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1 在农场依靠快速培养系统依据病原来做关于乳腺炎治疗的决策 S. Godden, E. Royster, J. Timmerman College of Veterinary Medicine, University of Minnesota St. Paul, MN

2 临床乳腺炎案例的选择性治疗 提纲 理性选择目标性的抗微生物治疗 使用精准猪场培养系统来指导临床乳腺炎治疗的决策 研究结果 : 使用快速培养系统来选择性的治疗临床乳腺炎案例

3 乳腺炎仍然是一个挑战 乳腺炎继续成为奶牛场最花成本的感染性疾病 (Riekerink et al., 2007; Sargeant et al., 1998; Erskine et al., 1988; Fetrow et al., 2010; Erskine et al., 2003) 奶牛场中使用的绝大部分的抗生素和乳腺炎的预防或治疗相关 (Pol and Ruegg, 2007) 目标 : 促进药物审慎 / 谨慎的使用同时最大化治疗效果 只在需要时使用抗生素 依据引起疾病的细菌适当的进行靶向治疗

4 做出战略决策 战略决策的制定应能保持优秀的牛奶质量和高产量, 减少抗生素使用和减少抗生素残留风险 不治疗 淘汰 隔离 使乳房干奶 需要相关信息找到感染母! 牛 治疗 哺乳期的治疗 干奶治疗

5 病史 + 体细胞计数 + 培养 最佳实践 = 依据母牛的病史和细菌培养情况做出单独治疗或管理决定 一些乳腺炎的案例不需要使用抗生素也能治愈 一些乳腺炎的案例无论如何都无法治愈 目标 : 只对临床乳腺炎案例中抗生素治疗有效的案例使用抗生素

6 引起哺乳期奶牛临床乳腺炎的原因 Etiology (% of samples) 病原 参考文献 NG 阴性 CNS 凝固酶阴性葡萄球菌 S. aureus 金黄色葡萄球菌 Strep ag 无乳链球菌 Env Strep 环境链球菌 Colif 大肠杆菌 Other 其它 Riekerink et al., Sargeant et al., Erskine et al., Erskine et al., No growth Gram-Pos Gram-Neg

7 Cause of Clinical Mastitis in Lactating Cows Etiology (% of samples) References NG CNS S. aureus Strep ag Env Strep Colif Other Riekerink et al., Sargeant et al., Erskine et al., Erskine et al., No growth Gram-Pos Gram-Neg

8 阴性培养结果 没有长微生物 =20%-40% 临床案例中采集的乳汁不会生长细菌 错误的阴性 ( 较少 ): 灵敏度不能够检测零星的细菌 存的微生物不能在培养介质或培养环境中生长 ( 比如支原体 ) 真实的阴性 ( 大多数情况 ) 采牛奶样的时候奶牛已经成功清除了细菌 ( 很可能 / 好比如大肠杆菌 ) 没有感染存在 没有乳房内治疗

9 革兰氏阴性菌感染 治疗或者不治疗 温和 / 中度的革兰氏阴性菌引起的乳腺炎有很高的自然治愈率 (Guterbock et al., 1993; Morin et al., 1998; Wilson et al., 1999) vs 一些研究表明通过治疗或者是延长治疗有高的细菌治愈率, 但是在临床治愈率或早期哺乳期表现方面没有差异 (Schukken et al., JDSci ; Schukken et al., JDSci ) 需要考虑的因素 大肠杆菌 VS 克雷伯氏杆菌 E. coli expect up to 90-95% spontaneous cure rate (Schukken et al., 2004; Döpfer et al., 1999) 大肠杆菌被认为有 90-95% 的自然治愈率 Klebsiella expect 35-40% spontaneous cure Pinzón-Sánchez et al., 2011 克雷伯氏杆菌被认为有 35-40% 的自然治愈率 (E. coli) 任何提示慢性感染的指标 提议 : 对第一例革兰氏阴性菌引起的感染不要进行乳房内治疗 考虑治疗反复的案例

10 (Strep. uberis 乳房链球菌 ) 通常通过乳房内抗生素进行治疗 : 革兰氏阳性菌感染 凝固酶阴性葡萄球菌 非厌氧链球菌环境链球菌. 例如 : 乳房链球菌 无乳链球菌 金黄色葡萄球菌? 低治愈率 20%-30% 组织侵入性的程度, 一些抗生素的耐药性 考虑的其他因素 ( 比如体细胞计数和乳腺炎病史 ) 如果是慢性的还需要考虑其他选项 (Pinzón-Sánchez et al., 2011)

11 其他病原 支原体 绿藻和酵母对乳房内抗生素没有反应 对病原的了解对确保适当的靶标性的使用乳房内抗生素十分重要

12 培养数据 革兰氏阴性菌 + 没有生长的情况 =50-80% 的案例 - 也许不需要乳房内抗生素 如果我们只治疗革兰氏阳性菌感染我们能降低 50% 的乳房内抗生素使用 不同牛奶场和不同的季节的差异很高

13 如何获得培养数据 1. 商业化的诊断实验室 ( 大学或其他机构 ) 2. 牛场或兽医门诊培养

14 诊断实验室培养 准确的可信赖的鉴定任何种类细菌 使用培养加上生化或分子诊断来确定真正的细菌种类 能确定非细菌生物 : 酵母 绿藻等 缺点 : 获得结果慢 成本 样品运送不方便

15 牛场牛奶培养或当地临床兽医 无菌搜集牛奶样品在牛场被涂板 培养和分析 选择培养基能够在不需要其它测试的条件下确定细菌

16 牛场培养 是快速 便宜确定乳腺炎病因的方式, 比如 : 不长 = 不治疗 革兰氏阴性 = 不治疗 ( 有例外 ) 革兰氏阳性 = 治疗 ( 有例外 ) 局限 : 必须要时间 空间 员工 培训

17 牛场培养系统举例 3M 公司纸片法系统 快速金黄色葡萄球菌平板 大肠杆菌计数平板

18 牛场培养系统举例 明尼苏达大学的 MN Easy 培养系统 Factor MacConkey MTKT MacConkey Factor Bi-Plate, $1.80 Tri-Plate, $3.00

19 双板系统 在法克特培养基上面生长 ( 亮红色 )= 革兰氏阳性菌 比如金黄色葡萄球菌 链球菌属 芽孢杆菌 棒状杆菌 Factor MacConkey 在麦康凯培养基上面生长的 ( 粉红色, 半透明 )= 革兰氏阴性菌 比如大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 肠杆菌 沙雷氏菌

20 MN Easy : 三板系统 在 MTKT 培养基上面生长 ( 暗红色 )= 链球菌或链球菌样细菌比如链球菌 气球菌属 肠球菌 MTKT MacConkey 在麦康凯培养基上面生长的 ( 粉红色, 半透明 )= 革兰氏阴性菌 比如大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 肠杆菌 沙雷氏菌 Factor 在法克特培养基上面生长 ( 亮红色 )= 革兰氏阳性菌比如金黄色葡萄球菌 链球菌属 芽孢杆菌 棒状杆菌

21 提纲 临床乳腺炎案例的选择性治疗 理性选择目标性的抗微生物治疗 使用精准猪场培养系统来指导临床乳腺炎治疗的决策 研究结果 : 使用快速培养系统来选择性的治疗临床乳腺炎案例

22 例子 : 依据引起乳腺炎的病原采用目标性的治疗 检测临床乳腺炎 牛场培养

23 例子 : 依据引起乳腺炎的病原采用目标性的治疗 没有生长 没有乳房内抗生素 如果出现系统性症状采取支持性护理 和全身性抗生素治疗 牛场培养结果

24 例子 : 依据引起乳腺炎的病原采用目标性的治疗 牧场结果 无生长 革兰氏阴性大肠杆菌克雷伯氏杆菌 NO Intramammary antibiotic tx Supportive care and systemic antibiotics if systemic signs

25 例子 : 依据引起乳腺炎的病原采用目标性的治疗 牧场结果 无生长 Gram-negative - E. coli - Klebsiella NO Intramammary antibiotic tx Supportive care and systemic antibiotics if systemic signs 革兰氏阳性菌 : 链球菌 凝固酶阴性葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 使用批准的乳房内抗生素 如果出现系统性症状采取支持性护理 和全身性抗生素治疗

26 牛场培养的准确性如何? 很少有检测是 100% 准确的!

27 (Gram positive, Gram-negative, No growth) 一般水平能很好解释的情况下准确性较好 无生长 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性菌 如果你打算通过确定革兰氏阳性感染来使用乳房内抗生素, 准确性为 80-84%

28 使用三板来确定葡萄球菌 链球菌和金黄色葡萄球菌时准确性也可以 Environmental Strep. Staph Species (CNS) Staph aureus * 淘汰前需要第二次进行检测来确定 (moderate Positive Predictive Value = 55-80%)

29 测试表现在种类水平不好 : 不要尝试区分不同的种类 是大肠杆菌还是克雷伯氏菌 它是革兰氏阴性的 是乳房链球菌还是停乳链球菌? 它是革兰氏阳性菌, 链球菌

30 提纲 临床乳腺炎案例的选择性治疗 理性选择目标性的抗微生物治疗 使用精准猪场培养系统来指导临床乳腺炎治疗的决策 研究结果 : 使用快速培养系统来选择性的治疗临床乳腺炎案例

31 使用牛场培养来治疗乳腺炎研究的结果 牛场培养结果能帮助选择性治疗临床乳腺炎 Lago et al. (2011) Journal of Dairy Science 8 herds: MN, WI, ON (150 1,800 cows) 449 mild or moderate clinical mastitis cases

32 研究目标 评估依据牛场培养结果进行选择性治疗的效果 抗生素的使用 短期的乳房健康结果 长期的结果 ( 哺乳期体细胞计数, 牛奶产量, 旧病复发, 淘汰 )

33 方法 : 实验流程 实验方法 第二天 阳性对照组 革兰氏阳性 混合感染 实验组 没有生长 革兰氏阴性

34 方法 : 跟访 Enrollment (day 0) Grade 1 or 2 Clinical Mastitis Day 14 Day 21 Day 0 to 12 months Sample 1 Cefa-Lak IMM Sample 2 Sample 3 Follow-up Positive Control Group Culture in lab Treat quarter immediately after milk sample collected - Farm records: Clinical Mastitis Culture Based Group Culture on Farm Culture in lab Treat quarter only if on-farm culture shows Gram-pos IMI Culture in lab Culture in lab - DHIA records: SCC Milk production Culling/death events

35 抗生素的使用显著减少 阳性对照 100% 治料 依据培养结果组 44% 需要治疗 延期和再次治疗情况减少 阳性对照 36% 依据培养结果组 19% 结果 : 短期结果 出病房的天数减少的趋势 阳性对照 =5.9 天 依据培养结果组 =5.2 天

36 治疗项目之间没有差异 临床治疗的天数 细菌学治愈 临床型乳房炎复发 体细胞计数 牛奶生产 扑杀或死亡 结果 : 长期结果 等候 24 小时与最开始治疗相比没有消极影响

37 总结 我们应该考虑奶牛因素和病原因素后靶向进行乳房内的抗生素治疗 快速的培养系统, 牛场或当地兽医临床设立的, 能指导临床乳腺炎治疗决策 不改变获得成功治疗可能性的同时, 培养结果指导的治疗决策能减少 50% 的抗生素使用量和减少牛奶的浪费

38 谢谢! 问题?

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