Yearbook of Chinese Medicine and Pharmacy, 25 (1), 239-256, 2007 中 醫 藥 年 報 第 25 期 第 1 冊 編 號 :CCMP93-RD-045 台 灣 產 茜 草 科 植 物 美 白 作 用 之 篩 選 溫 國 慶 中 國 醫 藥 大 學 摘 要 多 酚 類 化 合 物 具 有 抗 氧 化, 捕 捉 自 由 基 等 作 用 茜 草 科 植 物 富 含 多 酚 類 成 分, 本 計 畫 就 下 列 所 載 台 灣 產 茜 草 科 植 物 選 出 11 種, 如 玉 葉 金 花 (Mussaenda parviflora MATSUM) 林 氏 茜 草 (Rubia linii Chao) 小 梔 子 (Gardenia jasminoides Ellis f. radicans (Thunb.) Makino) 山 梔 子 (Gardenia jasminoides Ellis) 白 花 蛇 舌 草 ( 珠 仔 草, Hedyotis diffusa Willd.) 賣 子 木 (Ixora stricta Roxb.) 雞 屎 藤 (Paederia scandens) 水 線 草 (Hedyotis corymbosa (L.) LAM.) 九 節 木 (Psysbotria rubra (LOUR.) POIR.) 咖 啡 (Coffea arabica Linn.) 檄 樹 (Morinda citrifolia L.) 等 雞 屎 藤 乾 燥 植 物 以 正 己 烷 萃 取, 殘 渣 再 以 乙 酸 乙 酯 萃 取, 其 殘 渣 再 以 甲 醇 萃 取 濃 縮 液 經 濃 縮 至 乾 供 試, 其 他 植 物 以 甲 醇 萃 取, 濃 縮 供 酪 胺 酸 酶 活 性 抑 制 試 驗 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性 之 篩 選, 依 次 以 :(1) 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 ;(2) 酪 胺 酸 酶 抑 制 率 試 驗 ;(3) 以 B16 黑 色 素 瘤 細 胞 測 定 萃 取 物 抑 制 其 酪 胺 酸 酶 合 成 DOPA quinone 之 作 用 篩 選 結 果 各 低 極 性 及 高 極 性 溶 媒 萃 取 物 之 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性 均 低 於 熊 果 苷 然 甲 醇 萃 取 物 經 適 當 處 理 後 之 KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T 產 物, 發 現 具 有 活 性, 其 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性 就 抑 制 圈 而 言, 活 性 比 熊 果 苷 佳, 且 呈 濃 度 依 存 性 另 KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T 產 物, 對 B16 黑 色 素 瘤 細 胞 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 率, 分 別 為 熊 果 苷 (2.72mg/mL) 之 0.50 1.53 1.60 及 1.04 倍 具 有 開 發 具 美 白 作 用 成 分 之 潛 力 關 鍵 詞 : 茜 草 科 酪 胺 酸 酶 美 白 作 用 239
Number: CCMP93-RD-045 Screening of Rubiaceae Plants Produced in Taiwan for Whitening Kuo-Ching Wen China Medical University ABSTRACT Many plants of Rubiaceae are rich in polyphenols, a group of compounds possessing a variety of biological activities including anti-oxidation and free radical scavenging effects. In this project, 11 plants of Rubiaceae, which are grown in Taiwan, were selected and screened for whitening activity. These plants included Mussaenda parviflora MATSUM, Ixora stricta, Roxb, Rubia linii Chao, Gardenia jasminoides Ellis f. radicans (Thunb.) Makino, Gardenia jasminoides Ellis, Hedyotis diffusa Willd., Paederia scandens, Hedyotis corymbosa (L.) LAM., Psysbotria rubra (LOUR.) POIR, Coffea arabica Linn, and Morinda citrifolia. Paederia scandens was extracted with n-hexane. The residue was extracted with ethyl acetate, and then extracted with methanol. Each extract was concentrated. For other plants, methanol was used for extraction. All the concentrated solutions were subjected to tyrosinase activity inhibition tests. Three tests used for evaluating inhibition on tyrosinase activity included (1) tyrosinase activity inhibition zone, (2) the inhibition on tyrosinase activity measured by O.D. value, and (3) the inhibition on synthesis of DOPA quinone by tyrosinase in the presence of B 16 melanoma cell. The results indicated that the activities of all extracts from both non-polar and polar solvents were lower than arbutin. However, upon suitable treatment of various methanol extracts, the products KC-1T, KC-2T, KC-3T, and KC-4T showed higher activities than arbutin as compared with the inhibition zone test, and showed 240
dose dependency. Moreover, in the inhibition test on synthesis of DOPA quinone, higher inhibition was shown for KC-1T by 1.53-fold, KC-2T by 0.5-fold, KC-3T by 1.6-fold, and KC-4T by 1.04-fold when compared with arbutin. Through this investigation, products from target plants might be developed as whitening agents. Keywords:Rubiaceae, tyrosinase, whitening 241
壹 前 言 一 白 遮 三 醜, 亦 即 白 就 是 美, 在 東 北 亞 國 家 的 民 族 受 此 觀 念 之 影 響 甚 深, 故 美 白 化 妝 品 更 為 消 費 者 所 熱 衷, 化 妝 品 研 發 製 造 業 者 更 是 投 入 無 數 的 人 力 物 力 探 討 開 發 美 白 成 分 近 年 來 對 引 起 皮 膚 色 素 沈 著 的 機 (1) 制 有 很 大 的 突 破, 已 知 如 皮 膚 因 紫 外 線 照 射 而 促 進 黑 色 細 胞 分 泌 成 長 因 子 -paracrine autocrine 的 作 用 而 誘 發 色 素 沈 著 此 等 作 用 的 活 化 因 子 如 α-msh(melanocyte-stimulating hormone),et-1(endothelin-1) 及 與 發 炎 有 關 的 chemical mediator-scf(stem cell factor)/cj-kit 再 者, superoxide anion radical( O2-) 對 於 黑 色 素 生 合 成 速 率 之 決 定 性 階 段, 即 酪 胺 酸 藉 由 酪 胺 酸 酶 之 羥 基 化 (hydroxylation) 形 成 DOPA, 以 及 DOPA quinone 之 氧 化 過 程, 都 有 促 進 作 用 (2), 另 外 在 melanosome 從 melanocyte 向 keratinocyte 的 移 行 過 程 中, 於 keratinocyte 發 現 protease-activated receptor 2(PAR2) 介 入 melanocyte-keratinocyte interaction, 也 與 色 素 沈 著 有 關 (3) 另 外 對 於 黑 色 素 的 生 合 成 有 關 的 酪 胺 酸 酶 的 抑 制 作 用, 更 是 近 年 來 美 白 劑 開 發 的 重 點 有 關 美 白 劑 之 開 發, 福 島 氏 等 (4), 曾 就 外 台 秘 要 方 本 草 綱 目 記 載 對 肝 斑 雀 斑, 改 善 黑 色 皮 膚 之 處 方 中, 使 用 頻 率 高 的 33 種 中 藥 進 行 是 否 阻 斷 酪 胺 酸 酶 活 性 探 討, 結 果 發 現 烏 梅 桂 皮 蔓 荊 子 山 茱 萸 夏 枯 草 等 5 種 具 有 強 的 酪 胺 酸 酶 活 性 阻 斷 作 用, 並 自 桂 皮 分 離 出 cinnamalehyde, 蔓 荊 子 的 p-hydroxy benzoic acid,p-anisic acid 等 活 性 阻 (5) 斷 成 分 P. Bernard 等 亦 發 表 Stryphnodendron barbatimao Portulaca pilosa Cariniana brasiliensis Entadad africana and Prosopis africana 等 五 種 熱 帶 性 植 物 萃 取 物 具 有 抑 制 酪 胺 酸 酶 之 活 性 Wu (6) 等 亦 報 告 紅 花 (Crocus sativus) 具 抑 制 酪 胺 酸 酶 之 活 性, 含 crocusatin-k 及 crocusatin-l (7) 成 分 Shim 等 亦 報 告 自 Zanthoxylum piperitum 分 離 出 之 槲 皮 素 (8) (Querceitn) 具 抑 制 酪 胺 酸 酶 之 活 性 另 據 伊 藤 氏 報 告, 益 母 草 抽 出 物 具 抑 制 黑 色 素 生 成 作 用 又 Maeyama (9) 報 導 Waltherica indica (Sterculiaceae) 萃 取 物 具 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性 作 用, 其 成 分 為 黃 酮 類 (10) catechic tannin 及 含 phenolic acid 衍 生 物 據 高 木 氏 報 告 Jatoba 果 皮 抽 出 物 可 應 用 作 為 美 白 劑, 其 作 用 機 制 為 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性, 其 有 效 成 (11) 分 為 procyanidin 又 據 橋 爪 氏 報 告 橘 皮 抽 出 物 對 黑 色 素 生 成 具 抑 制 作 用, 其 作 用 機 制 主 要 為 抑 制 酪 胺 酸 酶 之 生 合 成, 經 分 離 其 有 效 成 分 為 tangeretin 及 nobiletin, 兩 者 均 為 含 有 多 個 methoxy 之 黃 酮 類 成 分 242
由 上 述 文 獻 報 導, 尤 其 是 近 年 之 資 料 顯 示, 含 多 酚 類 化 合 物 因 其 具 有 抗 氧 化, 捕 捉 自 由 基 等 作 用, 而 備 受 重 視 另 一 方 面 為 開 發 本 土 產 之 植 物 以 提 高 其 經 濟 價 值, 不 若 中 藥 之 開 發, 來 源 較 不 會 被 大 陸 所 掌 控, (12) 為 近 年 來 政 府 所 傾 向 的 政 策 據 文 獻 查 詢, 茜 草 科 之 被 苞 仙 丹 花 (Michelia champaca) 含 黃 酮 類 成 分 檄 樹 (13) (Morinda citrifolia) 葉 含 flavonol glycosides, 剛 果 咖 啡 (14) (Coffea robusta) 含 chlororgenic acid,catechin 含 多 酚 類 成 分, 顯 示 茜 草 科 之 植 物 富 含 多 酚 類 成 分, 極 具 開 發 價 值 243
貳 材 料 與 方 法 一 茜 草 科 植 物 之 採 集 及 處 理 山 梔 子 採 集 自 台 中 市 大 坑 風 景 區 ; 而 多 花 水 線 草 白 花 蛇 舌 草 則 採 集 自 台 中 縣 霧 峰 鄉 農 業 試 驗 所 附 近 稻 田 ; 至 於 鉤 藤 則 來 自 屏 東 縣 恆 春 地 區, 林 氏 茜 草 採 自 南 投 縣 鹿 谷 鄉 溪 頭 森 林 遊 樂 區 ; 九 節 木 及 玉 葉 金 花 則 採 自 於 台 中 市 科 博 館 附 近 ; 賣 子 木 採 自 於 台 南 縣 仁 德 鄉 ; 另 咖 啡 檄 樹 小 梔 子 購 自 園 藝 店 植 物 經 檢 視 剔 除 混 雜 物 及 其 他 植 物 後, 置 烘 箱 以 低 於 50 之 溫 度 烘 1-2 天, 烘 乾 後 均 予 以 秤 重 並 紀 錄 重 量, 置 於 4 冰 箱 保 存 二 植 物 鑑 定 ( 一 ) 外 部 形 質 鑑 別 利 用 五 官 檢 查 法 並 配 合 立 體 顯 微 鏡 觀 察 ( 二 ) 內 部 構 造 鑑 別 利 用 徒 手 切 片 法, 將 材 料 進 行 橫 切 (Transverse section; X.S.) 放 射 性 縱 切 (Radial longitudinal section;r.l.s.) 切 線 性 縱 切 (Tangential longitudinal section;t.l.s.) 與 表 面 切 (Surface section;s.s.) 等 以 切 片 刀, 切 取 近 10 μm 之 薄 片 檢 體 置 於 載 玻 片 上, 先 以 chloral hydrate solution 清 除 細 胞 內 含 物 後, 再 滴 加 各 種 不 同 化 學 試 劑, 例 如 phloroglucinol solution 與 hydrochloric acid 進 行 木 化 反 應, 或 滴 加 sudan Ⅲ solution 進 行 木 栓 化 反 應, 或 利 用 Schultze's 與 KOH maceration method 將 材 料 予 以 解 離, 最 後 以 glycerin:water(1:1) 混 合 溶 液 將 檢 體 封 鎖, 蓋 上 蓋 玻 片, 置 於 顯 微 鏡 下, 先 用 低 倍 鏡 檢 查 其 弱 擴 大 圖, 再 以 高 倍 鏡 觀 察 各 個 內 部 組 織 之 特 徵, 並 以 顯 微 測 微 計 測 量 各 組 織 或 細 胞 之 大 小, 同 時 利 用 顯 微 攝 影 技 術 將 鑑 別 所 需 組 織 照 相, 記 錄 觀 察 結 果, 並 利 用 描 繪 器 及 電 腦 和 周 邊 設 備 等 製 成 附 加 標 記 之 組 織 圖, 生 藥 組 織 略 字 說 明 如 表 ( 三 ) 結 果 分 析 利 用 顯 微 攝 影 技 術 記 錄 觀 察 結 果, 並 以 電 腦 軟 體 製 作 組 織 鑑 別 圖 244
三 植 物 萃 取 及 處 理 雞 屎 藤 乾 燥 植 物 50g 以 正 己 烷 萃 取, 殘 渣 再 以 乙 酸 乙 酯 萃 取, 之 後 殘 渣 再 以 甲 醇 萃 取 各 萃 取 液 進 行 減 壓 濃 縮 至 乾 其 他 植 物 各 約 取 10g, 加 適 量 甲 醇 浸 潤 (UP 級 ) 後, 以 超 音 波 震 盪 萃 取 二 次, 合 併 兩 次 濾 液 進 行 減 壓 濃 縮 至 乾 取 適 量 萃 取 之 檢 品, 以 適 當 溶 媒 溶 解 後, 經 進 一 步 處 理 供 試 四 酪 胺 酸 酶 活 性 抑 制 試 驗 : 酪 胺 酸 - 酪 胺 酸 酶 (15) (tyrosine-tyrosinase) 體 外 試 驗 系 統 ( 一 ) 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 取 自 mushroom 之 酪 胺 酸 酶 (2400u/mL) 置 於 洋 菜 培 養 基, 培 養 基 之 組 成 : 純 水 (97.5%),L-tyrosine(0.08%),Agar(2.0%),Phenoxyethanol(0.4%), 次 將 測 試 檢 品 與 對 照 品 (kojic acid, arbutin) 載 於 濾 紙 片 後 置 於 培 養 基 上 培 養 3 小 時 後, 比 較 抑 制 圈 之 大 小 (15) ( 二 ) 酪 胺 酸 酶 抑 制 率 試 驗 取 sample 1.8mL, 加 入 McIlvaine buffer(buffer 組 成 :0.2M Na 2 HPO 4,0.1M Citric acid,ph 值 調 為 6.8)2mL 及 0.03% Tryosine 2mL 混 合, 置 37 之 恆 溫 震 盪 槽 中 震 盪 後, 加 2400u/mL Tyrosinase 0.2mL 反 應, 以 紫 外 光 - 可 見 光 分 光 光 度 計 (Spectrophotometer UV-160A) 檢 測 其 在 475nm 之 吸 光 度 另 外 製 備 不 含 tyrosinase 之 空 白 對 照 組 (A 0 ), 另 製 備 控 制 組 (A b ), 實 驗 步 驟 與 sample 組 相 同, 僅 以 等 體 積 buffer 取 代 sample 另 分 別 以 熊 果 苷 (arbutin)sample 溶 液 當 成 正 對 照 組 (positive control group) 測 試 檢 品 溶 液 於 37 震 盪 30 分 鐘 後, 於 475nm 測 定 O.D. 值, 與 對 照 品 比 對 評 估 之 若 前 兩 項 試 驗, 顯 現 對 酪 胺 酸 酶 有 抑 制 作 用 者, 繼 續 進 行 下 列 之 試 驗 ( 三 ) 以 B16 黑 色 素 瘤 細 胞 測 定 萃 取 物 抑 制 其 酪 胺 酸 酶 合 成 DOPA (16) quinone 之 作 用 小 鼠 黑 色 素 瘤 細 胞 (Mouse melanoma) 購 自 財 團 法 人 食 品 工 業 發 展 研 究 所 於 12-well plate 置 入 4 10 5 cell/well 細 胞, 以 DMEM 培 養 液 培 養 (90% Dulbecco's modified Eagle's medium 含 245
有 4mM L-glutamine adjusted 1.5g/L sodium bicarbonate 4.5g/L glucose 10% fetal calf serum), 培 養 24 小 時, 加 入 植 物 萃 取 物 培 養 24 小 時 後, 加 含 0.5% Tritox X-100 的 磷 酸 緩 液 (50mM, ph 6.9)300μL 溶 解 後, 置 於 -80,30 分 鐘 後 取 出 置 室 溫 (25 )25 分 鐘, 之 後 於 37 放 置 5 分 鐘 每 孔 加 入 含 有 4%(V/V) N,N-dimethylacetamide 之 受 質 溶 液 2.85mL( 含 6.3mM MBTH, 3-methyl-benzothiazolinone hydrazone, 1.1mM L-dopa in 48mM sodium phosphate buffer solution, ph 7.1), 於 37 反 應 60 分 鐘 後, 以 紫 外 光 - 可 見 光 分 光 光 度 計 (Spectrophotometer UV-160 A) 於 波 長 508nm 測 定 其 O.D. 值 246
參 結 果 與 討 論 一 植 物 之 採 集 與 鑑 定 本 研 究 之 茜 草 科 植 物 經 五 官 與 顯 微 鑑 定 結 果 如 下 : ( 一 ) 外 觀 性 狀 鑑 別 茜 草 科 植 物 為 草 本 灌 木, 葉 對 生 具 明 顯 托 葉, 花 成 漏 斗 狀 九 節 木 果 實 為 漿 果, 成 熟 成 紅 色 ; 玉 葉 金 花 為 攀 緣 灌 木, 具 白 色 變 態 花 瓣 旗 於 花 瓣 呈 黃 色 ; 梔 子 葉 亮 綠 花 白 具 強 烈 香 氣,5-12 月 生 黃 色 漿 果, 具 5-9 縱 紋 雞 屎 藤 為 藤 本, 葉 揉 碎 後 有 雞 屎 味, 外 披 棉 狀 白 毛, 花 淡 紫 茜 草 科 植 物 外 觀 見 圖 Fig. 1-1 至 Fig. 1-4 ( 二 ) 顯 微 鑑 別 植 物 之 切 片 如 材 料 與 方 法 所 載 步 驟 進 行, 其 結 果 舉 白 花 蛇 舌 草 為 例, 如 Fig. 2 二 酪 胺 酸 酶 活 性 抑 制 試 驗 ( 一 ) 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 雞 屎 藤 逐 次 以 正 己 烷 乙 酸 乙 酯 及 甲 醇 萃 取 各 種 溶 媒 抽 取 之 萃 取 物, 進 行 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗, 抑 制 圈 均 比 熊 果 苷 低 如 Table 1 因 此 其 他 植 物 先 改 以 甲 醇 抽 提 濃 縮, 進 行 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 預 試 驗, 結 果 所 有 之 甲 醇 萃 取 物 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 亦 均 比 熊 果 苷 低 如 Table 2 為 求 突 破, 因 此 將 各 甲 醇 萃 取 物 進 行 處 理 後, 再 進 行 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗, 結 果 有 四 種 處 理 產 物, 即 KC-1T KC-2T KC-3T 與 KC-4T 具 良 好 之 抑 制 效 果, 經 系 列 稀 釋 再 進 行 酪 胺 酸 酶 平 板 試 驗, 其 抑 制 圈 活 性 具 濃 度 依 存 性, 結 果 如 Fig. 3 及 Table 3 4 所 示 以 KC-2T 之 抑 制 效 果 最 佳, 甚 至 超 越 熊 果 苷 之 活 性 ( 二 ) 酪 胺 酸 酶 抑 制 率 試 驗 本 實 驗 進 行 吸 光 度 偵 測 時, 因 檢 品 本 身 於 吸 光 波 長 475nm 具 有 吸 收, 會 干 擾 檢 測, 致 使 本 實 驗 無 法 順 利 進 行 ( 三 ) 以 B16 黑 色 素 瘤 細 胞 測 定 萃 取 物 經 處 理 之 產 物 抑 制 其 酪 胺 酸 酶 合 成 DOPA quinone 之 作 用 以 小 鼠 黑 色 素 瘤 細 胞 經 培 養, 再 加 入 萃 取 物 處 理 產 物 培 養 後 247
洗 下 細 胞, 再 以 DOPA 為 起 始 物, 另 其 合 成 DOPA quinone 後, 再 加 MBTH 反 應 呈 色, 於 波 長 508nm 測 定 OD 值, 各 萃 取 物 處 理 產 物 之 結 果 如 Table 5 所 示 KC-2T 及 KC-3T 之 抑 制 率 分 別 為 熊 果 苷 之 1.5 及 1.6 倍 與 Table 3 4 之 抑 制 圈 比 較,KC-1T 具 較 強 的 抑 制 圈, 但 在 黑 色 素 瘤 細 胞 之 試 驗, 似 未 顯 現 良 好 之 抑 制 率, 然 而 KC-3T 則 反 之, 此 可 能 與 細 胞 之 通 透 性 有 關, 尚 待 進 一 步 探 討 綜 合 上 述 結 果, 此 四 種 植 物 萃 取 物 處 理 產 物, 本 身 為 混 合 物, 即 有 與 熊 果 苷 純 品 相 當 或 更 強 之 抑 制 酪 胺 酸 酶 之 效 果, 可 見 其 深 具 開 發 潛 力 248
肆 結 論 與 建 議 一 植 物 經 低 極 性 及 高 極 性 溶 媒 之 萃 取 物, 其 抑 制 酪 胺 酸 酶 活 性 較 熊 果 苷 低 二 另 四 種 抽 出 物 經 處 理 後 (KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T), 顯 示 具 抑 制 酪 胺 酸 酶 作 用 且 具 濃 度 依 存 性 三 KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T 濃 度 分 別 相 當 於 原 植 物 之 重 量 (14.2 mg/ml 7.2mg/mL 8.7mg/mL 及 8.3mg/mL) 抑 制 黑 色 素 瘤 細 胞 之 酪 胺 酸 酶 活 性 為 熊 果 苷 (2.72mg/mL) 之 0.50 1.53 1.60 及 1.04 倍 誌 謝 本 研 究 計 畫 承 蒙 行 政 院 衛 生 署 中 醫 藥 委 員 會, 計 畫 編 號 CCMP93-RD-045 提 供 經 費 贊 助, 使 本 計 畫 得 以 順 利 完 成, 特 此 誌 謝 249
伍 參 考 文 獻 1. 正 木 仁,2003,チロシナ-ゼ 活 性 測 定 法 おょび 美 白 效 果 評 價 法,フレグ ランスジャ-ナル 臨 時 增 刊,No 18,35-41 2. Valverde P et al. 1996. Exp Dermatol. 5: 247. 3. Seiberg M et al. 2001. J Invest Dermatol. 115: 162-167. 4. 福 島 信 ほか,1989, 生 藥,43: 142. 5. Baurin N., Arnoult E., Scior T., Do QT., Bernard P., 2002, Preliminary screening of some tropical plants for anti-tyrosinase activity, Journal of Ethnopharmacology., 82(2-3): 155-8. 6. Li C.Y., Lee E.J., Wu T.S., 2004, Antityrosinase principles and constituents of the petals of Crocus sativus, Journal of Natural Products. 67(3): 437-40. 7. Chang Ho Jeong and Ki Hwan Shim, 2004, Tyrosinase Inhibitor Isolated from the Leaves Zanthoxylum pipertum, Biosci. Boitechnol. Biochem., 68(9): 1984-1987. 8. 伊 藤 三 明,2001,シン 科 植 物 の 化 妝 品 ヘの 应 用 - 益 母 草 を 中 心 に,フレグ ランスジャ-ナル,29(5): 77-80 9. Liye Maeyama. 2002. Whitening Complex with Waltheria indica Extract and Ferulic acid. Cosmetics & Toiletries magazine. 117(10): 69-74. 10. 高 木 啟 二 野 村 重 雄,2003,Jatoba 果 皮 抽 出 物 の 美 白 劑 ヘの 应 用,フレ グランスジャ-ナル, 臨 時 增 刊,No18,p. 82-90 11. Hashizume R., Hayashi S., 2003. Inhibitory effect of Kippi extracts on melanin synthesis. Fragrance Journal. Special issue. 18: 103-112. 12. Vimala R, Nagarajan S, Alam M, Susan T and Joy S. 1997. Indian Journal of Experimental Biology. 35(12): 1310-4. 13. Sang S, Cheng X, Zhu N, Stark RE, Badmaev V, Ghai G, Rosen RT and Ho CT. 2001. Journal of Agricultural & Food Chemistry. 49(9): 4478-81. 14. Shafiee M, Carbonneau MA, d'huart JB, Descomps B and Leger CL. 2002. Journal of Medicinal Food. 5(2): 69-78. 15. 三 井 幸 雄,2002, 天 然 物 素 材 の 化 妝 品 開 發 (1) 酒 粕 の 應 用, フレグラ ンスジャ-ナル,30(6):145-149 16. Radoslaw D, Daniel MA, Leonard AL. 2000. Exp. Eye Res. 70, 563-569. 250
陸 圖 檄 樹 咖 啡 山 梔 子 小 梔 子 Fig. 1-1 茜 草 科 植 物 ( 檄 樹 咖 啡 山 梔 子 小 梔 子 ) 外 觀 鉤 藤 玉 葉 金 花 Fig. 1-2 茜 草 科 植 物 ( 鉤 藤 玉 葉 金 花 ) 外 觀 251
雞 屎 藤 多 花 水 線 草 白 花 蛇 舌 草 Fig. 1-3 茜 草 科 植 物 ( 雞 屎 藤 多 花 水 線 草 白 花 蛇 舌 草 ) 九 節 木 林 氏 茜 草 Fig. 1-4 茜 草 科 植 物 ( 九 節 木 林 氏 茜 草 ) 外 觀 252
B A C ep cx B en ph xy p 0.1 mm 白 花 蛇 舌 草 A. 組 織 圖 ep 表 皮 層 cx 皮 層 en 內 皮 層 ph 篩 部 xy 木 部 p 柔 細 胞 B. 弱 擴 大 圖 C. 植 物 圖 Fig. 2 白 花 蛇 舌 草 之 植 物 切 片 圖 253
1 X 0.75X 1 X 0.75X 0.5 X 0.25 X 0.5X 0.25X KC-1T KC-2T 1 X 0.75X 1X 0.75X 0.5X 0.25X 0.5X 0.25X KC-3T KC-4T Fig. 3 KC-1T- KC-4T 不 同 稀 釋 濃 度 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 控 制 組 熊 果 素 2.72 mg/ml KC-2T 7.2 mg/ml KC-2T 1.44 mg/ml Fig. 4 KC-2T 對 黑 色 素 瘤 細 胞 之 酪 胺 酸 酶 之 抑 制 作 用 254
柒 表 Table 1 雞 屎 藤 之 不 同 溶 媒 萃 取 物 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 溶 媒 抑 制 圈 (cm) 正 己 烷 乙 酸 乙 酯 甲 醇 水 植 物 名 稱 雞 屎 藤 - - 1cm 熊 果 苷 1.3 cm - 表 無 抑 制 效 果 註 : 表 未 以 該 項 溶 媒 進 行 試 驗 Table 2 茜 草 科 植 物 萃 取 物 以 不 同 溶 媒 溶 解 進 行 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 植 物 名 稱 溶 媒 抑 制 圈 (cm) 水 Tween 20 Pluronic F-68 Propylene Glycol Cremophor EL 小 梔 子 - 1.3 - - - 咖 啡 - 1.4 1 - - 多 花 水 線 草 - 1.1 - - - 白 花 蛇 舌 草 1 1.1 - - - 檄 樹 1 1.2 1.1 - - 檄 樹 果 1.1 山 梔 子 - 12 1.1 - - 賣 子 木 - 林 氏 茜 草 - 鉤 藤 - 玉 葉 金 花 - 九 節 木 葉 - 九 節 木 枝 - 九 節 木 果 - 註 : 表 未 以 該 項 溶 媒 進 行 試 驗 ; - 表 無 抑 制 效 果 熊 果 苷 (27.23mg/mL) 之 抑 制 圈 直 徑 平 均 為 1.3(cm) 255
Table 3 茜 草 科 植 物 萃 取 物 經 處 理 後 之 產 物 其 系 列 稀 釋 液 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 平 板 試 驗 濃 度 抑 制 圈 (cm) 產 物 名 稱 1X 相 當 於 原 植 物 之 含 量 (mg/ml) 1 X 0.75 X 0.5 X 0.25 X r2 KC- 1T 130 1.9 ± 0.1 1.5 ± 0.2 1.3 ± 0 1.2 ± 0 0.885 KC- 2T 57.6 1.9 ± 0.1 1.7 ± 0.2 1.5 ± 0.1 1.2 ± 0.1 0.985 KC- 3T 79.1 1.5 ± 0.3 1.3 ± 0.2 1.2 ± 0.1 1.1 ± 0.1 0.958 KC- 4T 68.0 1.4 ± 0.1 1.4 ± 0.1 1.1 ± 0.2 1.0 ± 0 0.930 註 :n=3 熊 果 苷 (27.23mg/mL) 之 抑 制 率 平 均 值 為 1.3cm Table 4 茜 草 科 植 物 萃 取 物 經 處 理 後 之 產 物 與 熊 果 苷 麴 酸 之 酪 胺 酸 酶 抑 制 圈 達 1.3cm 所 需 之 濃 度 各 檢 品 形 成 抑 制 圈 (1.3cm) 所 需 之 濃 度 (mg/ml) arbutin kojic acid KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T 27.23 9.17 57.37 20.44 51.68 48.83 Table 5 KC-1T KC-2T KC-3T KC-4T 對 黑 色 瘤 細 胞 之 酪 胺 酸 酶 活 性 抑 制 率 Arbutin (2.72mg/mL) KC-1T (14.2mg/mL) KC-2T (7.2mg/mL) KC-3T (8.7mg/mL) KC-4T (8.3mg/mL) 100 % 50.3% 153 % 160.3% 104.1% 256