1 5, 4 1 6 ):6 7 P P 71 松花菜花球腐烂病病原分离鉴定及室内药剂筛选 王国荣1, 刘晓曦, 吴金丹, 王文凤3, 苏珍珠, 楼兵干* 1.浙江省杭州市萧山区农业技术推广中心,杭州 3113;.浙江大学生物技术研究所, 杭州 319;3.安徽农业大学植物保护学院,合肥 336) 摘要 松花菜花球腐烂病是近年来发生在浙江省松花菜 种 植 区 的 一 种 严 重 病 害,主 要 危 害 松 花 菜 花 球 花 梗,引 起 花球变褐腐烂,花梗发黑枯萎,造成严重经济损失 通过对松花菜花球腐烂病典型症状样本的采集,病原菌的 分 离 纯化,致病性测定,形态观察, 16SDNA 序列分析,脂肪 酸 分 析 和 B 鉴 定,明 确 病 原 菌 为 野 油 菜 黄 单 胞 菌 野 油 菜致病变种 X m mp p.mp Pmm )Dy 选择 8 种杀菌剂采用 KB 灭菌滤纸片法对 病 菌进行室内抑菌测定,结果表明, 7% 农用硫酸链霉 素 和 PHMB 对 该 病 菌 有 较 强 的 抑 制 作 用,其 次 中 生 菌 素 和 三 氯异氰尿酸也有一定的抑制作用 关键词 松花菜花球腐烂病; 杀菌剂; PHMB; 药剂筛选 中图分类号: S436. 3 文献标识码: A DOI: 1. 3969/. 59 154. 15. 6. 11. I, p w y, WJ W G 1, L X x, W W 3, SZz, LB 1. X A T C zc 3113,C ; yex H y,z.i U z 319,C ;3.C B y,z y,h P P,A A U 336,C ) y,h A B w m y p Z P.I m w k, w w y, k k w, m.i y,w y mp w m, p p, yp ymp xp m, p m, m p, y y 16SDNA q m y FAME),B.A y w p w X m mp p. mp Pmm )Dy.M,w 8 k y KB pp.t y w w 7% p my PHMB p, z my y p x. K w ; ; PHMB; yw 被誉为 有机花菜 的松花菜,其口感 形状有别 出现 该病害全年可见,春季最为明显,严重田块病 于传统紧花型花菜 因其营养丰富 口感好,适宜速 株率可达 3%~6%,已 成 为 制 约 松 花 菜 发 展 的 最 冻及脱 水 加 工 等 优 点,受 到 种 植 者 与 消 费 者 的 认 重要因素 对于 该 病 害,生 产 上 有 人 认 为 是 冻 害 引 近年来松花菜种植发展迅猛,浙江省种植面 起,有人认为是雨水过多引起,也有人认为是真菌病 起花球腐烂的 病 害,这 种 病 害 在 紧 花 型 花 菜 中 很 少 是一种细菌病害 为了探明引起浙江省松花菜花球 可 1] 积已超 6667m 然而,在种植过程中出现一种引 收稿日期: 14 1 9 修订日期: 15 基金项目: 浙江省 三农六方 资助项目 N163) * 通信作者 Em : @z.. 害,或者是缺素引起 而据我们观察与诊断,这可能
68 腐 烂 的 原 因, 我 们 对 松 花 菜 花 球 腐 烂 病 的 病 原 进 行 了 分 离 鉴 定, 在 室 内 对 防 治 药 剂 进 行 了 筛 选, 以 期 对 松 花 菜 生 产 管 理 起 到 指 导 作 用 1 材 料 与 方 法 1.1 病 样 采 集 及 病 原 菌 分 离 114 年 连 续 在 浙 江 省 杭 州 市 萧 山 区 舒 兰 农 场 农 一 场 浙 江 勿 忘 农 种 业 股 份 有 限 公 司 萧 山 基 地 进 行 田 间 调 查, 采 集 已 发 病 且 具 有 典 型 症 状 的 松 花 菜 病 株, 装 入 干 净 牛 皮 纸 袋 中, 带 回 实 验 室 取 病 健 交 界 处 组 织, 进 行 表 面 消 毒 后, 采 用 平 板 画 线 分 离 法 在 NA 培 养 基 蛋 白 胨 1, 氯 化 钠 5, 蔗 糖 5, 牛 肉 浸 膏 3, 琼 脂 15, 蒸 馏 水 1 ml,ph 7.~7.) 上 分 离 纯 化 3], 分 离 纯 化 的 菌 株 接 入 NA 试 管 中, 于 4 冰 箱 中 保 存 备 用 1. 致 病 性 测 定 健 康 松 花 菜 幼 苗 由 萧 山 农 业 技 术 推 广 中 心 提 供, 当 苗 长 至 5 片 叶 时 转 移 到 含 6 基 质 草 炭 蛭 石 珍 珠 岩 =4 1 的 盆 5mm 4mm) 中, 置 于 温 室 中, 定 时 定 量 浇 水 和 浇 灌 营 养 液 ; 当 松 花 菜 长 出 花 球 后, 用 于 1.1 节 中 分 离 菌 株 的 致 病 性 测 定 将 分 离 纯 化 的 5 株 菌 株, 在 NA 培 养 基 上 培 养 36 后, 用 无 菌 水 洗 脱 细 菌 菌 苔 制 成 浓 度 约 为 1 8 /ml 菌 悬 液, 采 用 喷 雾 法 接 种 于 健 康 的 松 花 菜 花 球 上, 针 刺 接 种 法 接 种 于 花 梗 和 叶 片 主 叶 脉 上, 伤 口 法 用 灭 菌 的 手 术 剪 蘸 取 菌 液 后 在 健 康 叶 片 上 剪 口 ) 接 种 于 叶 片 上, 每 株 菌 接 种 5 株 松 花 菜, 以 无 菌 水 为 对 照, 接 种 后 套 塑 料 袋 保 湿 定 期 观 察 接 种 组 与 对 照 组 花 球 花 梗 叶 片 和 叶 片 主 叶 脉 上 的 症 状 变 化, 记 录 结 果, 待 发 病 后 从 病 斑 上 再 次 分 离 病 原 菌 1.3 病 原 菌 培 养 性 状 与 形 态 特 征 观 察 供 试 病 原 菌 在 NA 平 板 培 养 基 上 培 养 48 后 观 察 菌 落 形 态, 同 时 挑 取 培 养 了 16~ 的 菌 体, 4] 参 照 S 等 的 方 法 进 行 革 兰 氏 染 色 1.4 病 原 菌 16SDNA 扩 增 及 序 列 分 析 5] 参 照 L 等 的 方 法 提 取 细 菌 基 因 组 DNA, 根 据 6] Ew 等 人 发 表 的 细 菌 16SDNA 基 因 通 用 引 物 对 分 离 的 菌 株 进 行 PCR 扩 增 正 向 引 物 P1 为 :5' AGAGTTTGATCATGGCTCAG3'; 反 向 引 物 P 为 : 5'ACGGTTACCTTGTTACGACTT3', 由 生 工 生 物 工 程 上 海 ) 有 限 公 司 合 成 PCR 反 应 体 系 为 :1 PCR 缓 冲 液 含 M + )5μL,NTP1 mm/l) 15 1μL, 引 物 P1 和 P1 mm/l) 各 1 μl, 模 板 DNAμL,Tq 酶 5U/mL).5μL, 加 HO 至 总 体 积 5μL; 反 应 条 件 为 :95 预 变 性 5 m; 94 变 性 3,55 退 火 m,7 延 伸 m, 35 个 循 环 ; 最 后 7 延 伸 1 m PCR 产 物 经 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 回 收 目 标 DNA 片 段, 由 上 海 生 工 生 物 工 程 有 限 公 司 测 序, 测 序 结 果 用 BLAST 软 件 在 GBk 上 进 行 同 源 性 比 较 1.5 病 原 菌 的 脂 肪 酸 FAME) 鉴 定 FAME 鉴 定 采 用 美 国 A689 型 气 相 色 7] 谱 系 统 参 照 MIDI 公 司 说 明 书 及 X 等 的 方 法 进 行 供 试 菌 株 在 TSBA 培 养 基 3 胰 蛋 白 胨 大 豆 肉 汤,15 琼 脂,1mL 蒸 馏 水 ) 上, 于 8 生 长 36 后, 用 无 菌 接 种 环 挑 取 一 环 培 养 菌 放 入 有 螺 帽 的 试 管 中, 提 取 脂 肪 酸 鉴 定 结 果 通 过 微 生 物 鉴 定 系 统 软 件 美 国 MIDI 公 司 开 发 的 基 于 细 菌 细 胞 脂 肪 酸 成 分 鉴 定 细 菌 的 MIS4.5mym) 和 LGS4.5yw)] 获 得 把 分 析 结 果 与 数 据 库 中 标 准 菌 种 的 脂 肪 酸 信 息 进 行 比 对 1.6 病 原 菌 的 B 鉴 定 采 用 B 公 司 生 产 的 GN 革 兰 氏 阴 性 菌 ) 测 试 板 和 GN 数 据 库, 按 照 操 作 规 程 进 行 鉴 定 病 原 菌 在 B 通 用 培 养 基 BUGM B wmm,51.7bua 琼 脂 培 养 基,95 ml 蒸 馏 水 ) 上 5 培 养 4 后 用 B 自 动 微 生 物 鉴 定 系 统 进 行 鉴 定 1.7 室 内 杀 菌 剂 筛 选 1.7.1 供 试 杀 菌 剂 供 试 杀 菌 剂 共 8 种, 分 别 是 :4% 三 氯 异 氰 尿 酸 可 湿 性 粉 剂 湖 南 省 海 洋 生 物 工 程 有 限 公 司 ); % 噻 菌 铜 悬 浮 剂 浙 江 龙 湾 化 工 有 限 公 司 );% 噻 唑 锌 悬 浮 剂 浙 江 新 农 化 工 股 份 有 限 公 司 );7% 农 用 硫 酸 链 霉 素 可 湿 性 粉 剂 华 北 制 药 股 份 有 限 公 司 );3% 中 生 菌 素 可 湿 性 粉 剂 深 圳 诺 普 信 农 化 股 份 有 限 公 司 );46% 氢 氧 化 铜 水 分 散 粒 剂 美 国 杜 邦 公 司 );5% 氯 溴 异 氰 尿 酸 可 溶 粉 剂 河 南 银 田 精 细 化 工 有 限 公 司 ); 聚 六 亚 甲 基 双 胍 盐 酸 盐 PHMB) 可 溶 性 粉 剂 海 宁 中 联 化 学 有 限 公 司 ) 1.7. 试 验 方 法 室 内 有 效 杀 菌 剂 筛 选 采 用 KB 滤 纸 片 扩 散 法 8], 菌 株 在 NA 培 养 基 上 培 养 4 后, 用 灭 菌 水 配 成 浓 度
41 卷 第 6 期 王 国 荣 等 : 松 花 菜 花 球 腐 烂 病 病 原 分 离 鉴 定 及 室 内 药 剂 筛 选 69 约 为 1 8 /ml 的 细 菌 悬 浮 液, 采 用 无 菌 棉 棒 均 匀 涂 布 于 NA 平 板 表 面, 涂 菌 后 室 温 干 燥 3~5m 初 筛 时, 将 8 种 药 剂 配 制 成 5 m/l, 用 无 菌 镊 子 夹 直 径 为 6mm 的 灭 菌 滤 纸 片 浸 泡 于 配 制 好 的 药 液 中, 浸 泡 片 刻 后 立 即 将 纸 片 平 放 于 直 径 为 9m 含 菌 NA 平 板 表 面, 每 皿 贴 3 张 纸 片, 以 浸 泡 灭 菌 水 的 纸 片 为 对 照, 重 复 3 次, 置 于 8 培 养 箱 中 9] 培 养, 培 养 36 后 观 察 测 量 抑 菌 圈 直 径 将 初 筛 试 验 中 产 生 抑 菌 圈 的 药 剂, 继 续 配 制 成 浓 度 为 1 5 1m/L 的 药 液, 用 上 述 同 样 的 方 法 测 定 抑 菌 圈 直 径 1.7.3 数 据 统 计 与 分 析 统 计 不 同 药 剂 的 不 同 浓 度 处 理 下 的 抑 菌 圈 直 径, 采 用 SPSS16. 软 件 进 行 差 异 显 著 性 分 析 结 果 与 分 析.1 病 害 田 间 症 状 引 起 松 花 菜 花 球 腐 烂 病 的 病 菌 主 要 危 害 花 球 花 梗, 也 能 够 侵 染 叶 片 该 病 害 最 典 型 的 症 状 是 在 花 球 或 花 蕾 上 形 成 深 褐 色 斑 点 然 后 腐 烂 花 球 发 病 初 期 出 现 黄 色 黄 褐 色 水 渍 状 斑 点 图, 随 后 斑 点 扩 大 并 增 加, 由 黄 褐 色 转 呈 深 褐 色 或 黑 色 并 腐 烂 图, 病 斑 从 花 蕾 向 花 梗 扩 展, 形 成 V 字 形 黑 色 病 斑 图, 潮 湿 时 病 部 组 织 用 手 触 摸 有 黏 腻 感 叶 片 发 病 从 叶 缘 开 始 向 叶 内 和 两 侧 呈 V 形 扩 展, 病 健 交 界 处 不 明 显, 病 斑 边 缘 常 具 黄 色 晕 图, 但 田 间 调 查 发 现 叶 片 较 少 表 现 出 症 状. 病 原 菌 分 离 与 致 病 性 测 定 从 具 有 典 型 花 球 腐 烂 病 症 状 的 松 花 菜 病 健 交 界 处 取 样, 制 成 临 时 玻 片, 在 光 学 显 微 镜 下 观 察, 可 见 从 病 组 织 中 喷 出 大 量 细 菌 从 病 部 共 分 离 纯 化 到 1 株 细 菌 菌 株, 分 别 是 XHC1 XHC XHC3 SHC1 SHC SHC3 SHC4 SHC5 SHC6 SHC7 SHC8 和 SHC9 将 上 述 1 株 菌 株 在 NA 平 板 上 画 线 培 养 36, 然 后 分 别 接 种 到 健 康 的 松 花 菜 花 球 花 梗 叶 片 和 主 叶 脉 上 结 果 表 明, 菌 株 之 间 的 致 病 性 有 差 异, 花 球 花 梗 叶 片 和 主 叶 脉 上 接 种 菌 株 XHC1 XHC SHC4 SHC7 SHC8 SHC9 后 不 发 病 ; 而 接 种 菌 株 XHC3 SHC1 SHC3 SHC5 SHC6 后 第 3 ~7 天 出 现 典 型 症 状 图 1~), 且 病 斑 症 状 与 田 间 症 状 一 致, 从 接 种 后 发 病 部 位 分 离 的 菌 株 与 供 试 细 菌 菌 株 的 菌 落 特 征 相 同, 而 接 种 无 菌 水 的 对 照 未 见 任 何 症 状 选 取 菌 株 XHC3 SHC1 SHC3 SHC 5 SHC6 进 一 步 进 行 鉴 定.3 病 原 菌 培 养 形 状 与 形 态 特 征 观 察 从 病 部 分 离 纯 化 的 细 菌 菌 株 在 NA 培 养 基 上 画 线 培 养 后 48 出 现 形 态 一 致 的 单 菌 落, 菌 落 直 径 约 为 1~mm, 黄 色, 圆 形 凸 起, 边 缘 整 齐, 菌 落 较 稠, 乳 脂 状 不 透 明 图, 革 兰 氏 染 色 反 应 阴 性.4 病 原 菌 16SDNA 扩 增 及 序 列 分 析 以 菌 株 XHC3 SHC1 SHC3 SHC5 SHC6 的 总 基 因 组 DNA 为 模 板, 用 引 物 P1 和 P 进 行 PCR 扩 增, 均 扩 增 出 约 1.5k 的 PCR 产 物 图 ), 产 物 纯 化 回 收 后, 送 至 生 工 生 物 工 程 上 海 ) 股 份 有 限 公 司 测 序 结 果 表 明,5 株 菌 的 测 序 结 果 一 致 将 SHC1 的 测 序 结 果 提 交 至 NCBI 的 核 酸 数 据 库 登 录 号 为 KP18149), 用 BLAST 软 件 进 行 同 源 性 比 较, 通 过 与 GBk 中 的 核 酸 数 据 进 行 比 对 分 析, 结 果 表 明 分 离 菌 株 与 野 油 菜 黄 单 胞 菌 野 油 菜 致 病 变 种 Xmmp p.mp) 登 录 号 为 KF57196. 相 似 度 最 高, 为 99%.5 病 原 菌 的 脂 肪 酸 FAME) 鉴 定 1] FAME 鉴 定 结 果 匹 配 程 度 遵 循 By 等 的 原 则 : 相 似 性 系 数 <., 结 果 不 可 用 ; 相 似 性 系 数.5, 鉴 定 到 种 供 试 病 原 细 菌 菌 株 XHC3 SHC 1 SHC3 SHC5 SHC6 的 FAME 鉴 定 结 果 与 16S DNA 的 鉴 定 结 果 一 致, 与 X.mp p. mp 最 相 似, 相 似 度 分 别 为.75.76.73.68.7.6 病 原 菌 的 B 鉴 定 供 试 菌 株 XHC3 SHC1 SHC3 SHC5 SHC6 在 BUGM 培 养 基 上 培 养 4 后, 经 B 自 动 微 生 物 鉴 定 系 统 鉴 定, 结 果 表 明,5 株 菌 与 X. mpp.mp 相 似 系 数 均 大 于.5, 分 别 是.73.7.69.75.71.7 室 内 药 剂 筛 选 结 果 KB 灭 菌 滤 纸 片 法 试 验 结 果 表 明 : 供 试 的 8 种 杀 菌 剂 对 松 花 菜 花 球 腐 烂 病 菌 的 抑 菌 作 用 不 同 7% 农 用 硫 酸 链 霉 素 WP PHMB 和 三 氯 异 氰 尿 酸 对 病 菌 有 较 好 的 抑 制 作 用, 其 中 PHMB 在 浓 度 为 1 m/l 时 仍 有 明 显 的 抑 菌 圈 产 生, 中 生 菌 素 对 病 菌 的 生 长 有 一 定 的 抑 制 作 用, 而 氯 溴
7 15 异氰尿酸 仅 在 高 浓 度 下 对 病 菌 有 一 定 的 抑 制 作 用,氢 氧 化 铜 从 高 浓 度 到 低 浓 度 都 可 见 抑 菌 圈, 但 都 很 小 ;噻 唑 锌 和 噻 菌 铜 在 高 浓 度 下 对 病 菌 也 无 抑 制 作 用 表 图 1 松花菜花球腐烂病症状 致病性试验结果和病原菌单菌落形态 F 1 Symp m w, p NA m m. y
41 卷第 6 期 71 王国荣等:松花菜花球腐烂病病原分离鉴定及室内药剂筛选 定,明确为 野 油 菜 黄 单 胞 菌 野 油 菜 致 病 变 种 X m mp p. mp Pmm )Dy ] 此菌也称甘蓝黑腐病菌 大量文献记载:甘蓝黑腐病 菌引起十字花科蔬菜黑腐病,在我国主要危害甘蓝 结球白菜 不结 球 白 菜 薹 菜 芥 菜 花 椰 菜 球 茎 甘 蓝 芥蓝 青花菜 抱子甘蓝 芜青甘蓝 羽衣甘蓝 紫 甘蓝 萝卜 荠 菜 等 1 余 种 十 字 花 科 蔬 菜 1],该 病 菌主要危害十字花科蔬菜的叶片 叶柄和叶脉,对松 花菜花球的危害却鲜有报道 在浙江省调查的松花 菜上,该病原菌主要危害花球,田间叶片很少见到症 状,因此,我们把引起浙江省松花菜花球腐烂的病害 称为 松花菜花球腐烂病 图 引物 P1 P 对分离菌株的 PCR 扩增结果 F PCRmp p. p m P1/P )本次试验 测 定 了 8 种 杀 菌 剂 对 病 原 菌 株 的 抑菌效果,结 果 表 明 PHMB 农 用 硫 酸 链 霉 素 和 三 氯异氰尿酸对 病 菌 的 抑 制 效 果 较 好,中 生 菌 素 也 有 一定的抑制效果,而噻唑锌 噻菌铜对该病菌无抑制 3 结论与讨论 从浙江 省 杭 州 市 萧 山 区 采 集 的 典 型 松 花 菜 作用 测定结果可为松花菜花球腐烂病的田间药剂 试验提供基础,但由于采用滤纸片法测定,结果受到 花球腐烂样本中分离的菌株,经致病性测定 病原形 药剂溶解性和扩散能力的影响,具一定局限性,同时 态观察 16SDNA 序列分析 脂肪酸鉴定和 B 鉴 也与药剂产品批号等有关 ) 表 1 8 种杀菌剂对病原菌菌株 SHC 1 的抑菌效果1 T 1 I 8 p SHC 1 药剂浓度/ m L1 F 抑菌圈直径/mm I z m 农用硫酸链霉素 A p my PHMB CK ±) ±) 11± 1±) ±. 3) 11±. ) 1 5 1 5 6±) 14± 5±. 3±. 9) 中生菌素 三氯异氰尿酸 氯溴异氰尿酸 氢氧化铜 ±) ±) ±) ±) 4) 3) Z T C m Cpp my y x y y 9± 1±. 6) 15±. 6) 9± 1 7) 8±) 11±) 6±) ) ) 4) 9±. 4) 11±. 5) 15±. 8) 5) 5) 1± 7±) 噻唑锌 噻菌铜 Z T z z pp 药效纸片直径为 6mm,抑菌圈直径为 3 次重复平均值;同列数据后不同小写字母表示在 5% 水平差异显著 T m pp 6mm, z m p.t m m 5%. 3)聚 六 亚 甲 基 双 胍 盐 酸 盐 是 一 种 广 谱 抗 菌 素,对 细 菌 真 菌 和 酵 母 菌 等 均 有 杀 灭 作 用,长 期 以 来 被 广 泛 用 于 医 药 行 业,以 及 化 妆 品 个 人 护 理 产 品 纺 织 品 食 品 工 业 等 本次试验表明 7] PHMB 对 松 花 菜 花 球 腐 烂 病 病 原 菌 具 有 较 好 的 抑 制 作 用,可 为 今 后 PHMB 用 于 植 物 病 害 防 治 提 供参考 参考文献 1] 顾宏辉,赵振卿,盛小光,等.浙 闽 山 地 松 花 菜 关 键 栽 培 技 术 J].中国蔬菜,11 :56 57. ] 顾宏辉,赵振卿,盛小光,等.浙 江 山 地 和 平 原 地 区 松 花 菜 栽 培施肥关键技术 J].中国蔬菜,11 ):64 65. 3] 方中达.植病研究方法M].第 3 版.北京:中国农业出版社, 1998:18 181. 下转 87 页)
41 卷第 6 期 生,初发时,叶片上出现褐色 病 斑,边 缘 带 黄 圈,后 期 多个病斑连成直径 5~1mm 的大病斑,遇炎热潮湿 条件病斑会扩大至整个叶片枯死,如花荚期高温多湿 气候常形成病害大发生,抑制植株光合作用13] 本研究表明绿豆叶斑病病原菌的生长最适温度 为 5,最适 ph 为 6 这一结果与张益先等 刘庆奎等 87 刘昌燕等:绿豆叶斑病病原鉴定及生物学特性研究 15] 和 16] 对 玉 米 灰 斑 病 菌 的 研 究 结 果 一 致 变,1977,6:765 774. py 3] I S M,Z M,Hqq A M. R m q C p p J].I J A B y,4,6 5):79 793. 4] 王彦,田静,范 保 杰,等.小 豆 主 要 病 害 研 究 进 展 J].华 北 农 学 报, 11, 6 S: 197 1. 5] 邢 宝 龙,冯 高,郭 新 文,等.绿 豆 尾 孢 菌 叶 斑 病 田 间 药 剂 防 治 试验 J].山西农业科学,1,4 3):64 66. 灰尾孢在人工 培 养 条 件 下 不 容 易 产 生 分 生 孢 子,本 仲建锋, 万正煌, 等. 化学药剂对绿豆尾孢菌叶斑病的田间 6] 刘昌燕, 试验 中 所 获 菌 株 除 了 在 V8 培 养 基 上 产 孢 外,在 7] 方中达.植病研究方法M].北京:农业出版社, 1998: 46 5. PDA PSA R 和 Cz pk 培 养 基 上 均 未 能 产 孢 因 此,还 需 要 尝 试 其 他 不 同 的 培 养 基 配 方,期 望能 找 到 一 种 有 利 于 变 灰 尾 孢 产 孢 的 培 养 基,通 过 研究 我 国 绿 豆 叶 斑 病 病 原 菌 的 生 物 学 特 性,在 防 治 绿豆 叶 斑 病 方 面 提 供 一 定 的 理 论 基 础 目 前,随 着 全球 气 候 变 暖,极 端 天 气 越 来 越 多,变 灰 尾 孢 具 有 较大 的 温 度 范 围 适 应 特 性,其 引 起 的 绿 豆 叶 斑 病 可 能具 有 加 重 的 趋 势,应 该 引 起 足 够 的 重 视,并 加 强 防治研究 参考文献 1] CR,S V,P C,.F p wp 防治效果比较 安徽农业科学, J]. 1 3, 4 1 5): 1 3 7 1 3 1. 8] C M,K m K,V L,.A RNA my yp B y J].FEMS M,3,8 :87 91. yl 9] 易 克 贤,黄 俊 生,刘 国 道,等.中 国 柱 花 草 炭 疽 病 原 菌 遗 传 多 态 性的 RAPD 分析 J].微生物学报,3,43 3):379 387. 1] 杨腊英,黄华平,唐复润,等.香 蕉 炭 疽 菌 DNAITS 区 的 分 子鉴定与检测 J].植物病理学报,6,36 3):19 5. 11] 郭英兰,刘锡琎.中国真菌 志 尾 孢 菌 属 4 卷)M].北 京:科 学出版社, 5: 148 15. 1] 李怡琳,李淑英.绿 豆 品 种 抗 叶 斑 病 鉴 定 研 究 J].作 物 品 种 资 源, 1987 4): 1 14. 13] 冯耀景,苏永福,王辉.泌阳县绿豆主要病虫害发 生 特 点 及 综 合 防治技术 J].现代农业科技, 11 19): 197 1. 14] 侯慧颖,张玉训,陈丽.绿豆病虫害发生及 防 治 措 施 J].种 业 导 刊, 9 9): 34. C p m V 15] 张益 先,吕 国 忠,梁 景 颐,等.玉 米 灰 斑 病 菌 生 物 学 特 性 研 究 ] TkRP,P PN,V mjp. G p 16] 刘庆奎,秦子慧,张小利,等.中国玉米灰斑病病原菌的鉴定 及 其 ) mi J].Nw D Rp,1,6:6. w p,y w m C p p m V ) J].E J].植物病理学报, 3, 33 4): 9 95. 基本特征研究 J].中国农业科学, 13, 46 19): 444 457. 责任编辑:田 喆) 上接 71 页) 4] S N W,J JB, C W. L y p p M ].3 E.USA: p m J].J Z U S ),3,4 4):463 468. y Am Py p S y,1. 8] 谭瑶,赵清,舒为群,等. KB 纸片扩散法药敏试验 J].检 验 医 学 PCR A m A )xy 9] 牛艺儒,宁 官 保.大 肠 杆 菌 的 药 敏 试 验 J].动 物 科 学 与 动 物 医 J].J C M y,,4 4): p 1] 李明远.十字花科蔬菜黑腐病的发生与防治 J].当代蔬 菜, 4 6] Ew U,R T,B k H, 1.I 11] 李杨,李付刚.聚六亚甲基双胍盐酸盐的合成及应用 J].精 细 化 16S m RNA J].N A 1]By JS,R DP,R kce.s p 5] L L x,cyt,b JL,.R m DNA x m p m mp m y 11 113. mp m.c z R,1989,17 19):7843 7853. 7] X G,SA,Sw J,.D m y m p m 与临床, 1, 7 ): 9 91. 学, 5 1): 3 31. 1: 36. 工原料及中间体, 11 ): 7 9 m mm J].C J M y y,,48 1:955 964. 责任编辑:杨明丽)