VITEK 鉴定卡 工业微生物培训资料书目参考 :SFP-DO55A- 译文 -1- 修改 -09/00 biomerieux 产品培训服务部
目录 1 - VITEK 方法 2 2 - GNI+ 革兰氏阴性菌鉴定卡 3 1 - 产品说明 3 2 - 预期应用 4 3 - 方法 5 4 - 故障排除 6 5 - 数据库 7 3 - NFC 非发酵菌鉴定卡 8 1 - 产品说明 8 2 - 预期应用 9 3 - 方法 10 4 - 数据库 11 4 - BAC 芽孢菌鉴定卡 12 1 - 产品说明 12 2 - 预期应用 13 3 - 方法 14 4 - 故障排除 15 5 - 数据库 16 5 - GPI 革兰氏阳性菌鉴定卡 17 1 - 产品说明 17 2 - 预期应用 18 3 - 方法 19 4 - 故障排除 20 5 - 数据库 21 6 - ANI 厌氧菌鉴定卡 22 1 - 产品说明 22 2 - 预期应用 23 3 - 方法 24 4 - 故障排除 25 5 - 数据库 25 6 - 微球菌鉴定 26 7 - YBC 酵母菌鉴定卡 28 1 - 产品说明 28 2 - 预期应用 29 2
3 - 方法 30 4 - 故障排除 31 5 - 数据库 31 8 - 一般介绍 32 9 - BIOBURDEN 生物记数 33 1 - 产品说明 33 2 - 预期应用 34 3 - 方法 35 4 - 数据库 37 5 - 技术介绍 38 3
第一章 VITEK 方法 菌种接种物的混浊度鉴定卡培养条件 革兰氏阴性杆菌 葡萄球菌 1McF 0.5 McF 革兰氏阴性菌 (GNI+) 标记 : 氧化酶 革兰氏阳性菌 (GPI) 标记 : 接触酶凝固酶 Vitek 35.5 0 C Vitek 35.5 0 C 链球菌 0.5 McF 革兰氏阳性菌 ( GPI) 标记 :b 溶血 Vitek 35.5 0 C 酵母菌 2 McF 酵母菌 (YBC) 注 :48h 培养 其它培养箱 30 0 C 24-48h 非发酵杆菌 1 McF 非发酵菌 ( NFC) Vitek 35.5 0 C 厌氧菌 3 McF 厌氧菌 ( ANI) 其它培养箱 37 0 C 24-48h 芽孢杆菌 0.5 McF 芽孢菌 (BAC) 注 :55 0 C 培养 Vitek 35.5 0 C 55 0 C 其它培养箱 24 h 4
第二章 革兰氏阴性菌鉴定卡 (GNI+) 1. 产品说明书 产品名称 VITEK 革兰氏阴性菌鉴定卡 ( VITEK GNI+) 产品参考书目 V 1316 预期应用与 Vitek 系统相连用的革兰氏阴性菌的鉴定卡套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书贮存 2-8 0 C 附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明 测定数目 29 分类单位数目 116 菌落选择 接种量 接种方式 革兰氏阴性杆菌 1McF 自动 培养 35.5 0 C (Vitek 培养器 ) 读 / 解释结果 自动 5
2. 预期应用 批注 [cai1]: * 革兰氏阴性杆菌鉴定 ( 肠杆菌科 Enterobacteriaceae) * 非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定 氧化酶阳性 ( 假单胞菌属 Pseudomonas) * 发酵革兰氏阴性杆菌鉴定 氧化酶阳性 ( 弧菌科 Vibrionaceae) 6
3- 方法 革兰氏阴性杆菌 培养基 = TSA + 5% 羊血 MacConkey 琼脂 -EMB 1.8ml Vitek 溶液 1 MacF ( 比浊仪兰色范围内 ) 接种 GNI+ 鉴定卡记录 : 氧化酶试验 Vitek 培养箱 在 2-8h 内读结果 ( 非发酵革兰氏阴性菌 4-12h) 7
4- 故障排除 接种前 : * 如果测定菌类似非发酵杆菌 ( 即生长缓慢, 通常氧化酶阳性 成极小菌落或需要 48h 才能得到可用菌落的话则接种量应增 加至 2McF 接种后 : * 在按种和培养之间的时间不要超过 20 分钟 结果介释 : 非发酵革兰氏阴性芽孢杆菌, 这些分离物都不能产生合适目阳性结果 ( 未定位杆菌 ) 鉴定可用非发酵菌 NFC 鉴卡或用不发酵葡萄糖的革兰氏阴性杆菌所用的其它常规的生化测定 5- 数据库 8
可鉴定的肠杆菌科 (Enterobacteriaceae) 成员包括 : 差异西地西菌 (Cedecea davisae), 拉氏西地西菌 (C.lapagei), 无丙二酸柠檬酸杆菌 (C.amalonaticus), 弗氏拧檬酸杆菌 (Citrobacter freundii), 科氏拧檬酸杆菌 (C. koseri; 差异柠檬酸杆菌 ), 迟钝爱德华氏菌 (Edwardsiella tarda), 产气肠杆菌 (Enterobacter aerogenes), 河生肠杆菌生物群 1(E. amingenus bigroup 1), 河生肠杆菌生物群 2(E. amingenus bigroup 2), 阿氏肠杆菌 (E.asburiae), 阴讲肠杆菌 (E. cloacae), 日勾维肠杆菌 (E. gergoviae), 霍氏肠杆菌 (E. homaechei), 中间肠杆菌 (E. intermedius), 坂崎肠杆菌 (E. sakazakii), 泰洛氏肠杆菌 (E. taylorae), 大肠埃希氏菌 (Escherichia coli), 弗氏埃希氏菌 (E. fergusonii), 赫氏埃希氏菌 (E. hermanii), 伤口埃希氏菌 (E. vulneris), 美洲爱文氏菌 (Ewingela americana), 幼虫哈夫尼菌 (Hafnia alvei), 产酸克雷伯氏菌 (Klebsiella oxytoca), 鼻臭克雷伯氏菌 (K. ozaenae), 肺炎克雷伯氏菌 (K. pneumoniae), 鼻硬结克雷伯氏菌 (K.rhinonslecero-mantis), 克雷伯氏菌属的其它种 (K. species), 非脱羧勒克氏菌 (Leclercia adecarboxylata), 摩根摩根氏菌 (Morganella morganii), 成团泛菌 (Pantoea agglomerans ; 成团肠杆菌 ), 奇异变形菌 (Proteus mirabilis), 彭氏变形菌 (P. penneri), 9
普通变形菌 (P. vulgaris), 产碱普罗威登斯菌 (Providencia alcalifaciens), 雷氏普罗威登斯菌 (Providencia rettgeri), 斯氏普罗威登斯菌 (Providencia stuartii), 斯氏普罗威登斯尿酶 + 菌 (Providencia stuartii urea+), 亚利桑那沙门氏菌 (Salmonella arizonae), 沙门氏菌属的种 (Salmonella species), 伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhi), 无花果沙雷氏菌 (Serratia fonticola), 普城沙雷氏菌 (Serratia plymithica), 深红沙雷氏菌 (Serratia rubidaea), 痢疾志贺氏菌 (Shigella dysenteriae), 索氏志贺氏菌 (Shigella sonnei), 志贺氏菌属的种 (Shigella species), 小肠结肠炎耶尔森氏菌 (Yersinia enterocolitica), 弗氏耶尔森氏菌 (Yersinia frederiksenii), 中间耶尔森氏菌 (Yersinia intermedia), 克氏耶尔森氏菌 (Yersinia kristensenii), 鼠疫耶尔森氏菌 (Yersinia pestis) 假结核耶尔森氏菌 (Yersinia pseudotuberculosis) 用 GNI+ 鉴定卡鉴定的弧菌科 (Vibrionaceae) 的成员包括 : 嗜水 / 豚鼠气单胞菌 (Aeromonas hydrophila/caviae), 维罗纳气单胞菌温和生物变种 (A. veronii biovar.sobria), 美人鱼发光杆菌 (Photobacterium damsela), 类志贺邻单胞菌 (Plesiomonas shigelloides), 解藻朊酸弧菌 (Vibrio alginolyticus), 霍乱弧菌 (Vibrio cholerae), 河流弧菌 (Vibrio fluvialis), 副溶血弧菌 (Vibrio parahaemolyticus) 创伤弧菌 (Vibrio vulnificus) 可鉴定的不发酵葡萄糖菌群包括 : 木糖氧化无色杆菌 (Achromobacter xylosoxidans), 10
乙酸钙不动杆菌无硝生物亚种 (Acinebacter calcoaceticus bio. anitratus), 可能是鲁氏不杆菌 (presumptive Acinetobacter lwoffii), 脲放线杆菌 (Actinobascillus ureae), 根癌土壤杆菌 [Agrobacterium tumefaciens ; 放射形土壤杆菌 (Agrobacterium radiobacter )], 粪产碱菌 (Alcaligenes faecalis), 木糖氧化产碱菌木糖氧化亚种 (Alcaligenes xylosoxidans ss. xylosoxidans), 支气管炎博特氏菌 (Bordetella bronchiseptica), 洋葱伯克霍尔德氏菌 [Burkholderia cepacia ; 洋葱假单胞菌 (Pseudomonas cepacia ) ], 帕氏伯克霍尔德氏菌生物亚种 1[Burkholderia pickettii bio.1 ]; 帕氏假单胞菌生物亚种 1(Pseudomonas pickettii bio. 1) ], 帕氏伯克霍尔德氏菌生物亚种 2[Burkholderia pickettii bio. 2 ; 帕氏假单胞菌生物亚种 2(Pseudomonas pickettii bio 2 ) ], 皮氏伯克霍尔德氏菌 [Burkholderia pickettii ; 皮氏假单胞菌 (Pseudomonas pickettii) ], 浅黄金色单胞菌 (Chryseomonas luteola), 嗜酸丛毛单胞菌 (Comamonas acidovorans), 刻蚀艾肯氏菌 (Eikenella corrodens), 栖稻黄色单胞菌 (Flavimonas oryzihabitans), 粘金黄杆菌 ( 黄杆菌 ) [ Chryseobacterium (Flavobacterium)gleum ], 产吲哚金黄杆菌 ( 黄杆菌 ) [ Chryseobacterium (Flavobacterium) indologenes ], 脑膜炎金黄杆菌 ( 黄杆菌 ) [ Chryseobacterium (Flavobacterium) meningosepticum], 气味黄杆菌 (Flavobacterium odoratum), 黄杆菌属的种 (Flavobacterium species), 人苍白杆菌 (Ochrobactrum anthropi), 溶血巴斯德氏菌 (Pasteurella haemolytica), 多杀巴斯德氏菌 (Pteurellasa multocida), 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa), 荧光 / 恶臭 / 门多萨假单胞菌 (Pseudomonas fluorescens 11
/putida/mendocina ), 施氏假单胞菌 (Pseudomonas stutzeri), 泡囊假单胞菌 (Pseudomonas vesicularis), 腐败瓦希氏菌 [ Shewanella putrefaciens ; 腐败交替单胞菌 (Alteromonas putrefaciens ) ], 多食鞘氨醇杆菌 (Sphingobacterium multivorum ), 少动鞘氨醇杆菌 [ Sphingobacterium paucimobilis ; 少动假单胞菌 (Pseudomonas paucimobilis) ], 嗜麦芽寡养单胞菌 [ Stenotrophomonas maltophilia; 嗜麦芽黄单胞菌 (Xanthomonas maltophilia) ] 新提出的菌 : 乙酸钙 - 鲍氏不动杆菌复合体 (Acinetobacter calcoaceticusbaumanii complex), 可能是鲁氏 / 琼氏不动杆菌 (presumptive Acinetibacter lwoffii/junii), 维罗纳气单胞菌维罗纳生物变种 (Aeromonas veronii biovar veronii), 水生布戴约维采菌 (Budvicia aquatica), 马鼻疽伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia mallei), CDC 群 EO-2 (CDC Group EO-2), 紫色色杆菌 (Chromobacterium violaceum), 布氏柠檬酸杆菌 (Citrobacter braakii), 弗氏柠檬酸杆菌复合体 (Citrobacter freundii complex), 弗氏 / 杨氏柠酸杆菌 (Citrobacter freundii/youngae), 法氏柠檬酸杆菌 (Citrobacter farmeri), 保科爱德华氏菌 (Edwardsiella hoshinae), 水生拉恩氏菌 (Rahnella aquatilis), 食神鞘氨醇杆菌 (Sphingobacterium spiritivorum), 嗜温鞘氨醇杆菌 (Sphingobacterium thalpophilum), 雷金斯堡预研菌 (Yokenella regensburgei) 116 TAXA 12
第三章 非发酵菌鉴定卡 (N F C) 1.- 产品说明书 产品名称 VITEK 非发酵菌鉴定卡 ( VITEK NFC) 产品参考书目 V1310 预期应用 与 VITEK 系统连用的非发酵杆菌的鉴定卡 盒装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书 贮存 2-8 0 C 附件 管 75X12mm 安瓿砂轮 带附件的 VITEK 系统 产品说明 测定数目 28 测定菌数目 42 选择菌落接种量接种方式读 / 解释结果 非发酵革兰氏阴性杆菌, 氧化酶阳性 1McF 自动自动 13
2 - 预期应用 * 鉴定非发酵革兰氏阴性杆菌 根据对某些化学底物作为唯一碳源的的同化作用 ( 利用 ) * 对 GNI 鉴定卡的主要补充测定 可鉴定没有合适鉴定卡的菌或用 GNI+ 鉴定卡鉴定不了的菌 * 专门用于工业微生物的新产品包括环境菌株的数据库只适用于工业有补充实验资料 (SRF) 14
3 - 方法 革兰氏阴性 / 氧化酶阳性的杆菌 培养基 = TSA + 5% Sheep+ Blood 1.8ml Vitek 溶液 1MacF ( 比浊仪兰色范围内 ) 接种 NFC 鉴定卡 Vitek 培养箱 在 6-8h 内读结果 4 - 数据库 15
- 溶血不动杆菌 (Acinetobacter haemolyticus) - 鲍氏不动杆菌 (Acinetobacter baumannii) - 鲁氏不动杆菌 (Acinetobacter lwoffii) - 豚鼠气单胞菌 (Aeromonas caviae) - 嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila) - 温和气单胞菌 (Aeromonas sobria) - 根癌土壤杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) - 粪产碱菌 (Alcaligenes faecalis) - 木糖氧化产碱菌木糖氧化亚种 (Alcaligenes xylosidans subsp. xylosidans) - 木糖氧化产碱菌反硝化亚种 (Alcaligenes xylosidans subsp. denitrificans) - 支气管炎博特氏菌 (Bordetella bronchiseptica) - 洋葱伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia cepacia) - 皮氏伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia picketti) -CDC 群 C-2 (CDC GroupIV C-2) -CDC 群 B-3 (CDC Group VB-3) -CDC 群 EF-4 (CDC Group EF-4) - 紫色色杆菌 (Chromobacterium violaceum) - 嗜酸丛毛单胞菌 (Comamonas acidovorans) - 睾丸酮丛毛单胞菌 (Comamonas testoteroni) - 浅黄金色单胞菌 (Chryseomonas luteola) - 栖稻黄色单胞菌 (Flavimonas oryzihabitans) - 脑膜炎黄杆菌 (Flavobacterium meningosepticum) - 人苍白杆菌 (Ochrobactrum anthropi) - 产气巴斯德氏菌 (Pasteurella aerogenes) - 美人鱼发光杆菌 (Photobacterium damsela) - 类志贺邻单胞菌 (Plesiomonas shigelloides) - 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) - 荧光假单胞菌 (Pseudomonas flurescens) - 门多萨假单胞菌 (Pseudomonas mendocina) - 类鼻疽假单胞菌 (Pseudomonas pseudomallei) - 恶臭假单胞菌 (Pseudomonas putida) - 施氏假单胞菌 (Pseudomonas stutzeri) - 腐败瓦希氏菌 (Shewanella putrefaciens) 16
- 多杀鞘氨醇杆菌 (Sphingobacterium multivorum) - 食神鞘氨醇杆菌 (Sphingobacterium spiritivorum) - 少动寡养单胞菌 (Sphingomonas paucimobilis) - 嗜麦芽寡养单胞菌 (Stenotrophomonas maltophilia) - 溶藻朊酸弧菌 (Vibrio alginolyticus) - 霍乱弧菌 (Vibrio cholerae) - 河流弧菌 (Vibrio fluvialis) - 副溶血弧菌 (Vibrio parahaemolyticus) - 创伤弧菌 (Vibrio vulnificus)- 42 分类单位 17
第四章 芽孢菌鉴定卡 (B A C) 1- 产品说明书 产品名称 VITEK BAC 产品参考书目 V1304 预期应用与 VITEK 系统相连用的革兰氏阳性芽孢菌的鉴定卡套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书贮存 2-8 0 C 附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明 测定数目 29 分单位数目 17 菌落选择 接种量 接种方式 革兰氏阳性杆菌, 接触酶阳性 0.5McF 自动化 培养 35.5 0 C (Vitek 培养器 ) 55 0 C ( 其它培养器 ) 读 / 解释结果 自动 18
2 - 预期应用 革兰氏阳性杆菌的鉴定 中温和高温芽孢菌 专门对工业微生物新发展的产品 ( 有补充实验资料 ) 19
3- 方法 革兰氏阳性杆菌氧化酶阳性 培养基 = TSA 1.8ml Vitek 溶液 0.5MacF ( 比浊仪红色范围内 ) 接种 BAC 鉴定卡如果 55 0 C, 则需说明培养温度 Vitek 培养箱在 6-15h 内 其它培养箱在 18-24h 内读结果用终点读数 20
4 - 故障排除 接种前 : 在 TSA 琼脂上, 需要二次转管 保证均匀的菌悬液 : 如果不均匀, 在调 0.5McF 之前, 则让悬液沉淀, 将均匀悬液倒入另一管内 如果需要不密闭的培养器, 则应将鉴定卡放在不透气 保湿的容器中, 以避免鉴定卡在 55 0 C 的失水损伤 接种后 : 在按种和培养之间的时间不要超过 30 分钟 结果介释 : 如果不适当的外加记号在鉴定卡上, 则端点读数器将给予 不能鉴定的菌 在试验报告上 过多的阴性生化结果, 将导至鉴定为球形芽孢杆菌 (Bacillus sphaericus), 但革兰氏染色可以邦助确定该鉴定的正确性 阳性对照是发酵葡萄糖, 如果 5 号杯阴性, 其它杯为阳性, 则在最终报告单上呈现 不可鉴定的菌 21
5 - 数据库 - 幼虫芽孢杆菌 (Bacillus alvei) - 腊状芽孢杆菌 (Bacillus cereus) - 环状芽孢杆菌 (Bacillus circulans) - 凝结芽孢杆菌 ( 嗜热 ) (Bacillus coagulans)(thermophile) - 坚强芽孢杆菌 (Bacillus firmus) - 侧孢芽孢杆菌 (Bacillus laterosporus) - 迟缓芽孢杆菌 (Bacillus lentus) - 地衣芽孢杆菌 ( 嗜热 ) (Bacillus licheniformis)(thermophile) - 浸麻芽孢杆菌 (Bacillus macerens) - 巨大芽孢杆菌 (Bacillus megaterium) - 多粘芽孢杆菌 (Bacillus polymyxa) - 短小芽孢杆菌 (Bacillus pumilus) - 球形芽孢杆菌 (Bacillus sphaericus) - 嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillus stearothermophilus) (thermophile) - 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) - 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)(globigii) - 苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis) 17 分类单位 22
第五章 革兰氏阳性菌鉴定卡 (GPI) 1- 产品说明书 产品名称 VITEK 革兰氏阳性菌鉴定卡 (VITEK GPI) 产品参考书目 V1305 预期应用与 VITE 系统相连用的革兰氏阳性球菌的鉴定卡套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书贮存 2-8 0 C 附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明测定数目 29 分类单位数目 45 菌落选择 接种量 接种方式 革兰氏阳性球菌 0.5McF 自动 35.5 0 C (Vitek 培养器 ) 读 / 解释结果 自动 23
2 - 预期应用 * 革兰氏阳性球菌 接触酶阳性 : 葡萄球菌 接触酶阴性 : 链球菌 * 还有利斯特氏菌 (Listeria) 和棒杆菌 (Corynebacterium) 一些 分类单位 24
3 - 方法 革兰氏阳性球菌 培养基 = TSA + 5% Sheep + Blood 1.8ml Vitek 溶液 0.5MacF ( 比浊仪红色范围内 ) 记录 : 接触酶 凝固酶 / β- 溶血接种 GPI 鉴定卡 Vitek 培养室 在 2-15h 内读结果 25
4- 故障排除 接种前 : 对特别粘的菌 极小菌落或需 48h 才能用的菌, 接种量应调 至 1McF 鉴定卡正确操作的关键是所有外加测定必需先于鉴定卡培养 之前 如果需要, 任何三个外加测定编码转换不能超过二个 小时 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 猪葡萄球菌 (S.hyicus) 和中间葡萄球菌 (S. intermedius) 的凝固酶是阳 性 凝固酶测定应按葡萄球菌套装参考书目 73112 进行, 在 兔血浆可疑的情况下, 推荐以参考书目 55181 和 55182 予确 定 接种后 : 鉴定卡的接种和培养之间的时间不能超过 20 分钟 结果的介释 : 如果凝固酶记录不正确, 则鉴定结果也不会正确 ( 例溶血 葡萄球菌就变成了金黄色葡萄球菌 ) 如果微球菌接种于 GPI 鉴定卡上, 将会给予 不能鉴定 或耳 葡萄球菌 ( 只是有的培养物的反应 ) 用原始数据, 应以杆菌素 2# 杯对照生长 如果与 PB 1# 杯相比, 菌不生长 ; 氧化酶阳性 ; 革兰氏染色观察时为四联形态, 则应证明为微球菌 26
5 - 数据库 酿脓链球菌 (Streptococcus pyogenes), 无乳链球菌 (Streptococcusagalactiae), 类马链球菌 (Streptococcus equisimilis), 马链球菌 (Streptococcus equi), 兽瘟链球菌 (Streptococcus zoopidemicus), 链球菌 G 群 (Group G streptococci), 咽峡炎链球菌链球菌 Streptococcus anginosus ; 米氏链球菌 (Streptococcus malleri), 粪肠球菌 (Entercoccus faecalis), 屎肠球菌 (Entercoccus faecium), 鸟肠球菌 (Entercoccus avium) 耐久肠球菌 (Entercoccus durans), 牛链球菌 (Streptococcus bovis), 牛链球菌变种 (Streptococcus bovis var.) 马肠链球菌 (Streptococcus equinus), 缓症链球菌 (Streptococcus mitis) 变异链球菌 (Streptococcus mutans), 乳房链球菌 (Streptococcus uberis) 血链球菌 Ⅰ 和 Ⅱ (Streptococcus san 导线 (GUI)sⅠ&Ⅱ), 唾液链球菌 (Streptococcus salivarius), 麻疹孪生球菌 (Gemella morbillorum), 少酸链球菌 (Streptococcus acidominimus), 气球菌 (Aorococcus), 链球菌 (Streptococcus pneumoniae), 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus), 表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis), 腐生葡萄球菌 (Staphylococcus saprophyticus), 人葡萄球菌 (Staphylococcus hominis) 沃氏葡萄球菌 (Staphylococcus warmeri), 缓慢葡萄球菌 (Staphylococcus lentus), 耳葡萄球菌 (Staphylococcus aurcularis), 模仿葡萄球菌 (Staphylococcus simulans), 27
科氏葡萄球菌 (Staphylococcus cohnii), 木糖葡萄球菌 (Staphylococcus xylosus), 松鼠葡萄球菌 (Staphylococcussciuri), 中间葡萄球菌 (Staphylococcus intermedius), 猪葡萄球菌 (Staphylococcus hyicus), 溶血葡萄球菌 (Staphylococcus haemolyticus), 头状葡萄球菌 (Staphylococcus capitis), 利斯特氏菌 (listeria species), 猪红斑丹毒丝菌 (Erysipelothrix rhusiopathiae), 化脓放线菌 (Actinomyces pyogenes), 溶血隐秘杆菌 (Arcanobacterium haemolyticum), 干燥棒杆菌 (Corynebacterium xerosis) 棒杆菌 (Corynebacterium species) 45 分类单位 28
第六章 厌氧菌鉴定卡 (A N I) 1- 产品说明书 产品名称 VITEK 厌氧菌鉴定卡 (VITEK ANI) 产品参考书目 V1309 预期应用与 VITEK 系统相连用的厌氧菌的鉴定卡套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书贮存 2-8 0 C 附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明测定数目 28 分类单位数目 9 菌落接种量 接种方式 3 McF 自动 培养 37 0 C ( 其它培养器 ) 读 / 解释结果 手册 29
2- 预期应用 * 厌氧和微好氧细菌 ( 革兰氏阳性和阴性 ) 鉴定 * 乳酸菌鉴定 * 有补充实验资料 (SRF), 可用于微球菌的鉴定 30
3 - 方法 厌氧菌 / 微球菌 培养基 = Columbia/TSA+ 5% 羊血 1.8ml Vitek 溶液 3-4MacF (> 比浊仪黄色范围 ) 接种 ANI 鉴定卡 其它培养器 37 0 C 竖置 4 h 内以肉眼读结果 用手持观察器, 按说明书进行 ( 生物分析 ) 31
4- 故障排除 接种后 : 鉴定卡接种和培养之间的时间不应超过 20 分钟 当读 21# 杯结果时, 为避免混淆, 应竖置鉴定卡 杯 壁有少量沉淀, 应作为阴性结果 结果介释 : 以没有碳水化合物的 #29 杯作为阴性对照, 与测定杯 #24-28 相比较, 得到利用与否的结果 32
5 - 数据库 能鉴定的厌氧和微好氧细菌成员包括 : 牛放线菌 (Actinomyces bovis), 衣氏放线菌 (Actinomyces isrelii), 麦尔放线菌 (Actinomyces meyeri), 龋齿放线菌 (Actinomyces odontolyticus), 化脓放线菌 (Actinomyces pyogenes), 粘放线菌 (Actinomyces viscosus), 溶血隐秘杆菌 (Arcanobacterium haemolyticum), 粪拟杆菌 (Bacteroides caccae), 多毛拟杆菌 (Bacteroides capillosus), 吉氏拟杆菌 (Bacteroides distasonis), 埃氏拟杆菌 (Bacteroides eggerthii), 脆弱拟杆菌 (Bacteroides fragilis), 拟屎拟杆菌 (Bacteroides merdae), 卵形拟杆菌 (Bacteroides ovatus), 粪便拟杆菌 (Bacteroides stercoris), 多形拟杆菌 (Bacteroides thetaiotaomicron), 单形拟杆菌 (Bacteroides uniformis), 解脲拟杆菌 (Bacteroides uerolyticus), 普通拟杆菌 (Bacteroides vulgatus), 双歧杆菌 (Bifidobacterium species), 二氧化碳嗜纤维菌 (Capnocytophaga species), 双酶梭菌 Clostridium bifermentans), 肉毒梭菌 (Clostridium botulinum), 丁酸梭菌 (Clostridium butyricum), 尸毒梭菌 (Clostridium cadaveris), 梭状梭菌 (Clostridium clostridiioforme), 艰难梭菌 (Clostridium difficile), 矛形梭菌 (Clostridium hastiforme), 溶组织梭菌 (Clostridium histolyticum), 无害梭菌 (Clostridium innocuum), 33
泥渣梭菌 (Clostridium limosum), 巴氏梭菌 (Clostridium baratii), 类腐败梭菌 (Clostridium paraputrificum), 产气荚膜梭菌 (Clostridium perfringens), 多枝梭菌 (Clostridium ramosum), 败毒梭菌 (Clostridium septicum), 索氏梭菌 (Clostridium sordellii), 生孢梭菌 (Clostridium sporogenes), 近端梭菌 (Clostridium subterminale), 第三梭菌 (Clostridium tertium), 破伤风梭菌 (Clostridium tetani), 白喉棒杆菌 (Corynebacterium diphteriae), 假结核棒杆菌 (Corynebacterium pseudotuberculosis), 棒杆菌 JK 群 (Corynebacterium group JK), 产气真杆菌 (Eubacterium aerofaciens), 迟缓真杆菌 (Eubacterium lentum), 粘液真杆菌 (Eubacterium limosum), 死亡梭杆菌 (Fusobacterium mortiferum), 坏死梭杆菌 (Fusobacterium necrophorum), 具核梭杆菌 (Fusobacterium nucleatum), 可变梭杆菌 (Fusobacterium varium), 麻疹孪生球菌 (Gemmella morbillorum), 嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus), 干酪乳杆菌 (Lactobacillus casei), 链状乳杆菌 (Lactobacillus catenaforme), 纤维二糖乳杆菌 (Lactobacillus cellobiosus), 发酵乳杆菌 (Lactobacillus fermentum), 詹氏乳杆菌 (Lactobacillus jensenii), 小乳杆菌 (Lactobacillus minutis), 厌氧消化链球菌 (Peptostreptococcus anaerbius), 不解糖消化链球菌 (Peptostreptococcus asaccharolyticus), 产吲哚消化链球菌 (Peptostreptococcus indolicus), 大消化链球菌 (Peptostreptococcus magnus), 微小消化链球菌 (Peptostreptococcus micros), 普氏消化链球菌 (Peptostreptococcus prevotii), 34
四联消化链球菌 (Peptostreptococcus tetradius), 不解糖卟啉单胞菌 (Porphyromonas asaccharolyticus), 牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonas gingivalis), 二路普雷沃氏菌 (Prevotella bivia), 颊普雷沃氏菌 (Prevotella buccae), 人体普雷沃氏菌 (Prevotella corporis), 解糖胨普雷沃氏菌 (Prevotella disiens), 中间普雷沃氏菌 (Prevotella intermedia), 洛氏 / 栖牙普雷沃氏菌 (Prevotella loescheii/denticola), 产黑普雷沃氏菌 (Prevotella melaninogenica), 口腔普雷沃氏菌 (Prevotella oralis), 口普雷沃氏菌 (Prevotella oris), 疮疱丙酸杆菌 (Propionibacterium acnes), 颗粒丙酸杆菌 (Propionibacterium granulosum), 解糖葡萄球菌 (Staphylococcum saccharolyticus), 星群链球菌 (streptococcus constellatus), 中间链球菌 (streptococcus intermedius) 小韦荣氏菌 (Veillonella parvula) 微球菌鉴定用补充测定指导文件 : 橙黄微球菌 / 里拉微球菌 (Micrococcus luteus/micrococcus lylae), 克氏考克氏菌 (Kocuria kristinae), 西宫皮生球菌 (Dermacoccus nishinomyaensis), 坐皮肤球菌 (Kytococcus sedentarius) 变化考克氏菌 (Kocuria varians) 35
6- 微球菌鉴定 1999 年 10 月 26 日宣布微球菌鉴定可以用厌氧菌鉴定卡 (V1309) 和 补充测定指导 (SRF), 在 ANI/SRF 数据库中可增加以下的菌 : 橙黄徽球菌 / 里拉微球菌 (Micrococcus luteus/micrococcus lylae) 克氏考克氏菌 (Kocuria kristinae) 西宫皮生球菌 (Dermacoccus nishinomiyaensis) 坐皮肤球菌 (Kytococcus sedentarius) 变化考克氏菌 (Kocuria varians) 描述 ANI 鉴定卡的测定是基于微生物对特殊底物的分解和各种指示剂的 检测 参见 ANI 包装内技术公报 (#07170-6) 的增加资料 补充测定资 料 (SRF) 允许工业试验室扩展 VITEK ANI BAC GNI GPI NFC NHI 和 YBC 各个工业需要的测定资料, 可见技术公报 (007178-2) 的增补资 料 程序 分离和培养微球菌培养物, 培养物悬液浓度达 #4McF 水平 接种 ANI 鉴定卡, 置 35-37 0 C 不密封培养器内, 培养 4h 可用肉眼 读结果 除未包括在鉴定卡之内的革兰氏染色阴性 杆状和吲哚不变化 外, 还需根据 ANI 鉴定卡的结果 参见表 #1 36
以下是我们测定的每个种的生物菌群和它们产生的生物码 我们推 荐您应用这些数据作为您来构建和合法化您自已的 ANI/SRF 数据库的 导线 表 1 橙黄微球菌 / 里拉微球菌 (Micrococcus luteus / Micrococcus lylae) 以数码表示的 8 橙黄微球菌 (Micrococcus luteus) 以数码表示的 3 里拉微球菌 (Micrococcus lylae) 生物码 (IND-R04.1) Text 生物码 (VTK-R03.01) GUI 重复次数 61000740004 3400071000 2(M.lylae) 01000740004 0400071000 12(M.lylae) 41000741004 1400074100 2(M.lylae) 01000750004 0400075000 12(M.luteus) 01000550004 0400055000 3 (M.luteus)) 01000561004 0400053400 2(M.luteus) 01000710004 0400074000 1 (M.luteus) 克氏考克氏菌 (Kocuria kristinae) 3 个分离物提出的编码 生物码 (IND-R04.1) Text 生物码 (VTK-R03.01) GUI 03000741404 0600071410 4 63000741404 3600071410 2 23000741404 2600071410 1 43000741404 1600071410 1 12020741404 4202071410 2 72020741404 7202071410 1 52020741404 5202071410 1 32010741404 6202071410 1 重复次数 37
西宫皮生球菌 (Dermacoccus nishinomyaensis) 1 个分离物提出的编码 生物码 (IND-R04.1) Text 生物码 (VTK-R03.01) GUI 01010551004 0404055400 4 01010541004 0404051400 4 43010551044 1604055401 2 重复次数 坐皮肤球菌 (Kytococcus sedentarius) 3 个分离物提出的编码 生物码 (IND-R04.1) Text 生物码 (VTK-R03.01) GUI 61002740004 3400271000 3 21000740004 2400071000 8 21002740004 2400271000 10 重复次数 变化考克氏菌 (Kocuria varians) 3 个分离物提出的编码 生物码 (IND-R04.1) Text 生物码 (VTK-R03.01) GUI 02000551004 0200055400 1 11020551004 4402055400 1 00000551004 0000055400 1 01000513004 0400054600 1 01000503004 0400050600 1 01000543404 0400051610 1 01000551004 0400055400 1 01000111004 0400044400 4 重复次数 38
ANI/SRF 结合将允许您建立用于难鉴定的微球菌和其它环境分离物的 SRF 数据库 这方法可流水型测定, 同时可邦您省去用于重新测定或 其它测定方法所需要的时间和金钱 39
第 7 章 酵母菌鉴定卡 (Y B C) 1- 产品说明书 产品名称 VITEK 酵母菌的鉴定卡 (YBC) 产品参考书目 V1303 预期应用与 VITEK 系统相连用的酵母菌的鉴定卡套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液管 1 本试卡说明书贮存 2-8 0 C 附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明测定数目 26 分类单位数目 36 菌落选择 接种量 接种方式 酵母菌 2McF 自动 培养 30 0 C ( 其它培养器 ) 读 / 解释结果 自动 40
2- 预期应用 * 基于碳水化合物同化作用的酵母菌鉴定 41
3- 方法 酵母菌 培养基 =Sabouraud 琼脂 1.8ml Vitek 溶液 2MacF ( 比色计绿圈 ) 接种 YBC 鉴定卡培养 48 h 其它培养器 30 0 C,24 或 48 h 内以端点读器观察结果 42
4 - 故障排除 接种后 : 为避免在杯底有酵母的沉淀, 应将鉴定卡水平放置 结果介释 : 24h 后, 如果葡萄糖 #24 杯还是阴性的话, 则在报告单上告 知 : 30 0 C 继续培养 24h 48h 后, 如果葡萄糖 #24 杯仍是阴性的话, 分离物可能不 是酵母菌 绝大多数酵母菌是同化葡萄糖的, 然而也有极 少菌株在 YBC 葡萄糖培养基不能很好生长, 但能在 Sabou- raud 葡萄糖琼脂上生长则被称之为 不能鉴定的菌 43
5- 数据库 头状芽裂酵母 (Blastochizomyces capitatus) 白假丝酵母 (Candida albicans), 无名假丝酵母 [(Candida famata; 白球拟酵母 (T. Candida)], 平滑假丝酵母 [ (Candida glabrata); 平滑球拟酵母 (T. glabraata)], 季也蒙假丝酵母 (Candida guillermondii), 土生假丝酵母 (Candida humicola), 克鲁斯假丝酵母 (Candida kusei), 郎比可假丝酵母 (Candida lambica), 假热带假丝酵母 (Candida pseudotropicalis), 皱落假丝酵母 (Candida rugosa), 星形假丝酵母 (Candida stellatoidea), 热带假丝酵母 (Candida tropicalis), 涎沫假丝酵母 (Candida zeylanoides), 新型隐球酵母 (Crptococcus neoformans), 地生隐球酵母 (Crptococcus terreus), 指甲隐球酵母 (Crptococcus uniguttulatus), 白地霉 (Geotrichum candidum), 青地霉 (Geotrichum penicillatum), 异常汉逊酵母 (Hansenula anomala), 奥默毕赤酵母 (Pichia ohmeri), 维克汉姆园孢囊菌 (Prototheca wickerhamii), 佐氏园孢囊菌 (Prototheca zopfii), 粘红酵母 (Rhodotorula glutinis), 果蝇红酵母 (Rhodotorula pilimanae), 深红酵母 (Rhodotorula rubra), 酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae), 赭色掷孢酵母 (Sporobolomyces salmonicolor), 白吉利丝孢酵母 (Trichosporon beigelii), 茁芽丝孢酵母 (Trichosporon pullulans), 解脂亚罗酵母 (Yarrowia lipolytica) 36 分类单位 44
第 8 章 一般介绍 О 纯化和新鲜分离物 24 h 最大生长量 О 适用琼脂避免抑制生长培养基 О 园柱形 VITEK 比色计读数必需小数点后一位 О 适用的外加测定 О 重复号如果同一产品得到不同的菌落, 则用分离号予以区分 О 检查灌满度在鉴定卡的杯中没有气泡 О 检查悬浮液严格控制 VITEK 悬浮液的无菌 О 需在注满后 20 分钟之内, 置鉴定卡在阅读器 / 培养器中 45
第 9 章 生物计数 (BIOBURDEN) 1- 产品说明书产品名称 VITEK 生物计数 (VITEK BIOBURDEN) 产品参考书目 V1103 预期应用与 VITEK 系统相连用的计数卡 (MPN 原则 ) 套装内容 20 个鉴定卡 20 个移液白色管 1 本试卡说明书贮存室温附件管 75 X 12mm 安瓿砂轮带附件的 Vitek 系统 产品说明杯的数目 接种 接种方式 30 个含乾燥的生长培养基 干净的液体样品 自动 培养 35.5 0 C 读 / 解释结果 自动 46
2 - 预期应用 * 应用 : 清亮和无色素溶液的计数控制 VITEK 悬浮液水的对照 ( 小体积 ) * 范围 : 5-80 个细胞 /ml 的计数运动性强的菌含有一个菌以上样品的生长量的测定 不透明的液体, 在样品中有抑制物, 阴性结果不能介释为无菌, 但可介释为 <1.2 细胞 /ml 47
3- 方法 计数样品充分摇匀 如果需要稀释, 可用 0.45-0.50 %NaCl 1.8ml 样品置于 12 X 75mmVitek 管中 〇 VITEK 以白色移液管 ( 不要前后搅动 ) 灌注 〇封闭后, 弃移液管, 在 30 分钟内, 置该鉴定卡于读器 - 培养室 〇 24-48h 内读结果 〇最大可能数 (Most Probable Number; 简称 MPN) 这是测定液体样品中菌数的一种统计学的方法 MPN 值具有检测检查时间时阳性杯数的功能 该值可从专制的表格中查到校正值 〇 mpn 表格 表格包括阳性杯数和相应最大可能的菌数 ( 见图 ) 〇 mpn 时间 表格包括测定时最大可能菌数 (MPN) 的计数 纵座标是阳性杯的数目, 横座标是菌数 /ml 48
4- 数据库 BIOBURDEN 鉴定卡的功能已被一系列稀释的培养物所证实, 这些培养物主要有以下的种 : 不动杆菌 (Acinebacter spp.), 产碱菌 (Alcaligenes spp.), 芽胞杆菌 (Bacillus spp.), 白色假丝酵母 (Candida albbicans), 黄杆菌 (Flavobacterium spp.), 假单胞菌 (Pseudomonas spp.), 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus), 链球菌 (Streptococcus spp.), 各种肠杆菌科 (Enterobacteriaceae) 的菌群 〇范围 : 由于培养室的温度为 35.5 0 C, 因此, 对传代时间超过 100 分 钟的菌就不可能精确的计数 萤光假单胞菌 (Pseudomonas fluorescens), 恶臭假单胞菌 (Pseudomonas putida) 和腐败假单胞菌 (Pseudomonas putrefaciens), 其它温度敏感的菌也会遇到的, 可用 49
5- 技术介绍〇注意点当操作的样品十分混浊或有色素的液体和高污染的样品必需要稀释, 但无菌技术必需跟上 样品必需充分混和 〇合适的稀释液应该用 0.45-0.50% 的无菌 NaCl 溶液, 不要用 VITEK 稀释液 〇检查灌满度在鉴定卡中无气泡 〇在灌满 30 分钟之内, 置鉴定卡于读数 / 培养器中 50