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第 27 卷第 4 期 218 年 4 月 doi:1.3978/j.issn.15-6947.218.4.8 http://dx.doi.org/1.3978/j.issn.15-6947.218.4.8 Chinese Journal of General Surgery, 218, 27(4):435-441. Chinese Journal of General Surgery Vol.

1 第 27 卷第 4 期 218 年 4 月 doi:1.3978/j.issn Chinese Journal of General Surgery, 218, 27(4): Chinese Journal of General Surgery Vol.27 No.4 Apr. 218 基础研究胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用邓浩 1, 刘磊 2 (1. 湖北省武汉市红十字会医院普通外科, 湖北武汉 4315;2. 华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院胃肠外科, 湖北武汉 4314) 摘要目的 : 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)CCAT2 在胃癌细胞中的表达及其作用方法 : 用 qrt-pcr 检测胃癌细胞系 AGS Hs746T 和 BSG823 及正常胃黏膜上皮细胞 GES-1 中 CCAT2 的表达, 将胃癌 AGS 细胞分别转染 CCAT2 sirna( ) 与阴性对照 sirna( ) 后, 以无转染的 AGS 细胞为空白对照,CCK-8 法检测细胞的增殖情况, 并分别用流式细胞术分细胞划痕和 Transwell 实验 Western blot 检测与的凋亡情况迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达结果 : 各胃癌细胞系中 CCAT2 相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞 GES-1( 均 ); 转染后 h,的增殖能力明显低于空白对照组与 ( 均 ), 而与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异 ( 均 P>.5); 与比较,细胞凋亡率明显升高划痕愈合率明显降低侵袭细胞数明显减少 ( 均 );P53 caspase-8 Bax 蛋白表达上调,Bcl-2 表达下调 ( 均 ) 结论 :CCAT2 在胃癌细胞中高表升高, 敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力, 机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关关键词胃肿瘤 ;RNA, 长链非编码 ; 细胞增殖 ; 细胞凋亡 ;RNA 干扰中图分类号 :R735.2 Expression of long non-coding RNA CCAT2 in gastric cancer cells and its action DENG Hao 1, LIU Lei 2 (1. Department of General Surgery, Wuhan Red Cross Hospital, Wuhan 4315, China; 2. Department of Gastrointestinal Surgery, the Central Hospital of Wuhan, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 4314, China) Abstract Objective: To investigate the expression of the long non-coding RNA (lncrna) CCAT2 in gastric cancer cells and its actions. Methods: The expressions of CCAT2 in different gastric cancer cell lines (AGS, Hs746T and BSG823) and normal gastric mucosal GES-1 cells were detected by qrt-pcr. The gastric cancer AGS cells were transfected with CCAT2 sirna (si-ccat2 group) or scrambled sirna sequences (negative control group) respectively, and then their proliferative abilities were measured by CCK-8 assay, using untransfected AGS cells as blank 收稿日期 : ; 修订日期 : 作者简介 : 邓浩, 湖北省武汉市红十字会医院副主任医师, 主要从事胃肠肿瘤基础与临床方面的研究通信作者 : 刘磊, haodeng333@126.com 435

2 436 第 27 卷 Key words control. In si-ccat2 group and negative control group, the apoptosis, the migration and invasion abilities and the expressions of apoptosis-associated proteins were determined by flow cytometry, scratch assay, Transwell assay and Western blot analysis, respectively. Results: The relative expression levels of CCAT2 in all studied gastric cancer cell lines were significantly higher than that in the normal gastric mucosal GES-1 cells (all ). At 72 and 96 h after transfection, the proliferative ability in si-ccat2 group was significantly lower than that in negative control group or blank control group (all ), while, no significant difference in proliferative ability was noted between negative control group and blank control group at each predefined time point (all P>.5). In si-ccat2 group compared with negative control group, the apoptosis rate was increased, and the wound healing rate and the number of invading cells were decreased significantly (all ); the protein expressions of P53, caspase-8 and Bax were up-regulated, while the protein expression of Bcl-2 was down-regulated significantly (all ). Conclusion: CCAT2 expression is increased in gastric cancer cells. Knockdown of its expression can inhibit the proliferation and abilities of migration and invasion of the gastric cancer cells, and the mechanism may be related to its regulating the expressions of apoptosis-associated proteins. Stomach Neoplasms; RNA, Long Noncoding; Cell Proliferation; Apoptosis; RNA Interference CLC number: R735.2 胃癌是常见的恶性肿瘤之一, 仅在 212 年, 胃癌新发病例就估计有 95 万左右, 其中死亡人数 72 万, 在不同的国家和地区, 胃癌的发病率有很大差异 [1] 在我国, 胃癌发病率及病死率位列第二 [2] 目前, 胃癌主要的治疗手段包括手术及放化疗, 但是由于多数患者在确诊时已进入进展期, 导致胃癌患者预后较差 [1] 因此, 寻找可靠的生物标志物作为临床早期诊疗的靶点具有重要意义长链非编码 RNA(long non-coding RNA, lncrna) 是一类长度超过 2 nt 的 RNA, 在基因转录转录后调控及表观遗传等多个水平调控基因表达, 在多种疾病中也有重要的作用 [3-4] lncrna CCAT2 最早在 213 年被发现并鉴定出来, 其序列定位于 8q24 高度保守区域 [5] CCAT2 在结直肠癌 [5] 非小细胞肺癌 [6] 食管鳞癌 [7] [8] 前列腺癌等肿瘤中异常高表达, 发挥类似于原癌基因的功能本研究旨在体外研究 CCAT2 在胃癌细胞系中的表达及敲低其表达对胃癌细胞生长和侵袭的作用及可能机制 1 材料与方法 1.1 材料胃癌细胞系 AGS Hs746T BSG823 及正常胃黏膜上皮细胞系 GES-1 均购自美国 ATCC 细胞库,P53 caspase-8 Bcl-2 及 Bax 一抗均购自美国 cell signaling technology 公司, 二抗购自美国 BD 公司,RPMI 164 培养基购自上海经科化学科技有限公司,LncRNA CCAT2 sirna 套装购自广州锐博生物科技有限公司,Lipofectamine TM 2 转染试剂购自美国 BD 公司 RT-PCR 仪购自美国 BD 公司,HBS-196B 酶标仪购自南京德铁实验设备有限公司, 蛋白免疫印迹电泳设备购自美国 Bio-Rad 公司 1.2 实验方法细胞培养转染及分组胃癌细胞系 AGS Hs746T BSG823 及正常胃黏膜上皮细胞系 GES-1 均种植于 RPMI 164 培养基, 并培养于 37 5%CO 2 培养箱中, 于 48 h 后消化传代, 实验所用的细胞均为对数生长期细胞取胃癌细胞系 AGS 分成 3 组, 及空白对照组, 并制备终浓度为 8 nmol/l 的 LncRNA CCAT2 sirna 脂质体复合物, 将 AGS 细胞系以每孔个接种于 6 孔板上, 待细胞生长至融合后,si- CCAT2 组和经 Lipofectamine TM 2 分别转染 CCAT2 sirna 序列和阴性对照 sirna 序列, 空白对照组以 PBST 为空白对照 CCAT2 sirna 序列正义链 : 5'-AGG UGU AGC CAG AGU UAA UTT-3', 反义链 :5'-AUU AAC UCU GGC UAC ACC UTT-3';

3 第 4 期邓浩, 等 : 胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用 437 阴性对照 sirna 序列正义链 :5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3', 反义链 :5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3' RNA 提取及实时荧光定量 PCR(qRT- PCR) RNA 的提取 : 收集待测细胞系和 3 组细胞, 每孔不少于个细胞, 用 All-in-One mirna 抽提试剂盒提取总 RNA, 取 5 μg 总 RNA 行反转录合成 cdna, 以 cdna 为模板,GAPDH 为内参, LncRNA CCAT2 引物序列正向 :5'-CCC TGG TCA AAT TGC TTA ACC T-3', 反向 :5'-TTA TTC GTC CCT CTG TTT TAT GG AT-3';GAPDH 引物序列正向 :5'-GCT CTC TGC TCC TCC TGT TC-3', 反向 :5'-ACG ACC AAA TCC GTT GAC TC-3' 行 qrt-pcr 反应反应条件 :95 变性 3 s, 95 5 s,6 2 s, 共 4 个循环, 使用 BIO- RAD real-time PCR 仪自带软件分析样本的循环阈值 (cycle threshold,ct), 采用 2 ΔΔCt 方法定量, 计算 LncRNA CCAT2 的相对表达量细胞增殖能力测定 CCK-8 法测定及空白对照组 3 组细胞增殖能力, 将及空白对照组细胞消化成单细胞悬液后, 以个 / 孔将 3 组细胞种植于 96 孔板上, 每个孔按 2 µl 的体积上样, 经 h 培养后, 2 µl CCK-8 溶液加入于每孔中去, 继续培养 1 h 后, 在 45 nm 波长下, 用酶标仪测定各孔吸光值, 以时间为横坐标, 吸光值为纵坐标绘制细胞增殖曲线细胞凋亡测定采用流式细胞术测定两组细胞凋亡率, 染色采用 Annexin V/PI, 将两组细胞消化后, 结合缓冲液重悬混匀后, 加入 Annexin V 抗体, 避光染色 1 min 后加入适量 PBS 溶液及 PI 染料, 流式细胞仪检测 Annexin V 阳性细胞比例来确定细胞凋亡率细胞迁移能力测定采用细胞划痕实验, 将及空白对照组细胞培养于 12 孔板中, 待细胞长满融合后, 用 2 µl 无菌 Tips 枪头画直线, 在 h 和 48 h 在显微镜下观察修复情况, 划痕愈合率的计算按照公式, 即划痕愈合率 =( 划痕后即刻的划痕面积 - 划痕后 48 h 的划痕面积 )/ 划痕后即刻的划痕面积 1% 实验在同一情况及条件下重复测量 3 次迁移能力与划痕愈合率成正比细胞侵袭能力测定采用 Transwell 实验将及空白对照组 3 组细胞, 每组取个细胞后接种于 Transwell 小室表面, 于 37 条件下培养 24 h,24h 后, 将小室膜下面的细胞用甲醛固定, 并采用.2% 结晶紫溶液染色 1 min, 显微镜下随机 1 个 2 视野, 计算膜下细胞数, 在同一条件下实验重复 3 次侵袭细胞数越多表示侵袭能力越强 Western blot 检测将两组细胞裂解变性后, 上样量为每孔 3 μg 蛋白, 浓缩胶条件为 5 min 8 V, 分离胶条件为 1 min 1 V, 常规转膜, 加入 P53 caspase-8 Bcl-2 及 Bax 一抗, 浓度为 1:2,4 孵育过夜, 二抗 (1:1) 经 37 孵育 4 h 后, PBST 漂洗 3 次, 在 ECL 发光液下显影,Quantity One 1-D 分析目标蛋白灰度值, 目标蛋白相对表达量 = 目标蛋白灰度值 /GAPDH 灰度值, 实验重复 3 次, 取平均值 1.3 统计学处理采用 SPSS 2. 统计软件行数据分析, 计量资料以均数 ± 标准差 (x ± s ) 表示, 两组间的比较采用 t 检验,3 组比较先用方差分析, 有意义时, 两两比较再用 LSD-t 检验, 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 CCAT2 在胃癌细胞系与正常胃黏膜上皮细胞中的表达 qrt-pcr 示, 正常胃黏膜上皮细胞系 GES-1 中 LncRNA CCAT2 相对表达量为 1.±.3, 在胃癌细胞系 AGS Hs746T 及 BSG823 中相对表达量分别为 8.52± ±.31 及 3.49±.18, 胃癌细胞系 AGS Hs746T 及 BSG823 中 LncRNA CCAT2 相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞系 GES-1( 均 )( 图 1)

438 第 27 卷 LncRNA CCAT2 相对表达量 1 8 6 4 2 P<.1 P<.

2 敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞增殖的影响胃癌细胞系 AGS 转染 24 h 后,qRT-PCR 示, LncRNA CCAT2 相对表达量为.25±.21, 相对表达量为 1.±.4, 空白对照组为 1.6±.

4 438 第 27 卷 LncRNA CCAT2 相对表达量 P<.1 P<.1 AGS Hs746T BSG823 GES-1 图 1 CCAT2 在胃癌及正常胃黏膜上皮细胞系中的表达 Figure 1 Expressions of CCAT2 in different gastric cancer cell lines and normal gastric cell line 2.2 敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞增殖的影响胃癌细胞系 AGS 转染 24 h 后,qRT-PCR 示, LncRNA CCAT2 相对表达量为.25±.21, 相对表达量为 1.±.4, 空白对照组为 1.6±.7, LncRNA CCAT2 相对表达量低于和空白对照组 ( 均 ), 提示转染成功 ( 图 2A) 转染 24,48 h 后,CCK- 8 实验示, 及空白对照组间 OD 45 nm 值差异无统计学意义 (P>.5); 转染后 h, si- CCAT2 组 OD 45 nm 值低于及空白对照组 ( 均 ), 与空白对照组间各时间点 OD 45 nm 值差异均无统计学意义 ( 均 P>.5)( 图 2B) LncRNA CCAT2 相对含量 OD 45 nm 空白对照组. 空白对照组 A 转染时间 (d) B 图 2 敲低 CCAT2 表达抑制胃癌细胞的影响 A:CCAT2 相对表达量 ;B: 细胞增殖曲线 Figure 2 Effect of knockdown of CCAT2 expression on gastric cancer cells A: Relative CCAT2 expression levels; B: Cell proliferation curves 2.3 敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞凋亡的影响流式细胞术检测结果示,细胞凋亡率为 (15.7±1.1)%, 凋亡率为 (4.5±.63)%,细胞凋亡率高于 ( 均 )( 图 3) PI Q1 1.% Q4 73.7% Q2 2.17% Q3 23.1% ANNEXIN FITC PI Q1 2.63% Q2 14.9% Q4 Q % 23.9% ANNEXIN FITC 细胞凋亡率 (%) 图 3 流式细胞术检测胃癌细胞凋亡 Figure 3 Apoptosis of the gastric cancer cells detected by flow cytometry

第 4 期邓浩, 等 : 胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用 439 2.4 敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞迁移和侵袭的影响细胞划痕实验示,si- CCAT2 组划痕愈合率为 (22.91±2.16)%, 为 (53.57±4.

1 侵袭细胞数 ( 个 ) 2 15 1 5 图 4 迁移和侵袭能力检测结果 A: 细胞划痕实验 ;B:Transwell 实验 Figure 4 Migration and invasion ability analyses A: Cell scratch assay; B:

74±.17)vs.(1.±.3) (.46±.3)vs. (1.±.3) 及 (2.28±.14)vs. (1.±.3); 与比较,P53 caspase-8 Bax 蛋白表达上调,Bcl-2 表达下调 ( 均 )( 图 5) P53 Caspase-8 Bcl-2 蛋白质的相对含量 4 3 2 1 P<.

5 第 4 期邓浩, 等 : 胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞迁移和侵袭的影响细胞划痕实验示,si- CCAT2 组划痕愈合率为 (22.91±2.16)%, 为 (53.57±4.81)%,划痕愈合率低于 ( )( 图 4A); Transwell 实验示,2 倍视野下,侵袭细胞数为 (116.9±7.5) 个, 为 (231.6±15.8) 个,侵袭细胞数少于 (P<.1)( 图 4B) 6 24 h h 痕愈合率 (%) 4 2 A 25 P<.1 侵袭细胞数 ( 个 ) 图 4 迁移和侵袭能力检测结果 A: 细胞划痕实验 ;B:Transwell 实验 Figure 4 Migration and invasion ability analyses A: Cell scratch assay; B: Transwell assay B 2.5 敲低 CCAT2 表达对胃癌细胞 P53 caspase-8 和 Bcl-2 蛋白表达的影响 Western blot 示,与 P53 caspase-8 Bcl-2 及 Bax 蛋白相对表达量分别为 (3.42±.21)vs.(1.±.4) (2.74±.17)vs.(1.±.3) (.46±.3)vs. (1.±.3) 及 (2.28±.14)vs. (1.±.3); 与比较,P53 caspase-8 Bax 蛋白表达上调,Bcl-2 表达下调 ( 均 )( 图 5) P53 Caspase-8 Bcl-2 蛋白质的相对含量 P<.1 P<.1 P<.1 Bax GADPH P53 Caspase-8 Bcl-2 Bax 图 5 Western blot 检测凋亡相关蛋白的表达 Figure 5 Western blot analyses of the expressions of the apoptosis-associated proteins

6 44 第 27 卷 3 讨论在我国, 胃癌发病率和病死率在恶性肿瘤中排名第二 [2] 目前, 胃癌的治疗包括手术和放化疗, 但大多数患者在确诊时已是进展期, 预后较差,5 年生存率低于 3% [9-11] lncrna 广泛存在于基因组中, 其没有开放阅读框, 能调控基因转录基因组印记和染色体修饰等生物学过程, 对生物体发育机体代谢和多种疾病有密切的关系 [12] lncrna CCAT2 在结直肠癌组织中高表达, 且其高表达会影响到癌基 [5] 因 myc 表达, 且可促进肿瘤的生长和转移, 研究认为这可能是通过影响 TCF7L2 介导的转录调控促进了 myc mir-17-5p 和 mir-2a 的表达来发挥作用, 同时也发现 CCAT2 能够影响到 Wnt 信号通路在非小细胞肺癌中,CCAT2 表达上调, 且其表达上调与远处转移有关, 下调 CCAT2 表达后, 可显著抑制癌细胞的增殖和侵袭能力 [6] 在食管鳞癌中,CCAT2 高表达与患者吸烟史相关 [7] 本研究发现 CCAT2 在 3 种胃癌细胞系中高表达, 这提示其在胃癌中具有类似于原癌基因的功能本研究通过敲低 CCAT2 来检测其对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响, 发现敲低 CCAT2 可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力, 同时诱导胃癌细胞凋亡在 [13] 胆囊癌中,CCAT2 高表达, 且其高表达与肿瘤大小淋巴结侵犯 TNM 分级及术后复发相关, 敲低 CCAT2 表达可抑制增殖迁移和侵袭, 并诱 [14] 导凋亡逆转上皮间质转化过程胰腺导管腺癌中, CCAT2 在胰腺癌组织及细胞中高表达, 且与预后差相关, 敲低其表达可抑制细胞增殖和侵 [15] 袭在神经胶质瘤中,CCAT2 在神经胶质瘤组织及细胞中高表达, 且与肿瘤大小及分级相关, 高表达 CCAT2 的神经胶质瘤患者预后较低表达者差, 沉默其表达可抑制神经胶质瘤生长迁移和侵袭, 并诱导早期凋亡,CCAT2 可调节上皮间质转化相关基因表达在前列腺癌中, 敲低 CCAT2 表达可抑制细胞生长迁移和侵袭, 且是影响前列腺癌预后的独立影响因子 [8] [16] 在卵巢癌中, 沉默 CCAT2 表达可抑制卵巢癌细胞系 HeLa 增殖, 并 [17] 诱导凋亡在肝细胞癌中,CCAT2 起着癌基因的功能, 调节着细胞增殖迁移和凋亡过程在细胞凋亡过程中,P53 是著名的抑癌基因, 可通过接收到细胞内的各种损伤和凋亡信号, 诱导细胞进入凋亡通路 ; 而下游的 caspase-8 是执行细胞凋亡的关键酶之一, 是控制细胞凋亡进程的核心酶, 通过接收上游凋亡信号,caspase-8 能对多个蛋白裂解, 阻滞细胞周期, 诱导细胞凋亡, 其通常是细胞凋亡水平的指标之一 Bcl-2 能通过改变线粒体中的氧化还原水平和线粒体膜通透性来抑制细胞的凋亡,bax 是 Bcl-2 家族最广泛的促凋亡蛋白, 这些蛋白都是细胞凋亡过程中重要的标志物 [18-24] 本研究对下游的凋亡标志性基因进行检测, 发现 P53 caspase-8 和 bax 显著上调, 而 Bcl-2 表达显著下调, 这提示敲除 CCAT2 能激活凋亡信号通路, 诱导癌细胞发生凋亡由于是体外研究, 本研究尚存在一定的不足, 比如 :CCAT2 在胃癌组织中的表达如何, 与预后的关系如何, 在动物体内实验如何, 都值得进一步的研究, 这也是后续的研究方向综上, 本研究发现,CCAT2 在胃癌细胞系中表达上调, 敲低 CCAT2 的表达可抑制胃癌细胞增殖迁移和侵袭, 并诱导胃癌细胞凋亡, 其机制可能与 P53 caspase-8 和 bax 上调及 Bcl-2 下调表达有关, 这为更深一步的阐明胃癌的发生发展机制提供了新的视野参考文献 [1] Torre LA, Bray F, Siegel RL, et al. Global cancer statistics, 212[J]. CA Cancer J Clin, 215, 65(2): doi: /caac [2] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 215[J]. CA Cancer J Clin, 216, 66(2): doi: / caac [3] Esteller M. Non-coding RNAs in human disease[j]. Nat Rev Genet, 211, 12(12): doi: 1.138/nrg374. Review. [4] Gutschner T, Diederichs S. The hallmarks of cancer: a long noncoding RNA point of view[j]. RNA biology, 212, 9(6): doi: /rna [5] Ling H, Spizzo R, Atlasi Y, et al. CCAT2, a novel noncoding RNA mapping to 8q24, underlies metastatic progression and chromosomal instability in colon cancer[j]. Genome Res, 213, 23(9): doi: 1.111/gr [6] Qiu M, Xu Y, Yang X, et al. CCAT2 is a lung adenocarcinomaspecific long non-coding RNA and promotes invasion of non-small cell lung cancer[j]. Tumour Biol, 214, 35(6): doi: 1.17/s z. [7] Wang J, Qiu M, Xu Y, et al. Long noncoding RNA CCAT2 correlates with smoking in esophageal squamous cell carcinoma[j].

7 第 4 期邓浩, 等 : 胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用 441 Tumour Biol, 215, 36(7): doi: 1.17/s x. [8] Zheng J, Zhao S, He X, et al. The up-regulation of long noncoding RNA CCAT2 indicates a poor prognosis for prostate cancer and promotes metastasis by affecting epithelial-mesenchymal transition[j]. Biochem Biophys Res Commun, 216, 48(4): doi: 1.116/j.bbrc [9] Brenner H, Rothenbacher D, Arndt V. Epidemiology of stomach cancer[j]. Methods Mol Biol, 29, 472: doi: 1.17/ _23. [1] 常敏, 张久聪, 周琴, 等. 胃癌流行病学研究进展 [J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 217, 26(9): doi:1.3969/j.issn Chang M, Zhang JC, Zhou Q, et al. Research progress of clinical epidemiology of gastric cancer[j]. Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology, 217, 26(9): doi:1.3969/j.issn [11] Jiang YX. 多学科方法综合治疗胃癌 [J]., 215, 24(1): doi:1.3978/j.issn Jiang YX. Multidisciplinary approach for the treatment of gastric cancer[j]. Chinese Journal of General Surgery, 215, 24(1): doi:1.3978/j.issn [12] Mercer TR, Dinger ME, Mattick JS. Long non-coding RNAs: insights into functions[j]. Nat Rev Genet, 29, 1(3): doi: 1.138/nrg2521. [13] Xu Y, Yao Y, Qin W, et al. Long non-coding RNA CCAT2 promotes cholangiocarcinoma cells migration and invasion by induction of epithelial-to-mesenchymal transition[j]. Biomed Pharmacother, 218, 99: doi: 1.116/j.biopha [14] Cai Y, Li X, Shen P, et al. CCAT2 is an oncogenic long non-coding RNA in pancreatic ductal adenocarcinoma[j]. Biol Res, 218, 51(1):1. doi: /s [15] Zeng J, Du T, Song Y, et al. Knockdown of Long Noncoding RNA CCAT2 Inhibits Cellular Proliferation, Invasion, and Epithelial- Mesenchymal Transition in Glioma Cells[J]. Oncol Res, 217, 25(6): doi: /965416X [16] Wu L, Jin L, Zhang W, et al. Roles of Long Non-Coding RNA CCAT2 in Cervical Cancer Cell Growth and Apoptosis [J]. Med Sci Monit, 216, 22: [17] Zhou N, Si Z, Li T, et al. Long non-coding RNA CCAT2 functions as an oncogene in hepatocellular carcinoma, regulating cellular proliferation, migration and apoptosis[j]. Oncol Lett, 216, 12(1): [18] Sheikh BY, Sarker MMR, Kamarudin MNA, et al. Antiproliferative and apoptosis inducing effects of citral via p53 and ROS-induced mitochondrial-mediated apoptosis in human colorectal HCT116 and HT29 cell lines[j]. Biomed Pharmacother, 217, 96: doi: 1.116/j.biopha [19] Zhang P, Huang C, Wang W, et al. Harmine Hydrochloride Triggers G2 Phase Arrest and Apoptosis in MGC-83 Cells and SMMC Cells by Upregulating p21, Activating Caspase-8/Bid, and Downregulating ERK/Bad Pathway[J]. Phytother Res, 216, 3(1):31 4. doi: 1.12/ptr [2] Wang L, Yang JK, Kabaleeswaran V, et al. The Fas-FADD death domain complex structure reveals the basis of DISC assembly and disease mutations[j]. Nat Struct Mol Biol, 21, 17(11): doi: 1.138/nsmb.192. [21] Tait SW, Green DR. Mitochondrial regulation of cell death[j]. Cold Spring Harb Perspect Biol, 213, 5(9):pii: a876. doi: 1.111/ cshperspect.a876. [22] McIlwain DR, Berger T, Mak TW. Caspase functions in cell death and disease[j]. Cold Spring Harb Perspect Biol, 213, 5(4):a8656. doi: 1.111/cshperspect.a8656. [23] Raghav PK, Verma YK, Gangenahalli GU. Molecular dynamics simulations of the Bcl-2 protein to predict the structure of its unordered flexible loop domain[j]. J Mol Model, 212, 18(5): doi: 1.17/s [24] Czabotar PE, Westphal D, Dewson G, et al. Bax crystal structures reveal how BH3 domains activate Bax and nucleate its oligomerization to induce apoptosis[j]. Cell, 213, 152(3): doi: 1.116/j.cell ( 本文编辑宋涛 ) 本文引用格式 : 邓浩, 刘磊. 胃癌细胞中长链非编码 RNA CCAT2 的表达及其作用 [J]., 218, 27(4): doi:1.3978/ j.issn Cite this article as: Deng H, Liu L. Expression of long non-coding RNA CCAT2 in gastric cancer cells and its action[j]. Chin J Gen Surg, 218, 27(4): doi:1.3978/j.issn

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5-25袁宏钧.indd 第 24 卷第 5 期 2015 年 5 月碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of