第 38 卷第 3 期 2018 年 3 月中南林业科技大学学报 Journal of Central South University of Forestry & Technology Vol. 38 No. 3 Mar Doi: /j.cnki x.2

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1 第 8 卷第期 2018 年月中南林业科技大学学报 Journal of Central South University of Forestry & Technology Vol. 8 No. Mar Doi: /j.cnki x http: //qks.csuft.edu.cn 青钱柳组织培养研究张文泉, 邓洁, 罗国涛, 张雕 ( 凯里学院, 贵州凯里 ) 摘要 : 以青钱柳幼嫩叶片为外植体进行组织培养, 观察青钱柳愈伤组织形成及再分化形成不定芽的过程, 研究不同培养基和不同生长调节物质组合对青钱柳愈伤组织诱导及植株再生的影响结果表明 :(1)MS WPM 和 B5 培养基均能诱导出愈伤组织, 激素及其浓度对愈伤组织诱导有显著影响愈伤组织在 WPM+2.0 mg/l2,4-d+ mg/l 6-BA 培养基组合上诱导率最高, 达 97.6%;(2) 青钱柳愈伤组织能分化形成不定芽, 激素不同浓度组合及外源物对愈伤组织分化有显著影响青钱柳叶片愈伤组织在 WPM+ mg/l 6-BA+2.0 mg/lzt +0.5 mg/l2,4-d+10% 椰乳的培养基上分化不定芽的频率最高, 达 66.%;() 青钱柳诱导生根的最佳培养基组合为 1/2 MS+1.5 mg/l IBA 关键词 : 青钱柳 ; 组织培养 ; 愈伤组织 ; 植株再生中图分类号 :S722 文献标志码 :A 文章编号 :167-92X(2018) Study on tissue culture of Cyclocarya paliurus ZHANG Wenquan, DENG Jie, LUO Guotao, ZHANG Diao (Kaili University, Kaili , GuiZhou, China) Abstract: The induction of adventitious shoot from callus of Cyclocarya paliurus and the effects of basic media and different growth regulators on induction of callus and adventitious shoots were studied with explants of the seedlings of Cyclocarya paliurus. As the results showed: (1) The types and concentrations of hormones had significant effects on callus induction. Callus of leaves could be induced on each basic medium applied in this paper and the highest induction frequency of callus reached 97.6%.The optimum medium for callus induction from leaves was WPM+ 2.0 mg/l 2, 4-D + mg/l 6-BA. (2)Successfully achieved the induction and germination of adventitious shoots from the leaf callus, the types and concentrations of hormones had significant effects on callus induction. The greatest induction frequency of adventitious shoots from leaf callus was observed in the medium of WPM+ mg/l 6-BA +2.0 mg/l ZT +0.5 mg/l 2,4-D +10% coconut,which reached 66.%. ()The adventitious root was induced on 1/2MS+1.5 mg/l IBA. Keywords: Cyclocarya paliurus; tissue cultur; callus; plant regeneration 青钱柳 Cyclocarya paliurus ( Batal) Iljinskaja 为中国特有的珍稀濒危植物, 属胡桃科 Juglandaceae 青钱柳属 Cyclocarya [1], 现有研究表明 : 青钱柳富含钾钙镁锌硒等多种对人体有益的中微量元素及三萜甾体类化合物和黄酮等有机成分, 全株均能入药, 干制叶片为治疗 II 型糖尿病的天然良药, 青钱柳的水提物还具有降血压降血糖降血脂的作用, 其药用价值及保健功效显著, 具有广阔的开发利用前景 [2-5] 青钱柳为落叶速生乔木, 树木高大挺拔, 枝叶美丽多姿, 其果实从 10 月至次年 5 月挂在树上像一串串的铜钱迎风摇曳, 别具一格, 因此又名摇钱树, 颇具观赏性, 具有极高的庭院栽培价值, 可作为园林绿化观赏树种青钱柳木材轻软, 细致, 有光泽, 纹理交错, 结构略细, 加工容易, 胶粘性和油漆性能好, 可作家具及工业上的优良用材 ; 其树皮含鞣质及纤维, 为橡胶及造纸原料, 树皮含鞣质, 可提制栲胶, 亦可做纤维原料青钱柳的自然资源极其匮乏, 种子具有深度休眠特性, 自然条件下, 次年或是多年后才能萌发, 且发芽率最高仅在 0.2%, 扦插成活率最高仅 45.6% [6-8], 使得青钱柳的种苗匮乏, 严重阻碍其开发利用植物组织培养为高效可行的无性繁殖方式, 具有繁殖系数高, 周期短, 且不受外界环境收稿日期 : 基金项目 : 贵州省科技厅联合基金项目 ( 黔科合 LH 字 [2014]7241 号, 黔科合 LH 字 [2015]7752 号 ); 贵州省科技厅基础研究项目 ( 黔科合基础 [2017]1165 号 ); 凯里学院博士专项课题 ( 凯院合 BS2019 号 ) 作者简介 : 张文泉, 副教授, 博士 ; zwq840209@yeah.net 引文格式 : 张文泉, 邓洁, 罗国涛, 等. 青钱柳组织培养研究 [J]. 中南林业科技大学学报,2018, 8(): 1-19.

2 张文泉, 等 : 青钱柳组织培养研究 14 第期条件限制等优点, 国内外虽然已有对青钱柳组织培养的研究, 但外植体多采用种胚, 外植体来源有限, 操作难度较大, 而且通过胚培养所建立的快繁体系难以保持母树的优良性状, 或者由于愈伤分化率生根率低等原因尚未建立青钱柳的完整组培体系 [9-10] 等笔者利用青钱柳幼嫩叶片为外植体, 探讨了基本培养基和生长调节物质对青钱柳愈伤组织及不定芽发生的影响, 以期为青钱柳的工厂化育苗提供技术支持, 从而解决青钱柳开发过程中资源匮乏问题 1 材料与方法 1.1 材料来源与处理试验材料为贵州省雷公山自然保护区内自然状况下生长的青钱柳当年生嫩叶 ( 颜色为淡红色到嫩绿色 ) 为外植体, 首先用洗涤液擦拭表面后, 流水冲洗 6 h, 于超净工作台上,75% 酒精消毒 0 s, 无菌水洗次 ; 0.1% 氯化汞消毒 10 min, 无菌水冲洗 ~ 5 次, 无菌滤纸吸干, 将叶片分割成约 cm 2 的小方块, 用手术刀在背面划 4 ~ 5 条划痕, 接种于已预备的愈伤诱导培养基中, 每瓶接种个外植体, 每处理次重复以嫩叶为外植体诱导所获得的愈伤组织为材料, 接种于分化培养基上, 进行愈伤组织不定芽分化试验以诱导获得的不定芽为材料, 接种于生根培养基上, 进行根系诱导 1.2 培养基及培养条件诱导愈伤组织的培养基 : 以 WPM,MS,B5 为基本培养基, 附加不同浓度 2,4-D( mg/l),6-ba( mg/l) 激素组合 ; 愈伤组织分化培养基 : 以 WPM 基本培养基, 附加不同浓度激素及外源物, 进行正交试验, 分析不同条件对青钱柳叶片诱导愈伤组织分化的影响, 各因素水平见表 1, 以不添加任何激素及外源物质的 WPM 培养基为 CK; 生根培养基 :1/2MS 为基本培养基, 附加 IBA( mg/l), 以上所有培养基均附加 % 蔗糖,6.0 g/l 琼脂, ph 值调至 5.8 ~ 6.0, 培养条件 : 愈伤组织诱导时采用暗培养, 愈伤组织分化及生根诱导采用光照培养, 光照强度为 ~ lx, 光照时长为 12 h/d, 全程培养温度 2 ~ 26 培养过程中, 定期观察生长情况, 接种 25 d 后, 统计不同培养基组合的愈伤组织诱导率愈伤组表 1 青钱柳叶片愈伤组织分化试验各因素水平 Table 1 Levels of different factors in leaf segments tissue culture test of Cyclocarya paliurus 水平 \ 因素 A(6-BA) 织接种于分化培养基后, 定期观察, 并统计各处理的愈伤组织分化率当愈伤组织分化的不定芽生长至 1.5 cm 接种于生根培养基后, 每一处理接种 20 个不定芽, 重复次, 定期观察根系诱导情况, 统计不定根诱导率及生根数, 测量根长其中 : 愈伤组织诱导率 = 形成愈伤组织的外植体数 / 接种外植体数 100%; 愈伤组织分化率 = 产生不定芽的愈伤组织数 / 接种的愈伤组织数 100%; 不定根诱导率 = 产生不定根的芽数 / 接种芽总数 100 % 本试验所得数据采用 Excel 2010 及 SPSS 19.0 进行分析处理 2 结果与分析 B( 2,4-D) C( 椰乳 ) /% 2.1 不同处理对青钱柳愈伤组织诱导的影响 D( ZT) 采用 WPM MS B5 种基本培养基, 附加不同浓度的外源激素 (2,4-D,6-BA) 组合, 以青钱柳叶片为外植体, 研究不同培养基及激素组合对青钱柳愈伤组织诱导的影响培养过程中观察 :8 d 时, 叶片切口及划痕处膨大,14 d 时于膨大处开始产生愈伤组织, 但不同处理条件下诱导得到的愈伤组织具有显著差异笔者将其分为 2 种类型 :I 型 ( 见图 1): 乳白色, 如小米粒状, 质地光滑疏松, 体积较大 ;II 型 ( 见图 2): 淡黄色如水渍状, 质地粗糙致密, 体积较小 ; 统计愈伤组织诱导率并分析后 ( 见表 2) 得出 : 相同培养基条件下, 不同外源激素组合条件下青钱柳叶片愈伤组织诱导率均存在极显著差异 (P < 0.05), 相同激素组合条件下, WPM 培养基上青钱柳叶片的愈伤组织诱导率最高, 愈伤组织诱导率为 58.% ~ 97.6%, 愈伤组织 90% 左右为 I 型,MS 培养基上愈伤组织诱导率为 54.2% ~ 87.5%, 愈伤组织 50% 左右为 I 型, B5 培养基上愈伤组织诱导率为 7.5% ~ 66.7%, 愈伤组织仅有 10% 左右为 I 型, 由此可知青钱柳叶片诱导愈伤组织最佳的基本培养基为 WPM 培养基

第 8 卷中南林业科技大学学报 15 导率为 97.6% 2.2 不同处理对青钱柳愈伤组织分化的影响将乳白色如小米粒状质地光滑疏松的愈伤组织置于超净工作台无菌培养皿上去除已老化的部分取中部质地疏松的愈伤组织接种于分化培养基上光照培养 14 16 d 空白对照图 1 青钱柳愈伤组织类型 I Fig.

0 软件采进行方差分析及多重比较比较各因素对愈伤组织诱导率的效应见表 4 图 2 青钱柳愈伤组织类型 II Fig.2 Callus types II of C.

8 d 50.0 e 2 0.5 2.0 79.1 d 75.0 c 54.2 d WPM MS B5 0.5.0 66.7 g 62.5 f 41.6 g 4 8. c 79.1 b 62.5 b 5 2.0 97.6 a 87.5 a 66.7 a 6.0 87.5 b 75.0 c 58. c 7 1.5 70.8 f 66.7 e 41.6 g 8 1.

0 进行方差分析及多重比较表明相同培养基条件下两类激素 2,4-D 6-BA 的浓度对青钱柳叶片愈伤组织诱导率均呈极显著差异相同质量浓度的 6-BA 水平下愈伤组织诱导率随 2,4-D 质量浓度的递增而呈抛物线状变化 2,4D 为 2.0 mg/l 时愈伤组织的诱导最高当 2,4-D 增加至.

3 第 8 卷中南林业科技大学学报 15 导率为 97.6% 2.2 不同处理对青钱柳愈伤组织分化的影响将乳白色如小米粒状质地光滑疏松的愈伤组织置于超净工作台无菌培养皿上去除已老化的部分取中部质地疏松的愈伤组织接种于分化培养基上光照培养 d 空白对照图 1 青钱柳愈伤组织类型 I Fig.1 Callus types I of C.paliurus 中的愈伤组织逐渐褐化失去生活力其他组合的愈伤组织表面的光泽度明显增加 d 愈伤组织表面逐渐出现球形突起见图随着培养时间的延长愈伤组织表面出现芽点并开始萌发 5 40 d 形成不定芽见图 4 45 d 后统计愈伤组织分化率得表所得数据采用 SPSS19.0 软件采进行方差分析及多重比较比较各因素对愈伤组织诱导率的效应见表 4 图 2 青钱柳愈伤组织类型 II Fig.2 Callus types II of C.paliurus 表 2 不同处理对青钱柳叶片愈伤组织诱导结果 Table 2 Result of different treatments on lamina callus induction of Cyclocarya paliurus 愈伤组织诱导率 /% 实验号 6-BA /(mg L-1) 2,4-D /(mg L-1) e 70.8 d 50.0 e d 75.0 c 54.2 d WPM MS B g 62.5 f 41.6 g 4 8. c 79.1 b 62.5 b a 87.5 a 66.7 a b 75.0 c 58. c f 66.7 e 41.6 g e 70.8 d 45.8 f h 54.2 g 7.5 h 图分化的青钱柳愈伤组织 Fig. Differentiated callus of C.paliurus 小写字母分别表示在0.05 水平的差异显著性下同采用 SPSS19.0 进行方差分析及多重比较表明相同培养基条件下两类激素 2,4-D 6-BA 的浓度对青钱柳叶片愈伤组织诱导率均呈极显著差异相同质量浓度的 6-BA 水平下愈伤组织诱导率随 2,4-D 质量浓度的递增而呈抛物线状变化 2,4D 为 2.0 mg/l 时愈伤组织的诱导最高当 2,4-D 增加至.0 mg/l 时愈伤组织的诱导反而下降相同质量浓度的 2,4-D 水平下愈伤组织诱导率与 6-BA 质量浓度的变化关系与 2,4-D 一致均表现为低浓度条件下的激素促进愈伤组织的诱导高浓度的激素抑制愈伤组织的诱导综上所述青钱柳叶片愈伤组织诱导的最佳培养基组合为 WPM+2.0 mg/l 2,4-D+ mg/l 6-BA 愈伤组织诱图 4 分化出不定芽的青钱柳愈伤组织 Fig.4 Adventitious buds differentiated from callus of C.paliurus 采用单变量多因素方差分析可知 6-BA ZT 椰乳个因素的伴随概率 P 分别为均小于 0.05 而 2,4-D 的 P 为 0.05 由此可知 6-BA ZT 椰乳因素对青钱

4 张文泉, 等 : 青钱柳组织培养研究 16 第期表不同处理组合对青钱柳叶片愈伤组织分化率的影响 Table Effects of different treatments on callus differentiation rate of Cyclocarya paliurus 实验号 A(6-BA) B( 2,4-D) C( 椰乳 ) D( ZT) 分化率 /% 重复 1 重复 2 重复平均柳叶片愈伤组织的分化率存在显著影响,2,4-D 对青钱柳叶片愈伤组织的分化率无显著影响其中 ZT 的影响最大, 其次是 6-BA, 影响最小的是椰乳表 4 因素间效应检验 Table 4 Tests of between-subjects effects 变差来源 III 型平方和 d f 均方 F Sig. A(6-BA) B(2,4-D) C( 椰乳 ) D(ZT) 校正的总计植物生长调节剂对青钱柳叶片愈伤组织分化的影响在青钱柳叶片愈伤组织分化试验中,6-BA 这一因素的设置水平, 水平 1( mg/l) 愈伤分化率的均值为 54.11%, 水平 2(2.0 mg/l) 愈伤分化率的均值为 59.78%, 水平 (.0 mg/l) 分化率的均值为 55%, 基于这些均值采用 LSD 进行成对比较, 得表 5 表 5 6-BA 各水平成对比较 Table 5 Pairwise comparisons of 6-BA concentrations (I) 6-BA (J) 6-BA 均值差值 (I-J) 标准误差 Sig * * * * 由表 5 可得出,6-BA 水平 1 与水平 2, 之间的愈伤组织分化率在 p 0.05 水平上存在显著性差异, 而水平 2 与水平差异不显著, 所以低浓度条件下, 提高激素浓度, 可明显提高青钱柳叶片愈伤组织的分化率, 而高浓度的激素则抑制愈伤组织的分化在青钱柳叶片愈伤组织分化试验中,ZT 这一因素的设置水平, 水平 1( mg/l) 愈伤分化率的均值为 5.44%, 水平 2(1.5 mg/l) 愈伤分化率的均值为 54.89%, 水平 (2.0 mg/l) 愈伤分化率的均值为 60.55%, 基于这些均值采用 LSD 进行成对比较, 得表 6 表 6 ZT 各水平成对比较 Table 6 Pairwise comparisons of ZT concentrations (I) ZT (J) ZT 均值差值 (I-J) 标准误差 Sig * * * * 由表 6 可得出,ZT 水平与水平 1,2 之间的愈伤组织分化率在 0.05 水平上存在显著性差异, 而水平 2 与水平 1, 差异不显著, 由此可知, 青钱柳愈伤组织分化试验中, 提高 ZT 的浓度能促进青钱柳叶片愈伤组织的分化生长素 2,4-D 在各因素中对青钱柳叶片愈伤组织分化率的影响不显著, 则不对生长素 2,4-D 的各水平做成对比较, 2,4-D 各水平的愈伤组织分化率均值为 : 水平 1(0.5 mg/l) 愈伤组织诱导率为 59.67%; 水平 2( mg/l) 为 54.67%; 水平 (1.5 mg/l) 为 54.55%, 体现出低浓度的激素促进愈伤分化的规律, 由此可知 : 青钱柳叶片愈伤组织分化最佳的激素组合为 mg/l 6-BA+ 2.0 mg/l ZT+ 0.5 mg/l 2,4-D 外源物质对青钱柳叶片愈伤组织分化的影响诸多研究表明 : 在培养基中加入外源物质如 :

5 第 8 卷中南林业科技大学学报 17 椰乳, 香蕉汁, 水解蛋白等天然物质能促进愈伤组织的分化在青钱柳叶片愈伤组织分化试验中, 椰乳这一因素的设置水平, 水平 1(10%) 愈伤分化率的均值为 59.67%, 水平 2(15%) 愈伤分化率的均值为 55.22%, 水平 (20%) 分化率的均值为 54.11%, 基于这些均值采用 LSD 进行成对比较, 得表 7 表 7 椰乳各水平成对比较 Table 7 Pairwise comparisons of coconut milk concentrations (I) 椰乳 (J) 椰乳均值差值 (I-J) 标准误差 Sig * * * * 由表 7 可得出, 椰乳水平 1 与水平 2, 之间的愈伤组织分化率在 0.05 水平上存在显著性差异, 而水平 2 与水平差异不显著, 由此可知, 青钱柳愈伤组织分化试验中, 椰乳浓度的增加对青钱柳叶片愈伤组织的分化率不存在促进作用, 因此采用较低浓度的椰乳 2. 不同激素浓度对青钱柳不定芽生根诱导的影响选取生长情况一致的不定芽, 在超净工作台截取不定芽 (1.5 cm) 接种于附加不同浓度 IBA 的 1/2MS 培养基上, 诱导根系,25 d 后观察, 在不定芽的基部产生白色的不定根, 随着培养时间的延长, 根系颜色加深, 逐步转化为深褐色 ( 见图 5),50d 后统计生根率及根系生长情况得表 8, 由表 8 分析可知 : 低浓度条件下 IBA 能促进青钱柳根系的诱导, 高浓度的 IBA 反而抑制根系的诱导, 当 IBA 为 1.5 mg/l, 青钱柳不定芽根系诱导率为图 5 根系诱导 Fig.5 Roots induced 27%, 平均根条数为 4.12, 平均根长为 1.81 cm, 生根效果优于其他激素浓度, 试验结果表明 : 青钱柳不定芽生根诱导最适的培养基组合为 1/2MS+ 1.5 mg/l IBA 表 8 不同 IBA 浓度对不定根诱导的影响 Table 8 Adventitious root inductions in different IBA 实验号 IBA 浓度生根率 /% 平均根数 / 条平均根长 /cm 生长状况 c 根系生长一般 2 22 b.50 9 根系长势较好 a 根系长势好, 有侧根 cd 根系生长一般结论与讨论不少学者对青钱柳器官发生的直接发生方式 [11-1] 进行了研究, 如 : 张志敏吴群英胡冬南等均采用青钱柳茎段对其不定芽的诱导进行了研究, 发现外植体的取材时间, 位置均影响显著, 最适时间为春季取材,5 月份是最佳的取样时期, 顶 [14] 芽下 1 2 节的幼嫩茎段分化效果较好 ; 尚旭岚等对青钱柳离体胚进行快速繁殖研究, 结果表明 : 采用离体胚为外植体进行组织培养时, 污染率低成苗数高, 为获得青钱柳无菌小植株的有效途径, 但青钱柳种子空壳率较高, 外有坚硬的种壳, 外植体来源缺乏而关于从幼胚叶片或茎段为外植体采用间接发生方式对青钱柳组培进行研究, 大部分仅获得愈伤组织 [15-17] 本试验采用青钱柳的幼嫩叶片为外植体诱导得到愈伤组织, 愈伤组织再分化出不定芽, 不定芽根系诱导获得完整植株的方式建立青钱柳的植株再生体系实验结果表明, 叶片在切口处先脱分化诱导得到愈伤组织形成愈伤组织, 愈伤组织再分化形成不定芽, 在此过程中, 植物生长调节剂起到至关重要的作用, 最常用的植物生长调节剂为 2,4-D 与 6-BA 组合, 常用于叶片茎段子叶胚等不同类型外植体愈伤组织的诱导及生长, 但浓度过高则会抑制愈伤组织的生长, 易导致玻璃化愈伤组织诱导过程中, 添加较高浓度的生长素和较低浓度的细胞分裂素可以提高愈伤组织的诱导率及愈伤组织的质量, 大量实验研究结果表明 : 浓度比为 2:1 ~ 10:1 之间则能诱导得到 [18] 愈伤组织, 如莫竹承等对膝柄木叶片组织培养时采用 mg/l 2,4-D+0.5 mg/l 6-BA 组合, 愈伤 [19] 诱导率高为 70%; 张彦妮等对普瑞头百合的组培过程中采用 2.5 mg/l 2,4-D+0.5 mg/l 6-BA

6 张文泉, 等 : 青钱柳组织培养研究 18 第期愈伤诱导率为 85%; 丁植磊 [20] 等对油茶 12 个物种花药愈伤组织诱导过程中采用 2,4-D 与 6-BA 组合, 愈伤诱导率均达到 100%, 本试验中对青钱柳叶片为外植体进行愈伤组织诱导 2.0 mg/l 2,4-D + mg/l 6-BA 诱导率最高的结果与以上研究结果一致愈伤组织的分化过程中, 则需要较高浓度的细胞分裂素和较低浓度的生长素, 这与其他木本植物离体培养在植物生长调节物质使用的原则上是相同的, 不仅取决于生长调节物质的种类及其绝对量, 还取决于它们之间的相对比例, 但离体培养成功是否成功, 尤其是再分化阶段, 外源物质的存在也起到了一定的作用, 诸多研究报道 : 在培养基中加入外源物质如 : 椰乳, 香蕉汁, 水解蛋白等等, 能促进愈伤组织的分化 [21,22], 本实验中添加椰乳能促进青钱柳愈伤组织的分化, 这与前期研究也是相符的但青钱柳的离体培养也有不同之处, 尤其是愈伤组织分化过程中, 由本实验结果可知 :6-BA ZT 两种分裂素均能对青钱柳叶片愈伤组织的分化起到促进作用, 影响显著, ZT 较 6-BA 作用更明显, 而 2,4-D 对青钱柳叶片愈伤组织的分化率无显著影响但同为胡桃科核桃属的诸多核桃品种在离体胚培养时, 添 6-BA 反而抑制芽苗的增殖 [2-25] 在青钱柳愈伤组织诱导过程中, 采用 WPM MS B5 种不同的培养基进行筛选,WPM MS B5 种培养基均能够诱导得到愈伤组织, 但培养基的种类对愈伤组织的诱导率及愈伤组织的质量存在显著影响, 在植物组织培养中,MS 为应用最广泛的基本培养基, 但对诸多针叶树种的组织培养中不适应 [26], 究其原因可能是由于 MS 培养基中的盐含量过高及 NH4+ - 和 NO 含量过高所致本试验得出 : 以青钱柳幼嫩叶片为外植体诱导愈伤时, 最适的培养基组合为 WPM+2.0 mg/l 2,4-D+ mg/l 6-BA, 愈伤组织分化 WPM+ mg/l 6-BA+2.0 mg/l ZT+0.5 mg/l 2,4-D +10% 椰乳的组合处理效果最优青钱柳愈伤组织分化出不定芽与愈伤组织的状态有密切联系, 只有适宜的的愈伤组织才能诱导出不定芽, 在本试验中, 只有小米粒状, 质地光滑疏松的愈伤组织能分化出不定芽, 而水渍状的愈伤组织褐化严重, 不能进一步分化在生根诱导阶段, 青钱柳根系诱导采用 1/2MS 培养基, 降低 MS 培养基中大量元素的量, 低盐条件下更有利于根系的生长综上所述, 青钱柳愈伤组织分化的频率还不是很高, 分化率最高只能达到 60% 左右, 不定芽发生和发育不能同步进行诱导形成的不定芽, 成苗还存在一定的困难, 不定芽虽然诱导得到不定根, 形成完整植株, 但生根率仅为 20% 左右, 而且侧根较少, 难以形成完整的根系, 如果大量应用于生产中会受到限制这也是本试验的局限所在在青钱柳的愈伤组织分化实验中是否还能有其他的激素组合, 或是添加其他外源物质能更进一步的促进青钱柳愈伤组织的分化? 有研究表明生根诱导培养基中加入活性炭等物质形成黑暗条件有利于根系形成, 在青钱柳根系诱导过程中采用此方法更有利于生根? 后续的实验及研究过程还需对愈伤组织分化不定芽生根机理和调控的方法进行探索, 打破愈伤组织分化难组培苗难以生根的瓶颈, 建立更加有效的青钱柳组培快繁体系参考文献 : [1] 张文泉, 邓洁. 青钱柳叶片诱导愈伤组织研究 [J]. 内蒙古农业大学学报,2016,7(2):28-. [2] Xie M Y, Lei L, Nie S P, et al. Determination of speciation of elements related to blood sugar in bioactive extracts from Cyclocarya paliurus leaves by FIA-ICP-MS [J]. European Food Research & Technology, 2006, 22(2): [] Xie J H, Xie M Y, Nie S P, et al. Isolation, chemical composition and antioxidant activities of a water-soluble polysaccharide from Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja [J]. Food Chemistry, 2010, 119(4): [4] Zhang J, Qiang S, Lu J C, et al. Phenolic compounds from the leaves of Cyclocarya paliurus (Batal.) Ijinskaja and their inhibitory activity against PTP1B [J]. Food Chemistry, 2010, 119(4): [5] 洑香香, 方升佐. 青钱柳次生代谢产物及其生理功能 [J]. 安徽农业科学,2009,7(28): [6] 李海玲, 方升佐. 青钱柳繁殖技术研究进展 [J]. 林业工程学报, 2009,19(6):-5. [7] 杨万霞, 方升佐. 青钱柳种子综合处理过程中内源激素的动态变化 [J]. 南京林业大学学报,2008,2(5): [8] 雷土荣, 方水强, 钟建军, 等. 青钱柳综合利用及播种育苗造林技术 [J]. 安徽农学通报,2010,16(8):94,101. [9] 谢明勇, 谢建华. 青钱柳研究进展 [J]. 食品与生物技术学报, 2008, 27(1): [10] 乔卿梅, 王鹏, 程茂高. 青钱柳的研究现状 [J]. 河南林业科技,2006,26(1):24-25,28. [11] 张志敏, 尚旭岚, 王纪, 等. 消毒方法和培养基对青钱柳茎段腋芽萌发的影响 [J]. 林业科技开发,2010,24(): [12] 吴群英, 徐庆, 李丽亚, 等. 青钱柳不同外植体组织培养及

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福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察

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第 38 卷第 3 期 2018 年 3 月 中南林业科技大学学报 Journal of Central South University of Forestry & Technology Vol. 38 No. 3 Mar Doi: /j.cnki x.2

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