第 7 卷 49 食品行业, 甚至化妆品行业都具有极高的研究及商业价值 [-6] 牛樟芝作为珍贵的药用真菌在台湾地区被称为药中之王森林中的红宝石 [7] 由于牛樟椴木可用于培养牛樟芝, 使得牛樟天然林得到广泛开发的同时造成人为盗伐严重现存天然林多分布于交通不便的高海拔山区, 林分中多逾龄老树,

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贵吉
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1 第 7 卷第期 2017 年月 Vol. 7 No. Aug Journal of Central South University of Forestry & Technology Doi:.14067/j.cnki x http: //qks.csuft.edu.cn 牛樟组织培养技术研究辛亚龙 1a 1b 唐军荣 1a 1b 杨宇明 2a 2b 原晓龙 2a 2b 李斌 1a 2b 辛培尧 1a 2b 王娟 2a 2b 1. 西南林业大学 a. 国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室 b. 云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室云南昆明云南省林业科学院 a. 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室 b. 国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护与繁育重点实验室云南昆明摘要以从台湾地区引进的珍贵树种牛樟带叶腋的幼嫩茎段为外植体研究不同培养基和植物生长调节剂组合对牛樟组培快繁的影响结果表明牛樟幼嫩茎段经处理后用 7% 乙醇处理 s 0.1% 升汞处理 min 后其污染率仅为.14% 较适宜的腋芽诱导培养基为 MS 6-BA2.0 mg/l IBA0.1 mg/l 增殖培养基为 MS+ 6-BA1. mg/l+naa mg/l 而 1/2 MS+NAA mg/l+iba mg/l+ 活性炭 AC 0. mg/l 为较理想的牛樟生根培养基开展牛樟组培快繁进行研究对其种质资源的保护遗传改良以及其工厂化生产有着重要的理论研究意义和实践应用价值关键词牛樟组织培养植物生长调节剂基本培养基中图分类号 S 文献标志码 A 文章编号 X(2017) Study on tissue culture of Cinnamomum kanehirae Hay XIN Yalong1a,1b, TANG Junrong1a,1b, YANG Yuming2a,2b, YUAN Xiaolong2a,2b, LI Bin1a,2b, XIN Peiyao1a,2b,WANG Juan2a,2b (1.Key Laboratory of Biodiversity Conservation in Southwest Region of State Forestry Administration, Southwest Forestry University, Kunming Yunnan 60224, China; 2.Yunnan Academy of Forestry, Kunming, 60204, China;.The Key Laboratory of Forest Plants Cultivation and Utilization,/The Key Laboratory of Rare and Endangered Forest Plants of State Forestry Administration, Yunnan Kunming, 60204, China; 4.Key Laboratory for Forest Genetic and Tree Improvement & Propagation in Universities of Yunnan Province, Southwest Forestry University, Kunming Yunnan 60224, China) Abstract: The tender stem segments with leaf axil of Cinnamomum kanehirae, a rare tree species introduced from taiwan province, were used as explants to study the inﬂuence on its tissue culture in different culture medium and treatment of plant growth regulators. The results showed that: After treatment, the tender stem segments of C.kanehirae were disinfect with 7% alcohol for s and 0.1% mercuric for min. The contamination rate was.14%. MS 6-BA2.0 mg/l IBA0.1 mg/l was the suitable culture medium for axillary bud induction, while the proliferation culture medium was MS+6-BA1. mg/l+naa mg/l. The culture medium of 1/2 MS+NAA mg/ L+IBA mg/l+ AC0. mg/l could obtain the ideal rooting effect. Study of C.kanehirae tissue culture has the Important theoretical and practical significance to its germplasm resources protection,genetic improvement and factory production. Keywords: Cinnamomum kanehirae Hay; tissue culture; plant growth regulator; basic culture medium 牛樟 Cinnamomum kanehirae Hay 隶属于樟科 Lauraceae 樟属 Cinnamomum 又名沉水樟湾原住民在牛樟树腐朽内壁中空处或枯死伏倒黑樟等自然分布于广西, 广东湖南江西缓慢自然产量稀少将其称为牛樟芝 [4] 相福建及台湾等省区多生于山坡或山谷密林中或关研究表明牛樟芝不仅对化学性引起的肝损伤 [1-2] 的阴暗潮湿的表面发现了一种多孔菌生长极为是一种极具观赏价值的园林具有保护作用能够抑制癌细胞生长具有抗氧绿化树种其木质细致纹理交错是家具制作化抗过敏增强免疫力降血压降血脂预路边或河旁水边 [] 工艺雕刻的上等原料更为重要的是早期台防心血管疾病的功效这使得牛樟芝在医药行业收稿日期基金项目国家林业局云南珍稀濒特植物保护与繁育重点实验室开放项目云南省科技计划项目 (201IA004) 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室开放项目作者简介辛亚龙硕士研究生通讯作者辛培尧副教授博士 xpytgyx@16.com 王娟教授博士 schima@16.com 引文格式辛亚龙唐军荣杨宇明等. 牛樟组织培养技术研究 [J]. 2017, 7(): 4-.

2 第 7 卷 49 食品行业, 甚至化妆品行业都具有极高的研究及商业价值 [-6] 牛樟芝作为珍贵的药用真菌在台湾地区被称为药中之王森林中的红宝石 [7] 由于牛樟椴木可用于培养牛樟芝, 使得牛樟天然林得到广泛开发的同时造成人为盗伐严重现存天然林多分布于交通不便的高海拔山区, 林分中多逾龄老树, 母树分散, 授粉不易, 且种子易受鸟兽取食, 采种困难, 偶有天然下种, 也因林下光照不足枯枝落叶过厚使种子不能自然萌发, 导致牛樟自然更新困难 [] 目前, 该树种野生资源匮乏, 濒危程度还在不断加剧, 已被列为国家三级重点保护植物 [9] 应用人工快繁技术, 加快扩大牛樟资源数量, 解除种群濒危状态, 同时为牛樟芝人工培育提供优良的专性寄主, 为生物医药产业发展提可持续的牛樟资源已显得非常重要和十分的迫切组织培养技术是解决林业生产用种苗急缺的有效方法之一 [] 关于牛樟的组织培养已有相关报道 [,11-1], 但因不同的地理种源引种区的生境条件及其培养环境的差异性, 在实际应用中存在不可重复性和稳定性不高的局限性, 不利于对牛樟开展标准化与规模化的生产本试验以牛樟嫩茎为启动培养材料, 探讨牛樟不定芽诱导增殖以及生根培养配方, 建立高效稳定重复性好的牛樟组织培养技术, 挽救和扩大牛樟种质资源, 加快解除牛樟的濒危状态, 并为种质改良和建立人工无性系快繁体系及其工厂化生产提供理论依据和产生实践指导 1 材料与方法 1.1 材料供试材料采自云南省普洱市思茅区曼歇坝台湾种源牛樟引种试验基地, 五月份采集母树上当年生的健壮无病虫害带叶腋的嫩枝带回实验室, 备用 1.2 方法材料预处理所采集的嫩茎去除叶片并保留 1 ~ 2 cm 长的叶柄, 先用试管刷将嫩枝表皮轻轻擦洗后用自来水冲洗 0 min, 再切成 4 ~ 6 cm 长茎段, 方便后续消毒外植体的消毒将上述处理材料移入超净工作台用 7% 的酒精和 0.1% 的升汞进行消毒酒精消毒时间为 s; 升汞消毒时间分别为 min 将消毒完成的嫩茎用无菌水冲洗次, 切除茎段两端及叶柄端部, 并使茎段长度保持在 1 ~ 1. cm 左右, 每段带有 1 个腋芽, 接种于 MS + 6-BA1.0 mg/l + IBA0.1 mg/l 培养基中, 用以筛选较佳的外植体消毒时间试验共设 9 个处理, 每个处理瓶, 每瓶接种材料个, 每处理重复次 1.2. 基本培养基的筛选选择 MS,B White WPM 为基本培养基, 分别加入 1.0 mg/l 的 6-BA 和 0.1 mg/l 的 IBA 培养 40 d 后, 统计出芽时间出芽率芽的生长情况, 从而筛选较佳的基本培养基类型试验共设 4 个处理, 每个处理瓶, 每瓶接种材料个, 每处理重复次外植体的诱导以 1.2. 中筛选出的较佳培养基为腋芽诱导基本培养基, 分别添加 mg/l 的 6-BA 和 mg/l 的 IBA, 外植体诱导 40 d 后, 统计发芽率芽均高, 芽的生长情况, 筛选不定芽诱导的较佳生长调节剂配比试验共设 9 个处理, 每个处理瓶, 每瓶放置材料个, 每处理重复次 1.2. 增殖培养基的筛选以 1.2. 中选出的较佳培养基为增殖培养基本培养基, 分别添加 mg/l 的 6-BA 和 mg/l 的 NAA, 用以筛选较佳的增殖培养配方选取诱导培养中获得的健壮的单个芽苗, 接种于不同植物激素组合的培养基上进行培养,40 d 后统计增殖系数, 芽的生长情况试验共设 16 个处理, 每处理 20 瓶, 每瓶放置材料个, 每处理重复次生根培养基的筛选以 1/2MS 培养基为生根基本培养基分别添加 mg/l 的 NAA 和 mg/l 的 IBA 以及 0. g/l 的活性炭 (AC), 筛选较佳的生根培养配方选取增殖培养中获得的生长健壮长约 2.0 ~.0 cm 以上的单株芽苗接种于培养基中,0 d 后统计平均生根率, 根的长势试验共设计 16 个处理, 每个处理 20 瓶, 每瓶放置材料个, 每处理重复次培养基质和培养条件上述所有培养基均加入琼脂.0 g/l 用以固化, 蔗糖浓度 0.0 g/l,ph=. ~ 6.0; 室内培养温度 2 左右 ; 光照强度 Lx, 光照周期 12 h/d 的条件下进行培养

3 0 1. 数据分析 Table 1 污染率 = 外植体污染数 / 接入的外植体总数 7% 乙醇 /S 0.1% 升汞 /min 死亡率污染率褐化率 e 27.7 a 6.2 f 出芽率 = 出芽的外植体数 / 接入的外植体总数增殖系数 = 继代所得的芽数 / 原接种芽数生根率 = 生根株数 / 接入生根的芽苗总数采用 SPSS 19.0 及 Excel 2007 软件进行统计分析 2.1 表 1 不同处理对消毒效果的影响 Influence on sterilization effect in different treatments 处理死亡率 = 外植体死亡数 / 接入的外植体总数 2 第期辛亚龙等牛樟组织培养技术研究 e 2.1 b.22 e 1 e 14.1 c.66 e 4 2 e.07 d 1.69 g.67 de.14 e 1.66 g 6.9 bc.14 f 1.21 c cd.2 f.00 d.4 b 1.4 g 1.7 b a 1.72 g a 同列中不同小写字母表示在0.0水平上差异显著下同结果与分析不同处理对外植体消毒效果的影响不同的消毒处理方法对牛樟外植体消毒的效果存在显著差异由表 1 可以看出处理的污染率都随着升汞消毒时间的增加而减小且变化明显处理 6 9 中 7% 的乙醇消表 2 不同基本培养基对芽诱导的影响 Table 2 Influence on bud induction in different basic media 培养基接种数出芽时出芽率类型 /个间 /d 芽的生长情况 MS a 幼苗翠绿生长旺盛 WPM b 幼苗生长旺盛后期略干枯 White 4 6. b 苗较小生长呈停滞状态 B 2..9 c 苗较小生长呈停滞状态毒时间达到了 s 此时的死亡率褐化率均明显高于其他组合而污染率呈下降趋势不同处理异显著该处理中发出的芽呈翠绿色且生长旺间外植体的死亡率存在显著差异其中处理 9 盛较健壮后期叶片和茎生长正常采用 WPM 的死亡率最高为 1.61% 而处理的死亡率较低分别为 0% 0% 1% 2% 和.67% 且这个处理间差异不显著随着升汞培养基出芽率为 4.44% 能抽出新芽叶片及茎长势旺盛但后期长势不及 MS 培养基且发芽率较低出芽时间也较长为 26. d 采用 B 和处理时间的增加外植体的污染率逐步下降其 White 为基本培养基外植体的腋芽出芽率率分别中处理 1 的污染率最高为 27.7% 且与其为 6.%.9% 但腋芽生长较小且缓慢因此认为 MS 培养基作为牛樟组织培养的基它个处理均存在显著差异处理和 9 的污染率较低分别为 1.4% 和 1.72% 而处理中其污染率虽较处理和 9 高但也处于一个较低水平为.14% 就褐化率而言处理 9 中的最本培养基效果较为理想 2. 不同处理对腋芽诱导效果的影响高达到 19.99% 褐化率较低的是处理 4 和分以 MS 培养基为腋芽诱导基本培养基添加别为 1.69% 和 1.66% 两处理间无显著差异不同浓度的 6-BA 和不同浓度的 IBA 进行外植体但与其它处理均存在显著差异而处理 4 中有着腋芽诱导培养基配方的筛选其结果如表所示较高的污染率由表可知随着 6-BA 浓度的加大发芽率综上所述可见牛樟嫩茎作为外植体消毒时逐渐升高在处理 9 中达到了.6% 随着 IBA 宜选择处理为较佳消毒方法即用 7% 乙醇浓度的升高愈伤组织形成也逐渐加大而发芽率处理 s 0.1% 升汞处理 min 时效果最佳有先升后降的趋势处理的发芽率 2.2 不同基本培养基对芽诱导效果的影响接种 40 d 后观察芽的生长状况并对数据进行方差分析其结果列于表 2 在 7.7% 91.11% 之间且这个处理间无显著差异 40 d 后统计苗高处理 4 6 中的苗均较其他处理高分别为和 2. cm 这个处理间差异不显著但与其它处理均有显著差异采用 MS 为基本培养基外植体于 21. d 内即因此处理 4 6 均可作为牛樟嫩茎腋芽诱导可出芽其出芽率达 6.67% 且与其它处理均差的较优方案但是从工厂化生产的需要考虑宜

第 7 卷 1 表不同处理下腋芽诱导效果比较 Table Comparison on inducing axillary buds in different treatments 处理接种数 6-BA /(mg L -1 ) IBA /(mg L -1 ) 发芽率 40 d 苗均高 /cm 芽的长势 1 1.0 0.1 7.6 c 1.7 b 发芽较迟新芽活力不足 2 1.0 74.

4 第 7 卷 1 表不同处理下腋芽诱导效果比较 Table Comparison on inducing axillary buds in different treatments 处理接种数 6-BA /(mg L -1 ) IBA /(mg L -1 ) 发芽率 40 d 苗均高 /cm 芽的长势 c 1.7 b 发芽较迟新芽活力不足 cd 1.76 b 发芽较迟新芽活力不足 d 1.0 b 发芽较迟新芽活力不足 a 2.70 a 发芽较快新芽生长旺盛 ab 2.0 a 发芽较快新芽生长旺盛 a 2. a 发芽较快新芽生长旺盛 ab 1.7 b 发芽快基部膨大芽活力不足 ab 1. b 发芽快基部膨大芽活力不足 b 1.4 b 发芽快基部膨大芽活力不足选择处理 4 为最理想的培养方案, 既保证了腋芽诱导效果和质量, 又可以减少生产成本 ( 图 1) 即 :MS+6-BA 2.0 mg/l+iba0.1 mg/l 为牛樟腋芽诱导的最佳培养基配方 2.4 不同处理对不定芽增殖效果的影响图 1 牛樟腋芽诱导 Fig.1 Axillary bud induction from Cinnamomum kanehirae explants 选取生长正常的腋芽, 以试验筛选出的 MS 培养基为基本培养基, 分别添加不同浓度的 6-BA 和 NAA 进行增殖培养配方的筛选,40 d 后进行观察, 并统计增殖率及芽的生长情况, 其结果如表 4 所示表 4 显示, 随着 6-BA 浓度的增加, 不定芽的表 4 不同处理下不定芽的增殖效果 Table 4 Effect comparison on adventitious bud proliferation in different treatments 处理 6-BA /(mg L -1 ) NAA /(mg L -1 ) 接种数增殖系数芽的生长情况 i 芽增殖好, 芽小, 生长较慢 i 芽增殖较好, 芽小, 生长较慢 h 芽增殖较好, 芽小, 生长较慢 i 芽增殖较好, 芽小, 有愈伤组织 gh 芽增殖好, 芽壮, 生长较快 f 芽增殖好, 芽壮, 生长较快 fg 芽增殖好, 芽壮, 生长较快 e 芽增殖较好, 芽壮, 有愈伤形成 d 芽增殖好, 芽壮, 生长快 c 芽增殖好, 芽健壮, 生长快 cd 芽增殖好, 芽弱, 生长较快 b 芽增殖好, 芽弱, 有愈伤组织形成 a 芽增殖好, 玻璃化, 部分芽后期死亡 a 芽增殖好, 玻璃化, 部分芽后期死亡 a 有愈伤组织, 玻璃化, 部分芽死亡 a 有愈伤组织, 玻璃化, 部分芽死亡增殖系数逐步增高处理和 16 中均获得了较高的增殖系数, 但这个处理中芽的玻璃化程度较重茎基部松散愈伤组织较多, 有叶片卷曲变形的现象, 不利于不定芽的增殖培养 ; 处理和 11 中, 其增殖系数分别为.67 和.62, 这 2 个处理间虽然无显著差异, 但比较芽的生长情况, 则以处理较优同时, 从工厂化生产的经济角度考虑, 也是处理较为理想 ( 图 2)

2 Table 处理 NAA /(mg L-1) 表不同处理的生根效果 Effect comparison on rooting in different treatments IBA /(mg L-1) 接种数 / 个平均生根率根的长势 1 6.2 f 根较细根数少 2 70. ef 根较细根数少 69. f 根较细根数较多 4 6.2 f 根较细根数少根部有愈伤 92.

5 2 第期辛亚龙等牛樟组织培养技术研究因此认为处理 MS+6-BA1. mg/l+naa mg/l 为牛樟不定芽增殖的较理想培养方案 2.4 不同处理对生根效果的影响对不同处理中不定芽苗的生根效果进行统计分析可知处理 9 6 和 7 中的不定芽具有较高的生根率 7.0% 92.0% 且这 4 个处理间不存在显著差异见表而参考根的生长情况处理 6 中的根较粗壮根数多根部洁白且无愈伤组织产生因此认为处理 6 1/2 MS+NAA mg/l +IBA mg/l+ac0. g/l 为牛樟生根培养的较理想配方图图 2 牛樟增殖培养 Multiplication culture of Cinnamomum kanehirae Fig.2 Table 处理 NAA /(mg L-1) 表不同处理的生根效果 Effect comparison on rooting in different treatments IBA /(mg L-1) 接种数 / 个平均生根率根的长势 f 根较细根数少 ef 根较细根数少 69. f 根较细根数较多 f 根较细根数少根部有愈伤 92.6 a 根粗壮根数较少根部白净 ab 根较粗根数多根部白净 7 7. abc 根较粗根数多根有愈伤 2.7 bcd 根较粗根数多根部有愈伤 a 根较粗根数少.6 bc 根较粗根数较多 11 cd 根较粗根数较多 de 根粗根数多根部有愈伤 ef f ef f 讨论试验发现以月份采集的嫩茎为材料进行消毒试验消毒效果好成活率高且长势旺盛后期曾采集 7 月份新发的嫩茎采用相同的消毒方法进行试验其污染率高达 % 这是由于当地进入雨季空气潮湿气温较高植物生长繁茂植物表面各类杂菌增多外界环境和节气的改变引起植物体内内源激素含量变化 [14-16] 试验中外植体的采集时间对于消毒效果影响十分明显外植体采集应以植物生长旺盛的月为最佳时期此时间段内空气中杂菌少植物内源激素含量高 Fig. 图牛樟生根培养 Rooting culture of Cinnamomum kanehirae 生长旺盛适合取材采集消毒容易成活率高周新华等 [17] 官锦燕等 [12] 在相关研究中对外植体的采集时间也提出了相似的看法

6 第 7 卷刘荣忠等 [11] 在对牛樟进行腋芽诱导时, 采用 MS + 6-BA2.0 mg/l + NAA0. mg/l 的培养基, 官锦燕等 [12] 采用了 MS + 6-BA1.0 mg/l + IBA0.1 mg/l 的培养基进行牛樟的腋芽诱导, 而周张德堂 [] 则认为,WPM + 6-BA1. mg/l + IBA 0.1 mg/l 较适合牛樟腋芽的诱导, 其诱导率分别为.%.2% 和 0%; 本试验发现, 外植体在 MS + 6-BA2.0 mg/l + IBA0.1 mg/l 的培养基中, 其诱导效果最佳, 诱导率 (91.11%) 也较以前学者所得的要高已有研究表明 [,11-12], 利用适宜的增殖培养基, 可使牛樟不定芽增殖系数达到 2.0 ~ 4.29, 本试验采用 MS+6-BA1. mg/l + NAA mg/l 的增殖培养基, 使牛樟不定芽的增殖系数达到.67, 且所增殖的不定芽苗长势良好在组培研究时须注意到, 影响植物离体培养的因素是多方面的, 包括离体器官的基因型, 外植体的选择继代培养的次数培养基成分培养条件等都会影响组培快繁重效果 [1] 本试验表明, 牛樟组织培养时, 以 MS 培养基为基本培养基可获得较优的培养效果这与刘荣忠等等 [12] 张德堂与林新春等 [] [1] [11] 官锦燕的相关研究相一致而与周的研究有所不同, 他认为 WPM 为牛樟组织培养的较理想的基本培养基不同的研究者所得的结论有所出入, 这可能与所采外植体基因型的不同有关同一物种, 由于引种到不同的生长环境中, 或有性繁殖, 往往造成其基因型的变异 [19] 而同一种植物的基因型种类, 往往是引起组织培养条件各异的主要原因之一 [20] 这可能也是已有研究报道重复性及稳定性不高的主要原因因此, 在利用所建立的组织培养体系进行工厂化生产时, 应特别注意取材条件及材料基因型的一致性, 从而确保技术体系的可重复性和稳定性参考文献 : [1] 中国科学院植物研究所. 中国植物志 :1 卷 [M]. 北京 : 科学出版社,192. [2] 彭真汾, 王威, 谢倩, 等. 牛樟资源保护现状及繁育研究进展 [J]. 亚热带农业研究,2016,12(1):6-72. [] 周张德堂. 台湾牛樟无性繁殖技术研究 [D]. 福州 : 福建农林大学,201. [4] 张知晓, 季梅, 泽桑梓. 牛樟芝培养技术的研究进展 [J]. 热带农业科学,201,(0): [] 杨璐. 牛樟芝提取物的药理学研究 [D]. 开封 : 河南大学, [6] 陈体强, 方忠玉. 台湾珍稀药用菌樟芝及其寄 ( 腐 ) 生树种牛樟 [J]. 福建农业科技,200(1): [7] 马晓蕾. 台湾红宝石 -- 牛樟菇 [J]. 中国商贸,201(19):42-4. [] 黄松根, 何坤益, 吴国武, 等. 牛樟天然林组成与结构之调查 [J]. 台湾林业科学,1996,11(4): [9] 国家环境保护局, 中国科学院植物研究所. 中国珍稀濒危保护植物名录 [J]. 生物学通报,197(7) :2-2. [] 李斌, 林源, 唐军荣, 等. 无籽刺梨的组织培养研究 [J]. 经济林研究,2016,4(): [11] 刘荣忠. 牛樟组培快繁技术研究 [J]. 现代农业科技, 2012(24): [12] 官锦燕, 谭嘉娜, 罗剑飘, 等. 牛樟的组织培养和植株再生 [J]. 南京林业大学学报 ( 自然科学版 ),2016,40(4):6-6. [1] 林新春, 曾余力, 王晓芹, 等. 牛樟体胚培养基及组培快繁方法 : 中国, [P] [14] 周安佩, 刘东玉, 纵丹, 等. 滇杨侧芽不同季节内源激素含量变化动态 [J]. 林业科学研究,2014,27(1): [1] 赵云龙, 李朝婵, 巫华美, 等. 种高山杜鹃不同季节茎段内源激素的变化 [J]. 贵州农业科学,2012,40(9): [16] 谭健晖, 黄寿先. 大花序桉离体根培养过程中内源激素的变化 [J].,201,(1):4-6,. [17] 周新华, 厉月桥, 王丽云, 等. 多花黄精根茎芽高效组培增殖和生根体系研究 [J]. 经济林研究,2016,4(1):1-6. [1] 沈逢源, 李高燕, 刘思琪. 植物组织培养过程中的影响因素 [J]. 现代园艺,2011(4):12,21. [19] 胡延吉. 植物育种学 [M]. 北京 : 高等教育出版社,2011. [20] 王蒂, 陈劲枫. 植物组织培养 ( 第 2 版 )[M]. 北京 : 中国农业出版社,201. [ 本文编校 : 文凤鸣 ]

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