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麻乙
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中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2015, 40(7) http://www.csumed.org 715 DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2015.07.003 www.csumed.org/xbwk/fileup/pdf/201507715.

1 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2015, 40(7) DOI: /j.issn 高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松 1 2, 何炜 ( 中南大学湘雅三医院 1. 放射科 ;2. 超声科, 长沙 ) [ 摘要 ] 目的 : 观察高强度聚焦超声 (high-intensity focused ultrasound,hifu) 热效应和非热效应损伤后兔肝 VX2 肿瘤的微观形态学变化方法 : 将 40 只兔肝 VX2 肿瘤模型大白兔随机分为热效应组 (n=20) 和非热效应组 (n=20), 每组于治疗后即刻及 3,7,14 d 分别随机处死 5 只, 分析超微结构凋亡相关蛋白表达及细胞凋亡情况结果 : 电镜显示 HIFU 辐照后各时间点非热效应组的组织细胞破坏程度较热效应组严重消融后两组交界区凋亡相关蛋白即刻及 3 d 血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,vegf) 呈低水平表达,7~14 d 均逐渐升高, 各时间点两组相比差异均无统计学意义 ( 均 P>0.05);caspase-3 治疗后 3 d 表达达到高峰,3 与 7 d 时非热效应组表达明显高于热效应组 ( 均 P<0.05);NF-κ 的表达 3 d 时开始增加,7 d 达高峰,14 d 开始下降, 各时间点两组相比差异无统计学意义 ( 均 P>0.05) TUNEL 检测 HIFU 治疗后交界区凋亡阳性细胞, 发现 3 与 7 d 非热效应组高于热效应组 ( 均 P<0.01), 凋亡指数分别为 (28.60±1.14)%,(21.80±1.92)% 和 (21.00±1.58)%,(14.80±1.48)% 结论:HIFU 热效应及非热效应机制均能诱导交界区凋亡产生, 而后者效果更为强烈 [ 关键词 ] 高强度聚焦超声消融 ; 兔 ; 肝肿瘤 ; 非热效应 ; 凋亡 Non-thermal effect of high-intensity focused ultrasound on ultrastructure and apoptosis in rabbit hepatic VX2 tumors PENG Song 1, HE Wei 2 (1. Department of Radiology; 2. Department of Ultrasonography, Third Xiangya Hospital, Central South University, Changsha , China) STRCT Objective: To observe the micromorphological changes of ultrastructure, apoptosis-related proteins expression and tumor cell apoptosis after ablation with the high-intensity focused ultrasound (HIFU), and to explore the mechanisms responsible for the thermal and non-thermal effect. Methods: Forty rabbits with hepatic VX2 tumors were randomly divided into a thermal group 收稿日期 (Date of reception): 第一作者 (First author): 彭松, pengsong@csu.edu.cn 通信作者 (Corresponding author): 何炜, wei_he@csu.edu.cn 基金项目 (Foundation item): 湖南省科学计划项目 (2012FJ4309) This work was supported by the Hunan Provincial Science & Technology Plan Program, P. R. China (2012FJ4309).

2 716 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(7) (n=20) and a non-thermal group (n=20), and were subjected to HIFU ablation with thermal or non-thermal condition, respectively. Five animals in each group were sacrificed on the 1st, 3rd, 7th or 14th day after the ablation. The changes of ultrastructure, apoptosis-related proteins expression and tumor cell apoptosis were detected. Results: The results of transmission electron microscope (TEM) revealed more severe injury on tissue and cells in the non-thermal group than that in the thermal group. The changes of apoptosisrelated proteins expression and tumor cell apoptosis in transient zone were significantly different in comparison with that in the ablated area or peripheral area between the two groups. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) was at low level on the 1st and 3rd day and elevated gradually on the 7th and 14th day, with no significant difference (all P>0.05). The expression of caspase-3 reached peak on the 3rd day and decreased on the 7th and 14th day. It was significantly higher in the non-thermal group than that in the thermal group on the 3rd and 7th day (all P<0.05). The expression of NF-κ was elevated from the 3rd day and reached peak on the 7th day while decreased on the 14th day. There was no significant difference at every time point between the 2 groups (all P>0.05). The apoptosis index in the non-thermal group and the thermal group on the 3rd and 7th day were (28.60±1.14)% vs (21.80±1.92)% and (21.00±1.58)% vs (14.80±1.48)%, respectively. It was higher in the non-thermal group than that in the thermal group (both P<0.01). Conclusion: oth the thermal and the non-thermal effect of HIFU can induce apoptosis in transient zone, but the latter have a stronger effect. KEY WORDS high-intensity focused ultrasound ablation; rabbits; liver neoplasm; non-thermal effect; apoptosis 高强度聚焦超声 (high-intensity focused ultra sound, HIFU) 治疗肿瘤的机制除了热效应外, 还有非热效应, 即空化效应和机械效应 [1-3] 过去认为非热效应对组织损伤的形状和大小都不确定且不可预测和控制, 在采用 HIFU 消融肿瘤时, 应力求采用热损伤而避免非热效应损伤, 如此才能保证消融的准确性随着 HIFU 技术基础研究不断深入及临床应用, 认为在某些情况下可以利用非热效应治疗作用来弥补热 [4] 效应机制的不足研究表明 : 非热效应可以抑制人淋巴瘤细胞的生长损伤 DN 促进凋亡和抑制增殖 ; 而热效应主要对组织产生热凝固性坏死, 二 [1,5] 者对组织损伤的机制不同本课题组及其他研究证实 : 调整 HIFU 辐照参数可以对活体组织诱发以非热效应为主的损伤, 但并未阐明对肿瘤细胞的远期生物学效应 ; 因此, 本研究运用电镜免疫组织化学及凋亡检测等方法, 观察 HIFU 诱发兔肝 VX2 肿瘤非热效应损伤后不同时间的组织超微结构改变及细胞凋亡, 以探讨非热效应对肿瘤细胞的影响 1 材料与方法 1.1 动物清洁级健康新西兰大白兔, 雌雄不限, 体质 [5-6] 量为 2.5~3.0 kg, 根据本课题组前期研究制作兔肝 VX2 肿瘤模型 40 只, 随机分为热效应组 (n=20) 和非热效应组 (n=20) 1.2 方法 HIFU 辐照辐照参数设置同本课题组前期研究 [5], 热效应组辐照参数 : 工作周期为 50%(on/off:500 ms/ 500 ms), 空间平均脉冲平均值声强 (spatial average and pulse average intensity,i SP ) 为 W/cm 2 ; 非热效应组辐照参数 : 工作周期为 5%(on/off: 50 ms/950 ms), I SP 为 W/cm 2 ; 其他辐照参数保持一致 : 功率探头频率 1 MHz, 探焦距 150 mm, 脉冲长度 1 s, 衰减系数 : 腹壁 1.2 d, 组织 0.8 d 辐照方法 : 计算机控制系统自 XYZ 轴切面在肿瘤内部勾画定位辐照范围, 标准为距离肿瘤边界以内 3~5 mm, 目的是对肿瘤进行计划范围内的非全瘤损伤治疗, 以观察辐照边界周围肿瘤细胞的变化情况病理检测 HIFU 治疗后即刻以及 3,7,14 d, 分别用过量麻醉药物注射方式将每组随机处死 5 只实验动物, 整体摘取肝, 切开肿瘤, 将肿瘤的损伤区域

高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松, 等 717 及其周围组织分为 3 个区域 [7] : 消融区 (HIFU 焦点辐照损伤后的组织 ) 交界区( 消融区周边 3 mm 的组织 ) 和周围区 ( 交界区以外的组织 ) 先从此 3 个区域多点取材, 每点取 1 mm 1 mm 1 mm 肿瘤组织以供电镜检查先后经 2.5% 戊二醛和 1% 锇酸双重固定,0.

0 万倍观察各组细胞超微结构改变然后将其余组织的损伤区域及其周边肿瘤组织标本用 10% 中性甲醛固定后, 石蜡包埋, 供常规 HE 染色及免疫组织化学检查血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,vegf) NF-κ 及 caspase-3 的表达情况每个肿瘤选取 5 张不同部位的切片, 每张切片随机按照消融区交界区和周围区分别观察 5

3 高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松, 等 717 及其周围组织分为 3 个区域 [7] : 消融区 (HIFU 焦点辐照损伤后的组织 ) 交界区( 消融区周边 3 mm 的组织 ) 和周围区 ( 交界区以外的组织 ) 先从此 3 个区域多点取材, 每点取 1 mm 1 mm 1 mm 肿瘤组织以供电镜检查先后经 2.5% 戊二醛和 1% 锇酸双重固定,0.1 mmol/l PS 漂洗, 丙酮梯度脱水,Epon812 环氧树脂包埋, LK8800 超薄切片机切片, 醋酸铀和硝酸铅双重染色, 日立 H-600 透射电镜 (transmission electron microscope,tem) 放大 0.5~2.0 万倍观察各组细胞超微结构改变然后将其余组织的损伤区域及其周边肿瘤组织标本用 10% 中性甲醛固定后, 石蜡包埋, 供常规 HE 染色及免疫组织化学检查血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,vegf) NF-κ 及 caspase-3 的表达情况每个肿瘤选取 5 张不同部位的切片, 每张切片随机按照消融区交界区和周围区分别观察 5 个高倍镜视野 ( 400), 计数 100 个肿瘤细胞, 阳性细胞计数 <10% 即定为阴性, 评定为 0 分 ; 阳性细胞计数 10% 即定为阳性, 阳性细胞计数占总细胞数 10%~25% 评定为 1 分 ( 低表达 );26%~50% 为 2 分,51%~75% 为 3 分 ( 中表达 ); 76%~100% 为 4 分 ( 高表达 ) TUNEL 法检测细胞凋亡武汉博士德生物工程有限公司专用 TUNEL 凋亡检测试剂盒检测, 发现细胞核染色呈棕褐色者为阳性细胞每张切片上随机选取 6 个视野, 并计算出凋亡细胞在全部癌细胞中所占比例凋亡指数 (apoptosis index,i)=( 凋亡细胞数 / 癌细胞总数 ) 100% 1.3 统计学处理使用 SPSS17.0 软件进行数据处理, 计量资料用均数 ± 标准差 (x±s) 表示实验数据采用单因素方差分析,P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 透射电镜检查 HIFU 治疗后即刻, 两组均可观察到消融区细胞坏死, 热效应组大部分肿瘤细胞膜及核膜保持完整, 细胞连接可见 ; 非热效应组消融区内细胞结构不清, 胞浆内可见大小不等空泡, 胞膜核膜断裂, 细胞连接不可见 ( 图 1) 两组交界区组织可见轻度细胞气球样变性, 细胞连接完整周围区无明显改变辐照后 3 和 7 d, 两组消融区内可见细胞膜核膜逐渐断裂溶解热效应组交界区组织细胞肿胀, 线粒体内质网轻度扩张, 而非热效应组交界区组织多数细胞膜模糊不清, 线粒体内质网肿胀, 细胞连接开放两组交界区组织可见凋亡细胞和凋亡小体分布, 非热效应组多于热效应组 ( 图 2) 辐照后 14 d, 两组消融区内可见细胞膜核膜消失, 大量钙盐沉积 ( 图 3) 热效应组交界区组织细胞形态恢复正常, 非热效应组交界区组织细胞仍可见肿胀, 并可见纤维包裹形成 ( 图 4) 图 1 HIFU 辐照即刻消融区透射电镜图 ( 5 000) Figure 1 blation area immediate after HIFU ablation under transmission electron microscope ( 5 000) : Thermal group; : Non-thermal group

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day after HIFU ablation under transmission electron microscope ( 5 000) : Swelling

apoptotic bodies (black arrow) and cells (star) in non-thermal group 图3 HIFU辐照14

transmission electron microscope ( 10 000) : Structure of tumor cells are lost,

calcification can be observed (black arrow) in the non-thermal group 图4 HIFU辐照14

ablation under transmission electron microscope ( 10 000) : Structure of tumor

4 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(7) 图2 HIFU辐照后3和7 d交界区透射电镜图( 5 000) Figure 2 Transient area on the 3rd and 7th day after HIFU ablation under transmission electron microscope ( 5 000) : Swelling of tumor cells and apoptotic body (black arrow) in thermal group; : Multiple apoptotic bodies (black arrow) and cells (star) in non-thermal group 图3 HIFU辐照14 d消融区透射电镜图( ) Figure 3 blation area on the 14th day after HIFU ablation under transmission electron microscope ( ) : Structure of tumor cells are lost, disintegrated, mixed togather in the thermal group; : Multiple clusters of calcification can be observed (black arrow) in the non-thermal group 图4 HIFU辐照14 d热效应组和非热效应组交界区透射电镜图( ) Figure 4 Transient area on the 14th day after HIFU ablation under transmission electron microscope ( ) : Structure of tumor cells are recovered in thermal group; : Macrophages aggregation (black arrow) and fiberous encapsulation (star) can be found in the non-thermal group

05 表1) 2.2.2 Caspase-3 的表达阳性染色定位于肿瘤细胞胞浆呈黄色粉至棕黄色改变 HIFU治疗后即刻有基础量的表达 3 d时达到高峰 7~14 d时逐渐下降 3与7 d时非热效应组caspase-3表达高于热效应组差异有统计学意义(均 P<0.

expression at once after HIFU ablation in the thermal group; : High expression on the 7th day in the non-thermal group 表 1 热效应组和非热效应组交界区各时间点 VEGF

即刻 3d 7d 14 d 1.20±0.19 1.28±0.25 1.24±0.43 1.32±0.23 2.74±0.

5 高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松等 2.2 免疫组织化学结果 HIFU治疗后热效应组与非热效应组消融区 VEGF NF- κ caspase-3无表达而在交界区有明显的免疫组织化学染色周围区caspase-3有基础量表达其余表达呈阴性两组交界区各种凋亡相关蛋白的表达情况如下 VEGF 的表达阳性染色定位于肿瘤细胞胞浆呈黄色改变 HIFU治疗后即刻至3 d呈低表达 7~14 d逐渐 719 升高(图5) 各时间点两组阳性细胞计数差异均无统计学意义(均 P>0.05 表1) Caspase-3 的表达阳性染色定位于肿瘤细胞胞浆呈黄色粉至棕黄色改变 HIFU治疗后即刻有基础量的表达 3 d时达到高峰 7~14 d时逐渐下降 3与7 d时非热效应组caspase-3表达高于热效应组差异有统计学意义(均 P<0.05 图6 表2) 图5 HIFU辐照后交界区VEGF表达( 400) Figure 5 VEGF expression in transient area detected by immunohistochemistry after HIFU ablation ( 400) : Low expression at once after HIFU ablation in the thermal group; : High expression on the 7th day in the non-thermal group 表 1 热效应组和非热效应组交界区各时间点 VEGF 表达评分比较 (n=20 x±s) Table 1 VEGF score comparison at diﬀerent time point between the thermal group and the non-thermal group (n=20, x±s) 组别热效应组非热效应组即刻 3d 7d 14 d 1.20± ± ± ± ± ± ± ±0.27 图6 HIFU辐照后交界区caspase-3表达( 400) Figure 6 Caspase-3 expression in transient area detected by immunohistochemistry after HIFU ablation ( 400) : Low or moderate expression on the 3rd day in the thermal group; : High expression on the 3rd day in the non-thermal group

720 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(7) http://www.csumed.

1.76±0.43 2.14±0.38 1.52±0.39 1.34±0.48 非热效应组 2.14±0.57 3.50±0.32* 2.40±0.32* 1.46±0.57 与热效应组比较,*P<0.05 2.2.3 NF-κ 的表达阳性染色定位于肿瘤细胞核, 呈棕黄色改变 3 d 时开始增加,7 d 达到高峰,14 d 开始下降 ( 图 7), 两组差异均无统计学意义 ( 均 P>0.

6 720 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(7) 表 2 热效应组和非热效应组交界区各时间点 caspase-3 表达评分比较 (n=20,x±s) Table 2 Caspase-3 score comparison at different time point between the thermal group and the non-thermal group (n=20, x±s) 组别即刻 3 d 7 d 14 d 热效应组 1.76± ± ± ±0.48 非热效应组 2.14± ±0.32* 2.40±0.32* 1.46±0.57 与热效应组比较,*P< NF-κ 的表达阳性染色定位于肿瘤细胞核, 呈棕黄色改变 3 d 时开始增加,7 d 达到高峰,14 d 开始下降 ( 图 7), 两组差异均无统计学意义 ( 均 P>0.05, 表 3) 2.3 凋亡检测结果 HIFU 治疗后消融区即刻就可以观察到较多凋亡阳性细胞表达,3 d 表达达峰值,7~14 d 时逐渐减少, 表达峰值变化同交界区, 但由于肿瘤细胞广泛损伤, 无法定量计算 I HIFU 治疗后交界区即刻 TUNEL 凋亡阳性细胞有基础量的表达,3 d 时达到高峰,7~14 d 时逐渐下降 ( 图 8),3 与 7 d 时非热效应组均高于热效应组, 差异有统计学意义 ( 均 P<0.05, 表 4) 周围区各时间点均没有凋亡阳性细胞的表达图 7 HIFU 辐照后热效应组和非热效应组交界区 NF-κ 的表达 ( 400) Figure 7 NF-κ expression in transient area detected by immunohistochemistry after HIFU ablation in the thermal group and the non-thermal group ( 400) : Moderate or high expression on the 7th day in the thermal group (red arrow); : High expression on the 7th day in the non-thermal group (red arrow) 表 3 热效应组和非热效应组交界区各时间点 NF-κ 表达评分比较 (n=20,x±s) Table 3 NF-κ score comparison at different time point between the thermal group and the non-thermal group (n=20, x±s) 组别即刻 3 d 7 d 14 d 热效应组 1.02± ± ± ±0.46 非热效应组 1.04± ± ± ±0.41

高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松, 等 721 图 8 HIFU 辐照后热效应组和非热效应组交界区细胞的凋亡表达 ( 400) Figure 8 poptosis expression detected by immunohistochemistry after HIFU ablation in the thermal group and the

(n=20,x±s,%) Table 4 Comparison of I at different time points between the thermal group and the non-thermal group (n=20, x±s, %) 组别即刻 3 d 7 d 14 d 热效应组 9.60±2.41 21.80±1.92 14.80±1.48 7.20±1.

7 高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响彭松, 等 721 图 8 HIFU 辐照后热效应组和非热效应组交界区细胞的凋亡表达 ( 400) Figure 8 poptosis expression detected by immunohistochemistry after HIFU ablation in the thermal group and the non-thermal group ( 400) : Transient area on the 3rd day in the thermal group (red arrow); : Transient area on the 3rd day in the non-thermal group (red arrow) 表 4 热效应组和非热效应组交界区各时间点 I 的变化 (n=20,x±s,%) Table 4 Comparison of I at different time points between the thermal group and the non-thermal group (n=20, x±s, %) 组别即刻 3 d 7 d 14 d 热效应组 9.60± ± ± ±1.48 非热效应组 10.20± ±1.14* 21.00±1.58* 8.20±1.67 与热效应组比较,*P< 讨论本研究中,HIFU 辐照后即刻虽然两组靶区内的细胞均坏死, 但非热效应组诱发的机械性和空化破坏强度较热损伤更为强烈辐照后 3 和 7 d, 两组消融区损伤演进程度相当, 而从交界区凋亡细胞和高电子密度的凋亡小体分布情况来看, 非热效应组较热效应组损伤严重, 提示此机制有可能造成超过预定辐照范围的损伤效应, 因此对于无安全消融边界的肿瘤需要避免过度损伤, 而对于存在安全消融边界的肿瘤则可将其加以利用, 以达到彻底消融辐照后 14 d 两组交界区损伤情况均有不同程度的减轻, 说明组织处于自我修复中 [8] Ferrara 等首次发现一类能特异性促进血管生成的可溶性糖蛋白, 命名为 VEGF 在肝癌治疗后, 残余肝组织 VEGF 的高表达可以作为术后复发的预测指标 [9] 由于消融区肿瘤凝固性坏死比较彻底, 两组消融区 VEGF 均无表达在交界区两组 VEGF 的表达在 HIFU 治疗后即刻至 3 d 呈低表达, 表明热效应与非热效应均抑制了 VEGF 的产生 7~14 d 时 VEGF 表达逐渐升高, 其原因可能是热效应和非热效应造成组织缺氧, 诱导 VEGF 转录增加 [10] ; 另外,HIFU 治疗过程中对组织微血管造成了破坏, 组织自身修复微血管也是其升高的原因非热效应组与热效应组相比,HIFU 治疗后即刻 3 和 7 d VEGF 的表达略低, 但差异无统计学意义, 表明治疗后即刻和短期内两组对交界区瘤细胞的 VEGF 表达抑制作用无明显差异 Caspase 家族与细胞凋亡密切相关, 细胞凋亡的过程实际上是 caspase 不可逆有限水解底物的级联反应过程 [11] Caspase-3 的表达不但反映细胞的凋亡水平, 而且反映凋亡启动因素的存在本实验结果显示 :HIFU 治疗后即刻交界区肿瘤细胞 caspase-3 有表达,3 d 时达高峰, 与瘤细胞受热损伤机械损伤因子有关, 虽无完全坏死, 但造成部分细胞逐渐变性及局部微血管被破坏后局部组织缺血缺氧而致细胞凋亡有关 ;7~14 d 时逐渐下降, 表明热损伤及机械损伤对细胞的后续影响消失, 局部微血管修复循环改善, 此与 7~14 d 时逐渐升高的 VEGF 表达相一致 3 与 7 d 时非热效应组 caspase-3 表达显著高于热效应组, 提示非热效应组发挥促肿瘤凋亡的效应优于热效应组, 其机制可能为机械和空化效应可使胞质细胞核内的抗原暴露, 通过某种作用方式刺激机体产生抗肿瘤免疫目前一般认为,NF-к 的促肿瘤作用主要与其抗凋亡作用有关 [12] 本实验结果显示,NF-κ 在 HIFU 治疗后即刻有基础量的表达,3 d 时开始增加,7 d 达到高峰, 其表达峰值晚于 caspase-3 的表

8 722 中南大学学报 ( 医学版 ), 2015, 40(7) 达, 可能与经 HIFU 治疗后组织细胞内的抑制因子受到损伤刺激后降解, 致使 NF-κ 激活有关 ;14 d 开始下降, 与 3 d 时相比无明显差异, 说明其激活作用有限, 非热效应组略高于热效应组, 但差异无统计学意义, 说明二者对 NF-κ 的激活效果相似细胞凋亡是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式, 治疗肿瘤就是杀伤和清除肿瘤细胞, 诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条途径 [13] 本实验结果表明 :HIFU 治疗后, 在周围区没有凋亡阳性细胞的表达, 各时间点无明显差异消融区有较多凋亡阳性细胞, 表达峰值变化同交界区交界区即刻凋亡阳性细胞有基础量的表达,3 d 时达到高峰,7~14 d 时逐渐下降,3 与 7 d 非热效应组高于热效应组, 差异有统计学意义其原因可能为肿瘤中心区域因受到 HIFU 直接作用导致了坏死, 而肿瘤边缘区域却只受到了非致死性损伤因子传导的缘故凋亡表达峰值与 caspase-3 表达峰值一致, 验证了 caspase-3 为细胞凋亡的重要执行者, 结果证明 HIFU 治疗具有促进辐照靶区周围肿瘤细胞凋亡的作用, 其中非热效应机制的促凋亡作用要强于热效应机制本研究结果表明 :HIFU 热效应机制和非热效应机制诱导兔肝 VX2 肿瘤细胞损伤凋亡是一个由多种蛋白参与调控的复杂过程, 非热效应机制能够有效地损伤靶区组织, 且与热效应相比, 还能够增强对损伤区域周围肿瘤细胞的损伤参考文献 [1] Laughner JI, Sulkin MS, Wu Z, et al. Three potential mechanisms for failure of high intensity focused ultrasound ablation in cardiac tissue[ J]. Circ rrhythm Electrophysiol, 2012, 5(2): [2] O'Neill E, Vo H, ngstadt M, et al. Pulsed high intensity focused ultrasound mediated nanoparticle delivery: mechanisms and efficacy in murine muscle[ J]. Ultrasound Med iol, 2009, 35(3): [3] Matsumoto Y, Nakano J, Oga S, et al. The non-thermal effects of pulsed ultrasound irradiation on the development of disuse muscle atrophy in rat gastrocnemius muscle[ J]. Ultrasound Med iol, 2014, 40(7): [4] Zhou SJ, Li SW, Wang JJ, et al. High-intensity focused ultrasound combined with herpes simplex virus thymidine kinase gene-loaded ultrasound-targeted microbubbles improved the survival of rabbits with VX2 liver tumor[ J]. J Gene Med, 2012,14(9/10): [5] 何炜, 王维, 周平, 等. HIFU 非热效应诱导兔肝 VX2 肿瘤损伤 [ J]. 中国医学影像技术, 2010, 26(12): HE Wei, WNG Wei, ZHOU Ping, et al. Injury on rabbit hepatic VX2 tumor induced by non-thermal effects of high-intensity focused ultrasound[ J]. Chinese Journal of Medical Imaging Technology, 2010, 26(12): [6] He W, Wang W, Zhou P, et al. Enhanced ablation of high intensity focused ultrasound with microbubbles: an experimental study on rabbit hepatic VX2 tumors[ J]. Cardiovasc Intervent Radiol, 2011, 34(5): [7] Luo W, Zhou X, Yu M, et al. blation of high-intensity focused ultrasound assisted with Sonovue on rabbit VX2 liver tumors: sequential findings with histopathology, immunohistochemistry, and enzyme histochemistry[ J]. nn Surg Oncol, 2009, 16(8): [8] Ferrara N, Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells[ J]. iochem iophys Res Commun, 1989, 161(2): [9] Zhuang PY, Wang JD, Tang ZH, et al. Peritumoral neuropilin-1 and VEGF receptor-2 expression increases time to recurrence in hepatocellular carcinoma patients undergoing curative hepatectomy[ J]. Oncotarget, 2014, 5(22): [10] Hendriksen EM, Span PN, Schuuring J, et al. ngiogenesis, hypoxia and VEGF expression during tumour growth in a human xenograft tumour model[ J]. Microvasc Res, 2009, 77(2): [11] Rongvaux, Jackson R, Harman CC, et al. poptotic caspases prevent the induction of Type I interferons by mitochondrial DN[ J]. Cell, 2014, 159(7): [12] Sirotkin V, Dekanová P, Harrath H, et al. Interrelationships between sirtuin 1 and transcription factors p53 and NF-κ(p50/ p65) in the control of ovarian cell apoptosis and proliferation[ J]. Cell Tissue Res, 2014, 358(2): [13] 林艳端, 申锷, 白文坤, 等. 20kHz 超声联合微泡诱导人前列腺癌 PC3 细胞的细胞自噬及早期凋亡 [ J]. 中国介入影像与治疗学, 2014, 11(5): LIN Yanduan, SHEN E, I Wenkun, et al. poptosis and autophagy induced by 20 khz ultrasound combined with microbubbles in human prostate cancer PC3 cells[ J]. Chinese Journal of Interventional Imaging and Therapy, 2014, 11(5): ( 本文编辑傅希文 ) 本文引用 : 彭松, 何炜. 高强度聚焦超声非热效应对兔肝 VX2 肿瘤超微结构及细胞凋亡的影响 [ J]. 中南大学学报 : 医学版, 2015, 40(7): DOI: /j.issn Cite this article as: PENG Song, HE Wei. Non-thermal effect of highintensity focused ultrasound on ultrastructure and apoptosis in rabbit hepatic VX2 tumors[ J]. Journal of Central South University. Medical Science, 2015, 40(7): DOI: /j.issn

211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont

211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont 210 毛果芸香碱联合拉坦前列素治疗原发性急性闭角型青光眼的疗效观察符元党 1, 郑振优 2, 林再雄 2, 周吉良 1. 昌江黎族自治县中西医结合医院, 海南昌江 572700 2. 海南医学院附属医院眼科, 海南海口 570100 1 摘要 : 目的探讨