杨柳, 等 : 激素对不同种源樟树体胚发生的影响 116 第 12 期体系, 提高了遗传转化效率近些年来, 基因工程的快速发展, 为不结实不耐寒和被害虫危害严重的樟树提供了新的培育方法, 这种方法不但可以保留樟树的优良性状, 还可以创造更为丰富的性状类型, 就樟树而言, 目前尚未建立起高效稳定

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暄需裘
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1 第 38 卷第 12 期 2018 年 12 月 Vol. 38 No. 12 Dec 中南林业科技大学学报 Journal of Central South University of Forestry & Technology Doi:14067/j.cnki x http: //qks.csuft.edu.cn 激素对不同种源樟树体胚发生的影响杨柳李志辉林立彬中南林业科技大学林学院湖南长沙摘要基因研究依赖于植株再生香樟离体培养植株再生以体胚发生为主以岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底樟树 Cinnamomum camphora 未成熟合子胚作为外植体研究不同激素在体胚发生过程中对体胚及愈伤组织诱导芽分化和生根的影响目的在于为湖南省不同种源樟树体胚发生建立基础完善樟树植株再生体系结果表明适合岳阳怀化樟树诱导体胚发生的最适培养基为 MS+1 mg L -1 6-BA+ mg L D 其余种源均为 MS+1 mg L-1 6-BA+ mg L D 岳阳怀化娄底种源樟树芽分化最佳培养基为 MS+5 mg L-1 6-BA+ mg L-1 NAA 醴陵和长沙种源樟树为 MS+3 mg L -1 6-BA+ mg L-1 NAA 郴州种源为 MS+5 mg L-1 6-BA+ mg L-1 NAA 诱导岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底樟树芽生根的最适激素浓度分别为 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA 1 mg L-1 IBA 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA 该研究为樟树的遗传改良和新品种培育提供重要参考依据关键词樟树体细胞胚植株再生激素中图分类号 S 文献标志码 A 文章编号 X(2018) Effects of hormon on somatic embryogenesis from different provenances of Cinnamomum camphora YANG Liu, LI Zhihui, LIN Libin (College of Forestry, Central South University of Forestry and Technology, Changsha , Hunan, China) Abstract: Gene research depended on plant regeneration, in vitro plantlet regeneration of Cinnamomum camphora was mainly embryogenesis. Explants from the immature zygotic embryos of Yueyang, Chenzhou, Liling, Huaihua, Loudi, Changsha, research different hormones in the process of embryo effects on induction, somatic embryo callus and bud differentiation and rooting, this study established the basis for the emergence of different species of camphor tree somatic embryos in Hunan Province, and improved the plant regeneration system of camphor tree. The results show that: for Yueyang, Huaihua camphor induced somatic embryogenesis of the optimum culture medium was MS+1 mg L-1 6-BA+ mg L-1 2, 4-D, the other provenances were MS+1 mg L-1 6-BA+ mg. L-1 2, 4-D; from Yueyang, Huaihua, Loudi, camphor tree bud differentiation medium were the best for MS+5 mg L-1 6-BA+ mg L-1 NAA, Liling and Changsha provenances MS+3 mg L-1 6-BA+ mg L-1 NAA,Chenzhou for the MS+5 mg L-1 6-BA+ mg L-1 NAA; Yueyang, Chenzhou, Liling, Huaihua, Loudi, Changsha camphor tree rooting optimal hormone concentrations were 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA, 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA, 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA, 1 mg L-1 IBA, 1 mg L-1 IBA+ mg L-1 NAA, 1 mg L-1 IBA. This study will provide important reference for genetic improvement and cultivation of Cinnamomum camphora. Keywords: Cinnamomum camphora; somatic embryogenesis; plantlet regeneration; hormone 体胚发生一直都是植物组织培养中的重要环树作为江南四大名木国内对于樟树体细胞节我国虽然开展木本植物体胚发生研究较晚胚胎发生的研究却不多仅有杜丽 [11] 利用香樟未但也取得了不错的成绩研究的树种包括龙眼 [1] 成熟合子胚初步建立了香樟体胚发生途径的植株再 [2] [3] [4] [5] 鹅掌楸荔枝马尾松橡胶树水曲生体系在此研究基础上施雪萍 [12] 陈甘明 [13] 柳 [6] 麻栎 [7] 杉木 [8] 枇杷 [9] 香榧 [10] 等樟对香樟体胚发生体系进行优化完善了植株再生收稿日期基金项目十三五国家重点研发计划项目樟树等高效培育技术研究 2016YFD 作者简介杨柳硕士研究生通信作者李志辉教授 lzh1957@126.com 引文格式杨柳李志辉林立彬. 激素对不同种源樟树体胚发生的影响 [J]. 中南林业科技大学学报 2018, 38(12): , 135.

2 杨柳, 等 : 激素对不同种源樟树体胚发生的影响 116 第 12 期体系, 提高了遗传转化效率近些年来, 基因工程的快速发展, 为不结实不耐寒和被害虫危害严重的樟树提供了新的培育方法, 这种方法不但可以保留樟树的优良性状, 还可以创造更为丰富的性状类型, 就樟树而言, 目前尚未建立起高效稳定的再生体系, 体细胞胚胎方面研究较少, 从而在很大程度上限制了樟树改良的进程研究了湖南省不同种源樟树, 对其体胚发生过程中的激素配比及相应表现进行了分析, 旨在为湖南省不同种源樟树体胚发生建立良好的基础, 完善樟树再生植株体系, 同时为樟树的遗传改良和新品种培育提供参考依据 1 材料与方法 1.1 材料与外植体处理选择树干饱满生长健壮无病虫害的樟树植株为供试母体, 材料于 2016 年 7 月采自湖南省长沙岳阳娄底醴陵郴州怀化的樟树未成熟种子将不同种源的樟树种子在自来水下冲洗干净, 置于无菌超净工作台上, 用 70% 的酒精浸泡 45 s, 无菌水冲洗 2 次, 转入 % 升汞溶液浸泡 8 min, 无菌水冲洗 3 次外植体按以上步骤消毒后, 在无菌操作台上切开果实, 取出合子胚接种于诱导樟树体胚发生的培养基上, 每个处理接种 30 瓶, 每瓶一个外植体,3 次重复 1.2 实验方法不同种源樟树体胚的诱导采用 MS 培养基为基本培养基, 添加激素为 6-BA(1 3 5 mg L -1 ) 2,4-D( mg L -1 ) NAA( mg L -1 ), 水解酪蛋白 (CH)700 mg, 蔗糖 30 g, 琼脂粉 7.5 g, ph 值 5.8 ~ 6.0, 培养条件为暗培养培养温度为 23± 不同种源樟树芽的分化将诱导产生的体胚培养至成熟, 接种到芽分化培养基上,7 d 后观察芽的诱导情况, 采用 MS 培养基为基本培养基, 添加激素为 6-BA(1 3 5 mg L -1 ) 2,4-D( mg L -1 ) NAA( mg L -1 ), 水解酪蛋白 (CH) 700 mg, 蔗糖 30 g, 琼脂粉 7.5 g,ph 值 5.8 ~ 6.0, 培养条件为光照培养 16 h, 黑暗培养 8 h, 光照强度为 Lx 左右培养温度为 23± 不同种源樟树根的诱导将诱导产生的芽经过进一步生长后从基部剪断, 转入诱导生根培养基,20 d 后观察生根率, 采用 MS 培养基为基本培养基, 添加激素为 IBA (1 mg L -1 ) NAA(0 mg L -1 ), 水解酪蛋白 (CH)700 mg, 蔗糖 30 g, 琼脂粉 7.5 g, ph 值 5.8 ~ 6.0, 培养条件为光照培养 16 h, 黑暗培养 8 h, 光照强度为 Lx 左右培养温度为 23±2 1.3 数据统计接种后的外植体培养 4 周后统计各个处理的体胚诱导率, 成熟体胚接种 4 周后统计芽的分化率, 芽接种 4 周后统计生根率, 用 SPSS 软件进行方差分析和多重比较, 最小显著性差异水平 P=5 体胚诱导率 =( 诱导出体胚的外植体总数 / 接种合子胚总数 ) 100%; 芽的分化率 =( 诱导出芽的外植体总数 / 接种的成熟体胚总数 ) 100%; 植株生根率 =( 诱导出根的外植体总数 / 接种的芽总数 ) 100% 2 结果与分析 2.1 不同种源樟树在不同激素组合上体胚的诱导将幼胚接种到不同激素组合的 MS 培养基上进行体胚诱导, 培养 3 ~ 5 d, 幼胚开始膨大, 7 ~ 10 d 观察到有两种形态的愈伤组织形成, 一般分为非胚性愈伤和胚性愈伤, 非胚性愈伤是灰色疏松性, 胚性愈伤是白绿色紧密型, 经过后期培养, 灰色疏松性少部分可诱导产生不定芽, 此种非胚性愈伤组织后期产生的芽玻璃化程度严重或者直接褐化死亡, 无法培育成正常植株, 白绿色紧密型的胚性愈伤组织在合适的条件下经培养可产生不定芽及再生植株除形成愈伤组织外, 培养 10 ~ 15 d, 子叶膨大处边缘颜色加深出现微小透明组织, 经过培养可直接发育成形态各异的子叶期体胚, 诱导的体胚大多聚集在一起, 可能是起源于同一细胞团, 外植体基部随着体胚的发生颜色逐渐加深直至褐色, 诱导不定芽的过程中同时会有不定根的产生, 这是体胚两极性的表现, 若先产生不定根则无法观察到不定芽的产生, 一定程度上不定根的先发生机制抑制了不定芽的发生 ( 见图 1) 在诱导不同种源樟树体胚发生过程中,6-BA 2,4-D NAA 3 个因素均设置 3 个水平,6-BA 为 mg L -1 2,4-D 和 NAA 均为

第 38 卷 117 中南林业科技大学学报 A 非胚性愈伤组织 B 胚性愈伤组织 C 畸形芽 D 芽正常萌发 E 体细胞胚胎发生 F 白绿色紧密型愈伤组织 G 根诱导 H 植株正常萌发 Fig. 1 图 1 樟树体细胞胚胎发生 Somatic embryogenesis of Cinnamomum camphora L.

3 第 38 卷 117 中南林业科技大学学报 A 非胚性愈伤组织 B 胚性愈伤组织 C 畸形芽 D 芽正常萌发 E 体细胞胚胎发生 F 白绿色紧密型愈伤组织 G 根诱导 H 植株正常萌发 Fig. 1 图 1 樟树体细胞胚胎发生 Somatic embryogenesis of Cinnamomum camphora L. mg L-1 从表 1 可以发现并不是每个激素质体胚诱导率随着 6-BA 质量浓度的升高而下降的趋量浓度都能成功诱导出体胚其中郴州种源樟树势在 5 mg L-1 的 6-BA 与 mg L-1 的 NAA 不能诱导产生体胚数较多不能诱导产生体胚的激素组合中各种源没有观察到体胚及胚性愈伤原因大多是产生了非胚性愈伤组织另外发现郴组织发生当 6-BA 质量浓度一定时体胚诱导率州种源樟树体胚在同样的处理下有较高污染率大体上随着 2 4-D 或 NAA 质量浓度的升高而降低体胚易死亡长沙种源樟树合子胚污染率低诱在 6-BA 质量浓度为 1 mg L-1 时各种源樟树有最导率高胚性愈伤组织呈乳白色紧密型表面光大体胚诱导率当 6-BA 质量浓度一样时 2 4-D 泽度明显不同种源樟树在不同激素组合上体胚的体胚诱导率高于 NAA 表 1 结果显示适合岳诱导结果表 1 表明不同种源樟树体胚诱导阳怀化樟树诱导体胚发生的最适培养基为 MS+ 率随着激素质量浓度的变化而变化大体上呈现 1 mg L-1 6-BA+ mg L D 最大体胚诱导率表 1 激素对不同种源樟树体胚诱导的影响 Table 1 The effect of hormone for somatic embryo from different provenances of Cinnamomum camphora 激素质量浓度 /(mg.l-1) 6-BA 2,4-D 体胚诱导率 /% NAA 岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底 77.8± ± ± ± ± ± ±4.2 6± ± ± ± ±2.7 5± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±2.7 7± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±2.7 5± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.6 7± ± ±1.6 5± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±4.2 10±2.7 表中数据为平均值±标准差

4 杨柳, 等 : 激素对不同种源樟树体胚发生的影响 118 第 12 期分别为 77.8% 73.3%, 郴州醴陵长沙娄底樟树最适培养基均为 MS+1 mg L -1 6-BA+ mg L -1 2,4-D, 最大体胚诱导率分别为 60% 64.4% 82.2% 66.7% 2.2 不同种源樟树在不同激素组合上芽的分化将愈伤组织和成熟的体胚接种到芽诱导培养基上, 经过 7 ~ 10 d, 在樟树体胚的基部, 开始有芽抽生萌动的迹象, 伴随着体胚上愈伤组织的形成, 绿色的芽点也遍布在愈伤组织表层形成突起, 培养 4 周左右, 绿色芽点慢慢发育长大, 形成肉眼可辨的不定芽, 芽长至 2 ~ 4 cm 可从基部截断转至生根培养基不同种源樟树在不同激素质量浓度培养基上芽分化结果 ( 见表 2) 显示, 不同种源樟树在同一质量浓度培养基或同一种源樟树在不同质量浓度培养基上表现不同总体来看, 随着 6-BA 质量浓度的增加, 各种源表现不一, 有的种源表现为诱导率随着 6-BA 质量浓度的增加而增加, 另一部分种源诱导率表现为先升高后降低 6-BA 质量浓度一定时,NAA 诱导率明显高于 2,4-D,2,4-D 和 NAA 质量浓度过高时, 部分种源芽的诱导率为 0 表 2 激素对不同种源樟树芽分化的影响 Table 2 The effect of hormone for bud from different provenances of Cinnamomum camphora 激素质量浓度 /(mg L -1 ) 芽分化率 /% 6-BA 2,4-D NAA 岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底 28.9± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.6 30± ± ± ± ± ± ± ± ±1 18.9± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±3.2 30± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±2.7 表中数据为平均值 ± 标准差岳阳种源分化率最高为 46.7%, 激素组合为 5 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA 低质量浓度 ( mg L -1 ) 的 2,4-D 芽的分化率好于高质量浓度 ( mg L -1 ) 的 2,4-D, 当 2,4-D 质量浓度过高为 mg L -1 时, 分化率为 0 分化率随着 6-BA 质量浓度的升高而升高,6-BA 与 NAA 激素组合均有芽的出现, 诱导结果明显好于 2,4-D 郴州种源樟树整体看来芽的诱导率较差, 最高为 38.9%, 激素组合为 5 mg/l 6-BA+ mg L -1 NAA 在 2,4-D 质量浓度为和 mg L -1 时诱导率为 0, 低质量浓度 2,4-D 诱导率最高也就 22.2% 整体看来, 当 NAA 质量浓度为 mg L -1 时有较高的诱导率,NAA 诱导效果明显好于 2, 4-D 对芽的诱导醴陵种源最高分化率 44.5% 是在 3 mg L BA+ mg L -1 NAA 中诱导得到的诱导率随着 6-BA 质量浓度的增加而增加,6-BA 质量浓度一定时, 随着 2,4-D 和 NAA 质量浓度的增加呈现先升高后下降的趋势, 组合 6-BA 质量浓度为 5 mg L -1 和 NAA 质量浓度为 mg L -1 时例外同样, 高质量浓度的 2,4-D( mg L -1 ) 芽的分化率为 0 长沙种源樟树整体看来芽分化率效果最好达 51.1%, 激素组合为 3 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA 除了 2 个激素组合没有观察到芽的分化, 大部分诱导效果不错, 分化率明显高于其他几个种源 6-BA 质量浓度一定时, 分化率随着 2,4-D 浓度升高而下降, 随着 NAA 质量浓度的升高为先上升后下降怀化种源樟树分化率与醴陵种源相同为

5 第 38 卷中南林业科技大学学报 %, 诱导的激素组合为 5 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA 芽的分化率随着 6-BA 质量浓度的升高大致为升高的趋势,6-BA 质量浓度一定时, 分化率随着 2,4-D 和 NAA 质量浓度的上升而下降低质量浓度 6-BA(1 mg L -1 ) 和低质量浓度 NAA( mg L -1 ) 的组合中芽的诱导率为 0 娄底种源樟树芽的分化率最高为 47.8%, 诱导此分化率的激素组合 (5 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA) 与岳阳怀化种源一致分化率随着 6-BA 浓度的升高而升高,6-BA 质量浓度一定时, 随着 2,4-D 浓度升高而降低,6-BA 为低质量浓度 (1 mg L -1 ) 时, 随着 NAA 质量浓度的升高表现为先升高后降低,6-BA 为高质量浓度 (3 mg L -1 和 5 mg L -1 ) 时, 随着 NAA 浓度的升高而下降 2.3 不同种源樟树在不同激素组合上根的诱导切割下来的芽经过进一步生长后转入生根培养基, 从表 3 中可以看出, 不同种源在不同激素组合上生根率差异显著, 长沙种源有最高生根率, 达到 84.4%, 郴州和醴陵都有最低生根率, 为 72.2%, 总体看来, 各种源在各处理下生根率均大于 50%, 根状态良好能发育成完整植株得出结论如下, 诱导岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底樟树芽生根的最适激素质量浓度分别为 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 表 3 激素对不同种源樟树生根的影响 Table 3 The effect of hormone for root from different provenances of Cinnamomum camphora 激素浓度生根率 /% /(mg L -1 ) 岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底 1 IBA 77.8±3.2 a 68.9±5.7 a 55.6±4.2 b 84.4±4.2 a 63.3±2.7 b 71.1±1.6 a 1 IBA+ NAA 82.2±1.6 a 63.3±2.7 ab 68.9±1.6 a 74.4±1.6 b 74.4±4.2 a 63.3±2.7 b 1 IBA+ NAA 67.8±5.7 b 57.8±5.7 b 72.2±1.6 a 67.0±2.8 c 57.8±5.7 bc 74.5±3.2 a 1 IBA+ NAA 57.8±1.6 c 72.2±3.2 a 56.7±4.7 b 72.2±1.6 bc 51.1±1.6 c 54.4±4.2 c 表中数据为平均值 ± 标准差, 同列不同字母表示差异显著 (P<5) 3 结论与讨论 3.1 结论 (1) 实验结果表明, 长沙岳阳樟树为较易诱导体胚发生的种源, 最高诱导率分别为 82.2% 77.8%, 郴州种源诱导效果最差,2,4-D 较 NAA 诱导效果好, 而低质量浓度的 2,4-D 诱导效果较好, 适合岳阳怀化樟树诱导体胚发生的最适培养基为 MS+1 mg L -1 6-BA+ mg L -1 2,4-D, 郴州醴陵长沙娄底樟树最适培养基为 MS+1 mg L -1 6-BA+ mg L -1 2,4-D; (2) 在芽诱导试验中,NAA 诱导率明显高于 2,4-D, 较高浓度的 6-BA 和较低质量浓度的 NAA 对芽有更高的诱导率,5 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA 激素组合适合岳阳怀化娄底种源樟树芽分化, 醴陵和长沙种源樟树为 3 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA, 郴州种源为 5 mg L -1 6-BA+ mg L -1 NAA; (3) 不同种源在不同激素组合上生根率差异显著, 各种源生根率均大于 50%, 诱导岳阳郴州醴陵长沙怀化娄底樟树芽生根的最适激素质量浓度分别为 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 1 mg L -1 IBA+ mg L -1 NAA 3.2 讨论近年来, 樟树组织培养取得了一定的成功, 多数研究者对樟树组织培养过程中的最佳培养基进行筛选, 在激素质量浓度组合方面做了众多研究, 但是仍存在很大的分歧, 这与外植体采种时间生理年龄基因型等多种因素有关到目前为止, 对于樟树的研究主要集中在樟树茎段组织培养诱导植 [14-15] 株再生以及樟树提取物 [16] [17] 生长模型等方面, 在樟树体胚发生方面研究较少, 利用樟树幼胚诱导体胚发生及再生植株方面就更少本试验表明低质量浓度的 2,4-D 对樟树体胚发生诱导效果较 [11] 好, 与杜丽诱导香樟体胚发生结果类似 ; 在芽诱导阶段, 较高质量浓度的细胞分裂素和较低质量浓度的生长素对愈伤组织有更高的分化率, 这与青 [18] 钱柳在组织培养过程中激素使用原则是一样的 ; [18] 樟树组培苗是易诱导生根的材料, 张椿芳以香樟茎段为外植体, 组培苗生根率可达 100%, 辛全 [19] 伟的研究中樟树生根率达 95%, 且各家系生根

6 杨柳, 等 : 激素对不同种源樟树体胚发生的影响 120 第 12 期率均在 50% 以上, 本研究取得的成果与前人类似, 各种源生根率均大于 50%, 但并没有 100% 生根的情况, 这可能是起始外植体及采种时间不同在植物体胚发生过程中, 生长素是非常重要的因素植物组培中生长素 2,4-D 对植株再生的 [20] 影响, 一直以来就有不同的观点李文静等人发现愈伤组织在 2,4-D 质量浓度较高的培养基上, [22] 荠菜再生植株能力有所降低 ; 刘福平和陈移亮在只含有 2,4-D 的培养基上蝴蝶兰诱导产生的愈 [22] 伤组织不具有分化能力 ; 而在马忠华等的实验中, 随着 2,4-D 质量浓度的增加, 早熟禾出愈率不断增加, 植株再生能力提高在实验中我们发现, 添加 2,4-D 的培养基确实能诱导较高频率的体胚产生, 且胚性愈伤组织发生频率也高, 诱导效果明显好于 NAA, 可见 2,4-D 确实有促进体胚发生的效果, 但是继续培养, 会发现这种促进效果也有抑制体胚发育的能力, 即在含有 2,4-D 的培养基上次生体胚不断发生, 体胚难以发育至成熟发芽乃至植株再生, 只有在降低 2,4-D 质量浓度或去除 2,4-D 的条件下能观察到芽分化, 添加 2, 4-D 前期体胚诱导过程中, 并不能发现体胚大量发生, 只有在后期 (15 d 以后 ) 才能明显观察到体胚的大量发生, 可能是在培养的过程中,2,4-D 质量浓度下降促进了体胚的发育 NAA 体胚诱导率没有 2,4-D 高, 我们发现较高质量浓度的 6-BA 与 NAA 组合几乎不能诱导体胚发生, 发生频率低, 诱导效果不好, 但在芽分化过程中含有 NAA 的培养基诱导效果好, 这与上面所说的 2,4-D 抑制体胚往下一阶段发育相符实验结果还发现,6-BA 质量浓度低, 利于愈伤组织及体胚发 [23] 生,6-BA 质量浓度高, 利于芽分化, 这与辜夕容 [24] 研究结果相似, 而王长宪认为 2,4-D:6-BA=4 时, 能提高愈伤诱导率, 这在我的实验中没有体现出来, 以后可设置更多的质量浓度梯度验证这一结论本研究虽然发现降低或去除 2,4-D 质量浓度能够使樟树再生体系进行下去, 但是转化效率不高, 植株再生仍有困难, 生根率也不是百分之百, 所以我们可以猜测可能添加某些激素或物质可以提高遗传转化效果, 使芽分化更容易或更高频率发生, 黄 [26] 健秋等研究发现附加一定量的肌醇可得到粗壮的后期原胚,ABA 和活性炭的同时使用能促进体胚形成, 肌醇作为一种有效的渗透剂 ABA 作为一种催熟剂是不是在樟树体胚诱导过程中有作用呢? 对后期原胚的形成是否有促进作用? 本次实验还有很多不足的地方, 对于激素比例对体胚发生过程的作用还需设置更多梯度, 对肌醇 ABA 活性炭等物质还需做更多的因素分析试验, 这要在以后的实验中加以验证, 得出更多准确的结论参考文献 : [1] 赖呈纯. 龙眼体胚发生早期的蛋白质组学研究 [D]. 福州 : 福建农林大学,2010. [2] 成铁龙, 孟岩, 陈金慧, 等. 茉莉酸甲酯对杂交鹅掌楸体胚发育的影响 [J]. 南京林业大学学报 ( 自然科学版 ), 2017, 41(6): [3] 邓朝军, 易干军, 曾继吾, 等. 荔枝体胚发生过程中的细胞学观察 [J]. 果树学报,2006, 23 (5) : [4] 杨模华, 张冬林, 李志辉, 等. 马尾松幼胚体细胞胚胎发生研究 [J]. 植物生理学报,2011,47(9): [5] 王天地. 橡胶树次生体胚发生起源及再生植株遗传稳定性的研究 [D]. 海南 : 海南大学,2013. [6] 崔雪梅. 水曲柳与暴马丁香体胚发生褐化外植体的生理生化状态的研究 [D]. 哈尔滨 : 东北林业大学,2015. [7] 廖婧, 方炎明, 虞木奎. 麻栎成熟合子胚外植体体胚发生和植株再生 [J]. 西北植物学报,2012,32(2): [8] 席梦利, 施季森. 杉木子叶和下胚轴的器官发生与体胚发生 [J]. 分子植物育种,2005, 3(6): [9] 沈庆斌. 枇杷高频率体胚发生体系的建立及其遗传转化初步研究 [D]. 福州 : 福建农林大学, [10] 项伟波. 香榧体胚发生体系优化及发育过程的显微观察 [D]. 杭州 : 浙江农林大学,2015. [11] 杜丽. 香樟体胚发生途径的植株再生体系的建立以及农杆菌介导遗传转化的初步研究 [D]. 武汉 : 华中农业大学,2005. [12] 施雪萍. 樟树体细胞胚再生体系的优化和转化 Barnase PaFT 基因的研究 [D]. 武汉 : 华中农业大学研,2009. [13] 陈甘明. 樟树遗传转化体系的优化及抗寒基因的转化 [D]. 武汉 : 华中农业大学,2014. [14] 叶润燕, 童再康, 张俊红, 等. 樟树茎段组培快繁 [J]. 浙江农林大学学报,2016,33(1): [15] 连芳青, 熊伟, 张露. 樟树茎段的离体培养和植株再生 [J]. 江西林业科技,1992(3): [16] 胡文杰, 高捍东, 江香梅, 等. 樟树油樟脑樟和异樟化学型的叶精油成分及含量分析 [J]. 中南林业科技大学学报,2012, 32(11): [17] 侯燕南, 吴惠俐. 非线性回归方法建立亚热带常绿阔叶树种地上生物量相对生长方程 [J]. 中南林业科技大学学报,2016, 36(12): ,107. [18] 张椿芳, 王建军, 何月秋. 香樟茎段组培快繁技术 [J]. 福建林业科技,2015,42(4): [19] 辛全伟. 香樟优良无性系繁殖技术的研究 [D]. 福州 : 福建农林大学研究生处,2010. ( 下转第 135 页 )

7 第 38 卷中南林业科技大学学报 135 表 4 备选合作伙伴与理想解的贴近度 Table 4 The closeness of ideal solution for alternative partners 备选合作伙伴 A 4 结论本研究以家具制造业为核心企业, 通过上游下游逆向物流协同来构建绿色供应链, 促进产业升级改造, 研究发现绿色供应链构建过程中其合作伙伴选择至关重要, 通过查阅相关文献和深入企业调研, 构建了一套结合企业基础评价和绿色环保评价的三级指标进行合作伙伴选择选取 TOPSIS 这一多目标决策法对合作伙伴进行选择, 在指标赋权时既考虑了专家评判的重要性, 又综合了数据所表现出来的离散信息, 构了基于熵值修正的 G1 组合权重模型, 能更加客观的计算出评价指标的权重, 使评价结果更具说服力同时通过算例对家具制造业绿色供应链合作伙伴选择评价过程进行应用, 对于其他绿色制造业合作伙伴选择决策能起到一定的借鉴作用参考文献 : 备选合作伙伴 B 备选合作伙伴 C [1] 周国梅, 石峰, 范纹嘉. 构建绿色供应链产业体系, 促进供给侧改革 [J]. 环境经济,2016(6): 备选合作伙伴 D 备选合作伙伴 E D D C * [2] M.H. NAGEL. Environmental supply chain management versus green procurement in the scope of business and leadership perspective [C]. Electronics and the Environment, 2000(3): [3] Pietrode Giovanni, Vincenzo Vinzi. Covariance versus componentbased estimations of performance in green management[j]. International Journal of Production Economics, 2012, 2(135): [4] 刘莹, 王田. 绿色供应链管理 : 发展进程国外经验和借鉴启示 [J]. 生态经济,2016,32(6): [5] 贾扬蕾, 鲁美娟, 阙师鹏. 循环共生经济下制造业绿色供应链模式构建 [J]. 企业经济,2014(11): [6] Sundarakani Balan, Souza Robert de, Goh Mark. Modeling Carbon Footprints Across the Supply Chain[J]. International Journal of Production Economics,2010(128): [7] 熊中楷, 耿丽娟, 聂佳佳. 基于 FCM 的逆物流供应商评估建模和算法 [J]. 管理工程学报,2011,25(1): [8] 丁志刚, 徐琪. 供应链实施低碳技术的博弈与激励机制研究 [J]. 北京理工大学学报 ( 社会科学版 ),2014,8(16): [9] 尹政平. 开放经济背景下低碳供应商的选择 [J]. 中国流通经济,2014,28(4): [10] 罗新星, 彭素华. 绿色供应链中基于 AHP 和 TOPSIS 的供应商评价与选择研究 [J]. 软科学,2011,25(2): [11] 陆秋琴, 赵俏. 基于熵权的 TOPSIS 供应链合作伙伴选择方法 [J]. 物流技术,2014,33(13): [12] 刘秋生, 王秀竹, 侯云章. 基于熵值的第三方逆向物流供应商评价研究 [J]. 科技管理研究,2013,33(10): [13] 唐毅, 张彬乐, 王忠伟. 基于三角模糊数犹豫直觉模糊集的林产品供应链信息共享程度评价 [J]. 中南林业科技大学学报, 2017, 37(12): [14] 李元爱.SD 五金家具公司供应链环境下的供应商质量管理研究 [J]. 物流技术,2015,34(6): [ 本文编校 : 文凤鸣 ] ( 上接第 120 页 ) [20] 李文静, 李学强, 贾毛毛, 等.6-BA NAA 和 2,4-D 不同配比对荠菜愈伤组织诱导生长及植株再生的影响 [J]. 植物生理学报,2012,48(2): [21] 刘福平, 陈移亮. 细胞分裂素对蝴蝶兰胚性愈伤组织诱导的影响 [J]. 热带作物学报,2008, 29(1): [22] 马忠华, 张云芳, 徐传祥, 等. 早熟禾的组织培养和基因枪介导的基因转化体系的初步建立 [J]. 复旦学报 ( 自然科学版 ), 1999(5): [23] 辜夕容, 黄建国, 杨庆. 香樟离体培养体系的构建初探 [J]. 中国农学通报,2005,21(2): [24] 王长宪, 刘静, 黄艳艳, 等. 山东抗寒香樟组培快繁体系的建立 [J]. 山东农业大学学报 ( 自然科学版 ), 2006,37(4): [25] 黄健秋, 卫志明. 马尾松成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生 [J]. 科学通报,1995,40(1): [ 本文编校 : 文凤鸣 ]

福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察

福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察福建农业学报邓素芳杨旸赖钟雄福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察邓素芳等朱砂根成年茎段的离体培养研究结果与分析福建农业学报第3期邓素芳等: 朱砂根成年茎段的离体培养研究带空洞, 无法观察图1 朱砂根成年茎段的离体繁殖 Fig 1 I n vitro propagation of A crenata 图 2