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离昶都
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1 2017 年 5 月 Vol.35 No.5 May 2017 Chinese Journal of Chromatography 502 ~ 508 研究论文 DOI: / SP.J 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱定性研究茶叶籽中的酚类化合物赖国银 1, 王俐娟 2, 卢鹤 2, 曾秋梅 2, 徐敦明 1, 王晓琴 2, 林立毅 1, 张志刚 1 3, 吕美玲 (1. 厦门出入境检验检疫局, 福建厦门 ; 2. 华侨大学化工学院华侨大学油脂及天然产物研究所, 福建厦门 ; 3. 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司, 北京 ) 摘要 : 采用超高效液相色谱 (UHPLC) 四极杆飞行时间质谱 ( Q TOF / MS) 技术定性分析茶叶籽中的酚类化合物茶叶籽样品经乙醇水溶液提取后经反相色谱分离, 通过 Q TOF / MS 进行化合物的鉴定基于山茶属及相关植物化学组成的文献, 建立了一个含有 106 种酚类化合物的数据库对 UHPLC Q TOF / MS 采集得到的一级质谱数据进行数据库检索, 然后对检索到的化合物色谱峰进行二级质谱扫描, 根据得到的碎片离子推断化合物的结构初步推断出茶叶籽提取物中的 24 种酚类化合物, 包括 13 种酚酸类 4 种儿茶素类和 7 种黄酮类化合物, 并通过与标准品比对, 进一步确证了这些化合物结果表明 UHPLC Q TOF / MS 技术可以用于对茶叶籽中酚类化合物进行快速准确可靠的定性分析, 促进新化合物的发现与鉴别关键词 : 超高效液相色谱 ; 四极杆飞行时间质谱 ; 酚类化合物 ; 茶叶籽中图分类号 :O658 文献标识码 :A 文章编号 : (2017) Qualitative analysis of phenolic compounds in Camellia Sinensis seeds by ultra high performance liquid chromatography combined with quadrupole time of flight mass spectrometry LAI Guoyin 1, WANG Lijuan 2, LU He 2, ZENG Qiumei 2, XU Dunming 1, WANG Xiaoqin 2, LIN Liyi 1, ZHANG Zhigang 1, LÜ Meiling 3 (1. Xiamen Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau, Xiamen , China; 2. College of Chemical Engineering, Institute of Oil and Natural Product, Huaqiao University, Xiamen , China; 3. Agilent Technologies (China) Co. Ltd, Beijing , China) Abstract: Phenol compounds from some plants are considered as the natural anti oxidants and have been demonstrated with the beneficial biological activities. In this work, the ultra high performance liquid chromatography ( UHPLC) combined with quadrupole time of flight mass spectrometry ( Q TOF / MS) was applied to qualitatively determine the phenolic compounds in Camellia Sinensis seeds. The seed sample was extracted using ethanol aqueous solution and further subjected to the UHPLC separation with the reversed phase C18 column as the stationary phase and the acidified acetonitrile / water as the binary mobile phases. The eluent from the column was directed to Q TOF / MS for compound identification. Based on a number of reports on the chemical components in Camellia Sinensis and the related plants, a customized compound database was initially created including the name and formula of the previously reported 106 phenol compounds. The acquired MS scan data were searched against the custom ized phenol compound database. The retrieved compounds were then subjected to MS / MS scan, and the obtained fragment ions were applied to further determine the possible structures. 收稿日期 : 通讯联系人.Tel:(0592) ,E mail:xudm@ xmciq.gov.cn. 基金项目 : 福建省自然科学基金项目 (2016J05045); 国家质检总局科技计划项目 (2016IK186). Foundation item: Natural Science Foundation of Fujian Province ( No. 2016J05045); Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine ( AQSIQ) Project ( No. 2016IK186).

2 第 5 期赖国银, 等 : 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱定性研究茶叶籽中的酚类化合物 503 A total of 24 phenolic compounds were tentatively identified, including 13 phenolic acids, 4 catechins, and 7 flavonoids, which were characteristic in the ethanol extract according to the available references and the relevant structural information of the molecular and fragment ions. These compounds were further confirmed by matching against the standard compounds in retention times and fragment ions. The results demonstrated that the UHPLC Q TOF / MS with the high mass accuracy and the high resolution is a reliable technology for rapid qualitative identification of the phenolic compounds in Camellia Sinensis seeds, promoting the discovery and identification of the new compounds. Key words: ultra high performance liquid chromatography ( UHPLC); quadrupole time of flight mass spectrometry ( Q TOF MS); phenolic compounds; Camellia Sinensis seed 茶树 (Camellia Sinensis O. Ktze) 为山茶科山茶属植物, 起源于我国云贵高原 [1] 茶树叶子果实等植物材料富含茶多酚 [2] 酚类化合物是植物中一种重要的次生代谢产物, 其分子结构中含有若干个酚性羟基基团, 一般分为酚酸类黄酮类单宁类黄烷醇类和苷类等 [3] 儿茶素类是山茶属植物的特征酚物质, 属于黄烷醇类化合物, 一般存在于该属植物的花茎叶和果实中 [4,5] 研究表明, 植物酚类化合物是一种天然抗氧化剂, 能清除人体内的一氧化氮 ( NO) 和活性氧 ( ROS) 自由基 [6], 抑制氧化酶活性和激活抗氧化酶体系 [7] 另有报道表明, 酚类化合物能有效抑制细菌和真菌的生长 [8,9], 同时可以抑制癌细胞增殖, 降低致癌诱变剂的活性 [10] 目前, 国内外对茶叶籽酚类化合物组成的研究报道不多, 主要集中于对酚类物质提取工艺的优化和总酚含量的测定 [11,12], 其中应用最为广泛的分析技术为紫外分光光度法 [13], 而对酚类化合物组成的定性则采用超高效液相色谱 (UHPLC) 技术 [14] 显然, 目前的分析方法依赖已知的标准品, 具有一定的局限性 ; 同时, 液相色谱技术灵敏度不高, 难以用于微量物质的鉴定超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱 (UHPLC Q TOF / MS) 是目前酚类化合物研究中应用较好的定性技术, 可以提高分析的特异性和准确度该技术能够在无标准品的情况下对粗提液中微量物质进行初步组成和结构分析, 灵敏度和选择性高, 已广泛应用于橄榄油中多酚物质的测定, 大大推动了橄榄油中微量活性物质分析的进展 [15-17] 为了能够深入了解茶叶籽中酚类化合物的组成, 本实验采用 UHPLC Q TOF / MS 技术, 对茶叶籽乙醇提取物进行研究分析通过自建酚类化合物数据库结合 Mass Hunter Q TOF / MS 数据采集与定性软件对茶叶籽提取物中的酚类物质进行初步检索检索到的化合物进一步进行二级质谱分析, 根据碎片离子信息判断化合物的可能结构, 并利用标准品比对的方式确证化合物, 为全面快速分析茶叶籽成分及其深度研发应用提供参考 1 实验部分 1.1 材料与试剂茶叶籽采自福建省泉州市安溪茶园乙腈甲醇甲酸 ( 均为色谱纯, 美国 Sigma Aldrich 公司 ); 正己烷 ( 色谱纯, 西陇化工股份有限公司 ); 实验用水为自制超纯水 ; 苯甲酸 4 羟基苯甲酸原儿茶酸一水合没食子酸邻苯二甲酸 4 羟基苯乙酸香草酸肉桂酸对香豆酸咖啡酸阿魏酸芥子酸绿原酸表儿茶素芹菜素山柰酚木犀草素槲皮素杨梅素柚皮素二氢槲皮素 ( 均为分析级标准品, 阿拉丁试剂公司 ); 儿茶素表没食子儿茶素表没食子儿茶素没食子酸酯 ( 均为分析级标准品, 美国 Sigma 公司 ); 0 2 μm 有机滤膜 ( 英国 Whatman 公司 ) 1.2 仪器与设备 Agilent 1290 系列超高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司 ), 配备在线脱气系统四元泵自动进样装置柱温箱 ;Agilent 6540UHD 高分辨飞行时间质谱仪 ( 美国 Agilent 公司 ), 配备鞘流双电喷雾离子源 ( dual Jet Stream ESI), Mass Hunter Data Acquisition 实时采集工作站, Qualitative Analysis 离线分析软件和 Mass Hunter PCDL Manager 个人化合物数据库与谱图库创建软件 ;BS2202S 分析天平 ( 德国 Sartorious 公司 ); QL 861 漩涡混合器 ( 海门其林贝尔仪器制造公司 ); 离心机 ( 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司 ); R215 旋转蒸发仪 ( 瑞士 BUCHI 公司 ), 配备 B491 水浴锅 V700 真空泵 ; DLSB 10 / 20 低温冷却液循环泵 ( 郑州长城科工贸公司 )

3 504 色谱第 35 卷 1.3 实验条件色谱条件色谱柱 : Agilent Eclipse Plus C18 ( 100 mm 2 1 mm, 1 8 μm); 流动相 :A 为 0 1% ( v / v) 甲酸水溶液,B 为 0 1% ( v / v) 甲酸乙腈溶液梯度洗脱 :0 ~ 5 min, 5% B ~ 10% B; 5 ~ 7 min, 10% B ~ 20% B; 7 ~ 9 min, 20% B; 9 ~ 10 min, 20% B ~ 50% B; 10 ~ 12 min: 50% B; 12 ~ 13 min, 50% B ~ 5% B; 13 ~ 15 min, 5% B 流速 0 4 ml / min; 柱温 30 ; 进样量 2 0 μl; 平衡时间 3 min 质谱条件采用鞘流双电喷雾离子源在负离子扫描方式下进行数据采集, 参比离子 m / z 为和干燥气为高纯 N 2, 毛细管电压 V, 雾化气压力 207 kpa, 碎裂电压 140 V, 干燥气温度 190, 干燥气流速 9 L / min, 鞘气温度 350, 鞘气流速 10 L / min, 离子扫描范围 m / z 100 ~ 二级质谱参数中碰撞能量设定为 10 ~ 40 ev 每天采集运行前, 使用调谐液 ( 含 125 μmol / L 三氟乙酸铵 5 μmol / L 嘌呤和 1 25 μmol / L 六 (1 氢,2 氢, 3 氢全氟丙氧基 ) 磷氮混合溶液 ( 溶剂为乙腈水, 95 5, v / v) 进行质量轴校准 1.4 样品前处理准确称取茶叶籽粉 1 00 g 于 100 ml 锥形瓶中, 加入 25 ml 提取液 ( 体积分数为 50% 的乙醇水溶液 ) 摇匀, 于 60 下振荡提取 1 h 后在 r / min 转速下离心 10 min, 收集上层澄清液继续向剩余沉淀物中加入 10 ml 提取液清洗, 离心收集上清液重复提取 3 次, 合并上清液, 于 35 下旋蒸浓缩至干后用 50% (v / v) 甲醇水溶液定容至 250 μl, 溶解液经 0 2 μm 有机滤膜过滤, 密封冷藏待分析 2 结果与讨论 2.1 条件优化色谱条件的优化由于茶叶籽提取物化学成分复杂, 因此本实验对色谱柱和流动相体系及洗脱程序进行了详细的考察分别考察了色谱柱 Zorbax RRHD C18 ( 100 mm 3 0 mm, 5 μm) Zorbax SB C18(150 mm 4 6 mm, 5 μm) Zorbax SB C18 ( 100 mm 2 1 mm, 3 5 μm) Extend C18(250 mm 4 6 mm, 5 μm) Zorbax Eclipse Plus C18(100 mm 2 1 mm, 1 8 μm) ( 美国 Agilent 公司 ) 和 Spursil C18 ( 150 mm 2 1 mm, 2 1 μm, 迪马科技有限公司 ) 结果表明色谱柱 Zorbax Eclipse Plus C18(100 mm 2 1 mm, 1 8 μm) 的分离效果最佳, 能较全面地反映茶叶籽提取物的化学成分, 因此采用此色谱柱进行之后的分析流动相体系的选择直接影响各组分分离效果首先考察了甲醇水和乙腈水流动相体系, 结果表明采用乙腈水体系为流动相时峰形更佳, 响应值更高同时考察了流动相中添加剂组成的影响, 包括不使用添加剂加入 5 mmol / L 醋酸铵和 0 1% ( v / v) 甲酸结果显示流动相中加入醋酸铵和不使用添加剂时, 峰形易产生拖尾现象, 物质间分离度较低 ; 而流动相中加入 0 1% ( v / v) 甲酸时, 能有效抑 [16] 制拖尾, 改善峰形, 和文献中使用酸性流动相时一致因此, 最终选择乙腈 0 1% (v / v) 甲酸水溶液作为流动相此外, 分别考察了柱温流速和梯度洗脱程序对组分分离的影响最终, 在节所述条件下, 所有组分得到较好的分离, 总离子流图见图质谱条件的优化分别考察了正负离子模式下的质谱全扫描检测, 结果显示大多酚类化合物在负离子模式下响应较好, 峰容量更大, 而在正离子模式下响应较弱因此本实验最终采用负离子模式进行检测此外, 对质谱参数中的毛细管电压干燥气温度和流速雾化气压力鞘气温度和流速碎裂电压等进行优化, 最终确定节的检测条件 2.2 茶叶籽提取物化学成分的鉴别分析应用 UHPLC Q TOF / MS 在上述优化的色谱和质谱条件下对茶叶籽提取物进行分析, 得到负离子模式下测定该提取物的总离子流色谱图 ( 见图 1a) 为了从中提取有效的与酚类相关的化合物信息, 首先通过查阅专业数据库 ( ChemSpider Pubmed Scifinder 中科院化学专业数据库 ) 和参考文 [18-28] 献收集了 106 种山茶属及相关植物中酚类化合物的名称及分子式, 并计算其精确相对分子质量, 利用 MassHunter PCDL ( Personal Compound Database and Library) Manager 软件建立含有这些酚类化合物的数据库通过 MassHunter 定性软件结合自建的酚类化合物数据库检索 UHPLC Q TOF / MS 采集到的原始数据, 得到提取液中含有的与酚类化合物库中精确相对分子质量一致的色谱峰这些色谱峰的提取离子色谱图如图 1b 所示然后, 利用 Q TOF / MS 质谱分析器的四极杆选择这些色谱峰对应的分子离子, 在碰撞池中对其进行碰撞诱导解离, 裂解所得的碎片离子通过 TOF 扫描得

4 第 5 期赖国银, 等 : 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱定性研究茶叶籽中的酚类化合物 505 图 1 Fig. 1 通过 UHPLC Q TOF / MS 得到的茶叶籽提取液的 (a) 总离子流色谱图及 (b) 可能的酚类化合物的重叠提取离子色谱图 (a) Total ion chromatogram (TIC) and (b) overlaid extracted ion chromatograms (EIC) of the tentatively identified phenolic compounds from the tea seed extract using ultra high performance liquid chromatography combined with quadrupole time of flight mass spectrometry ( UHPLC Q TOF / MS) Peak Nos. see Table 1. 到二级质谱图然后根据离子的裂解情况并结合文献进一步比对, 初步推断出茶叶籽乙醇提取物中的 24 种酚类化合物, 其中包括 13 种酚酸化合物 4 种儿茶素类化合物和 7 种黄酮类化合物 ( 见表 1), 其结构式见图酚酸类化合物 No. t R / min Standard t R / min Table 1 Formula 表 1 茶叶籽酚类化合物的 UHPLC Q TOF / MS 鉴定结果 Identification of the phenolic compounds in tea seeds using UHPLC Q TOF / MS Experimental Theoretical [M-H] - (m/ z) [M-H] - (m/ z) Error / ppm (10-6 ) 酚酸类化合物极性强, 保留时间较短结合文 [19] 献及专业数据库, 在茶叶籽乙醇提取物中共鉴定出 13 种酚酸类物质以化合物 2 为例, 其精确质量提取离子色谱图见图 3a, 对应的二级质谱图见图 3b 母离子 [ M -H] - 的 m / z 为 , 对应的 [19] 最佳分子式为 C 7 H 6 O 4, 经参考文献及数据库比 Product ions C 7 H 6 O gallic acid [21] Compound C 7 H 6 O ; protocatechuate [21] C 7 H 6 O p hydroxybenzoic acid [21] C 15 H 14 O ; ; epigallocatechin [20,23] C 8 H 8 O ; hydroxyphenylacetic acid C 8 H 6 O ; phthalic acid C 16 H 18 O chlorogenic acid C 15 H 14 O ; catechin [21,20] C 8 H 8 O ; vanillic acid [21] C 9 H 8 O caffeic acid [21] C 15 H 14 O ; ; epicatechin [21] C 22 H 18 O ; epigallocatechin gallate [21] C 9 H 8 O ; p coumaric acid [21] C 10 H 10 O ; ferulic acid [21] C 11 H 12 O ; sinapic acid [21] C 15 H 12 O ; taxifolin [21] C 7 H 6 O benzoic acid C 15 H 10 O ; myricetin [21] C 15 H 10 O ; kaempferol [21] C 15 H 10 O ; ; quercetin [21] C 9 H 8 O cinnamic acid [21] C 15 H 10 O ; ; apigenin [21] C 15 H 12 O ; ; naringenin [21] C 15 H 10 O ; luteolin [21]

5 506 色谱第 35 卷 Fig. 2 图 2 UHPLC Q TOF / MS 鉴定到茶叶籽乙醇提取物中的 24 种化合物的结构 Structures of the 24 compounds in tea seed extract identified by UHPLC Q TOF / MS Compound Nos. see Table 1. 图 3 化合物 2 的 (a) 提取离子色谱图 (b) 二级质谱图及 (c) 推断的裂解方式 Fig. 3 (a) EIC, (b) MS / MS spectrum and ( c ) the deducted fragmentation pathways of compound 2 对, 发现其与原儿茶酸分子离子峰一致, 故初步推测其为原儿茶酸可能的裂解方式如图 3c 所示, 母离子 [M-H] - 丢失羧基上的一个 -CO 2 基团, 产生 m / z 的碎片离子, 进一步脱水得到 m / z 的碎片离子该特征离子与实际采集到的 [19] 二级碎片离子图一致, 结合文献报道, 推断该化合物为原儿茶酸儿茶素类化合物儿茶素类化合物容易发生丢失 C 2 H 2 O 碎片 C 环的 1,4 键断裂和丢失 B 环的裂解方式 [20,29,30] 化合物 4 的精确相对分子质量提取离子色谱图及二级质谱图如图 4 所示, 其 [ M -H] - 离子峰 m / z 为 , 对应的最佳分子式为 C 15 H 14 O 7 经与参 [20] 考文献比对, 发现其与表没食子儿茶素一致, 故初步推测其为表没食子儿茶素 C 环的 1,4 键断裂, 可产生 m / z 的碎片离子 ; 而丢掉 B 环和部分 A 环, 可分别生成 m / z 为和的碎片离子 ; 可能的碎裂方式如图 4c 所示除了碎片离子 m / z 由于丰度偏低而实测值偏大, 相对偏差为 (9 13 ppm) 之外, 母离子和其他两个主要碎片离子的实测 m / z 值与理论值的相对偏差均在 3 ppm 以内, 而且子离子 [20] 碎片信息与文献报道一致据此推断, 该化合物

第 5 期赖国银, 等 : 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱定性研究茶叶籽中的酚类化合物 507 在化合物 18 的碎片离子中发现 m / z 151 003 0 和 178 997 8 的碎片离子, 因此鉴定该化合物为杨梅素 2.

6 第 5 期赖国银, 等 : 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱定性研究茶叶籽中的酚类化合物 507 在化合物 18 的碎片离子中发现 m / z 和的碎片离子, 因此鉴定该化合物为杨梅素 2.3 标准品确证为进一步确证, 将已初步鉴定出的化合物与标准品进行保留时间和二级质谱图比对在相同的色谱质谱条件下, 得到混合标准品的总离子流色谱图, 经精确质量数提取, 得到各标准化合物的保留时间和精确质量, 并采集各标准化合物的二级质谱图将初步鉴定的茶叶籽酚类化合物与标准品的保留时间进行比较 ( 见表 1), 所有 24 个化合物与对应标准品的保留时间差异均在 ±0 1 min 以内同时, 样品中实际采集到的主要二级碎片离子与标准品中分子离子峰裂解的碎片离子偏差均在 5 ppm 以下以原儿茶素 ( 见图 5a) 和表没食子儿茶素 ( 见图 5b) 为例, 茶叶籽实际样品二级质谱图中主要特征离子的 m / z 与标准品的主要特征离子吻合得很好图 4 化合物 4 的 (a) 提取离子色谱图 (b) 二级质谱图及 (c) 推断的裂解方式 Fig. 4 (a) EIC, (b) MS / MS spectrum and ( c ) the deducted fragmentation pathways of compound 4 应该为表没食子儿茶素黄酮类化合物黄酮类化合物的母体骨架特殊 ; 在负离子模式下, 不同的黄酮类化合物均有典型的裂解规律 [26,31], 如 C 环易发生逆 Diels Alder (RDA) 裂解依据其典型裂解方式, 共初步鉴定出 7 种黄酮类成分 : 柚皮素杨梅素槲皮素山柰酚木犀草素二氢槲皮素芹菜素如化合物 18 碎片离子峰的 m / z [21] 为 , 经与参考文献及数据库比对发现与杨梅素分子离子峰一致, 初步推测其为杨梅素杨梅素 C 环 RDA 裂解产生 m / z 的碎片离子, 丢失 B 环产生 m / z 的碎片离子图 5 (a) 表没食子儿茶素和 (b) 原儿茶酸在茶叶籽提取物及标准品中的质谱图比对 Fig. 5 Comparison of the MS / MS spectra between the tea seed extract and the standard compounds for ( a) ( -) epigallocatechin and ( b) protocatechuate 3 结论采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱技术在负离子模式下对茶叶籽中的酚类化合物进行分析, 根据各个色谱峰的精确相对分子质量二级碎片

7 508 色谱第 35 卷离子信息, 同时参考相关文献并结合自建的酚类化合物数据库, 共初步鉴定出 24 种主要酚类化合物, 其中包括 13 种酚酸类 4 种儿茶素类和 7 种黄酮类化合物经确证, 这些化合物与相应标准品的保留时间及二级质谱信息匹配良好该方法快速准确, 是一种相对较好的定性测定方法, 可作为茶叶籽中酚类化合物的分析方法, 为茶叶籽的进一步深入分析和开发提供了参考参考文献 : [1] Cao G F, Wu B, Zhong S X. Chinese Oils and Fats, 2008, 33 (8): 17 曹国锋, 邬冰, 钟守贤. 中国油脂, 2008, 33(8): 17 [2] Wang X Q, Liang X Q, Zhao J, et al. J Am Oil Chem Soc, 2014, 91: 629 [3] Song L J, Di Y. Progress in Chemistry, 2000, 12(2): 161 宋立江, 狄莹. 化学进展, 2000, 12(2): 161 [4] Kang H N, Chen B, Han C, et al. Journal of Instrumental Analysis, 2007, 26(2): 211 康海宁, 陈波, 韩超, 等. 分析测试学报, 2007, 26(2): 211 [5] Wei K, Wang L Y, Zhou J, et al. Food Chem, 2012, 130 (3): 720 [6] Guo S, Bezard E, Zhao B. Free Radic Biol Med, 2006, 39 (10): 24 [7] Wang J Z, Wang G, Xu G F, et al. Food and Drug, 2006, 8 (3A): 23 王景梓, 王岗, 徐贵发, 等. 食品与药品, 2006, 8(3A): 23 [8] Tapiero H, Tew K D, Ba G N, et al. Biomed Pharmacother, 2002, 56(4): 200 [9] Tang Y F, Zhang M L, Feng B, et al. Journal of Zhejiang A & F University, 2005, 22(5): 553 唐裕芳, 张妙玲, 冯波, 等. 浙江农林大学学报, 2005, 22 (5): 553 [10] Jacob J K, Hakimuddin F, Paliyath G, et al. Food Res Int, 2008, 41(4): 419 [11] Wang X Q, Shen J F, Wang M, et al. Food Science and Technology, 2007, 32(9): 238 王徐卿, 沈建福, 王敏, 等. 食品科技, 2007, 32(9): 238 [12] Zhu X Y, Zhong H Y, Zhou B, et al. Food and Machinery, 2012, 28(1): 166 朱晓阳, 钟海雁, 周波, 等. 食品与机械, 2012, 28(1): 166 [13] Zhu J X, Zhu Y J, Zhang S K, et al. China Tea Processing, 2011(4): 47 朱晋萱, 朱跃进, 张士康, 等. 中国茶叶加工, 2011(4): 47 [14] Fazel M, Sahari M, Barzegar M. Int Food Res J, 2008, 15 (1): 209 [15] Ouni Y, Taamalli A, Gómez Caravaca A M, et al. Food Chem, 2011, 127: 1263 [16] Bajoub A, Hurtado Fernández E, Ajal E A, et al. J Agric Food Chem, 2015, 63(17): 4376 [17] Bajoub A, Carrasco Pancorbo A, Ajal E A, et al. Food Chem, 2015, 166: 292 [18] Niu Y, Wang S F. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(8): 1056 牛研, 王书芳. 中草药, 2014, 45(8): 1056 [19] Vallverdú Queralt A, Estruch R, Lamuela Raventos R M. Food Chem, 2013, 141(4): 3365 [20] Liu G Q, Dong J, Wang H, et al. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2009, 30(5): 287 刘国强, 董静, 王弘, 等. 质谱学报, 2009, 30(5): 287 [21] Gómez Romero M, Zurek G, Schneider B, et al. Food Chem, 2011, 124: 379 [22] Zou L L, Li X X, Shi Q S, et al. Anal Methods, 2014, 6 (12): 4312 [23] Xu W, Fu Z Q, Lin J, et al. China Journal of Chinese Mate ria Medica, 2014, 39(22): 4365 许文, 傅志勤, 林婧, 等. 中国中药杂志, 2014, 39 ( 22): 4365 [24] Zhang X P, Jiang K Z, Lv H Q, et al. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2015, 36(4): 310 张小平, 蒋可志, 吕惠卿, 等. 质谱学报, 2015, 36(4): 310 [25] Shen D H, Lu X, Chang Y W, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2014, 32(1): 40 沈丹红, 路鑫, 常玉玮, 等. 色谱, 2014, 32(1): 40 [26] Jiang Y L, Huang F, Wu F H, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2015, 33(10): 1032 蒋娅兰, 黄芳, 毋福海, 等. 色谱, 2015, 33(10): 1032 [27] Zhang X G, Zheng Y J, Zeng Y T, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2015, 33(6): 583 张协光, 郑彦婕, 曾泳艇, 等. 色谱, 2015, 33(6): 583 [28] Zhang M Y, Xu Y, Song G S, et al. Chinese Journal of Chromatography, 2015, 33(8): 773 张梦雨, 徐洋, 宋冠杉, 等. 色谱, 2015, 33(8): 773 [29] Wang X Q, Yu H J, Zhao Y Q. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2009, 40(5): 745 王夏青, 於洪建, 赵余庆. 中草药, 2009, 40(5): 745 [30] Guo L B, Li Y H, Zhou J, et al. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology, 2012, 12(8): 47 郭琳博, 李宇华, 周婧, 等. 中国食品学报, 2012, 12(8): 47 [31] Xu Y, Dong J, Wang H, et al. Chemical Journal of Chinese Universities, 2009, 30(1): 46 徐英, 董静, 王弘, 等. 高等学校化学学报, 2009, 30(1): 46

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.