位结果 ph 值 4.5~5.5 可溶性固形物 % 7.8±0.5 山梨酸钾 g/kg 0.5 总砷 ( 以 As 计 ) mg/l 0.3 总汞 ( 以 Hg 计 ) mg/l 0.3 六六六 mg/l 0.2 DDT mg/l 0.2 菌落总数 cfu/ml 100 大肠菌群 MPN/100 ml 稳定性考察在温度为 40, 相对湿度为 75% 的条件下储存 3 个月, 检查各项理化指标结果表明, 产品在感官上变化不大, 略有微量沉淀析出,pH 值为 5.3, 可溶性固形物的量基本保持稳定, 菌落群数和大肠杆菌不超标活性成分定量测定取平贝雪梨产品 150 ml( 相当于平贝母原药材 3 g), 置具塞锥形瓶中, 水浴挥干水分, 精密加入浓氨试液 4 ml, 静置, 浸润 1 h, 精密加三氯甲烷 - 甲醇 (4:1) 的混合溶液 100 ml, 称定质量, 加热回流 3 h, 放冷, 再称定质量, 加上述混合溶液补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液 20 ml, 蒸干, 残渣加三氯甲烷分次溶解定量移入 10 ml 量瓶中, 定容精密吸取上述样品溶液 5 ml, 置 25 ml 量瓶中, 按贝母素乙标准曲线同法操作, 重复五次, 取样品溶液的上清液, 在 413 nm 处测定吸光度, 测得吸光度值为 0.135, 带入回归方程计算总生物碱的量结果平贝雪梨产品中总生物碱的量以贝母乙素计为 5.13 μg/ml 2.5 平贝雪梨保健饮料药效学研究大鼠足趾 [2,3] 肿胀实验取健康 SD 大鼠 32 只, 雄性, 称重, 随机分为 4 组, 每组 8 只, 即阴性对照组 ( 生理盐水组 ), 平贝雪梨饮高中低剂量组 ( 相当于平贝母生药材 1,0.5,0.25 g/kg) 以上各组给药方法均为 ig 给药, 每天 1 次, 连续 5 d 于末次给药 1 h 后, 每只大鼠左后足趾 sc 10% 鸡蛋清液 0.1 ml 随后于致炎后 h 分别测定左后足趾厚度一次 ( 用游标卡尺测量大鼠踝关节下 0.5 cm 处足趾中央厚度 ), 计算肿胀率结果见表 7 肿胀率 =( 致炎后足趾厚度 - 致炎前足趾厚度 )/ 致炎前足趾厚度 100% 3 讨论 19 世纪中期, 咸丰年间, 东北的汉朝满回等民族即有贝母梨治疗肺热咳喘等民间验方流传但是至今仍未有以二者为主要原料的的保健产品上市, 本实验研制出了工艺稳定质量可控的清咽保健饮料, 检测结果表明所研制出的保健食品工艺稳定, 各项指标均符合保健食品相关规定并对其主要活性成分进行了定量测定, 为其质量控制

5 第 33 卷第 3 期 2010 年 6 月表 7 平贝雪梨饮对大鼠足趾肿胀率的影响 ( x ± s, n = 8 ) Table 7 Effect of Pingbeixueli health drink in paw swelling of rats ( x ± s, n = 8 ) 肿胀率 /% 组别剂量 / (g kg -1 ) 1 h 3 h 4 h 5 h 对照组平贝雪梨饮组 10 ml ± ± ± ± ± ±5.54 * 17.2± ± ±3.45 * 8.7± ± ±3.88 ** ±5.03 * 11.3±3.24 ** 7.5±3.87 ** 3.1±2.27 ** 与对照组相比, * P <0.05 ** P <0.01 * P <0.05 ** P <0.01 vs control group 提供了科学的依据以保健品规定的评价清咽功能的急性炎症模型大鼠足趾肿胀模型, 对平贝雪梨产品的清咽效果进行了评价, 结果显示中高剂量组可以显著抑制鸡蛋清所引起的大鼠足趾肿胀 (P <0.05, 0.01), 表明此产品具有良好的清咽作用, 可用于咽喉疾病的辅助治疗并为平贝母与雪花梨的民间应用提供了理论支持, 有利于二者的进一步开发利用参考文献 : [1] 夏德豪, 程显隆, 肖新月, 等. 平贝母中总生物碱含量测定方法学研究 [J]. 中国药事, 200, 21(9): [2] 吕江明, 贾薇, 李春艳. 黄海棠提取物抗炎镇痛效应的研究 [J]. 实用中西医结合临床, 2008, 8(4): [3] 张志锋, 吴春蕾, 刘圆, 等. 藏药多舌飞蓬不同提取物抗炎镇痛活性及急性毒性研究 [J]. 中草药, 2009, 40(10):

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月 1339 非酒精性脂肪性肝病 (nonalcoholic fatty liver disease,nafld) 是一种与胰岛素抵抗遗 1338 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷第 9 期 2015 年 5 月九味肝泰胶囊对高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用陈菲 1 2,, 艾国 3, 盛柳青 1, 麻佳蕾 1, 黄正明 1. 金华职业技术学院医学院, 浙江金华